专利名称：针对nk1、nk2和/或nk3受体的抗体在癌症治疗中的用途的制作方法
技术领域：
本发明属于医学领域，更具体地，应用于医学、药理学和肿瘤学的分子生物学。具体地，它涉及治疗性抗体用于制备药物的用途，所述药物用于治疗人类的癌症。
背景技术：
NKUNK2和NK3型NK受体(P物质和速激肽类的神经肽受体)广泛地分布于体细胞中。已经在哺乳动物的中枢神经系统和周围神经系统中、在消化系统、循环系统、造血细胞和炎症和/或免疫应答细胞中、以及在软组织中(特别是在血管内皮中)证实了它们的存在。目前已知多种在它们的调节中涉及NK1、NK2和NK3受体的生物学过程。P物质是在哺乳动物中产生的天然起源的十一肽，它的序列被Veber等人(US4.680.283)进行了描述，且属于速激肽家族。该家族也包括其它肽，诸如神经激肽A、神经激肽B、神经肽K、神经肽Y和血细胞激肽I以及其它。在科学文献中已经广泛地报道了P物质和其它速激肽在几种疾病的病因病理机制中的参与。在这点上，已经将速激肽的作用与人神经系统疾病(诸如阿尔茨海默病、多发性硬化、帕金森病、焦虑和抑郁)的病因病理机制相关联(Barker R.等人，1996 ；Kramer MS,等人.1998)。还已经在几种具有炎症组分的疾病(诸如类风湿性关节炎、哮喘、变应性鼻炎、炎性肠病诸如溃疡性结肠炎和克罗恩病)的发病机理中证实了速激肽的参与(Maggi CA，等人.1993)。在该意义上，已经开发 了 NKl受体的非肽拮抗剂作为用于治疗几种中枢神经系统病症(诸如抑郁、精神病和焦虑)的药物(W095/16679、W095/18124、W095/23798和W001/77100)。已经描述，选择性的NKl受体拮抗剂可用于治疗由抗癌化疗剂诱发的恶心和呕吐，以及用于治疗某些形式的尿失禁(Quartara L.等人，1998 ；Doi T.等人，1999)。在2003年公开的研究(Giardina G，等人，2003)中，综述了关于NK1、NK2和NK3受体拮抗剂的最新专利。描述了得自最重要的全球生产商的分子，指示了它们的可能的应用，主要包括:抗抑郁、抗炎、抗焦虑、止吐、治疗溃疡性结肠炎、以及其它应用。由Antal Orosz等人(Orosz A,等人，1995)公开的文章描述了几种P物质(PS)拮抗剂用于抑制肺细胞癌(例如，在命名为NC1-H69的细胞中)的增殖的用途。另一方面，由Bunn PA Jr (Bunn PA Jr.等人，1994)公开的文章描述了可以抑制几种肺癌商业细胞系(例如，命名为NC1-H510，NC1-H345和SHP-77的细胞)的体外生长的P物质拮抗剂。在由Palma C等人.(Palma C.等人，2000)公开的文章中，描述了中枢神经系统的星形胶质细胞表达几种神经递质的功能受体，包括NKl受体。在脑肿瘤中，源自星形胶质细胞的恶性神经胶质细胞在速激肽的作用下并通过NKl受体的介导来触发增加它们的增殖速率的介质的分泌。结果，选择性的NKl拮抗剂作为用于治疗恶性神经胶质瘤的治疗剂是非常有用的。专利EP773026 (Pfizer)提及非肽NKl受体拮抗剂用于治疗哺乳动物的癌症的用途。尤其是在小肺癌、APUD0MAS(胺前体摄取和脱羧作用，主要位于消化管粘膜层中的肿瘤)、神经内分泌肿瘤和小肺外癌的治疗中。另一方面，专利W02001001922描述了 NKl受体拮抗剂用于治疗腺癌和非常具体地前列腺癌的用途。使用特异性的NKl 和 NK2 拮抗剂(例如，CP-96341-l-Pfizer-、MEN 11467、SR48968-Sanof1-和MEN11420_n印adutant-)的几项研究已经证实了它们在阻断细胞增殖中的效力(Singh D 等人，2000 ;和 Bigioni M.等人，2005)。已经描述，非肽NK受体拮抗剂会在得自不同肿瘤的肿瘤细胞中诱导细胞凋亡(细胞死亡)，所述肿瘤例如胃癌、结肠癌(Rosso M，等人，2008)或黑素瘤(Mufioz M，等人.2010)。此外，已经描述,这些受体在癌细胞中过表达。专利ES2246687要求保护“非肽NKl受体拮抗剂和P物质用于制备药物组合物的用途，所述药物组合物用于诱导得自哺乳动物的肿瘤细胞中细胞凋亡”，并因此“用于治疗
癌症”。抗体是能够高度选择性地结合几种有机分子的肽化合物。它们与某些细胞受体的结合诱导其活性的改变，这又可以导致细胞代谢的常规生理学活性的变化。针对几种细胞受体的细胞外结构域的单克隆抗体的应用(诸如治疗癌症)在临床实践中是普遍的。这些被批准用于肿瘤学中的治疗性单克隆抗体主要包括:曲妥单抗(它是用于乳腺癌的抗_ErbB2/HER2)、西妥昔单抗(它是用于结肠癌的抗-ErbBl/EGFR)和贝伐单抗(它是用于几类癌症的抗-VEGFR(血管内皮生长因子受体))(Adams GP.等人，2005)。专利申请W0/2009/1 25039要求保护“对P物质特异性的抗体或其片段用于制备药物的用途，所述药物通过直接施用给哺乳动物(包括人类)而用于表达NKl受体和/或ErbB受体家族成员的癌症的治疗性控制”。另外，在癌症的起源和发展中，不仅涉及肿瘤细胞的分子机制，而且基质细胞、炎症以及肿瘤细胞与基质和炎症之间的相互作用也是非常重要的(McAllister SS，等人.2010 ; Ikushima H, Miyazono K,2010)。另外，已经证实有些物质存在于肿瘤微环境中，并且在肿瘤的起源和进展中是非常重要的，所述物质例如NF-Kb(核因子KB)、TGF-13 (转化生长因子β)和SPARC(分泌的酸性的、富含半胱氨酸的蛋白)或TGF-α (转化生长因子a ) (Coussens L和WerbΖ.2002) ο TGF- β可以抑制CD8+淋巴细胞的前体形式转化为效应细胞形式(Berzofsky JA,等人.2004)。SPARC在肿瘤新血管形成中起主要作用(Carmeliet P和RK Jain.2000)。新血管形成、免疫和炎症是肿瘤进展的关键因素(Hanahan D和Weinberg RA.Cell.2000)。由成纤维细胞产生的某些分子在癌症进展中的重要性是众所周知的，甚至已经提出将它们用作治疗靶标，通过使用对它们特异性的单克隆抗体来治疗癌症(Welt S，等人.1994)。具体地，与肿瘤周围微环境有关的金属蛋白酶(MMP)是含有金属(锌)并降解细胞外基质蛋白(胶原IV、层粘连蛋白、弹性蛋白、纤连蛋白、葡聚糖蛋白等)的酶。它们在有些情况下生理性地表达，诸如伤口愈合、从软骨向骨的转变、和胎盘发育。它们在肿瘤转移的侵袭和发展过程中病理性地表达(Cox G.等人.2000)。最常见地参与肿瘤发展的MMP是:MMP-2 (明胶酶A)、MMP-3 (基质溶素I)、MMP-7 (基质溶解因子)、MMP-9 (明胶酶B)、丽 -11(基质溶素3)、丽 -13(胶原酶3)和MMP-14。目前正在试验几种称作金属蛋白酶抑制剂的药物用于治疗癌症:巴马司他(Batimastat，以MMP_1、2、3、7和9作为靶标的肽拟似物)、马立马司他(Marimastat，以MMP_1、2、3、7、9和12作为靶标的肽拟似物)、普啉司他(Prinomastat，以 MMP-2、3、9、13 和 14 作为靶标的非肽拟似物)、Bay_129566 (以 MMP_2、3 和9作为靶标的非肽拟似物)、Metastat (以MMP-2和9作为靶标的四环素)、BMS275291 (以MMP-2和9作为靶标的非肽拟似物)和新伐司他(Neovastat，得自鲨鱼软骨，以MMP-1、2、7、
