雷公藤植物的提取物的加工方法

雷公藤植物的提取物的加工方法
【专利摘要】本发明提供了源自雷公藤(TwHF)植物的提取物形式的产品，其可用于预防、治疗或缓解炎症病症或免疫障碍例如自体免疫疾病的症状。本发明还提供了冻干TwHF根和/或根部分的方法、冻干的TwHF根和/或根部分的去皮方法、自冻干的去皮的TwHF根和/或根部分制备和/或精制可自由流动的固体形式的提取物的方法、和使用TwHF的可自由流动的固体提取物预防、治疗或缓解炎症病症和/或免疫障碍的症状的方法。
【专利说明】雷公藤植物的提取物的加工方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本发明要求2011年3月I日提交的美国临时申请第61/448,028号和2011年5月9日提交的美国临时申请第61/484，031号的优先权。各优先权申请的公开整体援引加入本文。
【技术领域】
[0003]本公开的主题总体上涉及植物和植物产品，更具体地涉及雷公藤(Tripterygiumwilforii Hook F.)植物、植物产品以及制备和使用这样的植物和植物产品的提取物的方法。
【背景技术】
[0004]雷公藤(TwHF)(卫矛科(Celastraceae))，通常被称为雷公的藤，其是原产于中国和东南亚的多年生灌木。TwHF包含多种有毒的化合物。TwHF植物的部分，例如叶、茎、花、和根的表皮或皮是有毒的且如果被摄入可能会导致死亡。TwHF已被用于传统中药中用于治疗疾病和病症，但其应用受到其显著的毒性风险的限制。还已显示给药TwHF抑制白细胞介素-2-介导的免疫抑制 。已显示给药TwHF提取物或其组分(即获自TwHF的化合物雷公藤甲素和雷公藤羟内酯)抑制白细胞介素_2(IL-2)。这样的化合物的纯化成本高且耗费时间，但就毒素而言是必需的。使用获自所述植物的纯化较差的物质存在风险，即给药毒性物质而导致的有害的结果将大于治疗益处。
[0005]炎症反应与身体被外来物体侵入或损伤有关。有时，急性的或慢性的炎症反应都在身体并非处于真正的威胁下的情况下发生，并且炎症反应自身成为需要治疗的疾病或病症。类似地且密切相关地，炎症反应能够抵挡外来物体的侵入，但此反应也在不适合的情况下发生，例如当没有外来物体时。许多疾病的特征都在于不适合的免疫反应，其实例是人们已知的自身免疫性疾病。人们不断地努力以期对于涉及免疫反应和/或不适合的炎症反应的病症提供更有效的且更安全的治疗。
[0006]出于上述原因，本领域中持续存在对于以下组合物的需要:所述组合物包含TwHF的有益的生物学活性化合物和存在可接受地降低的TwHF毒素，其可用于预防、减轻、治疗或缓解不适合的炎症反应和/或不适合的免疫反应的症状。

【发明内容】

[0007]本发明描述了用于获得和加工雷公藤(TwHF)植物提取物的改善的方法，其提供了有益的生物学活性化合物以及可接受地降低水平的毒性物质，这改善了安全性特性。所述方法获得天然产物，其提供了 TwHF的益处，且没有使用天然植物所特有的对接受者有害的不当风险。
[0008]在一个方面，本发明描述了制备源自TwHF植物的根的冻干的根部分的方法，其中所述方法包括将多个冻干的TwHF根部分置于处于冻干室中的容器中，其中处于容器中的所述根部分彼此足够接近以促进热交换，且其中所述室的温度为-30°C或更低；降低室中的空气压力；并将所述容器加热至足以使根部分中的水升华，由此制备TwHF植物的冻干的根部分。在一个实施方案中，继续冻干过程，直至冻干的根部分包含不大于20重量％水。在另一个实施方案中，当容器温度达到约40°C的温度时完成冻干过程。还提供了通过本发明描述的冻干方法制备的TwHF植物的冻干的根。
[0009]在一些实施方案中，所述根获自已培植少于30个月的TwHF植物。在一些实施方案中，所述根获自TwHF var.Shiloh。在一些实施方案中，期望将TwHF的根加工成特定长度、平均长度、或最大长度的根部分。在这些实施方案中的一些中，在开始冻干过程之前将所述根加工成长度为6英寸或更低的根部分。在一些实施方案中，将所述根加工以将根的支化部分分离成单独的根部分，例如不同长度的基本上呈直线的根部分。
