专利名称：一种姜辣素脂质体及其制备方法
技术领域：
本发明属于生物医药领域，尤其是一种透皮性能优良的姜辣素脂质体的制备方法。
背景技术：
随着科学技术、仪器和方法学的迅速发展，人们对于自身的认识越来越深刻，对于皮肤生理病理的研究已经深入到基因和分子生物学水平，对相关生物医药产业的发展产生了巨大的推动作用，许多具有生物活性的动植物成分和生物高分子成分已经应用到生物医药行业，取得了巨大的社会和经济效益。但是，如何将这些具有生物活性的成分应用到生物医药领域中，面临着许多难题，主要表现在以下方面1、这些生物活性物质的稳定性问题，除了由其自身的结构和空间构象决定外，外界环境因素的影响也不容小视，例如表皮活性因子溶液，在外界环境中的活性持续时间有短短的数小时，在其被皮肤吸收发挥作用之前就基本失活了，根本不能发挥其应有的作用和效果。2、高分子成分难于被人体皮肤吸收的问题，通常来说，活性物分子量越小，越容易透过皮肤，一旦分子量大于600，活性物就很难被皮肤吸收了，而近年来应用的具有特定皮肤活性功能的物质大多数是肽类等高分子物质，其分子量少则数千，多则数十万，·这就决定了它们很难透过皮肤从而被有效吸收。3、生物活性物质的可溶性问题，大部分有效成分不能溶于水被皮肤表层吸收，很难发挥其作用。姜辣素能够加速血液流动，促使排汗，带走体内多余的热量，具有排毒、养颜、减肥的作用，但是由于上述原因，很难被皮肤吸收，难以发挥其应有的作用。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种设计合理、透皮性能优良的姜辣素脂质体的制备方法。本发明解决其技术问题是采取以下技术方案实现的—种姜辣素脂质体，其构成组分及其组分的重量份数为大豆磷脂65 70份、胆固醇30 35份、姜辣素O. 5 30份、无水乙醇1000 1500份、磷酸盐缓冲液70 120份。而且，所述的磷酸盐缓冲液的pH值为7. 2 7. 5。一种姜辣素脂质体的制备方法，包括以下步骤⑴称取大豆磷脂、胆固醇置于茄形瓶中，加入相当于大豆磷脂和胆固醇总体积6 10倍的无水乙醇使大豆磷脂和胆固醇完全溶解；⑵将茄形瓶置于旋转蒸发仪上，48 50°C减压蒸发溶剂，在茄形瓶中形成一层薄膜，然后中空干燥使溶剂除尽；⑶将姜辣素与无水乙醇按体积比I :5混合使姜辣素完全溶解，制得姜辣素溶液备用；
⑷将磷酸盐缓冲液加入到姜辣素溶液中形成姜辣素磷酸盐溶液；(5)将占O. 05 O. 14倍大豆磷脂和胆固醇总质量的姜辣素磷酸盐溶液加到步骤⑵含薄膜的茄形瓶中，35 40°C恒温震荡至薄膜脱落，然后放置2 3h水化，水化液分别经O. 80 μ m、0. 45 μ m、0. 22 μ m滤膜高压挤出，制得姜辣素脂质体混悬液；(6)采用冻干法制备姜辣素脂质体取姜辣素脂质体混悬液置于烧瓶中，浸入低温浴器内，缓慢旋转40 60min，直到冷冻成膜状；(7)将烧瓶连于冷冻干燥仪上，抽真空5 lOmin，使水分完全升华，制备出姜辣素脂质体。 一种姜辣素冻干脂质体，其构成组分及其组分的重量份数为大豆磷脂65 70份、胆固醇30 35份、姜辣素O. 5 30份、无水乙醇1000 1500份、冻干保护剂O. 5 3份，磷酸盐缓冲液70 120份。而且，所述的冻干保护剂为低浓度甘氨酸。