9、12和13作为靶标)。具体地，马立马司他已经完成了乳腺癌和非小细胞肺癌的I期临床试验，普啉司他已经完成了前列腺癌的I期临床试验，Bay-129566已经完成了几种实体瘤的I期临床试验，BMS275291已经完成了非小细胞肺癌的I期临床试验。另外，已经报道，马立马司他的应用被证实可有效地治疗晚期胰腺癌(Rosemurgy等人，Procc ASC01999)、晚期胃癌(Fieldng 等人，Procc ASC02000)、胶质母细胞瘤(Puphanich 等人，Procc ASC02001)和在一线化学疗法治疗以后的乳腺癌(Sparano等人，Procc ASC02002)。因此，综上所述，在现有技术中目前已知下述事实:1.NKU NK2和NK3受体广泛地分布在人体中。2.速激肽、尤其是P物质作用于NKl受体。3.非肽NKl受体拮抗剂可以用于制备药物，所述药物用于治疗几种中枢神经系统病症，诸如抑郁、精神病和焦虑，这已经成为几件专利申请的权利要求的对象(W095/16679、W095/18124、W095/23798 和 W001/77100)。4.与人体的正常非癌细胞相比，这些受体在癌细胞中过表达。5.非肽NKl受体拮抗剂的应用`已经表现出对肿瘤细胞的作用，导致所述肿瘤细胞中细胞凋亡(细胞死亡)。在这点上，专利ES2246687已经要求保护“非肽NKl受体拮抗剂和P物质用于制备药物组合物的用途，所述药物组合物用于造成哺乳动物肿瘤细胞中细胞凋亡”，并因此“用于治疗癌症”。6.“P物质抗体向不同肿瘤细胞系的直接施用会减少肿瘤细胞的增殖并诱导其死亡”，如在专利申请W0/2009/125039中所述，该专利申请要求保护“对P物质特异性的抗体或其片段用于制备药物的用途，所述药物通过直接施用给哺乳动物(包括人类)而用于表达NKl受体和/或ErbB受体家族成员的癌症的治疗性控制”。7.如前所述，专利ES2246687要求保护非肽NKl受体拮抗剂和P物质(并具体地列出了给定数目的它们)的用途。因此，它不包括抗体或由其衍生出的明显地且清楚地具有肽性质的片段。这已经导致例如改进专利申请W0/2009/125039，其要求保护对P物质特异性的抗体或其片段用于癌症的治疗性控制的用途。这是因为，显而易见地，如在上述部分中所讨论的，抗体具有肽性质，这已经阻止2件专利(ES2246687和W0/2009/125039)之间的冲突的存在。8.已经证实了 NK1、NK2和/或NK3受体在参与炎症和/或免疫应答的血细胞中、在基质基体细胞中和在肿瘤细胞周围的血管形成细胞中的存在。已知基质细胞、参与炎症和/或免疫应答的血细胞和血管形成细胞会影响肿瘤进展。但是，已知的现有技术，包括使用非肽NKl受体拮抗剂和对P物质特异性的抗体或其片段用于治疗癌症，本发明的主题以及实现的技术优点是，针对NKl、NK2和/或NK3细胞受体的抗体或其片段用于制备药物或药物组合物的用途，所述药物或药物组合物通过直接施用给哺乳动物(包括人类)而用于癌症的治疗性控制，因为这些抗体可以改变这些受体的活性，从而诱导肿瘤细胞凋亡、肿瘤周围细胞的变化、以及炎症和/或免疫应答的改变，产生有益的治疗效果。
发明内容
发明简述本发明的主题是，对NK1、NK2和/或NK3细胞受体特异性的抗体或其片段用于制备药物的用途，所述药物通过诱导肿瘤细胞的细胞死亡或细胞凋亡、肿瘤周围微环境(由基质细胞、基质基体、以及肿瘤内和肿瘤周围的血管形成组成)的变化和/或肿瘤周围的炎症和/或免疫应答而用于人癌症的治疗性控制。尤其是关于黑素瘤(melanoma)、癌(尤其是肺癌(lung carcinoma)、乳腺癌(breast carcinoma)、消化系统癌(digestivesystem carcinoma)、前列腺癌(prostate carcinoma)、甲状腺癌(thyroid carcinoma)、子宫颈癌(cervix carcinoma)、子宫内膜癌(endometrium carcinoma)、卵巢癌(ovarycarcinoma)、膀胱癌(bladder carcinoma)和绒毛膜癌(choriocarcinoma))、腺癌(尤其是结肠腺癌(colon adenocarcinoma)、乳房腺癌(breast adenocarcinoma)、卵巢腺癌(ovary adenocarcinoma)、膜腺腺癌(pancreas adenocarcinoma)、月市腺癌(lungadenocarcinoma)、消化系统腺癌(digestive system adenocarcinoma))、白血病(尤其是人淋巴母细胞白血病(lymphoblastic leukaemia))、淋巴瘤(尤其是人B-细胞淋巴瘤(B-cells lymphomas)或 T-细胞淋巴瘤(T-cells lymphomas)、霍奇金淋巴瘤(Hodgkinlymphoma)和伯基特淋巴瘤(Burkitt lymphoma))、神经胶质型肿瘤(neoplasms of glialtype)、神经外胚层起源的肿瘤(neoplasms of neuroectodermic origin)、人尤因肉瘤(human Edwing sarcoma)、其它肉瘤(诸如横纹肌肉瘤(rhabdomyosarcoma)和骨肉瘤(osteosarcoma))和胚胎起源 的其它肿瘤,诸如神经母细胞瘤(neuroblastoma)、髓母细胞瘤(medul1blastoma)和肾母细胞瘤(nephroblastoma)。NKl、NK2和/或NK3受体抗体是这些受体的高度特异性的拮抗剂，从而改变或阻断它们的活性，诱导肿瘤细胞的死亡和细胞凋亡、以及在这些肿瘤细胞周围的基质细胞和基质基体中的变化、参与炎症和免疫的细胞的变化、以及肿瘤和肿瘤周围细胞(它们形成肿瘤微环境)的血管形成的变化。简而言之，肿瘤微环境的这些变化可以总结为:成纤维细胞免疫表型(尤其是关于金属蛋白酶、NF-Kb、TGF-β和SPARC的产生，它们是肿瘤进展中的关键要素)的改变，炎症细胞免疫表型(例如，TGF-β和NF-kB，它们在肿瘤进展中也是非常重要的)的改变，和血管内皮细胞增殖(新血管形成是肿瘤进展的关键性决定因子)的抑制。NKU NK2和NK3受体抗体诱导几种商业的肿瘤细胞系的细胞凋亡。另外，它们诱导形成肿瘤微环境的细胞的变化，这对于癌症的治疗而言是有益的:在成纤维细胞中，在炎症细胞(单核细胞和多形核细胞)中，和在血管内皮中。因此，NK1、NK2和NK3受体抗体不仅通过肿瘤细胞中细胞凋亡而诱导死亡，而且通过基质细胞和癌细胞之间的相互作用逆转增强肿瘤的生长和永存的微环境中的细胞(基质-成纤维细胞,血管-血管内皮-和炎症细胞)的变化。肿瘤细胞死亡和肿瘤微环境的变化会导致肿瘤尺寸的减小或肿瘤的完全消除。因此，本发明涉及针对NK1、NK2和/或NK3受体的抗体或其片段通过直接施用给人类而用于治疗癌症的用途。本发明也包括一种用于治疗性处理人类癌症的方法，所述方法包括:施用有效量的针对NKl、NK2和/或NK3受体的抗体或其片段，所述抗体或其片段会改变所述受体在细胞中的活性。在本发明中，术语“直接施用”是指，不通过用免疫原性形式的NK1、NK2和/或NK3受体进行免疫使患者产生抗体来施用治疗。在本发明中，在体外生产抗体，并施用给患者。在本发明中提出的治疗可用于癌症患者，所述患者是无症状的、有症状的、在新辅助治疗中(外科手术治疗前)、在辅助治疗中(在没有可检测的明显肿瘤时，外科手术以后的补充治疗)和在转移阶段的疾病的治疗中。“癌症”被定义为，具有无限生长潜力的恶性肿瘤，其通过侵袭局部地扩展和通过转移全身性地扩展。根据本发明，将NK1、NK2和/或NK3受体抗体或其片段施用给患有癌症的受:试者。NKl、NK2和/或NK3受体抗体对其起作用的肿瘤细胞选自:人侵袭性恶性黑素瘤原发细胞、人黑素瘤转移细胞、位于淋巴结中的人黑素瘤细胞、人神经胶质瘤细胞、人乳腺癌细胞、人小细胞肺癌细胞、人大细胞肺癌细胞、人胰腺癌细胞、人前列腺癌细胞、人结肠癌细胞、人胃癌细胞、人卵巢癌细胞、人子宫内膜癌细胞、人子宫颈癌细胞、人甲状腺癌细胞、人膀胱癌细胞、人绒毛膜癌细胞、人急性B细胞淋巴母细胞白血病细胞、人急性T细胞淋巴母细胞白血病细胞、人伯基特淋巴瘤细胞、人霍奇金淋巴瘤细胞、人神经母细胞瘤细胞、人视网膜母细胞瘤细胞、人尤因肉瘤细胞、人横纹肌肉瘤细胞和人骨肉瘤细胞以及其它(参见表I)。本文使用的“NK1、NK2和/或NK3受体抗体”是指，针对NKl、NK2和/或NK3受体的任意多克隆抗体或单克隆抗体。本发明也考虑这些抗体的片段的用途。