专利名称：一种天然黄酮苷的制备工艺及用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及食品添加剂，尤其是涉及一种天然黄酮苷的制备工艺，本发明还涉及该天然黄酮苷的用途。
背景技术：
长期以来，人们常常依赖添加剂来使食品保鲜，尤其是富脂食品，为了防止油脂酸败，更是以添加合成抗氧化剂为主。近年来，随着人们对合成抗氧化剂的认识逐渐深入，对合成抗氧化剂用于食品的安全性深表担忧。世界卫生组织(FAO / WHO)、欧共体儿童保护组织(HACSG)、英国生物工业协会(BIBRA)、日本、美国的政府和组织的研究表明，合成抗氧化剂BHT、BHA、TBHQ等具有诸多副作用，对人体的肝、脾、肺均有不利影响，且可能诱发恶性肿瘤。所以美国食品药品管理局(FDA)建议在一般认为安全的物质中删去合成抗氧化剂BHT ；日本有关卫生部门经研究曾做出禁止使用合成抗氧化剂BHA的结论；对于TBHQ，虽然美国等少数国家批准了它在某些油脂中的使用，但欧盟、日本等国家认为它的毒理试验资料不完善，尚未批准使用。事实证明，在人们长期食用的食品中，天然抗氧化剂的毒性要远远低于人工合成的抗氧化剂，许多天然抗氧化剂甚至还具有保健作用。因此，从自然界天然植物中寻求安全性高、抗氧化能力强、无毒副作用等特点的天然抗氧化剂日益受到重视。目前，许多国家已加大了天然抗氧化剂的研发，成功开发出了大量天然抗氧化剂产品，受到人们的普遍欢迎。我国天然抗氧化剂的研发主要存在的缺点就是种类单一，生产率较低，所获得的纯化合物和复合型化合物较少。近年来，天然抗氧化剂如类胡萝卜素、多酚、黄酮等以30% 50%的速度增长。从中草药中提取抗氧化剂是继香辛料后研究开发的又一个热点。目前，日本、韩国和我国的台湾等正在积极开展研发。当前，能够实现工业化生产并得到成功开发的天然植物抗氧化剂有迷迭香提取物、茶多酚、竹叶黄酮提取物、甘草抗氧化物、丁香提取物等。这些天然植物型的抗氧化剂的应用效果和食用的安全性已得到充分肯定。随着天然抗氧化剂品种的增多以及生产成本的进一步降低，更多的天然抗氧化剂将不断涌现并有望逐步取代合成品。
发明内容
本发明的目的在于提供一种生产成本低、成品质量优良的天然黄酮苷的制备工艺，本发明还涉及该天然黄酮苷的用途。为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案本发明所述的天然黄酮苷的制备工艺，包括下述步骤第一步，提取
选取玉米须洗净、晾干后粉碎，将其放入密闭容器中，按照料液比1:15 1:20的比例加入浓度60%-80%的乙醇，室温浸提48-72小时，滤出浸提液，重复提取三次后合并浸提液，50°C以下真空浓缩；第二步，分离
将第一步所得乙醇浸提物依次用正己烷、乙酸乙酯萃取2-3次，合并乙酸乙酯相，50°C以下真空浓缩成浸膏；将上述浸膏用去离子水分散，上聚酰胺与硅胶的混合填充柱，先用乙酸乙酯洗脱，然后用含5%丙酮的乙酸乙酯洗脱，最后再用浓度20%-70%的乙醇梯度洗脱，分步收集，薄板检测，收集40%-50%乙醇洗脱液，500C以下真空浓缩；将浓缩液上ToyopearlHW-40柱进行纯化，即可得到6，4' - 二羟基-3'-甲氧基黄酮-7-0-葡萄糖苷成品。本发明所述的天然黄酮苷作为抗氧化剂在医药、食品和保健品领域中的用途。本发明的优点在于植物原料低廉易得，制备工艺简单，所得成品的色谱纯度高。该黄酮苷分离柱采用聚酰胺与硅胶混合填充新工艺并结合Toyopearl冊_40分离柱从禾本科植物玉米须中分离获得，经体外模拟体内试验表明，该黄酮苷具有强大的抗氧化能力和游离基清除能力，并预示其具有良好的保健功能。采用聚酰胺与硅胶混合填充新工艺能够在同一色谱柱中实现两种填料的不同分离行为，克服了以往单一填料分别操作的烦琐，并且容易实现难以分离的成分，达到更好的分离效果。
