专利名称：表阿霉素脂质体及其制备和储存方法
技术领域：
本发明属于医药技术领域，涉及药品给药领域的微粒制剂，更具体是指一种表阿霉素与适当辅料制成的脂质体，及其制备方法和储存方法。
背景技术：
表阿霉素(Epirubicin，EPI)是意大利学者Arcamone等在1975年通过半合成途径合成的一种蒽环类抗肿瘤抗生素，作用机理是直接嵌入DNA碱基对之间，干扰转录过程，阻止mRNA的形成，从而抑制DNA和RNA的合成，故对细胞周期各阶段均有作用，为细胞周期非特异性药物，主要作用于细胞核。目前，表阿霉素临床主要用于急性白血病和恶性淋巴瘤、乳腺癌、卵巢癌、膀胱癌、睾丸癌、胃癌、肝癌等多种实体瘤。表阿霉素存在较多不良反应，除可能出现的抗肿瘤药物的一般不良反应外(包括骨髓抑制、胃肠反应、神经毒性)，还可引起严重的局部不良反应，药物外渗可导致局部疼痛、严重组织损害和害死，由于该药的静脉注射时可发生严重的蜂窝组织炎，故不宜直接静脉推注，同时也要避免在小血管中注射或同一条静脉中重复注射。这给临床应用带来了较大的不方便，给患者带来了很大的痛苦。目前，国内外表阿霉素及其盐已有不少产品上市，如法玛西亚普强(中国)有限公司生产的“法玛新”，浙江海正药业生产的“艾达生”等，剂型一般为冻干粉针，由于药物分子未被包裹，与皮肤和血管组织直接接触，极易造成以上毒副作用。脂质体是靶向给药系统的一种新剂型，这种系统是目前药剂学最新、最有前途的给药系统。脂质体作为这个系统的一员一直是药剂学研究的热点，它可以将药物选择性地运送到靶点部位，发挥治疗作用，同时又不影响正常细胞、组织或器官的功能，从而达到提高疗效、减少毒副作用的目的。本发明采用脂质体包封表阿霉素，降低了毒副作用，提高了疗效。同时，本发明所采用的制备方法适合产业化推广。脂质体的储存稳定性一直难以解决，现有的冷冻干燥方法在经济和工业效率方面有局限。冷冻干燥过程不仅高耗能、长耗时，其干燥过程会对脂质体膜的生物、化学和物理性质造成影响，导致储存不稳定性。最终对脂质体所包封的活性成分带来有害影响。本发明采用了加入冷冻保护剂的储存方法，能够高效、稳定的保持脂质体的性质不受影响。有专利(公开号CN 15M354A)表阿霉素脂质体及其制备方法。用有机溶剂注入法制备了表阿霉素脂质体，但包封率较低，不能解决局部刺激性问题。有专利(公开号CN 10U64056A)盐酸表阿霉素脂质体及其制备方法。该方法制备的脂质体没有解决中试生产问题和稳定性问题。以上两个专利在充分发挥表阿霉素的药效、降低毒性及产业化方面还存在一定的不足。
发明内容
本发明的目的在于提供表阿霉素脂质体的制备及储存方法。本发明的特点是将表阿霉素制备成脂质体，同时以冷冻储存的方法解决脂质体的化学和物理稳定性问题，提高脂质体的货架期。
本发明中的表阿霉素脂质体是由表阿霉素及至少一种磷脂、同时可含有至少一种表面活性剂或一种冷冻保护剂或胆固醇而形成。储存方法包括常温储存、冷藏储存、冷冻储存及冷冻干燥储存。表阿霉素脂质体，其含以下组分及重量百分比表阿霉素 0. 0Ρ/Γ50. 0%
磷脂0. 1% 99. 9%
胆固醇09Γ60.0%
表面活性剂 09Γ60. 0%冷冻保护剂 0% 95%
表阿霉素脂质体，可以含有以下组分及重量百分比
表阿霉素2. 0% 10. I磷脂40. 0%'、80.胆固醇5% 30..0%表面活性剂1% 30..0%冷冻保护剂0% 60..0%
所述至少一种磷脂选自磷脂酰胆碱类、磷脂酰甘油类、磷脂酰肌醇类、磷脂酰乙醇胺类、神经鞘磷脂类、单链或双链磷脂(二肉蔻酸磷脂酰甘油、二月桂酸磷脂酰甘油、二软脂酸磷脂酰甘油、二硬脂酸磷脂酰甘油、二肉蔻酸磷脂酸、二月桂酸磷脂酸、二软脂酸磷脂酸、二硬脂酸磷脂酸、二油酸磷脂酰丝氨酸、二亚油酸磷脂酰肌醇、二棕榈酸磷脂酰胆碱(DPPC)、二月桂酸磷脂酰胆碱(DLPC)、二肉豆蔻酸磷脂酰胆碱(DMPC)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)、单肉蔻酸磷脂酰甘油、单月桂酸磷脂酰甘油、单软脂酸磷脂酰甘油、单硬脂酸磷脂酰甘油、单肉蔻酸磷脂酸、单月桂酸磷脂酸、单软脂酸磷脂酸、单硬脂酸磷脂酸、单油酸磷脂酰丝氨酸、单亚油酸磷脂酰肌醇、单棕榈酸磷脂酰胆碱(MPPC)、单月桂酸磷脂酰胆碱(MLPC)、单肉豆蔻酸磷脂酰胆碱(MMPC)、单硬脂酰磷脂酰胆碱(MSPC))及其混合物；