抗体片段是指NKl、NK2和/或NK3受体抗体的一部分，其具有足够的大小和适当的结构以结合存在于NKU NK2和/或NK3受体中的表位以及改变它的正常功能，包括避免P物质或这些受体的其它激动剂结合前述受体。本文使用的术语“特异性的”是指，所述抗体与其它抗原没有随机结合。多种众所周知的、基于抗原和抗体之间的免疫反应的测定技术可以与作为抗原的NK1、NK2和/或NK3受体一起使用，以确定给定的抗体或其片段是否具有结合存在于NKl、NK2和/或NK3受体中的表位以及潜在地改变它们的活性的能力。这些技术可以是，例如，“酶联免疫吸附测定”(ELISA)、免疫荧光测定(IFA)、放射免疫测定、免疫电泳和免疫印迹。另外，为了确定给定的抗体或抗体片段是否具有治疗癌症的能力，可以使用细胞凋亡诱导测定，其包括用DAPI (4' -6- 二脒-2-苯基吲哚)或用膜联蛋白染色。本发明的另一个主题是，改变NK1、NK2和/或NK3受体的功能的抗体或其片段在用于治疗癌症的药物组合物或药物的制备中的用途。必须理解的是，针对NKl、NK2和/或NK3受体的药物组合物或药物是呈药学上可接受的形式，其将直接地、优选地通过静脉内途径、口服途径、肠胃外途径或任意其它途径施用给个体。静脉内给药直接表示，将抗体或其片段或含有它的药物组合物直接施用进患者的血流中。口服给药可以包括吞咽，使得所述抗体或其片段以及含有的药物组合物接触胃肠道，或者可以使用口服或舌下给药，其中所述化合物从口腔直接进入血流中。肠胃外给药表示，除了经肠以外的给药途径，透皮或通过吸入且通常是通过注射或输注。肠胃外给药包括静脉内的、肌肉内的和/或皮下的注射或输注。另外，本发明的针对NK1、NK2和/或NK3受体的抗体或其片段可以单独施用，或与药学上可接受的载体和/或赋形剂联合施用。本领域技术人员将根据具体给药方法改造所述组合物。在施用纯化的抗体的情况下，口服给药是优选的方法，且优选地通过固体剂型(包括胶囊剂、片剂、丸剂、粉剂和颗粒剂以及其它)或液体剂型来实现。用于肠胃外给药的NK1、NK2和/或NK3受体抗体的制剂优选地包括水性的或非水性的无菌的溶液、混悬液或乳剂以及其它。术语“药学上可接受的载体或赋形剂”是指，必须经过联邦政府或州政府的管理机构批准的赋形剂，或在美国药典或欧洲药典中列出的赋形剂，或在普遍认可用于动物(更具体地，人类)的其它药典中列出的赋形剂。此外，适当的药学上可接受的赋形剂将随选择的具体剂型而变化。另外，可以关于它们在组合物中所具有的特定功能，选择适当的药学上可接受的赋形剂。例如，可以关于它们的增强均匀剂型的生产的能力，选择某些药学上可接受的赋形剂。可以关于它们的增强均匀剂型的生产的能力，选择某些药学上可接受的赋形齐U。可以关于它们的增强本发明化合物在施用给患者以后从一个器官或身体部件向另一个器官或身体部件运输的能力，选择某些药学上可接受的赋形剂。可以关于它们的增强患者接受的能力，选择某些药学上可接受的赋形剂。适当的药学上可接受的赋形剂包括下述类型的赋形剂，但不排除现有技术中已知的其它赋形剂:稀释剂、载体(loads)、粘合剂、崩解剂、润滑剂、滑动剂(gliding agents)、造粒剂、包衣剂、湿润剂(moisturising agents)、溶剂、共溶剂、助悬剂、乳化剂、甜味剂、矫味剂、掩味剂、色素、抗结剂、保湿剂(wetters)、螯合剂、增塑剂、增粘剂、抗氧化剂、防腐剂、稳定剂、表面活性剂和缓冲剂。本领域的技术人员应当理解，某些药学上可接受的赋形剂可以完成超过一种功能，且可以根据在制剂中存在的赋形剂的量和在制 剂中存在的其它成分而执行替代功能。技术人员具有本领域的知识和技能，使得他们能够选择适当量的适当的药学上可接受的赋形剂用于本发明中。另外，几种描述药学上可接受的赋形剂的来源是本领域技术人员可得到的，且可用于选择适当的药学上可接受的赋形剂。实例包括=Remington药物科学(Mack出版公司)(Remington' sPharmaceutical Sciences (Mack Publishing Company))、药物添加剂手册(Gower 出版有限公司)(The Handbook of Pharmaceutical Additives (Gower Publishing Limited))和药物赋形剂手册(美国药学会和药学出版社)(The Handbook of PharmaceuticalExcipients(the American Pharmaceutical Association and the PharmaceuticalPress))。根据预期的治疗效果、给药途径和治疗持续时间，可以选择活性成分的剂量。给药剂量和频率将取决于受试者的大小、年龄和健康状况，并考虑副作用的可能性。给药还将取决于使用其它药物的伴随治疗和每位受试者对施用的药物的耐受性。本领域技术人员使用标准规程可以确定适当的剂量。应当理解，所述剂量应当是抗体或其片段的有效量，因为所述治疗应当在这些患者中至少具有与当前治疗剂量相同的或更好的效果。所述组合物可以包含所述抗体或其片段作为单一抗癌剂，或者包含它们与其它治疗剂的组合，视情况而定。除非另有定义，在本文中使用的所有技术和科学术语具有与本领域技术人员通常理解相同的含义。与本文所述的那些类似或等效的方法和材料可以用于实践本发明。在说明书中和在权利要求书中，词语“包含”和它的变体无意排除其它技术特征、添加物、组分或步骤。本领域技术人员从说明书中和从本发明的实践中可以部分地推断出本发明的其它主题、优点和特征。
图1.用图中所示的抗体滴度的抗-NKl⑷、抗-NK2⑶或抗_NK3 (C)抗体处理48、72和96小时对人结肠腺癌的商业细胞系(SW-403)的增殖的抑制(表不为相对于对照培养物的百分比)，所述细胞系得自DSMZ公司(德国微生物和细胞培养物保藏中心，DeutscheSammlung von Mikrorganismen und Zellkultures)的细胞系收集物，并在该公司指定的条件下培养。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。图2.用图中所示的抗体滴度的抗-NKl (A)、抗-NK2 (B)或抗_NK3(C)抗体处理48、72和96小时对人乳房腺癌的商业细胞系(MCF-7)的增殖的抑制(表示为相对于对照培养物的百分比)，所述细胞系得自DSMZ公司的细胞系收集物，并在该公司指定的条件下培养。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。图3.用图中所示的抗体滴度的抗-NKl⑷、抗-NK2⑶或抗_NK3 (C)抗体处理48、72和96小时对人卵巢腺癌的商业细胞系(EF0-27)的增殖的抑制(表示为相对于对照培养物的百分比)，所述细胞系得自DSMZ公司的细胞系收集物，并在该公司指定的条件下培养。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。图4.用图中所示的抗体滴度的抗-NKl⑷或抗-NK3⑶抗体处理48、72和96小时对人胰腺腺癌的商业细胞系(CAPAN-1)的增殖的抑制(表不为相对于对照培养物的百分比)，所述细胞系得自DSMZ公司的细胞系收集物，并在该公司指定的条件下培养。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。图5.用图中所示的抗体滴度的抗-NKl (A)、抗-NK2⑶或抗_NK3 (C)抗体处理48、72和96小时对人胰腺腺癌 的商业细胞系(PA-TU-8902)的增殖的抑制(表示为相对于对照培养物的百分比)，所述细胞系得自DSMZ公司的细胞系收集物，并在该公司指定的条件下培养。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。图6.用图中所示的抗体滴度的抗-NKl⑷、抗-NK2⑶或抗-NK3 (C)抗体处理48、72和96小时对人肺腺癌的商业细胞系(DV-90)的增殖的抑制(表示为相对于对照培养物的百分比)，所述细胞系得自DSMZ公司的细胞系收集物，并在该公司指定的条件下培养。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。图7.用图中所示的抗体滴度的抗-NKl⑷、抗-NK2⑶或抗_NK3 (C)抗体处理48、72和96小时对人胃腺癌的商业细胞系(23132/87)的增殖的抑制(表示为相对于对照培养物的百分比)，所述细胞系得自DSMZ公司的细胞系收集物，并在该公司指定的条件下培养。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。图8.用图中所示的抗体滴度的抗-NKl⑷、抗-NK2⑶或抗_NK3 (C)抗体处理48、72和96小时对人子宫颈癌的商业细胞系(KB)的增殖的抑制(表示为相对于对照培养物的百分比)，所述细胞系得自DSMZ公司的细胞系收集物，并在该公司指定的条件下培养。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。
