专利名称：一种用于溶解胆固醇型结石的混合溶石剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种新型的用于溶解胆固醇型结石的混合溶石剂。
背景技术：
随着生活水平的提闻，胆结石的发病率逐年升闻，据统计，目如国内外有10%左右的人群在忍受着结石病带来的痛苦，因此探索一种 有效治疗结石病的方法当务必急。目前手术切除胆囊是治疗胆囊结石的主要手段，但胆囊切除术不仅治疗费用高，手术风险大，同时切除胆囊会给人们今后的生活带来一定的不便。除此之外，一些患者，比如年老体弱、肥胖以及患有其他重要脏器疾病，根本不适合进行胆囊切除术的治疗，因此，发展非手术治疗结石病的方法意义重大。口服药物治疗是最为理想的治疗方法，自1937年Neubridge尝试用口服胆汁酸的方法治疗结石病以来，一些其它的药物也被相继的开发出来，比如鹅脱氧胆酸，熊脱氧胆酸，Pravastatin，中草药制剂等。但总起来说，口服药物溶石具有疗效差，疗程长，费用高，复发率高等缺点，亟待进一步的发展。直接灌注溶石法也是一种较为理想的治疗结石病的方法，由于通过经皮经肝胆道置管(PTCD)或经内镜下逆行胆囊插管(ERCG)等途径，溶石剂灌注进入胆囊，能够直接和胆石接触，因此直接灌注溶石法治疗时间短，收效快。但该治疗方法的推广需要寻找一种对人体安全的溶石剂。乙醚是最早被应用的溶石剂，但由于乙醚沸点低于体温，进人体内后汽化而产生高压，使病人产生剧烈腹痛而未被广泛接受。随后右旋柠烯，单辛酸甘油酯，乙基丙酸等相继被用作直接灌注溶石法的溶石剂，但它们或多或少存在溶石率不高或者毒副作用大等问题而未被进一步的应用。目前，最为有效的溶石剂为甲基叔丁醚，其溶石作用较辛酸甘油酯强50倍，对胆固醇类结石完全溶石率为90 96%。自甲基叔丁醚被用作溶石剂以来，国内外很多学者对甲基叔丁醚的毒副作用进行了相关的研究，实验结果表明甲基叔丁醚对人体基本上是安全的。但甲基叔丁醚作为溶石剂也存在着一定的缺陷，比如尽管甲基叔丁醚的沸点为55. 7V,高于人的体温，但甲基叔丁醚的挥发性比较强，应用于人体时仍存在挥发而产生高压这一问题。同时，甲基叔丁醚会产生使人非常不舒服的刺激性气味。
发明内容
为了克服现有溶石剂的上述问题，本发明人研究发现，通过向甲基叔丁醚中添加卵磷脂，不但可以相应降低甲基叔丁醚的饱和蒸汽压，而且由于相对而言降低了甲基叔丁醚的百分含量，因此也相应降低了其气味的刺激性，从而获得一种新型的用于溶解胆固醇型结石的混合溶石剂，在此基础上完成了本发明。因此，本发明的主题是提供一种用于溶解胆固醇型结石的混合溶石剂，其包含甲基叔丁醚和卵磷脂，并且基于ImL的甲基叔丁醚计，卵磷脂的量为O. 10 O. 60g，所述卵磷脂优选是大豆卵磷脂或蛋黄卵磷脂。
本发明人对胆固醇的溶解情况进行了大量实验研究，结果发现，在一定量的甲基叔丁醚中随着卵磷脂加入量的增加，混合溶液对胆固醇的溶解量逐渐增大，而混合溶液的气味则逐渐变小。