[0010]在一些实施方案中，容器置于处于冻干室中的加热的支持物上。支持物可以被直接地加热，但所述公开还包括:所述容器的加热包括逐渐地增加被加热的支持物的温度。容器可以为任何大小、形状和深度。在一些实施方案中，容器的深度不大于2英寸。在一些实施方案中，容器的加热不会导致冻干室的加热。在一些实施方案中，容器为基本上平面的架，例如具有0.125、0.25、0.5、1.0、1.5或2英寸或0.125-2英寸(高度)范围内的任何尺寸的升高的周缘或公称高度的平面表面。
[0011]在一些实施方案中，容器中的根部分保持在约20°C -约70°C的温度范围内。在一个实施方案中，容器中的根部分保持在约38°C的温度下。
[0012]在另一个方面，还提供了制备TwHF植物的冻干的去皮的根部分(即冻干的根核)的方法。在一些实施方案中，所述方法包括将皮与冻干的根部分的根核分离，由此制备TwHF植物的冻干的去皮的根部分。在一些实施方案中，分离步骤包括向冻干的根部分施加足以使得皮自根核脱除的机械力。在一些实施方案中，所述方法任选地在选自由以下组成的组的装置中进行:鼓式去皮设备、环状去皮设备和连枷去皮设备。
[0013]机械力可以通过本领域中已知的任何方式产生。在一些实施方案中，机械力通过使冻干的根部分与选自由以下组成的组中的研磨剂接触而产生:冻干的根部分、金属物体、玻璃物体、木制物体、陶瓷物体、绳、皮革、砂、岩石、水泥、混凝土、石榴石、氧化铝、氧化硅、玻璃纤维、金刚石、去皮鼓的内投影、去皮鼓的平坦的或不平坦的内表面、环状去皮设备的平坦的或不平坦的内表面、多股连枷、或与多股连枷连接的多个物体。在一个实施方案中，研磨剂是磁化的金属物体。
[0014]在一个实施方案中，所述方法包括使用为鼓形去皮设备的装置且研磨剂为松散的物质，存在的重量比为冻干的根部分:研磨剂为1:8。在另一个实施方案中，研磨剂为松散的物质，存在的重量比为冻干的根部分:研磨剂为1:2。在一些实施方案中，冻干的根部分在真空下与研磨剂一起翻转，其持续时间足以使皮自冻干的根部分脱除，其中通过真空将脱除的皮除去(例如通过装置中的口)，由此将皮与根核分离。
[0015]另一个方面提供了通过本发明所述方法制备的TwHF植物的冻干的去皮的根部分。一些实施方案提供了 TwHF植物的冻干的根核，其中所述根核基本上没有皮。在一些实施方案中，根核包含不大于5重量％的水。在一些实施方案中,根核包含的皮少于尺寸相当的TwHF植物的新鲜的根部分的1%。在一些实施方案中，皮的缺乏通过肉眼观察确定，例如，TwHF植物的去皮的部分上缺乏粉红色/浅红色粉末说明皮的缺乏。[0016]在根据公开的此方面的一些实施方案中，根核包含不大于10%的存在于TwHF植物的皮中的化合物。这样的化合物(例如雷公藤红素)可以用作用于确定雷公藤的冻干的去皮的根部分或其提取物配制物中是否存在残留的皮。因此，本发明还描述了鉴定TwHF植物的冻干的去皮的根部分的配制物中的残留皮的方法，其中所述方法包括确定冻干的去皮的根部分中的皮标志物(例如雷公藤红素)的量，其中冻干的去皮的根部分配制物中较低的标志物(例如雷公藤红素)的量证明根部分配制物包含较低量的残留皮。本领域技术人员应认识到根提取物的皮污染的适合阈值水平可以根据提取物的性质及其意图的应用而变化，因此，所述公开考虑具有不大于阈值水平的皮标志物例如雷公藤红素的冻干的去皮的根部分，即使所述阈值高于根部分中的标志物的可测量或可检测量也是如此。冻干的根部分配制物中的标志物(例如雷公藤红素)的量通过本领域中已知方法例如NMR或HPLC确定。
[0017]在一些实施方案中，与尺寸相当的TwHF植物的新鲜的根的皮中存在的雷公藤红素的量相比较，冻干的去皮的根部分的配制物包含小于10%的雷公藤红素。在一些实施方案中，与尺寸相当的TwHF植物的新鲜的根的皮中存在的雷公藤红素的量相比较，冻干的去皮的根部分的配制物包含小于5%的雷公藤红素。在其他实施方案中，与尺寸相当的TwHF植物的新鲜的根的皮中存在的雷公藤红素的量相比较，冻干的去皮的根部分的配制物包含小于1%的雷公藤红素。在其他实施方案中，与尺寸相当的TwHF植物的新鲜的根部分的皮中存在的雷公藤红素的量相比较，冻干的去皮的根部分的配制物包含小于0.9%、0.8%、0.7%、
0.6%、0.5%、0.4%、0.3%、0.2%、0.1% 或更低的雷公藤红素。
