含有人参果提取物的组合物的制作方法

专利名称：含有人参果提取物的组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及促进血液循环的组合物，预防血管老化的组合物，治疗血管炎症的组合物，促进血管发生的组合物，治疗缺血性心脏病的组合物，改善和治疗局部血液循环不足的组合物，改善皮肤美观的组合物，和改善男性性功能的组合物，其含有人参果提取物作为活性成分。更具体地，本发明涉及含有人参果提取物作为活性成分的组合物，其促进内皮细胞中一氧化氮(NO)的生成，提高内皮细胞的活力，增强内皮细胞的流动性，并通过血管形成促进血管发生；通过促进内皮细胞中NO的生成使海绵体得到松弛并改善阴茎勃起，从而改善男性性功能；并提供抗氧化作用、通过促进胶原蛋白生物合成及抑制MMP-I防止皮肤老化并使皱纹得到改善；通过抑制黑色素合成提供皮肤美白效果，并提供皮肤保湿效果。
背景技术：
人参(Panax ginseng C. A. Meyer)是人参属五加科植物，并且在韩国、中国、日本及一些其它国家作为草药使用已超过2000年。在经验上，它已经被用于预防疾病和延长寿命。到目前为止，已知人参具有如下作用对中枢神经系统的正面作用，抗致癌作用，抗癌活性，免疫功能控制，抗糖尿病作用，肝功能改善作用，心血管障碍改善，抗动脉硬化作用， 血压控制，更年期改善，骨质疏松状况改善，抗压力及抗疲劳作用，抗氧化作用，预防衰老作用等等(The Recent Korean Ginseng -Constituents and Effects，Korea Ginseng and Tobacco Research Institute，56-112，1996)。人参皂苷，作为人参典型的活性化合物，均勻地分布于植物的地上及地下部分。特别是，众所周知不仅是人参皂苷的含量，其组成也因人参根部分、人参叶部分或人参果部分而不同(Attele AS 等，Biochem. Pharmacol. ,58 ；1685-1693，1999)。据报道，它们之中与人参根部相比，人参果提供更为优异的抗糖尿病作用，并拥有特征性的人参皂苷含量和组成 (Dey L. φ, Phytomedicine, 10 ；600—605，2003)。自古以来，相比人参的其它部分，人参果就已经备受珍视。已对其进行挑选和收割来获得种子。从人参果收集种子仅在四年的人参中进行一次。三年的人参很难产出好的一年生苗，原因是其种子太小。收集自五年或五年以上人参的种子坚实，但人参根部可能并未生长充分，并且由于组织不那么稠密很难产出高质量的红参。而且如果进行两次或两次以上的种子收集，红参的数量和质量都会遭到严重的破坏(The Recent Korean Ginseng Cultivation, Korea Ginseng and Tobacco Research Institute,130-131,1996)。对血液循环来说，毛细血管的扩张在外周血液循环中尤为重要。即没有血管的扩张，血管中的血流量不可能增加。在eNOS(内皮细胞一氧化氮合成酶)的作用下，NO参与血管扩张的过程。因此，高血压时，NO的生成减少(Forete，P.等，Basal nitric acidsynthesis in essential hypertension. Lancet. 1997 ;349 :837-842)。诸如衰老、吸烟、高血脂及糖尿病等其它因素也会降低血管中NO的生成量(Crossman，DC.More problems with endothelium. Q J Med. 1997 ；90 :157-160)。血管发生是涉及由已经存在的血管成长为新血管的过程。它以几个阶段发生组成血管的内皮细胞的迁移、经由细胞外基质(ECM)——一种细胞间屏障——的侵入、增殖以及向血管的分化(管形成)(Folkman，J.等，Angiogenesis. The Journal of Biological Chemistry,1992，267(16)，10931-10934)。从生理上讲，血管发生出现于胚胎发育期或月经期，并可能由于局部缺氧而暂时出现。应用治疗性血管发生以避免缺血性疾病、骨折等中的血流量不足。