以大豆卵磷脂为例，当相对于ImL的甲基叔丁醚而言大豆卵磷脂的量为O. IOg时，混合溶液对胆固醇的溶解量比没有大豆卵磷脂情况下增加20%以上。随着混合溶液中大豆卵磷脂加入量的增加，对胆固醇的溶解量起初逐渐增大，慢慢达到一个最高值，然后又有所降低。比如当相对于ImL的甲基叔丁醚而言大豆卵磷脂的量为O. 30g时，混合溶液对胆固醇的溶解量比没有大豆卵磷脂情况下增加50%左右；当相对于ImL的甲基叔丁醚而言大豆卵磷脂的量为O. 40g时，混合溶液对胆固醇的溶解量比没有大豆卵磷脂情况下增加约64%，差不多达到一个相对最大值；但当相对于ImL的甲基叔丁醚而言大豆卵磷脂的量为O. 50g时，混合溶液对胆固醇的溶解量比没有大豆卵磷脂情况下虽然增加50%左右，但比最大值有所降低；而当相对于ImL的甲基叔丁醚而言大豆卵磷脂的量为O. 60g时，混合溶液对胆固醇的溶解量比没有大豆卵磷脂情况下增加20%以上。以蛋黄卵磷脂为例，当相对于ImL的甲基叔丁醚而言蛋黄卵磷脂的量为O. IOg时，混合溶液对胆固醇的溶解量比没有蛋黄卵磷脂情况下增加约62%。随着混合溶液中蛋黄卵磷脂加入量的增加，对胆固醇的溶解量略有增大，但不明显，比如当相对于ImL的甲基叔丁醚而言蛋黄卵磷脂的量为O. 20g、0. 30g和O. 40g时，混合溶液对胆固醇的溶解量比没有蛋黄卵磷脂情况下分别增加约64%、67%和74% ;而当相对于ImL的甲基叔丁醚而言蛋黄卵磷脂的量为O. 50g时，混合溶液对胆固醇的溶解量比没有蛋黄卵磷脂情况下增加近I倍。不受任何理论的束缚，所述混合溶石剂对胆固醇之所以出现上述溶解现象，主要是因为，本发明人发现，卵磷脂如大豆卵磷脂或蛋黄卵磷脂对胆固醇产生增溶作用，当甲基叔丁醚中卵磷脂如大豆卵磷脂或蛋黄卵磷脂加入量增加时，混合溶液对胆固醇的溶解量会逐渐增大，但同时混合溶液的粘度也逐渐增大。而粘度增大程度视情况有所不同，对于大豆卵磷脂而言，粘度增大导致溶解胆固醇的速度有所减慢，因此当溶解度达到相对峰值后，增大的粘度一定程度上阻碍了胆固醇的溶解；而蛋黄卵磷脂情况下，溶解度受粘度增大的影响不大，因而表现为随着蛋黄卵磷脂加入量增加，胆固醇的溶解量也一直在增加。虽然事实上当溶解时间足够长时，溶石剂中卵磷脂如大豆卵磷脂或蛋黄卵磷脂的含量越高，其对胆固醇的溶解量越大。但在实际应用中，我们不仅要考虑单位体积的溶石剂对胆结石的溶解量，还需考虑溶石剂对胆结石的溶解速度以及成本问题。因此，根据本发明，所述用于溶解胆固醇型结石的混合溶石剂中，基于ImL的甲基叔丁醚计，卵磷脂，优选大豆卵磷脂或蛋黄卵磷脂的量为O. 10 O. 60g,优选O. 20 O. 50g，更优选O. 3 O. 4g。在实际应用中选择的溶石剂中卵磷脂的最佳用量视情况有所不同，如对于大豆卵磷脂与甲基叔丁醚量的关系而言，基于ImL的甲基叔丁醚计，大豆卵磷脂的量最优选为O. 30 O. 40g，而蛋黄卵磷脂的量最优选为O. 10 O. 40g。根据本发明优选的实施方式，所述溶石剂由以上所述量的甲基叔丁醚和卵磷脂如大豆卵磷脂或蛋黄卵磷脂两种成分所组成。本发明另一主题是以上所述溶石剂用于溶解胆固醇型结石的用途。本发明另一主题是以上所述溶石剂在制备治疗胆固醇型结石的药物中的用途。用本发明的溶石剂对胆固醇型结石进行体外溶解，结果发现，胆结石基本溶解，只留下少量的不溶残渣。通过在红外谱库中对残渣的红外光谱匹配比对，发现残渣的红外光谱与胆红素的谱图匹配度最大。