[0018]本发明中提供的另一个方面是TwHF植物的提取物，任选地为可自由流动的固体的形式，每mg提取物包含不大于2.5yg的雷公藤红素。在一些实施方案中，提供了(雷公藤甲素+雷公藤羟内酯)/雷公藤红素的比例为至少1.36的TwHF植物提取物。在一些实施方案中，TwHF提取物中(雷公藤甲素+雷公藤羟内酯)/雷公藤红素含量的比例为至少
1.46。
[0019] 本发明提供的其他方面包括将TwHF植物的提取物例如醇提取物加工成可自由流动的固体的方法。一个方面提供了包括以下的方法:获得TwHF植物的醇提取物，将醇提取物中的醇置换为极性有机溶剂例如乙酸乙酯以形成提取物/乙酸乙酯混合物；将所述提取物/乙酸乙酯混合物与赋形剂在真空下在不高于50°C的温度下组合，以制备浓缩的混合物；并且在不高于55°C的温度下干燥所述浓缩的混合物，由此制备可自由流动的固体形式的醇提取物。在一些实施方案中，提取物通过一次或多次乙醇提取自TwHF的根获得。在一些实施方案中，所述根为TwHF植物的冻干的去皮的根。在另外的实施方案中，所述根为TwHF植物的新鲜的去皮的根。通过本发明描述的方法加工TwHF植物的提取物可以对来自任何雷公藤根或根配制物的制备的提取物进行，包括自去皮的雷公藤根制备的提取物。此外，这样的根可以通过本领域中已知的任何方式去皮，并且因此不需要通过任何具体的方法例如如本发明中的一些实施方案中所述的涉及鼓式去皮设备、环形去皮设备、或连枷去皮设备的方法去皮。例如，对于实践本公开中描述的提取物加工方法，预期通过使用压辊、剥皮或其他施加机械力去皮的TwHF植物的根制备的提取物。当然，在冻干雷公藤根和根部分的方法中，在由去皮的根制备提取物的方法和加工已有的雷公藤提取物的方法中，不需要或不涉及去皮方法。[0020]在另一个方面，所述方法包括将天然的TwHF植物提取物与醇混合，以制备提取物/醇混合物；将所述提取物/醇混合物与赋形剂在真空下在不高于50°C的温度下组合，以制备浓缩的混合物；并且在不高于55°C的温度下干燥所述浓缩的混合物，由此制备可自由流动的固体形式的醇提取物。在一些实施方案中，所述醇为乙醇，在一些实施方案中，所述干燥步骤在不高于0.2个大气压(atm)的压力下进行。
[0021]适用于本发明所述的方法的赋形剂包括选自由以下组成的组的赋形剂:微晶纤维素(MCC)、麦芽糊精、Aerosil? (热解硅石)、玉米淀粉、和Neusilin (偏硅酸铝镁)。在一些实施方案中，所述赋形剂为微晶纤维素。
[0022]本发明描述的另一个方面是将TwHF植物的醇提取物加工成可自由流动的固体的方法，其中所述方法包括:获得TwHF植物的醇提取物，将醇提取物中的醇置换为极性有机溶剂例如乙酸乙酯以形成提取物/乙酸乙酯混合物；将所述提取物与非极性有机溶剂组合以制备提取物/非极性有机溶剂混合物；过滤所述提取物/非极性有机溶剂混合物以分离固体沉淀；并干燥所述固体沉淀，由此制备可自由流动的固体形式的醇提取物。适用于所述方法中的非极性有机溶剂包括选自由以下组成的组中的非极性有机溶剂:直链烷烃(包括但不限于戊烷、己烷、庚烷、辛烷、壬烷、和癸烷)和支链的烷烃(包括但不限于异戊烷、异己烷、异庚烷、异辛烷、异壬烷和异硅烷)。在一些实施方案中，非极性有机溶剂为庚烷。
[0023]在另一个方面，本发明描述了将TwHF植物的天然提取物加工成可自由流动的固体的方法，所述方法包括将所述天然提取物与非极性有机溶剂组合以制备其混合物；过滤所述混合物以分离固体沉淀；和干燥所述固体沉淀，由此制备可自由流动的固体形式的天然提取物。 [0024]本公开还提供了通过任意上述加工方法制备的可自由流动的固体形式的TwHF植物的提取物。
[0025]以下编号的段落各自简洁地定义本发明的一个或多个示例性的变体。
[0026]1.雷公藤(TwHF)植物的提取物，每mg所述提取物包含不大于2.5 μ g雷公藤红素。
[0027]2.如段落I所述的提取物，其中所述提取物的(雷公藤甲素+雷公藤羟内酯)/雷公藤红素(T+Td)/C)的比例为至少1.46。
[0028]3.如段落2所述的提取物，其中所述提取物的(T+Td)/C的比例为至少1.36。
[0029]4.如段落I所述的提取物，其中所述提取物为可自由流动的固体的形式。
[0030]5.由雷公藤(TwHF)植物的根制备冻干的根部分的方法，包括:
[0031](a)将冷冻的TwHF根部分置于处于冻干室中的容器中，其中所述室的温度为-30°C或更低；
[0032](b)降低室中的压力；和
[0033](c)将所述容器加热至足以使根部分中的水升华，由此制备TwHF植物的冻干的根部分。
[0034]6.如段落5所述的方法，其中使用多个根部分，且其中处于容器中的所述多个根部分彼此足够接近以促进根部分之间的热交换。
[0035]7.如段落5所述的方法，其中所述根获自已培植小于30个月的TwHF植物。
[0036]8.如段落5所述的方法，其中在冻干之前将所述根加工成长度为6英寸或更低的根部分。
[0037]9.如段落8所述的方法，其中将所述根加工成基本上呈直线的根部分。
[0038]10.如段落5所述的方法，其中将所述容器置于处于冻干室中的加热的支持物上。
[0039]11.如段落5所述的方法，其中所述容器的加热不包括所述冻干室的直接加热。
[0040]12.如段落5所述的方法，其中所述容器为基本上平面的架。
[0041]13.如段落5所述的方法，其中将所述容器中的所述根部分保持在约20°C -约70°C的温度范围内。
[0042]14.如段落5所述的 方法，其中持续进行所述冻干方法直至所述冻干的根部分包含不大于20重量％水。
[0043]15.如段落5所述的方法，其中所述根获自雷公藤Var.Shiloh。
[0044]16.通过段落5的方法制备的雷公藤植物的冻干的根部分。
[0045]17.制备雷公藤(TwHF)植物的冻干的去皮的根部分的方法，包括将皮与冻干的根部分的根核分尚，由此制备TwHF植物的冻干的去皮的根部分。
[0046]18.如段落17所述的方法，其中所述分离步骤包括向TwHF植物的冻干的根部分施加足以使得皮自根核脱除的机械力。
[0047]19.如段落18所述的方法，其中所述机械力通过使冻干的根部分与选自由以下组成的组中的研磨剂接触而产生:冻干的根部分、金属物体、玻璃物体、木制物体、陶瓷物体、绳、皮革、砂、岩石、水泥、混凝土、石榴石、氧化铝、氧化硅、玻璃纤维、金刚石、去皮鼓的内投影、去皮鼓的平坦的或不平坦的内表面、环状去皮设备的平坦的或不平坦的内表面、多股连枷、或与多股连枷连接的多个物体。
[0048]20.如段落17所述的方法，其中所述分离步骤包括选自由以下组成的组的装置:鼓式去皮设备、环状去皮设备和连枷去皮设备。
[0049]21.通过如段落17所述的方法制备的TwHF植物的冻干的去皮的根部分或冻干的根核。
[0050]22.TwHF植物的冻干的根核，其中所述根核基本上不含皮。
[0051]23.如段落22所述的冻干的根核，其中所述根核包含的皮少于尺寸相当的TwHF植物的新鲜的根部分的1%。
[0052]24.如段落22所述的冻干的根核，其中所述根核包含不大于10%的雷公藤红素。
[0053]25.将TwHF植物的天然提取物加工以制备可自由流动的固体形式的提取物的方法，所述方法包括:
[0054](a)将天然的TwHF植物提取物与醇混合，以制备其混合物；
[0055](b)将所述混合物与赋形剂在真空下在不高于50°C的温度下组合，以制备浓缩的混合物；和
[0056](c)在不高于55°C的温度下干燥所述浓缩的混合物以除去剩余的乙醇，由此制备可自由流动的固体形式的提取物。
[0057]26.如段落25所述的方法，其中所述提取物通过一次或多次乙醇提取自TwHF植物的根获得。
[0058]27.如段落25所述的方法，其中所述天然提取物获自TwHF植物的冻干的去皮的根部分或冻干的根核。[0059]28.如段落25所述的方法，其中所述赋形剂选自由以下组成的组:微晶纤维素、麦芽糊精、Aerosil'? (热解硅石)、玉米淀粉、和Neusilin (偏硅酸铝镁)。
[0060]29.如段落28所述的方法，其中所述赋形剂为微晶纤维素。
[0061]30.如段落25所述的方法，其中所述干燥步骤在建立不大于0.2atm的空气压力的真空下进行。
[0062]31.将TwHF植物的天然提取物加工以制备可自由流动的固体形式的提取物的方法，所述方法包括:
[0063](a)将所述天然提取物与非极性有机溶剂组合以制备其混合物；
[0064](b)过滤所述混合物以分离固体沉淀；和
[0065](C)干燥所述固体沉淀，由此制备可自由流动的固体形式的提取物。