世界范围内，动脉硬化引起的缺血性心血管疾病是主要死因之一，而且这些疾病在韩国也增长迅速(Jeong， Jin-Ok 等，Therapeutic angiogenesis. Journal of Korean Society for Vascular Surgery. 2000. 16(2)，265-269)。L-精氨酸是化学式为C6H14N4O2,分子量为174. 21的碱性氨基酸。它最初从羽扇豆 (一种豆类)幼苗提取物中分离出来。L-精氨酸是组成蛋白质的氨基酸之一。它富含在鱼精子和以游离态存在于植物种子中的精蛋白里。而且，它是尿素循环(也称为鸟氨酸循环) 的主要组成部分。在精氨酸酶的作用下，它被分解成尿素和鸟氨酸。L-精氨酸由瓜氨酸和天门冬氨酸合成。尽管L-精氨酸对成人来说是非必需氨基酸，但它对婴儿却是营养上必需的。已知NO-硝基-L-精氨酸为一氧化氮合成酶抑制剂。有研究表明NO-硝基-L-精氨酸可能干扰血管松弛。但其它研究表明在L-精氨酸(3X10_3mOl/L)的存在下，NO-硝基-L-精氨酸的抑制作用能够被逆转(Simonsen等，Nitric oxide is involved in the inhibitory neurotransmission and endothelium-dependent relaxations of human small penial arteries, Clin. Sci. 92 :3,265-75.) 该研究主张 L-精氨酸能够成为一氧化氮合成酶的有效底物，并能刺激血管中游离NO的释放。男性性功能包括性欲、阴茎勃起、射精以及性高潮。这种性功能取决于神经系统、 内分泌系统以及血液循环系统间复杂的生理相互作用。它们中任何一方的失调都可能导致性功能障碍。到仅仅大约10年前为止，性功能障碍还被认为是由精神因素引起的。但是， 随着现代医学科学的发展，已发现大约50%患者的性功能障碍是由包括血液循环系统、神经系统和内分泌系统失调、糖尿病、高血压、药物摄入等在内的多种原因引起的。最近，西地那非，一种磷酸二酯酶V抑制剂，在对于性功能障碍的治疗方面引起了广泛兴趣。但是，这种应用化学药品的治疗仅引起短暂的勃起，而且它价格昂贵并伴有包括头痛、血压升高、心脏病发作等在内的多种不良反应。特别是有不少与心脏病发作相关的死亡病例报道。因此，需要能够从根本上增强勃起功能的安全有效的治疗方法。最近的趋势倾向于开发增加 NO和cGMP生成的治疗性功能障碍的方法，NO和cGMP是引起海绵体平滑肌的强烈松弛，从而增强阴茎勃起的信号转导物质。出现在阴茎勃起过程中的变化是复杂的，并且需要外周及中枢神经系统和内分泌系统高度协调的控制。海绵体平滑肌的收缩受到突触后α 1肾上腺素能受体激活而产生的去甲肾上腺素能神经刺激的控制，而且勃起功能障碍可能与海绵体平滑肌张力的增强有关。然而，阴茎平滑肌的松弛部分地受非肾上腺素能非胆碱能(NANC)神经递质的调节，而阴茎海绵体平滑肌张力的下降源于由NO引起的海绵体松弛。在性兴奋过程中，NO从神经元和内皮细胞释放出来，与存在于平滑肌细胞和内皮细胞中的可溶性鸟苷酸环化酶(sGC)结合并将其激活，从而提高细胞内环鸟苷3' -5'-单磷酸(cGMP)的水平。通过不明机制， 尽管认为这与蛋白激酶G的活化有关，但增高的cGMP水平通过降低细胞内钙水平引起海绵体的松弛(这可能是由Ca2+激活的K+通道的活化而引起的)(Chuang等，cGMP mediates corpus cavernosum smooth muscle relaxation with altered cross-bridge function. Life Sci. 1998 ；63 (3) :185-94)。随着生活水平的提高以及人们对外表的日趋重视，通过可食用产品而不仅仅是施用于皮肤的化妆品来改善皮肤美观的愿望也愈加强烈。即对有效预防衰老，改善皱纹，并提供皮肤美白及皮肤保湿效果的皮肤美容食品的关注和期望提高。皮肤是覆盖我们身体的器官。它由三层基本层组成表皮、真皮和皮下组织。还包括其它诸如汗腺、皮脂腺、乳腺、毛囊等的附属器官。表皮被进一步划分为以下几层角质层、透明层、颗粒层、棘细胞层和基底层。