而相关文献中曾报道人胆结石中的主要成分是胆固醇和胆红素，而胆固醇型结石中胆固醇含量超过70 %，有的甚至高达90 %以上。因此，本发明的溶石剂对于胆固醇型结石的溶石效果更佳。虽然根据本发明的溶石剂对胆红素的溶解效果不佳，但胆固醇型结石基本溶解后所剩残渣直径基本上小于1_，而直接灌注溶石手术中所使用的导管直径一般在2_左右，胆管的平均直径大概为2到3_，因此这些不溶残渣足够小，完全可以由导管抽出或由胆管系统冲出。本发明的溶石剂可以采用直接灌注溶石法的给药方式，通过经皮经肝胆道置管(PTCD)或经内镜下逆行胆囊插管(ERCG)等途径，将溶石剂灌注进入胆囊，使其直接和胆石接触，对胆固醇型结石显示出明显疗效，除了发挥出直接灌注溶石法治疗时间短、收效快的效果外，还避免了汽化或挥发产生的高压给病人带来的腹痛感，也相应降低了甲基叔丁醚的刺激性气味及其他副作用。把本发明的新型溶石剂用于溶解人体胆结石的体外实验研究表明，该新型溶石剂对人体胆结石的溶解能力强于市场上任何溶石剂。由于大豆卵磷脂和蛋黄卵磷脂等卵磷脂是保健产品，对人体没有任何毒性，结合以往的有关甲基叔丁醚毒性研究的文献，由于达到同样的溶石效果相应地减少了甲基叔丁醚的用量，一定程度上会抑制其挥发以及由此可能带来的腹部胀痛感，同时减弱了其刺激性气味，因此本发明的新型溶石剂完全能够用于临床胆固醇型结石病人的非手术疗法的治疗。
图I :胆结石样品的红外光谱图和胆固醇标准红外光谱图，其中上图是胆结石样品谱，下图是胆固醇标准谱；图2 :实施例2中胆结石样品经包含甲基叔丁醚和大豆卵磷脂的溶石剂溶解后剩下的不溶残渣的电镜照片；图3 :胆结石样品的红外光谱图与胆结石在实施例2的溶石剂中充分溶解后所剩残渣的红外光谱图的比较，其中上图是胆结石样品谱，下图是溶解后所剩残渣的红外光谱；图4 :胆结石被实施例2的溶石剂溶解前的照片；图5 :胆结石被实施例2的溶石剂充分溶解后的照片；图6 :胆结石被实施例4的溶石剂溶解前的照片；图7 :胆结石被实施例4的溶石剂充分溶解后的照片；图8a :为甲基叔丁基醚的结构式，其中在甲基的碳原子上标有* ；图8b :为胆固醇的结构式，其中将*标于如图所示位置的相应碳原子上；图8c =MTBE溶解胆固醇后，胆固醇中带*的碳原子所对应的核磁谱，将其中的峰标记为b峰；实施例2所配制溶石剂溶解胆固醇后，胆固醇中带*的碳原子所对应的核磁谱，将其中的峰标记为a峰；和 图8d =MTBE溶解胆固醇后，胆固醇中带*的碳原子所对应的核磁谱，将其中的峰标记为b峰；实施例5所配制溶石剂溶解胆固醇后，胆固醇中带*的碳原子所对应的核磁谱，将其中的峰标记为a峰。
具体实施方式
下面结合附图通过具体实施方式
对本发明进行详细说明。本发明的特点和优点将随着这些描述变得更为清楚、明确。实施例I :配制溶石剂:为了测定在规定时间内大豆卵磷脂含有量不同的溶石剂对胆固醇的溶解能力，向6支IOmL的具塞比色管中分别加入3mL的甲基叔丁醚，再分别加入O. OOg,O. 30g,0. 60g,O. 90g, I. 20g, I. 50g的大豆卵磷脂制成溶液。溶解胆固醇:向这6支试管中逐渐加入胆固醇，漩涡振荡3分钟后，分别计算胆固醇的溶解量。实骀结果:表I中列出了随着大豆卵磷脂量的增多，胆固醇在该溶石剂中的溶解情况。表I :
