神经分化相关基因BRSK2的siRNA的新用途
【专利摘要】本发明属于医药及基因工程领域，提供了BRSK2的siRNA的新用途，即作为胰腺癌细胞对化疗药物的增敏剂。本发明还提供了一种抑制胰腺癌细胞增殖的药物组合物，该药物组合物主要包括BRSK2的siRNA和丝裂霉素。本发明还涉及该药物组合物的应用。本发明的药物组合物能够明显抑制胰腺癌细胞增殖的存活，促进胰腺癌细胞的凋亡。而且BRSK2在人脑和胰腺组织中高丰量特异性表达，尤其在胰腺癌组织中比癌旁组织中表达量更高，故本发明的siRNA有高度的特异性。本发明为寻找有效的治疗胰腺癌的药物提供一种全新的、特异的、高效的、低副作用的方法和途径。
【专利说明】神经分化相关基因BRSK2的siRNA的新用途
【技术领域】
[0001]本发明属于医药及基因工程领域，提供了神经分化相关基因BRSK2的siRNA的新用途。本发明还涉及了含有siRNA与化疗药物的药物组合物及其应用。
【背景技术】
[0002]胰腺癌是由胰腺癌上皮恶变形成的恶性肿瘤，虽然其发病率仅排名恶性肿瘤的第13位，但是其致死率却在恶性肿瘤中位列第8位。根据世界卫生组织的统计，全世界每年有216 000多人确诊为胰腺癌。在我国该癌症发病率原很低，但近年也呈现逐年增多的趋势，近年来已经升至第5位。即使现在有化疗、放疗、手术等多种治疗方法，胰腺癌的生存率仍然不到5%。因为在出现初级症状时就已经伴有转移现象，所以被确认为胰腺癌时往往已经是临床晚期。因此只有10%的患者能够接受手术，而辅助疗法基本已经无能为力。造成胰腺癌的死亡率基本上与其发生率持平，五年生存率仅有5%。[0003]AMP-活性相关激酶(AMP-activated protein kinase, AMPK)是一个高度保守的丝氨酸苏氨酸激酶，当细胞内能量下降时，AMPK经由其上游的激酶激活其催化区域的172位丝氨酸的磷酸化而被活化，因此又被称为能量变化感应器。根据AMPK激酶结构域氨基酸的保守性，Manning等人将BRSK1，BRSK2, AMPK等13个激酶归于AMPK亚家族。BRSK2是由 申请人:最早克隆出来的一个基因，刚开始认为其只在脑中表达，故起名为脑特异表达激酶2 (Brain-specific kinase 2，BRSK2)，后来发现其不仅仅存在于脑里，在胰腺中也有表达。
[0004]BRSK2是 申请人:利用重要结构域同源筛选策略EST电子克隆技术，首先克隆并提交的新基因。前期对BRSK2的研究主要集中在它们在神经极化、突触形成以及递质释放等过程中起到的应用。小鼠中BRSK2的同源基因被命名为SAD-A以及SAD-B，单突变BRSK2的动物模型表型正常，但是双突变BRSK2的模型动物在出生后两个小时就死亡，解剖发现动物的大脑皮层比正常的要薄得多，并且神经元缺乏轴突以及树突。一个可能的机制是SAD通过磷酸化Tau，引起MAPs与微管蛋白结合不紧密，造成微管蛋白不能正常形成，最终对轴突形成造成影响。另外有研究表明，人的BRSK2是新的突触小泡和活动机制相关蛋白激酶，通过磷酸化其活动区蛋白和小泡引发因子RM1，达到调节神经递质释放的功能。最新研究表明，除了在神经系统的中心起到调节神经极化、轴突树突形成等起到作用，BRSK2还能特异地定位于肌肉神经节点处，控制神经递质在周围神经系统的释放。
[0005]DNR是一种重要的蒽环类抗癌药物，分子式C27H29N010，通常称为柔红霉素。中文别名:正定霉素，柔毛霉素，红比霉素，红保霉素，佐柔比星，红比脘。外文名=Daunorubicin, Daunomycin, Daunoblastin, Rubidomycin, Rubomycin, Ondena, Cerubidine.外文缩写:DNR, DRB, DM, F.1.6339, NSC-82151, 13057R.P,本发明中也简称为 DAU。化学名:(1S,3S) -3-乙酸基-1,2,3,6,11-/K氧-3,5,12-二羟基-10-甲氧基-6,11- 二氧-1-1 蔡基-3-氨基-2，3，6-三去氧-a-L来苏六吡喃糖甙。DNR药物为橙红色针状结晶，易溶于水，其水溶液相当稳定，在0°C能保存3周，其活力不变，不溶于氯仿、丙酮、乙醚、苯。是Str.peucetius或Str.coeruleorubidus菌种所产生的抗生素,是从我国河北正定县土壤中得到的放线菌菌株，故亦名正定霉素。
[0006]阿霉素(DOX)分子式为C27H29N011，分子量 543.49，化学名称:(2R, 4S) ~4~ (3-Amino-2,3,6-trideoxy-a -L-lyxo-hexopyranosyloxy)-2-hydroxyacetyl-l, 2, 3, 4-tetrahydro-2, 5, 12-trihydroxy-7-methoxynaphthacene_6，11-dione。通常为桔红色的冻干粉剂。阿霉素是一种抗肿瘤抗生素，可抑制RNA和DNA的合成，对RNA的抑制作用最强，抗瘤谱较广，对多种肿瘤均有作用，属周期非特异性药物，对各种生长周期的肿瘤细胞都有杀灭作用。主要适用于急性白血病，对急性淋巴细胞白血病及粒细胞白血病均有效，主要的毒性反应有，白细胞和血小板减少，不同程度的毛发脱落，心脏毒性，恶心、食欲减退，药物溢出血管外可引起组织溃疡及坏死。
[0007]丝裂霉素，英文名=Mitomycin,分子式:C15H18N405,分子量:334.33，CAS号:50-07-7。结构如下:
[0008]
【权利要求】
1.神经分化相关基因BRSK2的SiRNA的一种用途，其特征在于，神经分化相关基因BRSK2的siRNA是胰腺癌细胞对药物的增敏剂。
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的药物是柔红霉素、丝列霉素或者阿霉素。
3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的神经分化相关基因BRSK2的siRNA的序列如SEQ ID NO I或者SEQ ID NO 3所示。
4.一种增强体外胰腺癌细胞对丝裂霉素敏感性的方法，其特征在于，在胰腺癌细胞的培养基中加入神经分化相关基因BRSK2的siRNA。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，在对胰腺癌细胞的培养基中加入丝裂霉素之前，加入神经分化相关基因BRSK2的siRNA。
6.一种抑制胰腺癌细胞增殖的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物包括神经分化相关基因BRSK2的siRNA和丝裂霉素。
7.如权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，神经分化相关基因BRSK2的siRNA与丝裂霉素的比值不多于1:50，摩尔比。
8.如权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物含有药学上有效量的神经分化相关基因BRSK2的抑制剂和药学上有效量的丝裂霉素以及药学上可接受的载体。
9.权利要求6所述的药物组合物的应用，其特征在于，将该药物组合物用于抑制胰腺癌细胞生长。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，在胰腺癌细胞的培养基中加入神经分化相关基因BRSK2的siRNA和丝裂霉素，能够明显促进胰腺癌细胞的凋亡进程。
【文档编号】A61K31/713GK103536933SQ201210238706
【公开日】2014年1月29日 申请日期:2012年7月10日 优先权日:2012年7月10日
【发明者】余龙, 王颖黎, 袁健, 郭泽坤, 李如伟 申请人:复旦大学