图1是本发明成品黄酮苷的高压液相色谱图。图2是本发明黄酮苷、芦丁与BHT分别对脂质体过氧化的半抑制浓度IC5tl的比较结果。图3是本发明黄酮苷、芦丁与BHT分别对DPPH自由基的半抑制浓度IC5tl的比较结^ ο图4是本发明黄酮苷、芦丁与Vc分别对超氧阴离子自由基[Of ]的半抑制浓度IC5tl的比较结果。图5是本发明黄酮苷、芦丁分别对羟基自由基[ 0H]的半抑制浓度IC5tl的比较结果。
具体实施例方式本发明所述的天然黄酮苷为6，4' -二羟基-3'-甲氧基黄酮-7-0-葡萄糖苷(6，4-dihydroxy-3-methoxyflavone-7-0-glucoside)o一、其制备工艺包括下述步骤第一步，提取
选取IOkg玉米须洗净、晾干后粉碎，分批放入密闭容器中，按照料液比1:15加入浓度70%的乙醇，每间隔6小时搅拌一次，室温浸提48小时，滤出浸提液，重复提取三次后合并浸提液，50°C真空浓缩，得浸膏1.5L (约900g干物质)；
第二步，分离
将第一步所得乙醇浸提物依次用正己烷、乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯相，50°C真空浓缩，得浸膏300mL (约8g干物质)；将上述浸膏用去离子水IOOmL分散，上聚酰胺与硅胶的混合填充柱(上部为硅胶，下部为聚酰胺；聚酰胺与硅胶所占比例为1:1 1:2 ；60mmX800mm)，先用乙酸乙酯洗脱，然后用含5%丙酮的乙酸乙酯洗脱，最后再用浓度20%-70%的乙醇梯度洗脱，分步收集，薄板检测，收集40%-50%乙醇洗脱液，50°C真空浓缩，得黄色液体IOOmL (约50mg干物质)；最后将浓缩液反复上hyopearl冊_40柱(30mmX 400mm)进行纯化，即可得到6，4
‘-二羟基-3'-甲氧基黄酮-7-0-葡萄糖苷25mg成品。经测试，该黄酮苷成品的色谱纯度(HPLC)为94%，如图1所示。二、本发明黄酮苷抗氧化性能测定1、黄酮苷对脂质体过氧化的抑制作用
脂质体的制备将8g大豆卵磷脂分散于IOOOmL去离子水中，用超声波处理成完全均勻的乳状液(周围以冰水保护)；
将10. OmL脂质体放入50mL的三角瓶中，依次加入已溶入甲醇中的黄酮苷0.05 0. 20mL和0. 05mol/L的硫酸铜2. 0 μ L，对照组加入相当黄酮苷体积的甲醇，其它同实验组，将其放在水浴恒温震荡器中震荡，速度为100次/min，温度为37°C。每次取0. ImL样液，于试管中(两个平行)，加入5mL无水甲醇，混勻后，以甲醇为空白，用Icm比色皿，测定234nm波长下的吸光度。恒温震荡前(Oh)测定一次，作为本底。以后每1 测定一次吸光度值，当对照样出现最大值后，再测定1 2次。试验结果表明随着黄酮苷浓度的增大，其抑制脂质氧化的能力增强，根据234nm紫外吸收的测定结果，对黄酮类抑制脂质氢过氧化物形成的抑制率进行了计算
抑制率(％)=X 100%
Afl
