专利名称：肉苁蓉多糖在制备改善学习记忆功能的药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及肉苁蓉多糖的应用，尤其涉及肉苁蓉多糖在制备改善学习记忆功能的药物中的应用。
背景技术：
记忆根据心理学特点和神经生理生化机制可分为四个阶段识记或获得，是指通过学习在大脑留下记忆痕迹的过程；贮存和巩固以及保持，这两个过程均为学习训练后发生的记忆痕迹由短时不稳定状态逐渐转化为长时牢固状态并贮存下来的过程；再现，是指存贮在脑内的记忆痕迹通过回忆或再现方式加以重现的过程。研究认为，中枢胆碱能系统与学习记忆关系密切，乙酰胆碱(acetylcholine, Ach)是促进学习记忆的神经递质，M胆 碱能突触为记忆的基础。ACh是中枢胆碱能系统中重要的神经递质之一，其主要功能是维持意识的清醒，促进学习和记忆的改善。ACh是由胆碱、乙酰辅酶A等在胆碱乙酰转移酶(choline, acety. transfertase, ChAT)的催化下合成，由AChE分解，其活力变化可间接反映脑内Ach的代谢情况。肉灰蓉为列当科植物肉灰蓉Cistanche deser-ticola Y. C. Ma.或管花肉灰蓉Cistanche Tubulosa(schrenk) R. Wight的干燥带鳞叶的肉质莖，成而温，具有补肾阳、益精血、润肠通便和延缓衰老等功能，有“沙漠人参”的美称。历代医家视其为抗衰老佳品。在我国已有两千多年的使用历史，现代药理学表明，肉苁蓉除作为传统的补肾壮阳中药外，更兼具有抗衰老、增强记忆、提高免疫力等多种功能。肉苁蓉的化学成分在同属植物中研究的最为深入，现已分离得到69个化合物。随着检测和提取方法的迅速发展，已从肉苁蓉中得到了多种类型的化学物质，主要有烃类、生物碱、黄酮类、氨基酸、苯乙醇甙类、苯丙醇甙类、环烯醚萜类、D—甘露醇、B —谷留醇、多糖及无机微量元素等。多糖类是重要的生物高分子化合物，有免疫调节、抗肿瘤、抗炎、抗病毒、抗氧化、抗辐射、降血糖、降血脂、保肝等多种生物活性，因此关于多糖的研究得以重视起来。肉苁蓉属植物中有多糖等主要成分。但文献检索未见肉苁蓉多糖单独在改善学习记忆功能方面的应用。
发明内容
本发明的目的在于提供肉苁蓉多糖在制备改善学习记忆功能的药物中的应用。研究发现乙酰胆碱对学习与记忆起重要作用，首先是从东蓑若碱可降低正常人回忆数字序列或一组物品以及复述一段文字的能力开始，以后在啮齿类动物的研究过程中证实，阻滞乙酰胆碱的药物如东莨菪碱、阿托品等能损害记忆和识别，东莨菪碱是M胆碱受体拮抗剂，可阻断大脑皮质、隔区及海马结构中的M胆碱受体引起胆碱能系统功能障碍，从而产生学习记忆能力减退。训练前给药，可造成动物记忆获得障碍。乙醇为中枢性抑制剂，灌服30%的乙醇主要导致动物记忆的再现障碍，测试前给药，较低浓度下即可明显破坏记忆过程，造成学习记忆再现障碍。训练前给药，可造成动物记忆获得障碍。本发明采用通道式水迷宫和Morris水迷宫法分别探讨肉苁蓉多糖对氢溴酸东莨菪碱所致小鼠学习记忆获得性障碍、乙醇所致小鼠学习记忆再现性障碍、亚硝酸钠所致小鼠学习记忆巩固性障碍的影响，表明肉苁蓉多糖具有促智作用，且本发明初步研究了肉苁蓉多糖的作用机制，为降低小鼠海马和大脑皮层AChE活性含量，为肉苁蓉多糖进一步的研发提供了临床前药理学实验依据。
图I为通道式(方形)水 迷宫；图2为由VEDI0-PCI-XR图象采集器及行为学软件得到的各组小鼠定位航行轨迹具体实施例方式本发明所述的肉苁蓉多糖用于改善学习记忆功能的动物实验是按照如下实施示例所表示的方法进行的研究。所涉及的方法是本领域的技术人员能够掌握和运用的技术手段，但以下实施示例不得理解为任何意义上的对本发明权利要求的限制。实施示例I肉苁蓉多糖对氢溴酸东莨菪碱所致小鼠学习记忆获得性障碍、乙醇所致小鼠学习记忆再现性障碍、亚硝酸钠所致小鼠学习记忆巩固性障碍的影响(一)材料与方法I 药物肉苁蓉多糖；多奈哌齐(江苏豪森药业股份有限公司国药准字H20030472)2实验动物筛选及分组本实验选用昆明小鼠，级别SPFNAF，体重20±2g，雌性各半，自由摄食饮水，12小时明暗交替照明。采用方形通道式水迷宫筛选动物，指引每只小鼠从入水点到出口两次，进行测试，若120s内找到出口则保留，未找到则淘汰。将筛选出来的60只小鼠随机分成6组，每组雌雄各半，包括空白组(注射用生理盐水200mg/kg)、阳性对照组(多奈哌齐0. 6mg/kg)、模型组(东莨菪碱4mg/kg、30% C2H5OH 200mg/kg>NaNO2120mg/kg)、肉灰蓉多糖低剂量组(50mg/kg)、肉灰蓉多糖中剂量组(100mg/kg)、肉灰蓉多糖高剂量组(200mg/kg),除东莨菪碱和NaNO2腹腔注射，其余灌胃给药。3氢溴酸东莨菪碱致学习记忆障碍模型的建立及给药模型组、阳性对照组、实验组于通道式水迷宫实验及Morris水迷宫实验测试前30min分别腹腔注射氢溴酸东莨菪碱(4mg/kg)，以此建立学习记忆获得性障碍模型，空白组给予相应体积的生理盐水。