[0066]32.如段落31所述的方法，其中所述天然提取物通过一次或多次乙醇提取自TwHF植物的根获得。
[0067]33.如段落31所述的方法，其中所述非极性有机溶剂选自由以下组成的组:直链C5-C10烷烃和支链C5-C10烷烃。 [0068]34.如段落33所述的方法，其中所述非极性有机溶剂为庚烷。
[0069]35.如段落31所述的方法，其中所述提取物获自TwHF植物的冻干的去皮的根部分。
[0070]36.通过如段落35所述的方法制备的可自由流动的固体形式的TwHF植物的提取物。
[0071]37.如段落36所述的提取物，其中每mg所述提取物包含不大于2.5 μ g的雷公藤红素。
[0072]38.如段落36所述的提取物，其中所述提取物的(雷公藤甲素+雷公藤羟内酯)/雷公藤红素((T+Td)/C)的比例为至少1.46。
[0073]39.如段落36所述的提取物，其中所述提取物的(T+Td)/C比例为至少1.36。
[0074]40.通过如段落31所述的方法制备的可自由流动的固体形式的TwHF植物的提取物。
[0075]41.如段落40所述的提取物，其中每mg所述提取物包含不大于2.5 μ g的雷公藤红素。
[0076]42.如段落40所述的提取物，其中所述提取物的(雷公藤甲素+雷公藤羟内酯)/雷公藤红素((T+Td)/C)的比例为至少1.46。
[0077]43.如段落40所述的提取物，其中所述提取物的(T+Td)/C比例为至少1.36。
[0078]44.将TwHF植物的醇提取物加工成可自由流动的固体形式的提取物的方法，包括:
[0079](a)获得TwHF植物的醇提取物；
[0080](b)将醇提取物中的醇置换为极性有机溶剂以形成提取物/极性有机溶剂混合物；
[0081](C)将所述提取物/极性有机溶剂混合物与赋形剂组合，以形成掺合物(admixture)；
[0082](d)将所述掺合物在真空下在不高于50°C的温度下浓缩；和[0083](e)在不高于55°C的温度下干燥所述浓缩的混合物，由此制备可自由流动的固体形式的提取物。
[0084]45.如段落44所述的方法，其中所述极性有机溶剂为乙酸乙酯。
[0085]46.将TwHF植物的醇提取物加工以制备可自由流动的固体形式的提取物的方法，包括:
[0086](a)获得TwHF植物的醇提取物；
[0087](b)将醇提取物中的醇置换为极性有机溶剂以形成提取物/极性有机溶剂混合物；
[0088](C)将所述醇提取物与非极性有机溶剂组合以形成掺合物；
[0089](d)过滤所述掺合物以分离固体沉淀；和
[0090](e)干燥所述固体沉淀，由此制备可自由流动的固体形式的提取物。
[0091]47.如段落46所述的方法，其中所述非极性有机溶剂为庚烷。
[0092]将参考以下包括实施例的详细的描述更好地理解本发明的其他特征和优势。
【具体实施方式】
[0093]本发明基于以下发现:TwHF植物的根的冻干有助于皮自根核的全面去除，这允许制备基本上不含存在于皮中的毒性化合物(例如雷公藤红素)的提取物。
[0094]本发明还基于以下发现:非极性有机溶剂和制剂赋形剂能够将TwHF的常规的提取物转化为可自由流动的固体。通过本领域已知的方法(例如不使用其他加工步骤的TwHF植物的醇提取)制备的TwHF植物的常规的提取物为蜡状的、无定型的组合物(即天然提取物形式)，具有不佳的流动特性，其要求特别的方式进行操作和制备可用的药品产品。通过本发明中所述的加工方法制备的可自由流动的固体包含可用水平的提取物化合物(例如雷公藤甲素和雷公藤羟内酯)，并且可以将这些提取物化合物配制成为用于多种病症的治疗的药品产品，所述病症包括抗炎病症例如风湿性关节炎。
[0095]1.定义
[0096]与其在本领域中的含义一致，术语“提取物”指从物质的组合物中抽提出的物质，例如通过流体物理地抽提，或挤压，或通过至少部分地溶于能够接触且优选地渗透所述物质的组合物的溶剂。提取物还被用于指经过提取或随后的操作例如用于制备固体而存在的抽提的物质。因此，提取物可以为溶液、混合物、浓缩物或精华的形式。提取物的固体形式基本上不含且通常不含提取中使用的流体例如溶剂。本发明中定义的提取物包括获自一个或多个提取步骤的单一的提取物以及多个单独的提取或一系列提取的产物的组合，各提取包括至少一个提取步骤。