图9.用图中所示的抗体滴度的抗-NKl (A)、抗-NK2⑶或抗_NK3 (C)抗体处理48、72和96小时对人子宫颈癌的商业细胞系(BT-B)的增殖的抑制(表示为相对于对照培养物的百分比)，所述细胞系得自DSMZ公司的细胞系收集物，并在该公司指定的条件下培养。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。图10.用图中所示的抗体滴度的抗-NKl⑷、抗-NK2⑶或抗_NK3 (C)抗体处理48、72和96小时对人子宫内膜癌的商业细胞系(AN3-CA)的增殖的抑制(表示为相对于对照培养物的百分比)，所述细胞系得自DSMZ公司的细胞系收集物，并在该公司指定的条件下培养。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。图11.用图中所示的抗体滴度的抗-NKl (A)、抗-NK2 (B)或抗_NK3 (C)抗体处理48、72和96小时对人乳腺癌的商业细胞系(MT-3)的增殖的抑制(表示为相对于对照培养物的百分比)，所述细胞系得自DSMZ公司的细胞系收集物，并在该公司指定的条件下培养。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。
图12.用图中所示的抗体滴度的抗-NKl (A)、抗-NK2 (B)或抗_NK3 (C)抗体处理48、72和96小时对人乳腺癌的商业细胞系(MDA-MB-468)的增殖的抑制(表示为相对于对照培养物的百分比)，所述细胞系得自DSMZ公司的细胞系收集物，并在该公司指定的条件下培养。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。图13.用图中所示的抗体滴度的抗-NKl⑷、抗-NK2⑶或抗_NK3 (C)抗体处理48、72和96小时对人卵巢癌的商业细胞系(C0L0-704)的增殖的抑制(表示为相对于对照培养物的百分比)，所述细胞系得自DSMZ公司的细胞系收集物，并在该公司指定的条件下培养。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。图14.用图中所示的抗体滴度的抗-NKl⑷、抗-NK2⑶或抗_NK3 (C)抗体处理48、72和96小时对人卵巢癌的商业细胞系(FU-0V-1)的增殖的抑制(表示为相对于对照培养物的百分比)，所述细胞系得自DSMZ公司的细胞系收集物，并在该公司指定的条件下培养。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。图15.用图中所示的抗体滴度的抗-NKl⑷、抗-NK2⑶或抗_NK3 (C)抗体处理48、72和96小时对人前列腺癌的商业细胞系(22RV1)的增殖的抑制(表示为相对于对照培养物的百分比)，所述细胞系得自DSMZ公司的细胞系收集物，并在该公司指定的条件下培养。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。图16.用图中所示的抗体滴度的抗-NKl⑷、抗-NK2⑶或抗_NK3 (C)抗体处理48、72和96小时对人小细胞肺癌的商业细胞系(HCC-44)的增殖的抑制(表示为相对于对照培养物的百分比)，所述细胞系得自DSMZ公司的细胞系收集物，并在该公司指定的条件下培养。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。图17.用图中所示的抗体滴度的抗-NKl (A)或抗-NK2 (B)抗体处理48、72和96小时对人非小细胞肺癌的商业细胞系(C0R-L23)的增殖的抑制(表示为相对于对照培养物的百分比)，所述细胞系得自ECACC公司(欧洲细胞培养物保藏中心,European Collectionof Cell Cultures)的细胞系收集物，并在该公司指定的条件下培养。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。图18.用图中所示的抗体滴度的抗-NKl (A)、抗-NK2 (B)或抗_NK3 (C)抗体处理48、72和96小时对人小细胞肺癌的商业细胞系(H-209)的增殖的抑制(表示为相对于对照培养物的百分比)，所述细胞系得自DSMZ公司的细胞系收集物，并在该公司指定的条件下培养。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。图19.用图中所示的抗体滴度的抗-NKl (A)或抗-NK2 (B)抗体处理48、72和96小时对人小细胞肺癌的商业细胞系(H-1963)的增殖的抑制(表示为相对于对照培养物的百分比)，所述细胞系得自DSMZ公司的细胞系收集物，并在该公司指定的条件下培养。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。图20.用图中所示的抗体滴度的抗-NKl (A)或抗-NK2 (B)抗体处理48、72和96小时对人小细胞肺癌的商业细胞系(H-69)的增殖的抑制(表示为相对于对照培养物的百分比)，所述细胞系得自ECACC公司的细胞系收集物，并在该公司指定的条件下培养。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。图21.用图中所示的抗体滴度的抗-NKl (A)或抗-NK2 (B)抗体处理48、72和96小时对人肺癌的商业细胞系(A-427)的增殖的抑制(表示为相对于对照培养物的百分比)，所述细胞系得自DSMZ公司的细胞系收集物，并在该公司指定的条件下培养。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。图22.用图中所示的抗体滴度的抗_NK2(A)或抗-NK3 (B)抗体处理48、72和96小时对人甲状腺癌的商业细胞系(8505C)的增殖的抑制(表示为相对于对照培养物的百分比)，所述细胞系得自DSMZ公司的细胞系收集物，并在该公司指定的条件下培养。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。图23.用图中所示的抗体滴度的抗-NKl (A)或抗-NK2 (B)抗体处理48、72和96小时对转移性人乳头状甲状腺癌的商业细胞系(B-CPAP)的增殖的抑制(表示为相对于对照培养物的百分比)，所述细胞系得自DSMZ公司的细胞系收集物，并在该公司指定的条件下培养。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。