构成表皮的细胞主要类型是角质形成细胞和黑色素细胞。真皮被分为两个区域称为乳头区的浅表区域和称为网状区的深层较厚区域。它由粘弹性组织构成，并由无定形基质以及胶原蛋白、弹性蛋白等纤维状蛋白质组成。乳头区由较细的胶原纤维和它们间的空隙组成，并且富含细胞成分和基质成分。另一方面，网状区由较粗的聚集胶原纤维和它们间的空隙组成。胶原纤维通过弹性蛋白被连接起来。皮肤老化依据其起因可以分为自然老化和非自然老化。自然老化是随着时间的推移皮肤结构及生理功能的退化，而不考虑环境的变化。非自然老化是由于长期暴露于外在环境如阳光下所致。特别是，由光线引起的皮肤老化被称作光老化。紫外(UV)线是引起皮肤老化过程中生理学及形态学变化的主要原因。除了自然和非自然老化因素，现代社会环境的影响和季节因素也导致透明质酸生物合成的减少，而它是表皮和真皮中糖蛋白的主要组成部分。结果，皮肤变得粗糙和干燥。如果皮肤发生自然老化，则皮肤变得干燥，同时纤细的皱纹增加并加深。而且，由于表皮、真皮等结构和功能的改变，皮肤失去其大部分弹性并且看起来下垂。真皮变薄，而胶原蛋白的数量以每年的速度减少，并且剩余的胶原纤维也逐渐变粗并趋于交联，导致溶解性、弹性等的降低。同时，弹性蛋白纤维也变粗并趋于交联。此外，真皮中成纤维细胞的增殖减少，并且胶原蛋白的合成和分解能力降低。胶原蛋白是皮肤组织的主要组成部分，它与皮肤老化相关。该蛋白质占不含脂肪的皮肤干重总量的77%，并且占真皮纤维成分的90%。它负责维持皮肤的强度、弹性和柔性。因此，促进胶原蛋白的合成以及抑制胶原蛋白的降解已成为皮肤美观和预防皮肤老化方面的重要问题。很明显，光老化类似于自然老化，但是，从组织学上讲，它与角质形成细胞增殖增加引起的表皮增厚、黑色素细胞增加以及光线破坏区域的色素沉着有关。拥有光亮、透明和白暂的皮肤是现代人的强烈渴望之一。人的肤色取决于皮肤中黑色素的浓度和分布。除了遗传因素，还与诸如紫外线、疲劳、压力等的环境或生理因素相关。黑色素的合成过程如下酪氨酸被转化为多巴，然后在酪氨酸酶的作用下转化成多巴奎宁(dopaquinine)，之后，多巴奎宁通过非酶促氧化转化为黑色素。皮肤内黑色素的过分合成导致皮肤变黑、黄褐斑和雀斑。因此，可以通过抑制皮肤内黑色素的合成达到皮肤美白效
发明公开技术问题本发明针对解决上述问题。本发明的发明人发现，人参果(即人参地上部分之一) 的提取物与包括人参根部或红参根部在内的其它部分相比具有不同的组成和作用。因此，本发明的目的是应用人参果提取物提供通过改善内皮细胞活力，提升内皮细胞流动性以及促进内皮细胞管形成从而促进血液循环和血管发生的组合物，防止皮肤老化，改善皱纹并提供皮肤美白和皮肤保湿效果的改善皮肤美观的组合物，以及通过增加 NO——一种引起海绵体平滑肌松弛的信号转导物质——的生成从而增强阴茎勃起进而改善男性性功能的组合物。技术方案一方面，本发明提供促进血液循环的组合物，预防血管老化的组合物，治疗血管炎症的组合物，促进血管发生的组合物，治疗缺血性心脏病的组合物以及改善并治疗局部血液循环不足的组合物，其含有人参果提取物作为活性成分。根据本发明的实施方案，在治疗缺血性心脏病的组合物中，所述缺血性心脏病是动脉硬化、心绞痛或心肌梗死。根据本发明的实施方案，组合物中人参果提取物的制备方法如下向干燥的人参果中加入乙醇，之后回流提取，过滤，浓缩，除去油溶性组分，加入丁醇提取并浓缩。另一方面，本发明提供含有人参果提取物作为活性成分的改善皮肤美观的组合物。另一方面，本发明提供含有人参果提取物作为活性成分的改善男性性功能的组合物。另一方面，本发明提供含有人参果提取物作为活性成分并且还含有L-精氨酸的改善男性性功能的组合物。有益效果本发明的含有人参果提取物的组合物扩张血管，从而促进血液循环，抑制血管老化，治疗血管炎症，有助于通过促进血管发生治疗诸如动脉硬化、心绞痛及心肌梗死的缺血性心脏病，有助于改善和治疗由关节炎或骨折引起的局部血液循环不足。此外，它还具有优异的皮肤老化抑制作用、皮肤皱纹改善作用、皮肤美白效果及皮肤保湿效果。因此，可以用本发明的组合物制备用于改善皮肤美观的功能性保健食品。此外，本发明的人参果提取物增加内皮细胞中NO的生成，从而使阴茎勃起的改善成为可能。当将其与作为一氧化氮合成酶底物的L-精氨酸联合使用时，这种作用可能进一步加强。因此，含有人参果提取物和 L-精氨酸作为活性成分的组合物可能有效改善男性性功能。附图简要说明通过以下详细说明并结合随附的权利要求，将更加清楚地理解本发明的上述和其它目的及特点和其它优势，其中图Ia是内皮细胞的共聚焦激光显微图像，图Ib中对荧光强度与未处理组的荧光强度进行了对比；图加所示为存活内皮细胞的增殖，图2b中对染色的内皮细胞的吸光度进行了对比；