一种姜辣素冻干脂质体的制备方法，包括以下步骤⑴称取大豆磷脂、胆固醇置于茄形瓶中，加入相当于大豆磷脂和胆固醇总体积6 10倍的无水乙醇使大豆磷脂和胆固醇完全溶解；⑵将茄形瓶置于旋转蒸发仪上，48 50°C减压蒸发溶剂，在茄形瓶中形成一层薄膜，然后中空干燥使溶剂除尽；⑶将姜辣素与无水乙醇按体积比I :5混合使姜辣素完全溶解，制得姜辣素溶液备用；⑷将磷酸盐缓冲液及冻干保护剂加入到姜辣素溶液中形成姜辣素磷酸盐溶液；(5)将占O. 05 O. 14倍大豆磷脂和胆固醇总质量的姜辣素磷酸盐溶液加到上述含薄膜的茄形瓶中，35 40°C恒温震荡至薄膜脱落，然后放置2 3h水化，水化液分别经O. 80 μ m、0. 45 μ m、0. 22 μ m滤膜高压挤出，制得姜辣素脂质体混悬液；(6)采用冻干法制备姜辣素脂质体取姜辣素脂质体混悬液置于烧瓶中，浸入低温浴器内，缓慢旋转40 60min，直到冷冻成膜状；(7)将烧瓶连于冷冻干燥仪上，抽真空5 lOmin，使水分完全升华，制备出姜辣素冻干脂质体。本发明的优点和积极效果是本发明以姜辣素为模型成分，并以大豆磷脂、胆固醇作为脂质体原料，采用挤出-冻干法制备出透皮性能优良的姜辣素脂质体，通过姜辣素脂质体的外观、pH、粒径、表面电荷等基本数据，以及包封率和载药量检测、体外释放和透皮吸收试验表明，本发明的姜辣素脂质体具有非常强的体外透皮吸收性能，为姜辣素脂质体技术应用于生物医药行业提供实验依据。
具体实施例方式以下结合实例对本发明做进一步描述。一种姜辣素脂质体，其构成组分及其组分的重量份数为大豆磷脂65 70份、胆固醇30 35份、姜辣素O. 5 30份、无水乙醇1000 1500份、PBS缓冲盐(pH 7. 2 7. 5) 70 120 份。
一种姜辣素脂质体的制备方法，包括以下步骤(I)按比例精密称取大豆磷脂、胆固醇置于茄形瓶中，加入相当于大豆磷脂和胆固醇总体积6 10倍的无水乙醇使大豆磷脂和胆固醇完全溶解。(2)将茄形瓶置于旋转蒸发仪上，48 50°C减压蒸发溶剂，在茄形瓶中形成一层薄膜，然后中空干燥过夜，使溶剂除尽。(3)按姜辣素与无水乙醇按体积比I :5混合使姜辣素完全溶解，制得姜辣素溶液备用。(4)将磷酸盐缓冲液(PBS pH 7. 2 7. 5)加入到步骤(3)制得的姜辣素溶液中形成姜辣素磷酸盐溶液，磷酸盐缓冲液(PBS pH 7. 2 7. 5)与姜辣素溶液的体积比为7 8 ··O. 3 O. 8。 (5)将占O. 05 O. 14倍大豆磷脂和胆固醇总质量的姜辣素磷酸盐溶液加到上述含薄膜的茄形瓶中，35 40°C恒温震荡至薄膜脱落，然后放置2 3h水化，水化液分别经O. 80 μ m、0. 45 μ m、0. 22 μ m滤膜高压挤出，制得姜辣素脂质体混悬液。(6)采用冻干法制备姜辣素脂质体取姜辣素脂质体混悬液置于磨口圆底烧瓶中，浸入低温浴器内，缓慢旋转40 60min，直到冷冻成膜状。(7)将烧瓶连于冷冻干燥仪上，抽真空5 lOmin，使水分完全升华，制备出姜辣素脂质体。一种姜辣素冻干脂质体，其构成组分及其组分的重量份数为大豆磷脂65 70份、胆固醇30 35份、姜辣素O. 5 30份、无水乙醇1000 1500份、冻干保护剂O. 5 3份，PBS缓冲盐(pH 7. 2 7. 5) 70 120份。姜辣素冻干脂质体与前述姜辣素脂质体的区别在于加入了冻干保护剂，该冻干保护剂采用低浓度甘氨酸，由于氨基酸离子具有酸、碱两性，可抑制磷酸缓冲盐结晶，在冷冻干燥过程中抑制pH值的改变而阻止蛋白质药物变性。