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图24.用图中所示的抗体滴度的抗-NKl抗体处理48、72和96小时对人膀胱癌的商业细胞系(5637)的增殖的抑制(表示为相对于对照培养物的百分比)，所述细胞系得自DSMZ公司的细胞系收集物，并在该公司指定的条件下培养。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。图25.用图中所示的抗体滴度的抗-NKl (A)或抗-NK2 (B)抗体处理48、72和96小时对人乳房导管癌的商业细胞系(BT-474)的增殖的抑制(表示为相对于对照培养物的百分比)，所述细胞系得自DSMZ公司的细胞系收集物，并在该公司指定的条件下培养。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。图26.用图中所示的抗体滴度的抗-NKl (A)或抗-NK2⑶抗体处理48、72和96小时对人滤泡甲状腺癌的商业细胞系(TT2609-C02)的增殖的抑制(表示为相对于对照培养物的百分比)，所述细胞系得自DSMZ公司的细胞系收集物，并在该公司指定的条件下培养。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。图27.用图中所示的抗体滴度的抗-NKl⑷、抗-NK2⑶或抗_NK3 (C)抗体处理48、72和96小时对人移行膀胱癌的商业细胞系(RT-4)的增殖的抑制(表示为相对于对照培养物的百分比)，所述细胞系得自DSMZ公司的细胞系收集物，并在该公司指定的条件下培养。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。图28.用图中所示的抗体滴度的抗-NKl (A)或抗-NK2 (B)抗体处理48、72和96小时对人泌尿道上皮膀胱癌的商业细胞系(647-V)的增殖的抑制(表示为相对于对照培养物的百分比)，所述细胞系得自DSMZ公司的细胞系收集物，并在该公司指定的条件下培养。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。图29.用图中所示的抗体滴度的抗-NKl (A)、抗-NK2 (B)或抗_NK3 (C)处理48、72和96小时对人绒毛膜癌的商业细胞系(AC-1M32)的增殖的抑制(表示为相对于对照培养物的百分比)，所述细胞系得自DSMZ公司的细胞系收集物，并在该公司指定的条件下培养。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。图30.用图中所示的抗体滴度的抗-NKl⑷、抗-NK2⑶或抗_NK3 (C)抗体处理48、72和96小时对人纤维肉瘤的商业细胞系(HT-1080)的增殖的抑制(表示为相对于对照培养物的百分比)，所述细胞系得自DSMZ公司的细胞系收集物，并在该公司指定的条件下培养。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。图31.用图中所示的抗体滴度的抗-NKl⑷、抗_NK2(B)或抗_NK3 (C)抗体处理48、72和96小时对人神经胶质瘤的商业细胞系(GAMG)的增殖的抑制(表示为相对于对照培养物的百分比)，所述细胞系得自DSMZ公司的细胞系收集物，并在该公司指定的条件下培养。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。图32.用图中所示的抗体滴度的抗-NKl⑷、抗_NK2(B)或抗_NK3 (C)抗体处理48、72和96小时对人恶性纤维组织细胞瘤的商业细胞系(U-2197)的增殖的抑制(表示为相对于对照培养物的百分比)，所述细胞系得自DSMZ公司的细胞系收集物，并在该公司指定的条件下培养。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。图33.用图中所示的抗体滴度的抗-NKl抗体处理48、72和96小时对人T/NK细胞白血病的商业细胞系(YT)的增殖的抑制(表示为相对于对照培养物的百分比)，所述细胞系得自DSMZ公司的细胞系收集物，并在该公司指定的条件下培养。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。图34.用图中所示的抗体滴度的抗-NKl⑷、抗-NK2⑶或抗_NK3 (C)抗体处理48、72和96小时对人B淋巴母细胞白血病的商业细胞系(SDl)的增殖的抑制(表示为相对于对照培养物的百分比)，所述细胞系得自DSMZ公司的细胞系收集物，并在该公司指定的条件下培养。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。图35.用图中所示的抗体滴度的抗-NKl⑷、抗-NK2⑶或抗_NK3 (C)抗体处理48、72和96小时对人T淋巴母细胞白血病的商业细胞系(BE-13)的增殖的抑制(表示为相对于对照培养物的百分比)，所述细胞系得自DSMZ公司的细胞系收集物，并在该公司指定的条件下培养。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。图36.用图中所示的抗体滴度的抗-NKl⑷、抗-NK2⑶或抗_NK3 (C)抗体处理48、72和96小时对人B淋巴瘤的商业细胞系(BC-1)的增殖的抑制(表示为相对于对照培养物的百分比)，所述细胞系得自DSMZ公司的细胞系收集物，并在该公司指定的条件下培养。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。图37.用图 中所示的抗体滴度的抗-NKl (A)或抗-NK2 (B)抗体处理48、72和96小时对人B淋巴瘤的商业细胞系(SU-DHL-16)的增殖的抑制(表示为相对于对照培养物的百分比)，所述细胞系得自DSMZ公司的细胞系收集物，并在该公司指定的条件下培养。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。
图38.用图中所示的抗体滴度的抗-NKl (A)、抗-NK2⑶或抗_NK3 (C)抗体处理48、72和96小时对人伯基特淋巴瘤的商业细胞系(CA-46)的增殖的抑制(表示为相对于对照培养物的百分比)，所述细胞系得自DSMZ公司的细胞系收集物，并在该公司指定的条件下培养。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。图39.用图中所示的抗体滴度的抗-NKl⑷、抗-NK2⑶或抗_NK3 (C)抗体处理48、72和96小时对人霍奇金淋巴瘤的商业细胞系(KM-H2)的增殖的抑制(表示为相对于对照培养物的百分比)，所述细胞系得自DSMZ公司的细胞系收集物，并在该公司指定的条件下培养。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。图40.用图中所示的抗体滴度的抗-NKl⑷、抗-NK2⑶或抗_NK3 (C)抗体处理48、72和96小时对人T淋巴瘤的商业细胞系(DERL-7)的增殖的抑制(表示为相对于对照培养物的百分比)，所述细胞系得自DSMZ公司的细胞系收集物，并在该公司指定的条件下培养。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。图41.用图中所示的抗体滴度的抗-NKl⑷或抗-NK2(B)抗体处理48、72和96小时对人T淋巴瘤的商业细胞系(SUP-Tl)的增殖的抑制(表示为相对于对照培养物的百分比)，所述细胞系得自DSMZ公司的细胞系收集物，并在该公司指定的条件下培养。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。图42.用图中所示的抗体滴度的抗-NKl⑷、抗_NK2(B)或抗_NK3 (C)抗体处理48、72和96小时对人黑素瘤的商业细胞系(MEL HO)的增殖的抑制(表示为相对于对照培养物的百分比)，所述细胞系得自DSMZ公司的细胞系收集物，并在该公司指定的条件下培养。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。图43.