专利名称：α-硫酸锌在制备治疗糖尿病并发症药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及生物医药领域，具体涉及α -硫酸锌在制备治疗糖尿病并发症药物中的应用。
背景技术：
糖尿病几乎所有的慢性并发症都与肾素-血管紧张素系统(RAS)有关，但研究并未发现糖尿病患者血液中肾素或是血管紧张素II有所增高，循环中RAS的组份不但不升高，甚至下降。随着多组织包括胰腺组织、脂肪组织、心脏组织中表达RAS各成分的发现，人们发现组织细胞局部的RAS在糖尿病并发症的发生过程中起到重要作用。
高糖引起氧化应激是糖尿病慢性并发症发病的起始和中心机制。细胞内氧化应激随着葡萄糖水平增加而升高，同时细胞局部RAS组份的基因表达被激活，研究发现阻断氧化应激能减少RAS激活水平，阻断RAS也能减少ROS产生。在局部阻断RAS作用，不减少RAS相关基因在局部的表达。
发明内容
本发明的目的在于根据高糖与局部RAS的关系，提供一种抗氧化剂在制备糖尿病并发症药物中应用。实际上，本发明涉及α -硫辛酸在制备糖尿病并发症药物中的应用。涉及α-硫辛酸在制备糖尿病并发症肾病药物中的应用。涉及α -硫辛酸在制备糖尿病并发症高血压药物中的应用。下面用α -硫辛酸的药理实验及结果证明其在制药领域中的应用。将分化成熟的3T3-L1脂肪细胞株进行分组实验(1)5. 5mM糖浓度将分化成熟的脂肪细胞分为3组，在无血清含有O. 2%BSA的DMEM培养液中饥饿12小时。将分化成熟的脂肪细胞分为2组，I组为5. 5mM糖浓度的无血清DMEM培养液对照，另外I组加入含a-硫辛酸的5. 5mM糖浓度的无血清DMEM培养液，培养48小时；(2)15mM糖浓度将分化成熟的脂肪细胞分为3组，在无血清含有O. 2%BSA的DMEM培养液中饥饿12小时。将分化成熟的脂肪细胞分为2组，I组为15mM糖浓度的无血清DMEM培养液对照，另外I组加入含a-硫辛酸的15mM糖浓度的无血清DMEM培养液，培养48小时；(3)25mM糖浓度将分化成熟的脂肪细胞分为3组，在无血清含有O. 2%BSA的DMEM培养液中饥饿12小时。将分化成熟的脂肪细胞分为2组，I组为25mM糖浓度的无血清DMEM培养液对照，另外I组加入含a-硫辛酸的25mM糖浓度的无血清DMEM培养液，培养48小时。结果不同糖浓度对3T3-L1脂肪细胞局部RAS基因表达的影响诱导分化成熟的3T3-L1细胞在不同糖浓度包括5. 5mM, 15mM,25mM葡萄糖浓度作用48小时后，肾素、肾素结合蛋白、血管紧张素原、血管紧张素转换酶、AT1R、AT2R基因表达水平的变化与5. 5mM糖浓度组比较，15mM葡萄糖浓度能显著的降低3T3-L1脂肪细胞中肾素结合蛋白的表达，而肾素、血管紧张素原、血管紧张素转化酶、AT1R、AT2R表达呈增高的趋势，但无统计学意义。25mM葡萄糖组中肾素、血管紧张素原、血管紧张素转化酶、AT1R、AT2R表达显著增高，较5. 5mM葡萄糖组分别增高51.71倍(F=170. 7，Ρ〈0· 0001), 12. 86倍(F=31. 56，Ρ〈0· 0001),3. 04 倍(F=7. 132，P=O. 0037),4. 16 倍(F=5. 167，P=O. 0118),2. 62 倍(F=3. 698，P=O. 0349)，而肾素结合蛋进一步降低至76. 3% (F=8. 548，Ρ=0· 001)。由此可见，高糖浓度能够增加肾素、血管紧张素原、血管紧张素转化酶、AT1R、AT2R表达，从而激活RAS系统。不同糖浓度对3T3-L1脂肪细胞ROS的影响诱导分化成熟的3T3-L1细胞在不同糖浓度包括5. 5mM, 15mM,25mM葡萄糖浓度作用48小时后细胞内ROS的表达15mM葡萄糖和25mM葡萄糖均能显著增加细胞内ROS的表 达，与5. 5mM葡萄糖对照组比分别增加141. 1%和198. 5% (F=22. 36，Ρ〈0· 0001)。