一种姜辣素冻干脂质体的制备方法，包括以下步骤(I)按比例精密称取大豆磷脂、胆固醇置于茄形瓶中，加入相当于大豆磷脂和胆固醇总体积6 10倍的无水乙醇使大豆磷脂和胆固醇完全溶解。(2)将茄形瓶置于旋转蒸发仪上，48 50°C减压蒸发溶剂，在茄形瓶中形成一层薄膜，然后中空干燥过夜，使溶剂除尽。(3)按姜辣素与无水乙醇按体积比I :5混合使姜辣素完全溶解，制得姜辣素溶液备用。(4)按比例将磷酸盐缓冲液(PBS pH 7. 2 7. 5)及冻干保护剂(低浓度甘氨酸)力口入到步骤(3)制得的姜辣素溶液中形成姜辣素磷酸盐溶液。(5)将占O. 05 O. 14倍大豆磷脂和胆固醇总质量的姜辣素磷酸盐溶液加到上述含薄膜的茄形瓶中，35 40°C恒温震荡至薄膜脱落，然后放置2 3h水化，水化液分别经O. 80 μ m、0. 45 μ m、0. 22 μ m滤膜高压挤出，制得姜辣素脂质体混悬液。(6)采用冻干法制备姜辣素脂质体取姜辣素脂质体混悬液置于磨口圆底烧瓶中，浸入低温浴器内，缓慢旋转40 60min，直到冷冻成膜状。(7)将烧瓶连于冷冻干燥仪上，抽真空5 lOmin，使水分完全升华，制备出姜辣素冻干脂质体。
下面对姜辣素脂质体(姜辣素冻干脂质体)的理化性质说明(I)外观性质。目测姜辣素脂质体混悬液为均匀淡黄色；姜辣素脂质体(未加冻干保护剂)为淡黄色海绵状松散粉末或块状；姜辣素冻干脂质体(加入冻干保护剂)为流动性良好的白色粉末。在电镜下观察制备的脂质体为小多室脂质体；扫描电镜下，未加冻干保护剂的脂质体为白色蜡块状，加冻干保护剂的脂质体为白色球状。(2) 一般理化性质(pH、粒径和表面电荷)姜辣素脂质体的pH为7. 08，粒径70. 16nm, Zeta电位为-63. 9mV (阳离子表面吸附的缓冲液中的阴离子的表现)。下面通过HPLC方法对姜辣素脂质体的姜辣素含量进行检测 样品处理精密量取样品500 μ 1，加入100 μ I 10%TritonX_100，涡旋混合2min，IOOOOrpm离心4min,取上清液20 μ I进样,在色谱条件下分析,记录峰面积,用外标法计算姜辣素含量。色谱固定相WatersSYMMETRY C18 5 μ m 色谱柱(250_Χ4· 6mm);流动相甲醇-水(58:42V/V)，流速11111/1^11;检测波长20511111;柱温351;进样量2(^1。姜辣素保留时间约为8. 8min。特异性空白脂质体+10%Tri tonX-100、姜辣素对照品+10%Tri tonX-100分别进样，发现脂质成分和TritonX-IOO对姜辣素检测无干扰，本方法具有良好的特异性。精密度在空白脂质体中加入不同量的姜辣素配置成低、中、高(30、200、700. O μ g/ml)不同浓度PBS (1_10)溶液，每个浓度各6个样品，按上述分别测定日内、日间变异，结果见表I。表I HPLC测定空白脂质体PBS (1_10)溶液中姜辣素的精密度
权利要求
1.一种姜辣素脂质体，其特征在于其构成组分及其组分的重量份数为大豆磷脂65 70份、胆固醇30 35份、姜辣素O. 5 30份、无水乙醇1000 1500份、磷酸盐缓冲液70 120份。
2.根据权利要求I所述的一种姜辣素脂质体，其特征在于所述的磷酸盐缓冲液的PH值为7. 2 7. 5。