用图中所示的抗体滴度的抗-NKl (A)或抗-NK2 (B)抗体处理48、72和96小时对人黑素瘤的商业细胞系(C0L0679)的增殖的抑制(表示为相对于对照培养物的百分比)，所述细胞系得自DS MZ公司的细胞系收集物，并在该公司指定的条件下培养。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。图44.用图中所示的抗体滴度的抗-NKl⑷或抗-NK2 (B)抗体处理48、72和96小时对具有淋巴结转移的人黑素瘤的商业细胞系(C0L0858)的增殖的抑制(表示为相对于对照培养物的百分比)，所述细胞系得自ICLC公司(Interlab细胞系保藏中心，InterlabCell line collection-CBA-Genoa)的细胞系收集物,并在该公司指定的条件下培养。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。图45.用图中所示的抗体滴度的抗-NKl⑷、抗-NK2⑶或抗_NK3 (C)抗体处理48、72和96小时对人多发性骨髓瘤的商业细胞系(C0L0677)的增殖的抑制(表示为相对于对照培养物的百分比)，所述细胞系得自DSMZ公司的细胞系收集物，并在该公司指定的条件下培养。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。图46.用图中所示的抗体滴度的抗-NKl⑷、抗-NK2⑶或抗_NK3 (C)抗体处理48、72和96小时对人神经母细胞瘤的商业细胞系(KELLY)的增殖的抑制(表示为相对于对照培养物的百分比)，所述细胞系得自DSMZ公司的细胞系收集物，并在该公司指定的条件下培养。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。图47.用图中所示的抗体滴度的抗-NKl (A)或抗-NK2 (B)抗体处理48、72和96小时对人神经母细胞瘤的商业细胞系(MR-32)的增殖的抑制(表示为相对于对照培养物的百分比)，所述细胞系得自DSMZ公司的细胞系收集物，并在该公司指定的条件下培养。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。图48.用图中所示的抗体滴度的抗-NKl (A)或抗-NK2⑶抗体处理48、72和96小时对人骨髓神经母细胞瘤的商业细胞系(SKN-BE2)的增殖的抑制(表示为相对于对照培养物的百分比)，所述细胞系得自ICLC公司的细胞系收集物，并在该公司指定的条件下培养。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。图49.用图中所示的抗体滴度的抗-NKl⑷、抗-NK2⑶或抗_NK3 (C)抗体处理48、72和96小时对人骨肉瘤的商业细胞系(MG-63)的增殖的抑制(表示为相对于对照培养物的百分比)，所述细胞系得自ICLC公司的细胞系收集物，并在该公司指定的条件下培养。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。图50.用图中所示的抗体滴度的抗-NKl (A)或抗-NK2 (B)抗体处理48、72和96小时对人骨肉瘤的商业细胞系(CAL-72)的增殖的抑制(表示为相对于对照培养物的百分比)，所述细胞系得自DSMZ公司的细胞系收集物，并在该公司指定的条件下培养。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。图51.用图中所示的抗体滴度的抗-NKl (A)、抗-NK2 (B)或抗_NK3 (C)抗体处理48、72和96小时对人横纹肌肉瘤的商业细胞系(A-204)的增殖的抑制(表示为相对于对照培养物的百分比)，所述细胞系得自DSMZ公司的细胞系收集物，并在该公司指定的条件下培养。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。图52.用图中所示的抗体滴度的抗-NKl (A)、抗-NK2 (B)或抗_NK3 (C)抗体处理48、72和96小时对人视网膜母细胞瘤的商业细胞系(Y-79)的增殖的抑制(表示为相对于对照培养物的百分比)，所述细胞 系得自DSMZ公司的细胞系收集物，并在该公司指定的条件下培养。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。图53.用图中所示的抗体滴度的抗-NKl⑷、抗_NK2(B)或抗_NK3 (C)抗体处理48、72和96小时对人视网膜母细胞瘤的商业细胞系(WER1-Rb-1)的增殖的抑制(表示为相对于对照培养物的百分比)，所述细胞系得自DSMZ公司的细胞系收集物，并在该公司指定的条件下培养。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。图54.用图中所示的抗体滴度的抗-NKl⑷、抗_NK2(B)或抗_NK3 (C)抗体处理48、72和96小时对人尤因肉瘤的商业细胞系(MHH-ES-1)的增殖的抑制(表示为相对于对照培养物的百分比)，所述细胞系得自DSMZ公司的细胞系收集物，并在该公司指定的条件下培养。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。图55.用图中所示的抗体滴度的抗-NKl (A)或抗-NK2 (B)抗体处理48、72和96小时对人子宫内膜基质肉瘤的商业细胞系(ESS-1)的增殖的抑制(表示为相对于对照培养物的百分比)，所述细胞系得自DSMZ公司的细胞系收集物，并在该公司指定的条件下培养。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。图56.用图中所示的抗体滴度的抗-NKl (A)抗体处理48、72和96小时对人内皮细胞系(C-12210)的增殖的抑制(表示为相对于对照培养物的百分比)。作为增殖的对照，在没有前述抗体存在下培养所述细胞。
具体实施方式
本发明的一个实施方案涉及至少一种特异性针对NK1、NK2和/或NK3细胞受体的抗体或其片段或它们的组合用于制备药物或药物组合物的用途，所述药物或药物组合物用
于治疗癌症。本发明的另一个实施方案涉及至少一种特异性针对NK1、NK2和/或NK3细胞受体的抗体或其片段或它们的组合用于制备药物或药物组合物的用途，所述药物或药物组合物用于诱导肿瘤细胞中细胞凋亡。本发明的另一个优选实施方案包括至少一种特异性针对NK1、NK2和/或NK3细胞受体的抗体或其片段或它们的组合用于制备药物或药物组合物的用途，所述药物或药物组合物用于减小肿瘤尺寸。该肿瘤尺寸减小通过改变肿瘤周围微环境而实现，后者包括改变在肿瘤周围的基质基体(stromal matrix)和基质细胞(stromal cell)的生理学、改变该基质的细胞(成纤维细胞)的生理学、改变炎症和/或免疫应答细胞的生理学、和改变血管形成细胞的生理学，所述血管形成细胞例如在肿瘤区域和肿瘤周围区域周边的血管内皮细胞。所有这些的目的是，改变肿瘤周围区域的生理学，其表现出不同于它们在没有肿瘤存在下的生理学的独特特征，其决定肿瘤周围微环境并促进肿瘤发展和进展。通过使用目标在于减小肿瘤尺寸和阻止它们进展的抗-NKl、抗-NK2和抗-NK-3抗体，改变肿瘤周围区域的这种独特的生理学。在这点上，改变基质基体和基质细胞的生理学和/或参与炎症和免疫应答的细胞的生理学包括抑制肿瘤标记。这些肿瘤标记优选地选自下述列表中的任一种:NF-kB、TGF a、TGF- β 1、TGF- β 2、TGF- β 3、SPARC、ΜΜΡ-3、ΜΜΡ-7、ΜΜΡ-9、MMP-11、MMP-13、ΜΜΡ-14和/或它们的任意组合。另外，改变负责血管形成的细胞的生理学包括抑制新血管形成，优选地通过抑制血管内皮细胞增殖进行。如以上所讨论的，所有这些的目的是，减小肿瘤尺寸和阻止它的进展。要用本发明化合物治疗的癌症选自包括下述各项的组:黑素瘤、神经胶质肿瘤、癌、腺癌、白血病、淋巴瘤、骨髓瘤、神经母细胞瘤(和生殖细胞或神经外胚层型的其它肿瘤)和/或肉瘤。