图3a所示为染色的内皮细胞的流动性，图北中对细胞的流动性与未处理组细胞的流动性进行了对比；图如所示为固定的染色内皮细胞，图4b中对管长与未处理组的管长进行了对比；图fe是从主动脉环延伸出的新生毛细血管的光学显微图像，图恥所示为通过测量新生血管的长度和数量所评估的血管萌发的促进作用；图6a是小鼠内血管发生的实时活体荧光显微图像，图6b所示为使用计算机程序分析的血管变化(0 最少变化，5 最多变化)；图7中对比了对LPS诱导的NO生成的抑制作用；图8中对比了小鼠血液中NO和炎症因子PGE2、TNF-α禾Π ILl-β的生成；图9所示为所测物质的活性氧清除活性；

图10所示为实施例1的人参果提取物的胶原蛋白生成；图11所示为实施例1的人参果提取物对MMP-I合成的抑制作用；图12所示为实施例1的人参果提取物的皱纹抑制作用；图13所示为实施例1的人参果提取物的减少皱纹作用；图14为表明L-精氨酸、红参提取物及人参果提取物在内皮细胞中的促NO生成作用的共聚焦激光显微图像；图15为通过相对荧光强度表明L-精氨酸、红参提取物及人参果提取物在内皮细胞中的促NO生成作用的图表；图16为通过相对荧光表明人参果提取物和L-精氨酸促进NO生成的协同作用的图表。实施本发明的最佳方式 下文中将对本发明做出更详细的说明。本发明提供组合物，它含有人参果提取物作为活性成分，促进内皮细胞中NO的生成从而改善血液循环，改善内皮细胞活力，促进内皮细胞的分化和迁移，并促进血管发生。 本发明的组合物可能含有人参果提取物作为活性成分从而通过提高内皮细胞中NO的生成改善阴茎的勃起，进而改善男性性功能，该组合物可能还含有L-精氨酸。为了改善男性性功能，需要通过使海绵体充分松弛来促进阴茎的勃起。这与NO生成的增加有关。在动物实验中，发现NO在阴茎勃起过程中起到重要作用。性刺激后，在阴茎副交感神经的外周，内皮细胞中NO的生成增加。NO激活鸟苷酸环化酶，从而将鸟苷三磷酸(GTP)转化成环鸟苷单磷酸(cGMP)。由此产生的cGMP提供触发海绵体平滑肌及阴茎动脉松弛的信号，从而引起阴茎勃起。因此，NO的生成对于维持阴茎勃起至关重要。所以，将作为一氧化氮合成酶底物的L-精氨酸和促进血管内NO生成的物质联合使用将会触发海绵体中NO的充分释放，从而引起平滑肌的松弛，使血液充分地流入并治疗勃起功能障碍。本发明的用于改善男性性功能的组合物基于所述组合物的总重量，取决于所述组合物的类型，可以含有0.01-100重量％的人参果提取物。当与L-精氨酸联合使用时，基于组合物的总重量，L-精氨酸的含量可以为0. 01-99. 9重量％。为了预防皮肤老化，改善皱纹并达到皮肤美白和皮肤保湿效果，需要有效清除由自然或非自然原因产生的活性氧(氧自由基)，促进胶原蛋白生成，抑制MMP-1，抑制酪氨酸酶，抑制黑色素生成，以及促进透明质酸生成。本发明的用于改善皮肤美观的含有人参果提取物的组合物可以制备成用于预防皮肤老化，改善皮肤皱纹，使皮肤美白和皮肤保湿的功能性保健食品。本发明的功能性保健食品组合物基于所述组合物的总重量，取决于所述组合物的类型，可以含有0.01-100重量％的人参果提取物。本发明的含有人参果提取物的组合物可以用作食品、药品等的添加剂。用于药品时，本发明的含有人参果提取物作为活性成分的组合物可以通过加入常用无机或有机载体制备成固体、半固体或液体剂型用于口服或肠胃外给药。口服给药制剂形式可包括片剂、丸剂、颗粒剂、软/硬胶囊剂、散剂、微粒剂、乳剂、 糖浆剂、弹丸剂等等。肠胃外给药制剂形式可包括注射剂、滴剂、软膏剂、洗剂、喷雾剂、混悬剂、乳化剂、栓剂等等。本发明的活性成分可以通过本领域中的常用方法制备成制剂形式。 