所述表面活性剂选自溶菌素、胆汁酸、肉豆蔻酰表面活性剂、棕榈酰表面活性剂、硬脂酰表面活性剂、甘油单油酸酯、神经酰胺、聚乙二醇酯类表面活性剂、PEG-神经酰胺、C18-醚连接的溶血磷脂酰胆碱、聚乙二醇-聚乙烯共聚物、嵌段共聚物、脂肪酸及其混合物；
所述冷冻保护剂选自聚乙二醇、聚丙烯酰吗啉、聚-2-乙基-2-噁唑啉、聚乙烯吡咯烷酮、甲氧基聚乙二醇(mPEG)、各种糖类(包括海藻糖、甘露醇、蔗糖、葡萄糖、氯化钠、乳糖、山梨醇、右旋糖苷、甘油或甘氨酸)及其混合物。 表阿霉素脂质体的制备方法是采用一步法制备空白纳米脂质体，以PH梯度法或硫酸铵梯度法进行药物装载，包括以下步骤
别取处方量的磷脂、表面活性剂、胆固醇分散于PH2. 0-5. 0的缓冲液中，多次通过纳米机高压乳勻减低粒径，加入PH9. 0-12. 0的碱性溶液，调节pH至6. 0-7. 5，将的空白脂质体溶液与表阿霉素的冷冻保护剂溶液混合，30-70°C下孵育10-60分钟，即得；或分别取处方量的磷脂、表面活性剂、胆固醇分散于100-300mM的硫酸铵溶液中，多次通过纳米机高压乳勻减低粒径，得到空白脂质体，将空白脂质体通过超滤器置换浓缩外水相为冷冻保护剂溶液，将的空白脂质体溶液与表阿霉素的冷冻保护剂溶液混合，30-70°C下孵育10-60分钟，即得。本发明的优点是脂质体可以避免普通注射液的一些毒副作用，并对肿瘤具有一定的靶向性，可以更好地发挥药效，降低毒性；本发明采用一步法制备脂质体能够产业化，适合工业化生产；采用的冷冻储藏脂质体的方法，能够高效、稳定的保持脂质体的性质不受影响。
具体实施例方式
本发明的具体实施方式
，由以下的实施实例说明，但本发明的保护范围不局限于此。实施例1
将氢化大豆磷脂(HSPC)和N-(羰基-甲氧基聚乙二醇-2000)-1, 2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DSPE-mPEG2000)以摩尔比90:10分散于701的300mM pH4的柠檬酸缓冲溶液中。经过IOOObar高压乳勻后，获得100mg/ml磷脂浓度，平均粒径为50-300nm的空白脂质体。将2. Oml表阿霉素(5. Omg/ml)的海藻糖(lg/ml)水溶液和1. 5ml的0. 4mM碳酸钠溶液加入2. Oml的空白脂质体中，于60°C下孵育30min。然后将载药脂质体及空白脂质体于-20°C储存。通过相同的方法制备没有加入冷冻保护剂mPEG及海藻糖的脂质体。_20°C储存后，检测粒度的变化，结果见表1。结果表明，加入冷冻保护剂的空白及载药脂质体经过冷冻/解冻后，粒径没有明显变化；而未加入冷冻保护剂的脂质体经过冷冻/解冻后，粒径明显增大。表1冷冻/解冻过程对脂质体粒度的影响
时间含職^mmmm勉_雔 99载■ 慮鉢 IOIm载舊腦儺 112塞个週103IiS339mi个月1_IMSS2412e个駕IMIif315131
实施例2
按实施例1方法制备表阿霉素脂质体，将样品于_20°C储存6个月，分别于初始时刻，1个月、3个月、6个月时，测定样品的含量、粒径、包封率、突释百分比及pH值，结果见表2。结果表明，在6个月内脂质体各性质没有明显变化，证明储存方法合理可行。
表2冷冻/解冻过程对脂质体性质的影响
时间含量(表阿霉素)(mg/ml)粒径(nm)包封率(1 )突释百分(%)PH值初始2. 0110199. 987. 88ι个月1. 9910399. 877. 913个月1. 9710499. 787. 876个月1. 9810799. 897. 9权利要求
1.一种表阿霉素脂质体，其特征通过表阿霉素脂质体由表阿霉素及至少一种磷脂、同时可含有至少一种表面活性剂或一种冷冻保护剂或胆固醇而形成，储存方法包括常温储存、冷藏储存、冷冻储存及冷冻干燥储存。