4乙醇致学习记忆障碍模型的建立及给药模型组、阳性对照组、实验组于通道式水迷宫实验及Morris水迷宫实验测试前30min分别灌胃给予30% C2H5OH,以此建立学习记忆再现性障碍模型，空白组给予相应体积的生理盐水。5亚硝酸钠致学习记忆障碍模型的建立及给药模型组、阳性对照组、实验组于Morris水迷宫实验测试后立即腹腔注射亚硝酸钠(120mg/kg)，24小时后进行测试，以此建立学习记忆巩固性障碍模型，空白组给予相应体积的生理盐水。6给药方案除造模测试外，每天空白组、模型组灌胃给予注射用生理盐水，阳性对照组灌胃给予0. 6mg/kg多奈哌齐,实验组分别按剂量灌胃给予50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg肉灰蓉多糖。7通道式(方形)水迷宫行为测试水迷宫(本实验室自制)由一黑色有机玻璃长方体水槽(73cmX42cmX30cm)组 成，其中有若干隔板组成迷宫，如图I所示，其中1、2、3、4为盲端1、2、3、4，A、B、C、D为四个入水点，迷宫的一端有一组台阶为终点，迷宫中水深20cm，水温22°C ±2°C。各模型及对照组动物依次进行水迷宫实验，第Id路径包括I个盲端，第2d有2个盲端，第3d有3个盲端，
4、5、6、7d均为4个盲端。每天训练两次，记录每只动物在游泳中进入盲端的次数及游出时间，如果120s内未上岸，按120s计算。8 Morris水迷宫行为测试Morris (上海吉量软件科技有限公司)水迷宫为一直径120cm、高50cm的圆柱形水池，其内部被分为4个大小相等的象限，在其中的一个象限中央放置一直径为9. 5cm平台，此平台位置一旦被确定将在整个行为学测试中保持不变。放置水迷宫的房间内物品位置固定以保证小鼠通过水迷宫外不变的物品信息来寻找平台。试验过程中控制水温在(22±2)°C。从第13d开始进行定位航行实验，连续训练4d，每天训练两次，第14d将安全岛所在象限作为入水点，第15、16d将安全岛旁边的象限作为入水点，第17d将安全岛对侧象限作为入水点。记录小鼠在120s内寻找到平台的时间即逃避潜伏期，若小鼠在120s内未寻找到平台则其逃避潜伏期记为120s，每只小鼠训练完毕后不论是否找到平台均将之放于平台上20s。在测试中除记录逃避潜伏期外同时记录小鼠的游泳路程。定位航行试验结束后，撤去平台，将小鼠从安全岛对侧象限面向池壁放入水中，测其在120s跨原平台所在位置的次数(即穿梭次数)和第I次到达原平台的时间。试验检测指标穿梭次数是指撤除平台后，小鼠穿越原平台所在位置的次数。第一次到达平台时间式指撤除平台后，小鼠第一次到达平台所在位置的时间。在行为学测试中，小鼠的游泳活动由水迷宫水池上方的摄像装置记录，通过VEDI0-PCI-XR图象采集器及行为学软件处理数据并存于计算机中。9统计学分析实验数据用又± SD表示，对于水迷宫行为测试分析结果采用t检验，进行组间比较( 二)实验结果I通道式水迷宫行为测试结果分析(I)对东莨菪碱所致小鼠记忆获得性障碍的影响在最初的训练中，小鼠表现为进入盲端的错误次数多以及找到安全台阶的潜伏期长。随着训练增加，以台阶为目标的目的性游动逐渐产生和增强。在腹腔注射氢溴酸东莨菪碱后，模型组小鼠目的性游动明显减少，再次出现进入盲端的错误次数多以及找到安全台阶的潜伏期增长的现象，而在给予肉苁蓉多糖提取物后具有显著的改善作用，小、中、大三个剂量组的逃避潜伏期与模型组比较均有差异(P < 0. 05)，小剂量和大剂量组的撞壁次数与模型组比较有差异(P < 0. 05)。实验结果见表I。表I :东莨菪碱模型对小鼠学习记忆的影响(又土SD，n = 10)
权利要求
1.肉苁蓉多糖在制备改善学习记忆功能的药物中的应用。
2.根据权利要求I所述肉苁蓉多糖的应用，其特征在于肉苁蓉多糖用于制备治疗老年性痴呆的药物。
3.肉苁蓉多糖在制备降低海马中AChE活性含量的药物中的应用。
4.肉苁蓉多糖在制备降低大脑皮层中AChE活性含量的药物中的应用。
5.肉苁蓉多糖在制备提高脑内Ach含量的药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了肉苁蓉多糖在制备改善学习记忆功能的药物中的应用，采用通道式水迷宫和Morris水迷宫法分别探讨肉苁蓉多糖对氢溴酸东莨菪碱所致小鼠学习记忆获得性障碍、乙醇所致小鼠学习记忆再现性障碍、亚硝酸钠所致小鼠学习记忆巩固性障碍的影响，表明肉苁蓉多糖具有促智作用，且本发明初步研究了肉苁蓉多糖改善学习记忆功能的作用机制为降低小鼠海马和大脑皮层AChE活性含量，提高脑内Ach的含量。
文档编号A61P25/28GK102743408SQ20121018198
公开日2012年10月24日 申请日期2012年5月28日 优先权日2012年5月28日
发明者徐俊梅, 李刚, 武世奎, 马慧 申请人:内蒙古医学院