更优选地，所述癌选自下述的任一种:乳腺癌(包括导管癌)、肺癌(包括小细胞肺癌和非小细胞肺癌)、甲状腺癌(包括滤泡癌和乳头状癌)、消化系统癌、前列腺癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、卵巢癌、膀胱癌(包括内皮癌和移行癌)和/或绒毛膜癌。另外，所述腺癌选自下述的任一种:乳房腺癌、卵巢腺癌、胰腺腺癌、肺腺癌和消化系统腺癌(包括胃腺癌和结肠腺癌)。另一方面，白血病优选地是人T细胞白血病、B细胞白血病和/或Τ/ΝΚ细胞淋巴母细胞白血病。淋巴瘤优选地是B型淋巴瘤、T型淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤和/或伯基特淋巴瘤。要用本发明公开的抗体治疗的肉瘤的类型优选地是:骨肉瘤、横纹肌肉瘤、纤维肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、子宫内膜基质肉瘤和/或尤因肉瘤。另一方面，要用本发明公开的抗体治疗的其它肿瘤优选地是神经母细胞瘤、以及生殖细胞和/或神经外胚层起源的其它肿瘤。在本发明中使用的抗体优选地至少识别选自SEQ ID N0:U SEQ ID NO:2或SEQID NO:3的ΝΚ1、ΝΚ2或ΝΚ3受体的序列。本发明的另一个优选实施方案涉及一种药物组合物，其包含至少一种特异性针对NKUNK2和/或NK3受体的抗体或其片段或它们的组合。在本发明中使用的抗体优选地至少识别选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3的NKl、NK2或NK3受体的序列。该药物组合物也可以包含药学上可接受的载体和/或赋形剂。本发明的范围也包括该药物组合物用于治疗癌症的用途。更具体地，所述癌症选自:黑素瘤、癌、腺癌、白血病、淋巴瘤、神经母细胞瘤(或其它胚胎肿瘤或神经外胚层肿瘤)和/或肉瘤。更优选地，所述癌选自下述的任一种:乳腺癌(包括导管癌)、肺癌(包括小细胞肺癌和非小细胞肺癌)、甲状腺癌(包括滤泡癌和乳头状癌)、消化系统癌、前列腺癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、卵巢癌、膀胱癌(包括内皮癌和移行癌)和/或绒毛膜癌。另外，所述腺癌选白下述的任一种:乳房腺癌、卵巢腺癌、胰腺腺癌、肺腺癌和消化系统腺癌(包括胃腺癌和结肠腺癌)。另一方面，白血病 优选地是人T细胞白血病、B细胞白血病和/或T/NK细胞淋巴母细胞白血病。淋巴瘤优选地是B型淋巴瘤、T型淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤和/或伯基特淋巴瘤。要用本发明的药物组合物治疗的肉瘤的类型优选地是:骨肉瘤、横纹肌肉瘤、纤维肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、子宫内膜基质肉瘤和/或尤因肉瘤。另一方面，要用本发明的药物组合物治疗的其它肿瘤优选地是神经母细胞瘤、以及生殖细胞和/或神经外胚层起源的其它肿瘤。本发明的另一个优选实施方案是，前述药物组合物用于诱导肿瘤细胞中细胞凋亡的用途。本发明的实现的一个甚至更优选的实施方案是，前述药物组合物通过改变肿瘤周围微环境而减小肿瘤尺寸的用途，所述改变包括:改变在肿瘤周围的基质基体和基质细胞的生理学、改变炎症和/或免疫应答细胞的生理学、和/或改变在肿瘤区域和肿瘤周围区域中的血管形成细胞的生理学。在这点上，改变基质基体和基质细胞的生理学和/或参与炎症和免疫应答的细胞的生理学包括抑制肿瘤标记。这些肿瘤标记优选地选自下述列表中的任一种:NF-kB、TGF a、TGF- β 1、TGF- β 2、TGF- β 3、SPARC、ΜΜΡ-3、ΜΜΡ-7、ΜΜΡ-9、MMP-1UΜΜΡ-13、ΜΜΡ-14和/或它们的任意组合。另外，改变负责血管形成的细胞的生理学包括抑制新血管形成，优选地通过抑制血管内皮细胞增殖进行。本发明也包括用于治疗癌症的至少一种特异性针对NKl、ΝΚ2和/或ΝΚ3受体的抗体或其片段或它们的组合。在本发明中使用的抗体优选地至少识别选自SEQ ID NO =USEQID NO:2 或 SEQ ID NO:3 的 ΝΚ1、ΝΚ2 或 ΝΚ3 受体的序列。本发明的实施方案的一种优选形式由下述组成:用于诱导肿瘤细胞中细胞凋亡的至少一种特异性针对ΝΚ1、ΝΚ2和/或ΝΚ3细胞受体的抗体或其片段或它们的组合。在本发明中使用的抗体优选地至少识别选自SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO:2或SEQ ID Ν0:3的ΝΚ1、ΝΚ2或ΝΚ3受体的序列。本发明的实施方案的另一种形式包括，至少一种特异性针对ΝΚ1、ΝΚ2和/或ΝΚ3细胞受体的抗体或其片段或它们的组合其用于通过改变肿瘤周围微环境而减小肿瘤尺寸，所述改变包括:改变在肿瘤周围的基质基体和基质细胞的生理学、改变炎症和/或免疫应答细胞的生理学、和/或改变在肿瘤区域和肿瘤周围区域中的血管形成细胞的生理学。在这点上，改变基质基体和基质细胞的生理学和/或参与炎症和免疫应答的细胞的生理学包括抑制肿瘤标记。这些肿瘤标记优选地选自下述列表中的任一种:NF-kB、TGFa ,TGF-β 1、TGF-β 2、TGF-β 3、SPARC、MMP-3、MMP-7、MMP-9、MMP-1U MMP-13、MMP-14 和 / 或它们的任意组合。另外，改变负责血管形成的细胞的生理学包括抑制新血管形成，优选地通过抑制血管内皮细胞增殖。在本发明中使用的抗体优选地至少识别选自SEQ ID NO:U SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3的NK1、NK2或NK3受体的序列。本发明的另一个实施方案是，一种用于治疗癌症的方法，所述方法包括:给患者施用有效量的至少一种特异性针对NK1、NK2和/或NK3细胞受体的抗体或其片段或它们的组合或如前所述的包含这些抗体的药物组合物。在本发明中使用的抗体优选地至少识别选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3的NKl、NK2或NK3受体的序列。可以用本发明描述的方法治疗的癌症的类型与以前描述的那些相同。在本发明的一个甚至更优选的实施方案中，该方法的特征在于，它通过给患者施用有效量的至少一种特异性针对NK1、NK2和/或NK3细胞受体的抗体或其片段或它们的组合或如前所述的包含这些抗体的药物组合物，增加肿瘤细胞中细胞凋亡。在本发明中使用的抗体优选地至少识别选自SEQ ID NO:USEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3的NK1、NK2或NK3受体的序列。在本发明的实现的另一种其它形式中，该方法的特征在于，它通过如上所述改变肿瘤周围微环境和/或肿瘤周围的炎症和/或免疫应答而减小肿瘤尺寸。在人类中施用抗体或含有它们的药物组合物的优选方法是直接途径。通过例证来给出具体实施方案和提供的数据，且无意限制本发明。实施例1.用NK1、NK2和NK3受体抗体处理来抑制得自不同类型的癌症的细胞系的增殖和诱导其细胞凋 亡。商业的肿瘤细胞系下表I详述了 NKl、NK2和/或NK3受体抗体对其起作用的具体商业肿瘤细胞系的选择。根据不同的销售公司DSMZ (德国微生物和细胞培养物保藏中心)、ICLC(Interlab细胞系保藏中心-CBA-Genoa)和ECACC(欧洲细胞培养物保藏中心)提供的说明书，培养这些商业细胞系。简而言之，在补充了通过热处理灭活的10%胎牛血清(FBS)的DMEM培养基(Dulbecco改良的Eagle培养基，简单改进的Eagle基础培养基)或RPMI1640 (RoswellPark Memorial Institute) (Gibco,巴塞罗那,西班牙)中培养维持所述商业肿瘤细胞系。另外，将1%的抗生素-抗霉菌剂(antimycotics, Invitrogen)加入所述培养基中。将所述细胞系接种在具有75-cm2表面的培养瓶(Falcon,Heidelberg,德国)中。每2天更新培养基。在37°C的温度，在含有95%空气和5% CO2的湿气氛中，在培养室中培养细胞。在接种细胞6天后，通过用胰蛋白酶(不含钙或镁的0.05和0.02% EDTA ;Sigma-Aldrich，马德里，西班牙)处理，收集这些细胞。在进行试验的前一晚上，剥夺所有细胞的血清，除非另外指出。在所有这些细胞系中，证实了 NK1、NK2和NK3受体的存在，表明了抗-NK1、抗-NK2和抗-NK3抗体的抗肿瘤作用。表1.用于证实NK1、NK2和NK3受体抗体的抗肿瘤作用的肿瘤细胞系