2.权利要求1的方法，还包括冷藏储存表阿霉素脂质体；运输所述冷冻的表阿霉素脂质体和在另一位置解冻所述制剂；冷冻干燥储存表阿霉素脂质体。
3.权利要求1所述的表阿霉素脂质体，其特征在于含以下组分及重量百分比 表阿霉素 0. 0Ρ/Γ50. 0%磷脂0. 1% 99. 9%胆固醇09Γ60.0%表面活性剂 09Γ60. 0% 冷冻保护剂 09Γ95. 0%。
4.权利要求1所述的表阿霉素脂质体，可以含有以下组分及重量百分比 表阿霉素 2. 09Γ10. 0%磷脂40. 0% 80. 0%胆固醇59Γ30.0%表面活性剂 Ρ/Γ30. 0% 冷冻保护剂 09Γ60. 0%。
5.权利要求1、3、4的方法，其中A.所述至少一种磷脂选自磷脂酰胆碱类、磷脂酰甘油类、磷脂酰肌醇类、磷脂酰乙醇胺类、神经鞘磷脂类、单链或双链磷脂(二肉蔻酸磷脂酰甘油、二月桂酸磷脂酰甘油、二软脂酸磷脂酰甘油、二硬脂酸磷脂酰甘油、二肉蔻酸磷脂酸、二月桂酸磷脂酸、二软脂酸磷脂酸、二硬脂酸磷脂酸、二油酸磷脂酰丝氨酸、二亚油酸磷脂酰肌醇、二棕榈酸磷脂酰胆碱 (DPPC)、二月桂酸磷脂酰胆碱(DLPC)、二肉豆蔻酸磷脂酰胆碱(DMPC)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)、单肉蔻酸磷脂酰甘油、单月桂酸磷脂酰甘油、单软脂酸磷脂酰甘油、单硬脂酸磷脂酰甘油、单肉蔻酸磷脂酸、单月桂酸磷脂酸、单软脂酸磷脂酸、单硬脂酸磷脂酸、单油酸磷脂酰丝氨酸、单亚油酸磷脂酰肌醇、单棕榈酸磷脂酰胆碱(MPPC)、单月桂酸磷脂酰胆碱 (MLPC)、单肉豆蔻酸磷脂酰胆碱(MMPC)、单硬脂酰磷脂酰胆碱(MSPC))及其混合物；B.所述表面活性剂选自溶菌素、胆汁酸、肉豆蔻酰表面活性剂、棕榈酰表面活性剂、 硬脂酰表面活性剂、甘油单油酸酯、神经酰胺、聚乙二醇酯类表面活性剂、PEG-神经酰胺、 C18-醚连接的溶血磷脂酰胆碱、聚乙二醇-聚乙烯共聚物、嵌段共聚物、脂肪酸及其混合物；C.所述冷冻保护剂选自聚乙二醇、聚丙烯酰吗啉、聚-2-乙基-2-噁唑啉、聚乙烯吡咯烷酮、甲氧基聚乙二醇(mPEG)、各种糖类(包括海藻糖、甘露醇、蔗糖、葡萄糖、氯化钠、乳糖、山梨醇、右旋糖苷、甘油或甘氨酸)及其混合物。
6.权利要求5的方法，其中，所述冷冻保护剂可以通过水解的键与磷脂结合(例如N-(羰基-甲氧基聚乙二醇-2000)-1, 2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺 (DSPE-mPEG2000))。
7.权利要求1、2、3、4所述的表阿霉素脂质体的制备方法，其特征是采用一步法制备空白纳米脂质体，以PH梯度法或硫酸铵梯度法进行药物装载，包括以下步骤分别取处方量的磷脂、表面活性剂、胆固醇分散于PH2. 0-5. 0的缓冲液中，多次通过纳米机高压乳勻减低粒径，加入PH9. 0-12. 0的碱性溶液，调节pH至6. 0-7. 5，将的空白脂质体溶液与表阿霉素的冷冻保护剂溶液混合，30-70°C下孵育10-60分钟，即得；或分别取处方量的磷脂、表面活性剂、胆固醇分散于100-300mM的硫酸铵溶液中，多次通过纳米机高压乳勻减低粒径，得到空白脂质体，将空白脂质体通过超滤器置换浓缩外水相为冷冻保护剂溶液，将的空白脂质体溶液与表阿霉素的冷冻保护剂溶液混合，30-70°C下孵育10-60分钟，即得。
8.权利要求1、2、3、4、7所述的表阿霉素脂质体，其中的表阿霉素可以是表阿霉素、盐酸表阿霉素、表阿霉素硫酸盐、表阿霉素硝酸盐、表阿霉素乳酸盐及其任意组。
全文摘要
本发明属于药物制剂领域，涉及表阿霉素脂质体及其制备和储存方法。本发明表阿霉素脂质体由表阿霉素及至少一种磷脂、同时可含有至少一种表面活性剂或一种冷冻保护剂或胆固醇而形成。储存方法包括常温储存、冷藏储存、冷冻储存及冷冻干燥储存。
文档编号A61K9/127GK102552146SQ201210030179
公开日2012年7月11日 申请日期2012年2月13日 优先权日2012年2月13日
发明者刘微, 李俊, 李翔, 杨世林, 罗晓健, 苏丹, 陈兰英, 雷景邦 申请人:江西本草天工科技有限责任公司