甲基叔丁醚的量(mL)~Γ1 Γ1 Γ1 Γ1 Γ1 Γ1 大豆卵磷脂的量(g) OOO 030 060 090 Oo ΓδΟ 溶解胆固醇的量(g)042οΓδ οΓδ 0 600 69063从表I的实验结果可以看出，溶石剂中随着大豆卵磷脂的含量增加，溶解胆固醇的量逐渐增加，当大豆卵磷脂的质量增加到I. 5g时，胆固醇在溶石剂中的溶解量反而减小。实施例2 配制溶石剂:按照3mL的甲基叔丁醚对应O. 90g的大豆卵磷脂这一关系配制溶石剂。溶解人体胆结石:取一块从人体中取出的胆结石样品，其红外光谱如图I中上面的图所示，下面的图是胆固醇标准红外光谱图。由图I确定该样品为胆固醇型结石。该胆结石被溶石剂溶解前的形态照片如图4所述。将该胆结石样品逐渐加入所配制的溶石剂中，在超声下，14至15min后胆结石基本溶解，只留下少量的不溶残渣。对残渣进行电镜分析，其电镜照片如附图2所示，表明残渣的直径基本上小于Imm0而直接灌注溶石手术中所使用的导管直径在2_左右，胆管的平均直径为2到3_，因此这些不溶残渣足够小，完全可以由导管抽出或由胆管系统冲出。图3为胆结石样品的红外光谱图与胆结石在溶石剂中充分溶解后所剩残渣的红外光谱图的比较，其中上图是胆结石样品谱，下图是溶解后所剩残渣的红外光谱。两个谱峰有较大差别，说明胆固醇型结石样品中的主要成分，即胆固醇基本被溶解，余下不能被溶石剂溶解的残渣。
通过在红外谱库中对残渣的红外光谱匹配比对，发现残渣的红外光谱与胆红素的谱图匹配度最大。相关文献中曾报道人胆结石中的主要成分是胆固醇和胆红素，而胆固醇型结石中胆固醇含量超过70%，有的甚至高达90%以上。因此，本发明该实施例制备的溶石剂对于胆固醇型结石的溶石效果更佳。该胆结石被所配制的溶石剂充分溶解后的形态照片如图5所示，可见胆结石基本溶解。实施例3 配制溶石剂: 按照3mL的甲基叔丁醚对应I. 20g的大豆卵磷脂这一关系配制溶石剂。溶解人体胆结石:取一块如实施例2那样来自人体的胆固醇型胆结石样品。将该胆结石样品逐渐加入所配制的溶石剂中，在超声下，12至13min后胆结石基本溶解，只留下少量的不溶残渣，其形态照片类似图5那样，而且这些残渣的直径基本上小于1mm。实施例4 配制溶石剂:为了测定在规定时间内，蛋黄卵磷脂含有量不同的溶石剂对胆固醇的溶解能力，向6支IOmL的具塞比色管中分别加入3mL的甲基叔丁醚,再分别加入O. OOg, O. 30g,0. 60g,
O.90g, I. 20g, I. 50g的蛋黄卵磷脂制成溶液。溶解胆固醇:向这6支试管中逐渐加入胆固醇，漩涡振荡3分钟后，分别计算胆固醇的溶解量。实验结果:表2中列出了随着蛋黄卵磷脂量的增多，胆固醇在该溶石剂中的溶解情况。表2
甲基叔丁醚的量(mL)~Γ1 Γ1 Γ1 Γ1 Γ1 Γ1 蛋黄卵磷脂的量(g)OOO030060090 Γ20 ΤδΟ