可以适当地使用表面活性剂、赋形剂、着色剂、芳香剂、防腐剂、稳定剂、缓冲剂、助悬剂或其他辅剂。本发明的组合物可依据常用方法制备成药物制剂。当制备制剂时，优选用载体与活性成分混合或使其稀释，或者在容器型载体中将其封装。如果以稀释剂作为载体，它可以是固体、半固体或液体物质，对活性成分起到载体、赋形剂或介质的作用。适当的载体、赋形剂或稀释剂的实例包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟苯甲酯 (methylhydroxybenzoate)、轻苯丙酉旨(propylhydroxybenzoate)、滑石粉、硬月旨酸续及矿物油。制剂还可能含有填充剂、防絮凝剂、润滑齐 、湿润齐 、芳香齐 、乳化剂、防腐剂等等。本发明的组合物可以通过本领域中公知的方法制备成制剂，以便在给予哺乳动物后，活性成分能够以速释、缓释或控释方式释放出来。本发明的药物组合物可以制备成各种途径给药，包括口服、皮内、皮下、静脉内、腹膜内、肌内给药，通过使用贴剂或离子透入疗法进行局部施用。其中，优选局部施用和口服给药。对于人，活性成分的每日剂量可为1-100毫克/公斤体重，优选为5-70毫克/公斤体重。每日可一次或多次给药。然而，活性成分实际剂量的确定应考虑多种因素，包括要治疗的特定疾病、给药途径、病人的年龄、性别和体重、疾病的严重程度等等。因此，上述提到的给药剂量决不限制本发明的范围。作为功能性食品使用时，本发明的含有人参果提取物作为活性成分的组合物可以通过加入相关领域中常用的组分制备成片剂、胶囊剂、软胶囊剂、丸剂、颗粒剂、饮料、膳食条(diet bar)、巧克力、焦糖、糖果等。而且可以适当地添加适合于功能性食品的功能性成分。发明方式下面的实施例对本发明做出更为详细的阐述，但不是为了限制本发明的范围。实施例1 人参果提取物的制备1)人参果的预处理从收获的未加工的人参果中将种子分离并移出。人参果的果肉和果皮经日光晒干或热风干燥得到干燥的人参果。2)人参果提取物的制备向Ikg干燥的人参果中加入3L乙醇，然后回流提取，接着过滤，在40-45 V下减压浓缩，得到300g人参果提取物。实施例2 人参果提取物的制备1)将IOOg实施例1中得到的人参果提取物溶解于IL水中。通过加入500mL乙醚，使用分液漏斗除去油溶性成分。随后，向剩余的水层中加入500mL水饱和丁醇。此过程重复3次。所得的丁醇层减压浓缩，得到60g人参果提取物(粗皂苷)。比较例1 人参根部提取物的制备人参根部提取物通过与实施例1类似的方法制备，除了使用红参根部代替人参^ ο实验例1 人参果提取物与人参根部提取物成分的对比
1.人参皂苷(人参皂甙)成分的分析分别用乙醚处理实施例1和比较例1中制备的人参果提取物和人参根部提取物以去除油溶性成分。然后，用丁醇(BuOH)提取粗皂苷并浓缩。应用HPLC对人参皂苷(人参皂甙)成分进行分析。结果如下表1所示。表1
权利要求
1.人参果提取物在制备用于改善男性性功能的组合物中的用途。
2.权利要求1的用途，其中所述组合物还含有L-精氨酸。
3.权利要求1的用途，其中所述组合物含有基于所述组合物总重量的0.01-100重量％ 的人参果提取物。
4.权利要求2的用途，其中所述组合物含有基于所述组合物总重量的0.01-99. 9重量％的L-精氨酸。
5.权利要求1的用途，其中所述组合物提高血管内皮细胞中一氧化氮(NO)的生成。
6.权利要求1的用途，其中所述组合物改善阴茎勃起。
7.权利要求1的用途，其中所述组合物为片剂、丸剂、弹丸剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、软膏剂、饮料或注射剂的制剂形式。
全文摘要
本发明涉及含有人参果提取物的组合物。具体而言，本发明涉及人参果提取物在制备用于改善男性性功能的组合物中的用途。
文档编号A61K31/198GK102429940SQ20111040111
公开日2012年5月2日 申请日期2008年5月28日 优先权日2007年5月28日
发明者全喜莹, 崔荣德, 廉明勋, 朴燦雄, 李偿闵, 李常峻, 李真锳, 赵南勋, 金春基, 金荣明 申请人:株式会社太平洋