专利名称：藏药仁青芒觉在制备治疗肝硬化药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明属于中药技术领域，具体涉及一种中药的新用途。
背景技术：
肝硬化是一种常见的慢性肝病，可由一种或多种原因引起肝脏损害，肝脏呈进行性、弥漫性、纤维性病变。具体表现为肝细胞弥漫性变性坏死，继而出现纤维组织增生和肝细胞结节状再生，这三种改变反复交错进行，结果肝小叶结构和血液循环途径逐渐被改建， 使肝变形、变硬而导致肝硬化。肝纤维化是慢性肝病发展为肝硬化过程中的共有病理组织学变化，是影响慢性肝病预后的重要环节，是发展到肝硬化必经阶段，而评价药物治疗肝硬化疗效的主要指标是肝功能和肝纤维化，所以肝硬化的主要治疗方案就是改善肝功能和抗纤维化治疗。但目前缺乏理想的抗肝纤维化西药，中药防治肝硬化显示出良好的前景。仁青芒觉(RQMJ)为传统藏族验方，收载于中国药典2010年版一部572页。其主要功能与主治为清热解毒、益肝养胃、愈疮明目醒神，滋补强身。用于治疗自然毒、配制毒等各种中毒症；“培根”、“木布”等疾病；急慢性胃溃疡，腹水、麻风病等。
发明内容
本发明的目的在于提供藏药仁青芒觉(RQMJ)的第二医药用途，即仁青芒觉在制备治疗或预防肝硬化药物中的新用途。本发明也提供仁青芒觉在制备改善肝纤维化药物中的应用。本发明采用皮下注射四氯化碳(CCl4)和腹腔注射二甲基亚硝胺(DMN)诱导的2种大鼠肝纤维化模型，以扶正化瘀胶囊作为阳性对照药，观察仁青芒觉对大鼠肝纤维化的影响。结果显示仁青芒觉能够明显预防CCl4诱导的大鼠肝纤维化的发生和发展；对DMN造成的肝纤维化，亦有一定的治疗作用，明显改善肝纤维化的程度，提示仁青芒觉在预防和治疗肝硬化中有明显的作用。在上述2个模型上藏药仁青芒觉的作用与阳性对照药物扶正化瘀胶囊相当。具体地，仁青芒觉预防给药，对四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化模型有显著影响，血清生化和胶原指标检测显示，与模型组比较，该药能够显著降低N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAG)活性，高(0.2g/kg)、中(0. lg/kg)剂量组能够明显降低IV型胶原含量， 对透明质酸(HA)、层粘蛋白(LN)含量有一定的降低趋势，能够明显提高血清中总蛋白(TP) 和白蛋白(ALB)含量，降低谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性和总胆红素(TBIL)含量；肝勻浆检测显示，该药明显增加肝组织的蛋白含量，显著降低羟脯胺酸(Hyp)含量，中剂量组能够明显降低肝组织中丙二醛(MDA)含量，抑制率达8%;肝组织病理学HE及纤维胶原染色(Masson)显示，该药能够显著减轻肝细胞损伤及延缓肝纤维化程度。具体地，仁青芒觉治疗给药，对DMN诱导的肝纤维化模型大鼠的血清生化、血清胶原和肝勻浆检测结果显示，仁青芒觉能够显著增加血清中TP和ALB含量，降低ALT、AST活性和TBIL含量，仁青芒觉各剂量组显著降低HA、IV型胶原含量，低(0. 05g/kg)剂量组能够明显降低LN含量，对III型前胶原含量有一定的降低趋势，中、低剂量组显著增加肝组织中蛋白含量，高、低剂量组对Hyp含量仅有一定的降低趋势；肝组织病理学HE及纤维染色显示，仁青芒觉高剂量组能够显著改善弥漫性肝细胞水肿变性、坏死及减轻纤维增生程度，肝纤维化程度显著低于模型组，中、低剂量组对DMN肝纤维化有一定的改善作用。
进一步地，所述仁青芒觉可制备成丸剂、胶囊剂、片剂、散剂和颗粒剂等药学制剂中的任一种口服制剂。