溶解胆固醇的量(g)0420680690 700 73086从表2的实验结果可以看出，溶石剂中随着蛋黄卵磷脂的含量增加，溶解胆固醇的量逐渐增加，即使当蛋黄卵磷脂的质量增加到I. 5g时，胆固醇在溶石剂中的溶解量仍比较大，但观察到此时溶液体系的粘度也较大。实施例5 配制溶石剂:按照3mL的甲基叔丁醚对应O. 30g的蛋黄卵磷脂这一关系配制溶石剂。溶解人体胆结石:取一块从人体中取出的胆结石样品，由红外光谱图确定该样品为胆固醇型结石。该胆结石被溶石剂溶解前的形态照片如图6所述。将该胆结石样品逐渐加入所配制的溶石剂中，在超声下，18至20min后胆结石基本溶解，只留下少量的不溶残渣。通过在红外谱库中对残渣的红外光谱匹配比对，发现残渣的红外光谱与胆红素的谱图匹配度最大。因此，该溶石剂对于胆固醇型结石的溶石效果更佳。该胆结石被所配制的溶石剂充分溶解后的形态照片如图7所示，可见胆结石基本溶解，而且这些残渣的直径基本上小于1mm。实施例6 配制溶石剂:
按照3mL的甲基叔丁醚对应O. 90g的蛋黄卵磷脂这一关系配制溶石剂。溶解人体胆结石:取一块如实施例5那样来自人体的胆固醇型胆结石样品。将该胆结石样品逐渐加入所配制的溶石剂中，在超声下，16至17min后胆结石基本溶解，只留下少量的不溶残渣，其形态照片类似图7那样，而且这些残渣的直径基本上小于1mm。实施例7 配制溶石剂:按照3mL的甲基叔丁醚对应I. 50g的蛋黄卵磷脂这一关系配制溶石剂。
_3] 溶解人体胆结石:取一块如实施例5那样来自人体的胆固醇型胆结石样品。将该胆结石样品逐渐加入所配制的溶石剂中，在超声下，14至15min后胆结石基本溶解，只留下少量的不溶残渣，其形态照片类似图7那样，而且这些残渣的直径基本上小于1mm。测丨试实例:碳谱以图8a的甲基叔丁基醚以及图Sb的胆固醇中带星号*的碳原子为研究对象。步骤A:在MTBE中加入足够多的胆固醇，充分溶解后取一定量的上清液用MTBE稀释，对稀释后的溶液进行定量碳谱的测定。把图8a甲基叔丁醚中带星号*的碳原子对应峰的面积定为1，测量图8b的胆固醇中带星号*的碳原子对应的核磁谱峰的面积，该峰命名为b峰,如图8c下图所示。步骤B :在实施例2所配制的大豆卵磷脂和MTBE的溶石剂中加入足够多的胆固醇，充分溶解后取一定量的上清液，用MTBE稀释，稀释倍数为步骤A的I. 3倍，对稀释后的溶液进行定量碳谱的测定。把图8a的甲基叔丁醚中带星号*的碳原子对应峰的面积定为
I,测量图8b的胆固醇中带星号*的碳原子对应峰的面积，该峰命名为a峰，如图8c上图所
/Jn ο由于在大豆卵磷脂和MTBE形成的溶石剂中溶解较多的胆固醇后，长期放置体系会凝固，不利于做定量碳谱(因为定量碳谱需要扫描较长的时间)，所以相对于A步骤而言，对体系进行了稍加倍的稀释。经折算后，图Sc中a峰的积分面积为O. 048，b峰的积分面积为O. 041。因此，通过定量碳谱进一步验证了在MTB E中加入大豆卵磷脂后，混合溶剂对胆固醇的溶解能力进一步增大。而且由核磁图发现，当在MTB E中加入大豆卵磷脂后，胆固醇的峰位向高场发生了移动，说明大豆卵磷脂和胆固醇之间存在着一定的相互作用力，而这种作用力可能是导致新型溶石剂对胆固醇的溶解能力增大的直接原因。步骤B’ 在实施例5所配制的蛋黄卵磷脂和MTB E的溶石剂中加入足够多的胆固醇，充分溶解后取一定量的上清液，用MTB E稀释与步骤A相同的倍数，对稀释后的溶液进行定量碳谱的测定。