[0097]本发明中使用的术语“TwHF植物的醇提取物”指通过一次或多次醇提取而不经过其他加工步骤从TwHF植物(例如TwHF植物的根部分)抽提出的物质，所述其他加工步骤包括例如使用极性有机溶剂(例如乙酸乙酯)的溶剂置换和/或醇提取物中的固体颗粒的分离。醇提取物可以为溶液、混合物、浓缩物或精华的形式。通常，醇提取物不是蜡状的、无定型的固体且不包含蜡状的、无定型的固体，但醇的部分去除或完全去除可以制备蜡状的、无定型的固体的提取物或包含蜡状的、无定型的固体的提取物，其在本发明中被称为天然提取物的一个形式。[0098]本发明中使用的术语“TwHF植物的天然提取物”包括通过本领域中已知的方法制备的蜡状的、无定型形式的固体形式的TwHF植物的提取物。因此，天然提取物的一个形式为蜡状的、无定型固体的醇提取物或包含蜡状的、无定型固体的醇提取物。TwHF植物的其他醇提取物不必须为天然植物或植物部分的提取物，并且因此可以不含蜡状的、无定型固体。
[0099]本发明中使用的术语“浓缩的过滤物”是将在本发明中描述的提取方法期间制备的一种或多种过滤物浓缩的结果。
[0100]本发明中使用的术语“TwHF植物的新鲜的根”指未经过干燥例如冻干的TwHF植物的根。
[0101]本发明中使用的术语“根部分”是指TwHF植物的根的一部分或全部根部分，其具有适于置于冻干室中的大小。为了获得此适合的大小，可以将TwHF根加工或研磨至与在冻干室中冻干相容的长度(或直径)。
[0102]本发明中使用的术语“研磨剂”指能够通过摩擦和/或通过机械冲击磨损或侵蚀物质(例如TwHF植物的根上的皮)的试剂。
[0103]术语“基本上不含皮的根部分”具有其在本领域中普通的且习惯的含义，即大体上没有皮的根部分。具体而言，预期基本上不含皮的根部分包含的皮少于尺寸相当的TwHF植物的新鲜的根部分的2%(通过肉眼观察)。
[0104]术语“可自由流动的固体”和“经加工的TwHF”提取物在本发明中可互换地使用。在一些实施方案中，将 天然提取物与非极性有机溶剂组合以制备适于配制成药品产品和/或营养补充剂的可自由流动的固体提取物。不期望受理论限制，人们认为非极性有机溶剂(例如己烷、庚烷)去除天然提取物中存在的使之难以操作和配制成可被递送的形式(药品产品或营养补充剂)的蜡、脂肪和油。在一些实施方案中，通过将提取物(例如已经过使用极性有机溶剂例如乙酸乙酯进行溶剂置换的醇提取物)与赋形剂接触而将提取物加工，以形成易于操作和配制成药品产品和营养补充剂的提取物的可自由流动的固体形式。
[0105]I1.冻干TwHF植物的根的方法
[0106]如在本发明中提供的实施例中所证明的，与常规方法相比较，在去除皮之前将TwHF植物的根或根部分冻干允许容易地、定量地去除皮。冻干为脱水方法，其中将水自TwHF植物的根去除，而不将植物物质暴露于对于液体水和/或过量的热的可能有害的作用的延长的暴露期。冻干方法可以使用本领域已知的任何方法实施，并且可以在本领域已知的任何冻干设备中实施。
[0107]本公开的一个方面提供了由TwHF植物的根制备冻干的根部分的方法，其中所述方法包括将多个冻干的TwHF根部分置于处于冻干室中的容器中，其中处于容器中的所述根彼此足够接近以促进热交换；降低室中的压力；并将所述容器加热至足以使根部分中的水升华，由此制备TwHF植物的冻干的根部分。
[0108]冻干方法的第一步是根部分的冷冻。TwHF植物的根可以生长至多至12米的长度，这对于与大多数的商业冻干室相匹配而言过大。因此，在一些实施方案中，期望在开始冻干方法之前将TwHF植物的根加工或研磨，以制备更易处理的大小的根部分。在冷冻之前或之后，但在冷冻干燥之前，将TwHF根加工至期望的长度或长度范围。例如，在一些实施方案中，将TwHF植物的根加工以制备长度为约24英寸或更低的根部分。在一些实施方案中，将TwHF植物的根加工以制备长度为约12英寸、约11英寸、约10英寸、约9英寸、约8英寸、约7英寸、约5英寸、约4英寸、约3英寸、约2英寸、约I英寸、约1/2英寸或更低的根部分。在一些实施方案中，将TwHF植物的根加工以制备长度为约6英寸的根部分。