图1是RQMJ对CC14大鼠肝纤维化血清HA的影响。图2是RQMJ对CC14大鼠肝纤维化血清LN的影响。图3是RQMJ对CC14大鼠肝纤维化血清NAG的影响。图4是RQMJ对CC14大鼠肝纤维化血清IV型胶原的影响。图5是RQMJ对CCl4大鼠肝纤维化血清ALT的影响。图6是RQMJ对CCl4大鼠肝纤维化血清AST的影响。图7是RQMJ对CCl4大鼠肝纤维化血清ALB的影响。图8是RQMJ对CCl4大鼠肝纤维化血清TP的影响。图9是RQMJ对CCl4大鼠肝纤维化血清TBIL的影响。图10是RQMJ对CC14肝纤维化肝勻浆超氧化物歧化酶(SOD)的影响。
图11是RQMJ对CC14肝纤维化肝勻浆MDA的影响。图12是RQMJ对CCl4肝纤维化肝勻浆蛋白的影响。图13是RQMJ对CCl4肝纤维化肝勻浆Hyp的影响。图14是RQMJ对D丽肝纤维化血清ALT的影响。图15是RQMJ对D丽肝纤维化血清AST的影响。图16是RQMJ对D丽肝纤维化血清TP的影响。图17是RQMJ对D丽肝纤维化血清ALB的影响。图18是RQMJ对DMN肝纤维化血清TBIL的影响。图19是RQMJ对D丽肝纤维化血清HA的影响。图20是RQMJ对D丽肝纤维化血清LN的影响。图21是RQMJ对DMN肝纤维化血清III型前胶原的影响。图22是RQMJ对DMN肝纤维化血清IV型胶原的影响。图23是RQMJ对D丽肝纤维化肝勻浆SOD的影响。图M是RQMJ对D丽肝纤维化肝勻浆MDA的影响。图25是RQMJ对DMN肝纤维化肝勻浆蛋白的影响。图沈是RQMJ对DMN肝纤维化肝勻浆Hyp的影响。
具体实施例方式试验材料1、受试药物
仁青芒觉胶囊为市购，由甘南佛阁藏药有限公司生产，胶囊内容物为给药物，为棕褐色粉末；其规格0. 25g/粒，批号100501，生产日期2010年5月10日，批准文号国药准字 Z20050177。试验时用蒸馏水配成所需浓度，供动物ig (灌胃给药)给药。2、阳性对照药扶正化瘀胶囊市售，上海黄海制药有限责任公司生产，批号1004033、主要试剂四氯化碳(CCl4)天津天河化学试剂厂生产，批号20070510。橄榄油意大利百瑞莱生产，批号20100520。胆固醇天津市科锐思精细化工有限公司，批号20100620。猪油市售。玉米粉市售。谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、总胆红素 (TBIL)试剂中生北控生物科技股份有限公司，批号依次为100321、100301、09(^61、 090261、100361。超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、羟脯氨酸(Hyp)、N-乙酰- β -氨基葡萄糖苷酶(NAG)、蛋白试剂盒南京建成生物工程研究所，批号依次为20101109，20101022， 20101018,20101105ο透明质酸(HA)、层粘蛋白(LN)、III、IV型胶原酶免试剂盒=Adlitteram diagnostic laboratories t，。二甲基亚硝胺(DMN)上海开明化学厂，批号01610223。戊巴比妥钠北京化学试剂公司德国进口分装，批号060222。生理盐水天津市津兰药业有限公司生产，批号 09121302。4、实验仪器LXJ-IIB型低速大容量多管离心机，上海安亭科学仪器有限公司。XW-80A旋涡仪上海沪西分析仪器厂有限公司。DK型电热恒温水浴锅上海精宏实验设备有限公司。SUNRISE酶标仪奥地利日升。PL203电子天平梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司。T2000电子天平美国双杰兄弟(集团)有限公司日立7080全自动生化仪日本日立株式会社5、实验动物Wistar大鼠，雄性，引进时体重140_160g，天津市山川红实验动物科技有限公司提供，生产许可证编号SCXK(津)2009-0001，实验动物质量合格证号00(^603，00(^623。饲养在有中央空调的观察室(津实设施准第012号，符合屏障级标准)中，大鼠饲料为天津市华荣实验动物科技有限公司提供，饮纯净水。6、动物设施和动物饲养设施名称天津市新药安全评价研究中心实验动物系统设施许可证津实设施准第012号