把图8a的甲基叔丁醚中带星号*的碳原子对应峰的面积定为1，测量图8b的胆固醇中带星号*的碳原子对应峰的面积,该峰命名为a峰,如图8d上图所示。图8d中a峰的积分面积为O. 054，b峰的积分面积为O. 041。因此，通过定量碳谱进一步验证了在MTB E中加入蛋黄卵磷脂后，混合溶剂对胆固醇的溶解能力进一步增大。而且由核磁图发现，当在MTBE中加入蛋黄卵磷脂后，胆固醇的峰位向高场发生了移动，说明蛋黄卵磷脂和胆固醇之间存在着一定的相互作用力，而这种作用力可能是导致新型溶石剂对胆固醇的溶解能力增大的直接原因。 以上通过优选的具体实施方式
对本发明进行了范例性说明。不过需要声明的是，这些具体实施方式
仅是对本发明的阐述性解释，并不对本发明的保护范围构成任何限制，在不超出本发明精神和保护范围的情况下，本领域技术人员可以对本发明技术内容及其实施方式进行各种改进、等价替换或修饰，这些均落入本发明的保护范围内。
权利要求
1.一种用于溶解胆固醇型结石的混合溶石剂，其特征在于， 该溶石剂包含甲基叔丁醚和卵磷脂，并且基于IrnL的甲基叔丁醚计，卵磷脂的量为O.10 O. 60go
2.根据权利要求I所述的溶石剂，其特征在于，所述卵磷脂是大豆卵磷脂。
3.根据权利要求I所述的溶石剂，其特征在于，所述卵磷脂是蛋黄卵磷脂。
4.根据权利要求I至3之一所述的溶石剂，其特征在于， 基于ImL的甲基叔丁醚计，所述卵磷脂的量为O. 20 O. 50g，优选O. 30 O. 40g。
5.根据权利要求I至4之一所述的溶石剂，其特征在于， 基于ImL的甲基叔丁醚计，大豆卵磷脂的量优选为O. 30 O. 40g，最优选为O. 30g。
6.根据权利要求I至4之一所述的溶石剂，其特征在于， 基于ImL的甲基叔丁醚计，蛋黄卵磷脂的量优选为O. 10 O. 40g。
7.根据权利要求I至6之一所述的溶石剂，其特征在于，所述溶石剂由所述量的甲基叔丁醚和大豆卵磷脂或蛋黄卵磷脂组成。
8.根据权利要求I至7之一所述的溶石剂用于溶解胆固醇型结石的用途。
9.根据权利要求I至7之一所述的溶石剂在制备治疗胆固醇型结石的药物中的用途。
10.根据权利要求I至7之一所述的溶石剂的给药方式，包括经皮经肝胆道置管(PTCD)或经内镜下逆行胆囊插管(ERCG)等途径，将溶石剂灌注进入胆囊，使其直接和胆石接触。
全文摘要
本发明涉及一种用于溶解胆固醇型结石的混合溶石剂，其特征在于，该溶石剂包含甲基叔丁醚和卵磷脂，并且基于1mL的甲基叔丁醚计，卵磷脂的量为0.10～0.60g，所述卵磷脂优选是大豆卵磷脂或蛋黄卵磷脂。本发明的溶石剂不但可以相应降低甲基叔丁醚的饱和蒸汽压，而且由于相应降低了甲基叔丁醚的百分含量，因此也相应降低了其气味的刺激性，因此本发明的新型溶石剂能够用于临床胆固醇型结石病人的非手术疗法的治疗。
文档编号A61P1/16GK102614155SQ20121006519
公开日2012年8月1日 申请日期2012年1月13日 优先权日2012年1月13日
发明者凌晓锋, 刘微, 吴瑾光, 周孝思, 徐怡庄, 李昕, 李晓佩 申请人:中国科学院过程工程研究所, 北京大学, 北京大学第三医院, 辽宁中医药大学