[0109]在一些实施方案中，TwHF植物的根的直径为约1/2英寸或更低。在一些实施方案中，根的直径为约1/3英寸、1/4英寸、1/8英寸、1/16英寸或更低。在其他实施方案中，TwHF植物的根的直径为约I英寸或更高。在一个实施方案中，将TwHF植物的根加工以制备长度为约6英寸且直径为约1/2英寸的根部分。典型地，TwHF根未进行加工以改变其平均直径，但本公开预期期望(或至少非不希望)使用任何减小直径和增加表面的常规的研磨技术的这样的加工，以更有效地冻干所述配制物。考虑到对根或根部分进行提取，各种长度和直径的根和根部分是可以接受的，包括研磨的、浸软的或粉碎的根和根部分。
[0110]在一些实施方案中，TwHF植物的根为支化的。在一些实施方案中，将TwHF植物的支化的根加工，以分离根的支化的部分，以制备基本上呈直线的根部分。
[0111]待用于本发明所述的冷冻干燥方法中的根部分获自任何年份和来源的TwHF植物。在一些实施方案中，根部分获自来源于中国的TwHF植物，且在一些实施方案中，根部分获自来源于美国的TwHF植物。在一些实施方案中，根部分获自于TwHF var.Shiloh。本发明中使用的术语“来源于中国的TwHF植物”指获自中国来源的TwHF植物。此定义包括收获自在中国种植的植物的根部分、收获自中国生长的野外植物的根部分、以及收获自在除中国以外的国家种植的植物的根部分，但所述植物为中国来源(例如自中国TwHF植物的插枝(或种子)生长)。本发明中使用的术语“来源于美国的TwHF植物”指获自美国来源的TwHF植物。此定义包括收获自在美国种植的植物的根部分、收获自美国生长的野外植物的根部分、以及收获自在除美国以外的国家种植的植物的根部分，但所述植物为美国来源(例如自美国TwHF植物的插枝(或种子)生长)。
[0112]根部分获自任意年份的TwHF植物。在一些实施方案中，根部分获自生长了小于约30个月的TwHF植物。在相关的实施方案中，根部分获自种植了约29个月、28个月、27个月、26个月、25个月、24个月、23个月、22个月、21个月、20个月、19个月、18个月、17个月、16个月、15个月、14个月、13个月、12个月、11个月、10个月、9个月、8个月、6个月或更少的TwHF植物。在其他实施方案中，根部分获自生长了至少30个月或更长的TwHF植物。在这样的实施方案中，根部分获自种植了约31个月、32个月、33个月、34个月、35个月、36个月、37个月、38个月、39个月、40个月、41个月、42个月、43个月、44个月、45个月、46个月、47个月、2年、3年、4年、5年、6年、7年、8年、9年、10年或更多的TwHF植物。
[0113]多个方法适于冷冻TwHF根或根部分(由其制备提取物)。在一些实施方案中，冷冻方法通过在开始冷冻干燥过程之前将根部分置于容器中并将容器置于专用的冷冻装置(即与冻干室分离的冷冻装置)过夜而实施。在冷冻干燥过程中，将处于容器中的所述根部分放置得彼此足够接近以促进热交换。优选地，根部分与至少一个其他的根部分接触，和/或与容器接触，以通过传导促进热交换。容器可以包含任意一种或多种物质，优选地包含传导性物质。容器为与冻干室相容的任意形状或基座(footprint)。容器为与冻干室的内部尺寸相容的任意深度；在一些实施方案中，容器的深度为不大于2英寸，例如约0.125-约2英寸范围内的深度，或公称高度。在一些实施方案中，将根部分冷却至其共晶点，以确保无论压力如何都不存在液相的物质。
[0114] 特别地预期使用能够将根部分的温度降低至-10°C _70°C范围内的温度的任何商业的冷冻装置(例如冷冻器)。在一些实施方案中，将根部分的温度降低至_20°C -约-70°C范围内的温度。在一些实施方案中，将根部分的温度降低至约_20°C、_25°C、_30°C、_35°C、_40 V、-45 V、-50 °C、-55 °C、-60 °C、-65 °C、或约-70 V的温度。在一些实施方案中，将根部分的温度降低至约_20°C的温度。一旦根已在期望的温度下冷冻，则将包括所述冷冻的根部分的容器置于冻干室中，将其温度保持在约-20 V或更低的温度。
[0115]在其他实施方案中，冷冻过程在冻干室中实施，而不是用专用的、另外的冷冻装置。在这样的实施方案中，将根部分直接地置于冻干室中并且将室的温度降至约-20°C或更低。