式中=Atl为对照组最大吸收值;At为与Atl相对应时间的各组的吸收值。结果表明6，4' - 二羟基-3'-甲氧基黄酮-7-0-葡萄糖苷的半抑制浓度IC5tl仅为 0. 3 μ g/mL,比芦丁的 IC5tl (3.8μ g/mL)和合成抗氧化剂 BHT 的 IC5tl (0. 37 μ g/mL)
还要低。如图2所示。2、黄酮苷对DPPH自由基的清除能力
取一定浓度黄酮苷(1. 25 40 μ g/mL)待测样品的甲醇溶液0. 2mL,加入7. 8 mL浓度为 0.025mg/mL 的 2，2-diphenyl -2- picrylhydrazyl(DPPH)甲醇溶液，立即混勻，在一定时间间隔内测定其在515nm处的吸光度，直到读数稳定。测定结果表明，随着黄酮苷浓度的增大，其清除DPPH自由基的能力也增强。黄酮苷对DPPH自由基的清除率按下式计算
清除率(％)=1 X 100%
Ao
式中=Atl为零时刻DPPH自由基反应液的吸收值；At为t时刻DPPH自由基反应液基本稳定时的吸收值。结果表明6，4' - 二羟基-3'-甲氧基黄酮-7-0-葡萄糖苷的半抑制浓度IC5tl仅为 0. 27 μ g/mL,比芦丁(IC5Q=3. 38 μ g/mL)和 BHT (IC50=4. 19 μ g/mL)还要低很多，如图 3所示。3、黄酮苷对超氧阴离子自由基
的清除能力
将已溶于甲醇中的黄酮苷(lmg/mL)用0. 05mol/L pH7. 8并含有0. lmmol/L EDTA的磷酸盐缓冲液配成不同的浓度。发光系统采用邻苯三酚-鲁米诺体系，测定操作按下表1进行。 表1超氧阴离子自由基
测定各试剂加入体积
权利要求
1.一种天然黄酮苷的制备工艺，其特征在于包括下述步骤第一步，提取选取玉米须洗净、晾干后粉碎，将其放入密闭容器中，按照料液比1:15 1:20的比例加入浓度60-80%的乙醇，室温浸提48-72小时，滤出浸提液，重复提取三次后合并浸提液， 50°C以下真空浓缩；第二步，分离将第一步所得乙醇浸提物依次用正己烷、乙酸乙酯萃取2-3次，合并乙酸乙酯相，50°C 以下真空浓缩成浸膏；将上述浸膏用去离子水分散，上聚酰胺与硅胶的混合填充柱，先用乙酸乙酯洗脱，然后用含5%丙酮的乙酸乙酯洗脱，最后再用浓度20%-70%的乙醇梯度洗脱， 分步收集，薄板检测，收集40%-50%乙醇洗脱液，500C以下真空浓缩；将浓缩液上Toyopearl HW-40柱进行纯化，即可得到6，4' - 二羟基-3'-甲氧基黄酮-7-0-葡萄糖苷成品。
2.根据权利要求1所述的天然黄酮苷作为抗氧化剂在医药、食品和保健品领域中的用途。
全文摘要
本发明公开了一种天然黄酮苷的制备工艺，选取玉米须放入密闭容器中，加乙醇浸提48-72小时，滤出浸提液，真空浓缩；将浸提物依次用正己烷、乙酸乙酯萃取，真空浓缩成浸膏；浸膏用去离子水分散，上聚酰胺与硅胶的混合填充柱，用乙酸乙酯和含5%丙酮的乙酸乙酯梯度洗脱，再用浓度20%-70%的乙醇梯度洗脱，分步收集，薄板检测，收集40%-50%乙醇洗脱液，真空浓缩，上ToyopearlHW-40柱进行纯化，即可得到6,4′-二羟基-3′-甲氧基黄酮-7-O-葡萄糖苷成品。本发明的优点在于植物原料低廉易得，制备工艺简单，所得成品的色谱纯度高。经体外模拟体内试验表明，该黄酮苷具有强大的抗氧化能力和游离基清除能力，并预示其具有良好的保健功能。
文档编号A61K36/899GK102552303SQ20121002631
公开日2012年7月11日 申请日期2012年2月7日 优先权日2012年2月7日
发明者任顺成, 刘泽龙, 王宏雁 申请人:河南工业大学