3.—种如权利要求I或2所述姜辣素脂质体的制备方法，其特征在于包括以下步骤 ⑴称取大豆磷脂、胆固醇置于茄形瓶中，加入相当于大豆磷脂和胆固醇总体积6 10倍的无水乙醇使大豆磷脂和胆固醇完全溶解； ⑵将茄形瓶置于旋转蒸发仪上，48 50°C减压蒸发溶剂，在茄形瓶中形成一层薄膜，然后中空干燥使溶剂除尽； ⑶将姜辣素与无水乙醇按体积比I :5混合使姜辣素完全溶解，制得姜辣素溶液备用； ⑷将磷酸盐缓冲液加入到姜辣素溶液中形成姜辣素磷酸盐溶液； (5)将占O.05 O. 14倍大豆磷脂和胆固醇总质量的姜辣素磷酸盐溶液加到步骤⑵含薄膜的茄形瓶中，35 40°C恒温震荡至薄膜脱落，然后放置2 3h水化，水化液分别经O. 80 μ m、0. 45 μ m、0. 22 μ m滤膜高压挤出，制得姜辣素脂质体混悬液； (6)采用冻干法制备姜辣素脂质体取姜辣素脂质体混悬液置于烧瓶中，浸入低温浴器内，缓慢旋转40 60min，直到冷冻成膜状； ⑴将烧瓶连于冷冻干燥仪上，抽真空5 lOmin，使水分完全升华，制备出姜辣素脂质体。
4.一种姜辣素冻干脂质体，其特征在于其构成组分及其组分的重量份数为大豆磷脂65 70份、胆固醇30 35份、姜辣素O. 5 30份、无水乙醇1000 1500份、冻干保护剂O. 5 3份，磷酸盐缓冲液70 120份。
5.根据权利要求4所述的一种姜辣素冻干脂质体，其特征在于所述的磷酸盐缓冲液的pH值为7. 2 7. 5。
6.根据权利要求4所述的一种姜辣素冻干脂质体，其特征在于所述的冻干保护剂为低浓度甘氨酸。
7.—种如权利要求4至6任一项所述姜辣素冻干脂质体的制备方法，其特征在于包括以下步骤 ⑴称取大豆磷脂、胆固醇置于茄形瓶中，加入相当于大豆磷脂和胆固醇总体积6 10倍的无水乙醇使大豆磷脂和胆固醇完全溶解； ⑵将茄形瓶置于旋转蒸发仪上，48 50°C减压蒸发溶剂，在茄形瓶中形成一层薄膜，然后中空干燥使溶剂除尽； ⑶将姜辣素与无水乙醇按体积比I :5混合使姜辣素完全溶解,制得姜辣素溶液备用； ⑷将磷酸盐缓冲液及冻干保护剂加入到姜辣素溶液中形成姜辣素磷酸盐溶液； (5)将占O.05 O. 14倍大豆磷脂和胆固醇总质量的姜辣素磷酸盐溶液加到上述含薄膜的茄形瓶中，35 40°C恒温震荡至薄膜脱落，然后放置2 3h水化，水化液分别经O. 80 μ m、0. 45 μ m、0. 22 μ m滤膜高压挤出，制得姜辣素脂质体混悬液； (6)采用冻干法制备姜辣素脂质体取姜辣素脂质体混悬液置于烧瓶中，浸入低温浴器内，缓慢旋转40 60min，直到冷冻成膜状；⑴ 将烧瓶连于冷冻干燥仪上，抽真空5 lOmin，使水分完全升华，制备出姜辣素冻干脂质体。
全文摘要
本发明涉及一种姜辣素脂质体及其制备方法，姜辣素脂质体的构成组分及其组分的重量份数为大豆磷脂65～70份、胆固醇30～35份、姜辣素0.5～30份、无水乙醇1000～1500份、磷酸盐缓冲液70～120份；其制备方法为⑴称取大豆磷脂、胆固醇置于茄形瓶中并使用无水乙醇使其溶解；⑵将茄形瓶减压蒸发溶剂；⑶制得姜辣素溶液；⑷形成姜辣素磷酸盐溶液；⑸制备姜辣素脂质体混悬液；⑹采用冻干法制备姜辣素脂质体；⑺通过冷冻干燥仪抽真空5～10min，使水分完全升华，制备出姜辣素脂质体。本发明设计合理，制备出的姜辣素脂质体具有非常强的体外透皮吸收性能，为姜辣素脂质体技术应用于生物医药行业提供实验依据。
文档编号A61P43/00GK102895189SQ20121038019
公开日2013年1月30日 申请日期2012年10月9日 优先权日2012年10月9日
发明者李欢, 孟刚 申请人:天津芸熙生物技术有限公司