设施地点天津市南开区鞍山西道308号(300193)设施环境温度、湿度、换气次数由中央系统自动控制，温度维持在20 ^°C，相对湿度维持在40 70%，通风次数为10-15次/小时全新风，光照为12小时明、12小时暗。饲料名称大鼠料供应商天津市华荣实验动物科技有限公司生产饮用水来源天成恒业生产的KFR0-50纯水机制备的纯净水(质量情况符合国家纯净水标准)动物的日常饲养管理由动物保障部负责，每日为动物提供足够的块料和新鲜的饮用水，饮水瓶每周灭菌处理一次。7、给药途径、方法、剂量、频率和用药期限以及选择理由给药途径灌胃给药体积大鼠10ml/kg剂量设计及理由根据厂家提供剂量设计给药途径选择理由本供试品为拟用于治疗肝纤维化的药物，临床给药途径为口服，为保持和临床给药途径一致，采用灌胃给药方式进行研究。剂量设置(仁青芒觉胶囊内容物药粉g/kg体重):0. 2g/kg、0. lg/kg、0. 05g/kg。配制方法称取2gRQMJ药粉，加入蒸馏水研磨，定容至100ml，浓度为0. 02g/ml，为高剂量组用药液，然后依次倍比稀释即得中、低剂量组用药液。8、数据处理采用SPSS 11. 50ne-ffay ANOVA (单因素方差分析，LSD)对数据进行统计分析，计量数据以均值和标准差表示；组织病理的病变程度采用SPSS11. 5NParTests Mann-ffhitney Test，并采用EXCEL作图。实施例1仁青芒觉对CCL4诱导的大鼠肝纤维化的影响试验选用Wistar雄性大鼠90只，体重140-160 (g)，按体重随机分成正常对照组 (10只)，模型组(16只)，RQMJ三个剂量组(各16只)，扶正化瘀胶囊组(16只)。除对照组外，其余各组每只动物皮下注射CCl4诱导剂，首次注射CCl4原液5ml/kg，以后每隔3天注射40% CCl4-橄榄油3ml/kg，共7周。在开始2周喂饲20%猪油加0. 5%胆固醇的玉米粉饲料，在3-6周喂饲单纯玉米粉饲料。在造模开始时即按表1所示剂量ig给予不同药物，每日1次，连续7周，对照组及模型组给予同体积蒸馏水。于造模7周后，末次给药后1 小时，腹腔注射40mg/kg戊巴比妥钠麻醉动物，腹主动脉取血，离心收集血清。取固定位置肝组织，固定于12%福尔马林液中，剩余肝组织用生理盐水制成10%肝组织勻浆。1)血清生化测定指标ALT、AST、NAG活性、TP、ALB和TBIL含量；2) ELISA试剂盒检测胶原指标HA、LN、IV型胶原；3)肝勻浆测定指标S0D、MDA、Hyp及蛋白；4)肝组织病理学检查HE染色，Masson纤维胶原染色。结果1.仁青芒觉对CCL4诱导的大鼠肝纤维化肝脏系数的影响结果显示(见表1)，与对照组比较，模型组大鼠体重显著降低、肝脏系数显著增加，与模型组比较，RQMJ高、中剂量组能够显著降低肝脏系数，但对体重无明显影响。表1. RQMJ对CCL4诱导的大鼠肝纤维化肝脏系数的影响()
权利要求
1.藏药仁青芒觉在制备治疗肝硬化药物中的应用。
2.藏药仁青芒觉在制备预防肝硬化药物中的应用。
3.藏药仁青芒觉在制备改善肝纤维化药物中的应用。
4.权利要求1至3中任一项所述的应用，其中所述仁青芒觉制备成丸剂、胶囊剂、片齐IJ、 散剂和颗粒剂等药学制剂中的任一种口服制剂。
全文摘要
本发明公开了藏药仁青芒觉在制备抗肝纤维化药物中的新用途。动物实验表明仁青芒觉能够明显预防四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化的发生和发展；对二甲基亚硝胺(DMN)诱导的肝纤维化也有治疗作用，可明显改善肝纤维的程度；其预防和治疗效果与阳性药扶正化瘀胶囊相当。
文档编号A61K33/28GK102343015SQ20111031136
公开日2012年2月8日 申请日期2011年10月14日 优先权日2011年10月14日
发明者李恒方, 李敬涛, 陈丽娟, 陈维武 申请人:西藏奇正藏药股份有限公司