抗氧化剂对细胞内ROS及RAS各成分表达的影响为了明确高糖浓度下ROS变化对RAS各成分表达的影响，我们在诱导分化完全的3T3-L1脂肪细胞中加入抗氧化剂α -硫辛酸，培养48小时后检测3T3-L1脂肪细胞中R0S、肾素、肾素结合蛋白、血管紧张素原、血管紧张素转换酶、AT1R、AT2R表达的变化。α-硫辛酸能显著降低25mM葡萄糖引起的细胞内ROS至69. l%(t=3. 184，P=O. 008)。而在5. 5mM葡萄糖组及15mM葡萄糖浓度条件下，α-硫辛酸对细胞内的ROS无显著影响。在5. 5mM葡萄糖组及15mM葡萄糖组，α -硫辛酸对肾素、血管紧张素原mRNA表达无显著性改变。在25mM葡萄糖组，给以α -硫辛酸处理后，肾素、血管紧张素原mRNA表达分别降至原来的 43. 8% (t=3. 953，P=O. 002),43. 5% (t=2. 803，P=O. 013)，并具有统计学差异。在15mM葡萄糖组及25mM葡萄糖组，α -硫辛酸对肾素结合蛋白均有显著的降低作用(t=2. 803，P=O. 013)。α -硫辛酸在不同糖浓度条件下，对血管紧张素转换酶、AT1R、AT2R变化均无显著的改变。本发明结果表明高糖能显著的增加AGT的表达。此外，高糖还能激活3T3-L1脂肪细胞中RAS其他各基因的表达，包括肾素，AGT, ACE, AT1R，AT2R，相反肾素结合蛋白的表达减少。同时，高血糖显着增加细胞内活性氧，引起的氧化应激。应用抗氧化剂α-硫辛酸通过降低细胞内活性氧水平可降低肾素及ACT的表达，从而可用于糖尿病并发的肾病和高血压的药物制备。
具体实施例方式实施例(1)5. 5mM糖浓度将分化成熟的脂肪细胞分为3组，在无血清含有O. 2%BSA的DMEM培养液中饥饿12小时。将分化成熟的脂肪细胞分为2组，I组为5. 5mM糖浓度的无血清DMEM培养液对照，另外I组加入含a-硫辛酸的5. 5mM糖浓度的无血清DMEM培养液，培养48小时；(2)15mM糖浓度将分化成熟的脂肪细胞分为3组，在无血清含有O. 2%BSA的DMEM培养液中饥饿12小时。将分化成熟的脂肪细胞分为2组，I组为15mM糖浓度的无血清DMEM培养液对照，另外I组加入含a-硫辛酸的15mM糖浓度的无血清DMEM培养液，培养48小时；(3)25mM糖浓度将分化成熟的脂肪细胞分为3组，在无血清含有O. 2%BSA的DMEM培养液中饥饿12小时。将分化成熟的脂肪细胞分为2组，I组为25mM糖浓度的无血清DMEM培养液对照，另外I组加入含a-硫辛酸的25mM糖浓度的无血清DMEM培养液，培养48小时。相对于低葡萄糖组，中葡萄糖组与高葡萄糖组细胞内的活性氧均有显著性增加。高葡萄糖组中肾素、血管紧张素原、血管紧张素转换酶、血管紧张素I型受体、血管紧张素2型受体均有显著性增加，中葡萄糖组也表现出相同的趋势但不显著性差异。而肾素结合蛋白在中葡萄糖组及高葡萄糖组均显著降低；抗氧化剂α-硫酸锌可阻断高糖引起的细胞内活性氧的增加，从而阻断高葡萄糖诱导的肾素及AGT表达的增加。
以上所述为本发明的较佳实施例而已，但本发明不应该局限于该实施例所公开的内容。所以凡是不脱离本发明所公开的精神下完成的等效或修改，都落入本发明保护的范围。
权利要求
1.a-硫辛酸在制备治疗糖尿病并发症药物中的应用。
2.a _硫辛酸在制备治疗糖尿病并发症肾病药物中的应用。
3.a -硫辛酸在制备治疗糖尿病并发症高血压药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了α-硫辛酸在制备糖尿病并发症药物中的应用。本发明结果表明高糖能显著的增加AGT的表达。此外，高糖还能激活3T3-L1脂肪细胞中RAS其他各基因的表达，包括肾素，AGT，ACE，AT1R，AT2R，相反肾素结合蛋白的表达减少。同时，高血糖显着增加细胞内活性氧，引起的氧化应激。应用抗氧化剂α-硫辛酸通过降低细胞内活性氧水平可降低肾素及ACT的表达，从而可用于糖尿病并发的肾病和高血压的药物制备。
文档编号A61P9/12GK103006641SQ20121057676
公开日2013年4月3日 申请日期2012年12月26日 优先权日2012年12月26日
发明者宁光, 方萍, 汤正义, 崔斌, 王卫庆 申请人:上海市内分泌代谢病研究所