权利要求
1.至少一种特异性针对NK1、NK2和/或NK3细胞受体的抗体或其片段或它们的组合用于制备治疗癌症的药物或药物组合物的用途。
2.至少一种特异性针对NKl、NK2和/或NK3细胞受体的抗体或其片段或它们的组合用于制备诱导肿瘤细胞中细胞凋亡的药物或药物组合物的用途。
3.至少一种特异性针对NKl、NK2和/或NK3细胞受体的抗体或其片段或它们的组合用于制备减小肿瘤尺寸的药物或药物组合物的用途。
4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，肿瘤尺寸减小通过改变肿瘤周围微环境而实现。
5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，改变肿瘤周围微环境包括:改变基质基体和基质细胞的生理学，和/或改变参与炎症和/或免疫应答的细胞的生理学，和/或改变负责血管形成的细胞的生理学。
6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，改变基质基体和基质细胞的生理学和/或改变参与炎症和免疫应答的细胞的生理学包括抑制肿瘤标记。
7.根据权利要求6所述的用途，其中所述肿瘤标记优选地选自下述列表中的任一种:NF-kB、TGF a、TGF- β 1、TGF- β 2、TGF- β 3、SPARC、ΜΜΡ-3、ΜΜΡ-7、ΜΜΡ-9、MMP-11、MMP-13、MMP-14和/或它们的任意组合。
8.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，改变负责血管形成的细胞的生理学包括:抑制新血管形成，优选地通过抑制血管内皮细胞的增殖进行。
9.根据权利要求1-8中的任一项所述的用途，其中所述癌症选自包括以下各项的组中的任一种:黑素瘤、神经胶质瘤、癌、腺癌、白血病、淋巴瘤、骨髓瘤、胚胎或神经外胚层型肿瘤和/或肉瘤。
10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于，所述癌选自下述的任一种:乳腺癌包括导管癌、肺癌包括小细胞肺癌和非小细胞肺癌、甲状腺癌包括滤泡癌和乳头状癌、前列腺癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、卵巢癌、膀胱癌包括内皮癌和移行癌、和/或绒毛膜癌。
11.根据权利要求9所述的用途，其特征在于，所述腺癌选自下述的任一种:结肠、乳房、卵巢、胰、肺和胃的腺癌。
12.根据权利要求9所述的用途，其特征在于，所述白血病选自:Τ细胞淋巴母细胞白血病、B细胞淋巴母细胞白血病和Τ/ΝΚ细胞白血病。
13.根据权利要求9所述的用途，其特征在于，所述淋巴瘤选自:Β型淋巴瘤、T型淋巴瘤、霍奇金或伯基特淋巴瘤。
14.根据权利要求9所述的用途，其特征在于，所述肉瘤优选地是骨肉瘤、横纹肌肉瘤、子宫内膜基质肉瘤、纤维肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤或尤因肉瘤。
15.根据权利要求9所述的用途，其特征在于，所述肿瘤优选地是神经母细胞瘤或视网膜母细胞瘤。
16.根据权利要求1-15中的任一项所述的用途，其中所述抗体至少识别选自SEQIDNO:1、SEQ ID NO:2 或 SEQ ID NO:3 的 ΝΚ1、ΝΚ2 或 ΝΚ3 受体的序列。
17.药物组合物，其包含至少一种特异性针对ΝΚ1、ΝΚ2和/或ΝΚ3受体的抗体或其片段或它们的组合。
18.根据权利要求17所述的组合物，其中所述抗体至少识别选自SEQID NO:USEQ IDNO:2或SEQ ID NO:3的NK1、NK2或NK3受体的序列。
19.根据权利要求17或18中的任一项所述的组合物，其另外包含载体和/或药学上可接受的赋形剂。
20.权利要求17-19的药物组合物用于治疗癌症的用途。
21.根据权利要求20所述的用途，其中所述癌症选自包括以下的组:黑素瘤、神经胶质瘤、癌、腺癌、白血病、胚胎或神经外胚层型肿瘤和/或肉瘤。
22.根据权利要求21所述的用途，其特征在于，所述癌选自下述的任一种:乳腺癌包括导管癌、肺癌包括小细胞肺癌和非小细胞肺癌、甲状腺癌包括滤泡癌和乳头状癌、前列腺癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、卵巢癌、膀胱癌包括内皮癌和移行癌、和/或绒毛膜癌。
23.根据权利要求21所述的用途，其特征在于，所述腺癌选自下述的任一种:结肠、乳房、卵巢、胰、肺和胃的腺癌。
24.根据权利要求21所述的用途，其特征在于，所述白血病选自:T细胞淋巴母细胞白血病、B细胞淋巴母细胞白血病和Τ/ΝΚ细胞白血病。
25.根据权利要求21所述的用途，其特征在于，所述淋巴瘤选自:Β型淋巴瘤、T型淋巴瘤、霍奇金或伯基特淋巴瘤。
26.根据权利要求21所述的用途，其特征在于，所述肉瘤优选地是骨肉瘤、横纹肌肉瘤、子宫内膜基质肉瘤、纤维肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤或尤因肉瘤。
27.根据权利 要求21所述的用途，其特征在于，所述肿瘤优选地是神经母细胞瘤或视网膜母细胞瘤。
28.权利要求17-19的药物组合物用于诱导肿瘤细胞中细胞凋亡的用途。
29.权利要求17-19的药物组合物用于减小肿瘤尺寸的用途。
30.根据权利要求29所述的用途，其特征在于，所述肿瘤尺寸减小通过改变肿瘤周围微环境而实现。
31.根据权利要求30所述的用途，其特征在于，改变肿瘤周围微环境包括:改变基质基体和基质细胞的生理学，和/或改变参与炎症和免疫应答的细胞的生理学，和/或改变负责血管形成的细胞的生理学。
32.根据权利要求31所述的用途，其特征在于，改变基质基体和基质细胞的生理学和/或改变参与炎症和免疫应答的细胞的生理学包括抑制肿瘤标记。
33.根据权利要求32所述的用途，其中所述肿瘤标记优选地选自下述列表中的任一种:NF-kB、TGFa ,TGF-β 1、TGF_β 2、TGF_β 3、SPARC、MMP-3、MMP-7、MMP-9、MMP-11、MMP_13、MMP-14和/或它们的任意组合。
34.根据权利要求31所述的用途，其特征在于，所述改变负责血管形成的细胞的生理学包括:抑制新血管形成，优选地通过抑制血管内皮细胞的增殖进行。
全文摘要
针对NK1、NK2和/或NK3受体的抗体在癌症治疗中的用途。本发明的主题是，对细胞的NK1、NK2和/或NK3受体特异性的抗体或其片段用于制备药物的用途，所述药物通过直接施用给哺乳动物(包括人类)而如下治疗人癌症诱导肿瘤细胞的细胞死亡或细胞凋亡，改变肿瘤周围微环境(由基质细胞、基质基体、以及肿瘤内和肿瘤周围的血管形成组成)和/或最终肿瘤周围的炎症和/或免疫应答。具体地，在黑素瘤、癌(尤其是乳腺癌、肺癌、消化系统癌、前列腺癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、卵巢癌和膀胱癌)、白血病、淋巴瘤、肿瘤(诸如神经母细胞瘤)和肉瘤(诸如骨肉瘤)的情况下。
文档编号A61K39/395GK103179986SQ201180049210
公开日2013年6月26日 申请日期2011年8月12日 优先权日2010年8月12日
发明者曼努埃尔·比森特·萨利纳斯马丁 申请人:安达卢西亚健康服务部