[0116]一旦冻干室已达到期望的温度且已将根部分置于冻干室中，则将冻干室中的空气压力降低以使得根部分中的水升华。在一些实施方案中，将热施加至根部分以促进水自根部分的去除。在此过程中，根部分中的水的至少50%升华。在一些实施方案中，根部分中的水的至少约 60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99% 或更高升华。在一些实施方案中，通过逐渐地将冻干室的温度自约10°C增加至约70°C，产生对根部分的辐射加热以及一些传导加热，从而间接地将热施加至根部分。在一些实施方案中，首先将室的温度升至约10°C，然后将温度在约10°C下稳定整夜。随后将室的温度升至约35°C，持续约8小时，随后升至约50°C，持续约8小时。在一些实施方案中，在冻干过程的最后，冻干的根部分中的最终的残留水含量为约20%或更低。在一些实施方案中，冻干的根部分包含不大于15%水。在其他实施方案 中，冻干的根部分包含不大于10%水。在其他实施方案中，冻干的根部分包含不大于5%水或更低。在其他实施方案中，冻干的根部分包含不大于2%水或更低。
[0117]在其他实施方案中，通过逐渐地将冻干室中的支持物的温度自约10°C增加至约70°C，导致主要(如果不是唯一地)对根部分的传导加热，从而直接地将热施加至根部分。在这些实施方案中的一些实施方案中，将冷冻的根部分置于处于冻干室中的加热的支持物上的导热容器中，并逐渐地增加加热的支持物的温度。尽管冻干室的温度可以以供应至处于室中的支持物的热量的副产物的形式而升高，但冻干室自身没有被直接地加热。在一些实施方案中，将加热的支持物的温度升高至约10°c，持续整夜，随后再次升高(约20°C至约400C )，持续约6-12小时，并再次升高(约30°C至约60°C )，再持续6_12小时。将处于室中的根部分的温度保持在约38°C。在一些实施方案中，将加热的支持物间歇地加热，由此为根部分提供间歇的热。在这样的实施方案中，典型地以2-3秒的间隔将热提供至根部分。在一些实施方案中，加热的支持物以5秒、10秒、15秒、20秒、25秒、30秒、35秒、40秒、45秒、50秒、55秒、I分钟、5分钟、10分钟、15分钟、20分钟、25分钟、30分钟、35分钟、40分钟、45分钟、50分钟、55分钟、I小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时或更高的间隔时间为根部分提供间歇的热。尽管在上述实施方案中典型地不加热冻干室，但预期TwHF根部分可以在冻干室中冻干，除加热含根部分的容器的支持物外，其也被加热。在一些实施方案中，在冻干过程的最后，冻干的根部分中的最终的残留水含量为约20%或更低。在一些实施方案中，冻干的根部分包含不大于15%水、不大于10%水、不大于5%水或更低。
[0118]通过应用真空控制冻干室的压力。真空用于促进升华。在一些实施方案中，冻干室中的压力范围为约3-约10毫巴。在一些实施方案中，冻干室中的压力不大于0.01atm0
[0119]在一些实施方案中使用冷凝室和/或冷凝器板以提供在上面包含或收集水蒸气的表面。通过利用冷凝器，防止了水蒸气达到真空泵，其可能会降低泵的性能。冷凝器保持在本领域技术人员已知的可用于除湿的温度。在一些实施方案中，冷凝器的温度保持在_50°C或更低。在一些实施方案中，冷凝器的温度保持在_30°C或更低。
[0120]所得的TwHF植物的冻干的根部分包括根核和皮，其中皮与根核的附着被改变，因此相对于尺寸相当的新鲜的TwHF根部分，降低了皮对于根核的附着强度。不期望受具体理论的限制，预期例如根据本发明所述的冻干方法制备的完全干燥的TwHF植物的根部分允许皮自根核的 更为定量的去除。与获自其中已通过常规的方法去除皮但未首先冻干的根核的提取物相或获自冻干的但其中冻干过程未使得根部分中的水基本上升华的根核的提取物相比较，期望获自这样的冻干的去皮的根核的提取物包含显著更低水平的毒性化合物(例如雷公藤红素)。
[0121]II1.TwHF植物的根的去皮方法
[0122]本公开涉及TwHF根的去皮方法的方面不同于本公开的其他方面，例如TwHF根的冻干方法、制备TwHF提取物的方法，和将这样的提取物加工成为可自由流动的固体的方法。但是，本公开的这些方面是模块化的，并且以不同的组合预期，例如包括冻干方法、去皮方法和提取物制备方法的制备提取物的方法。
[0123]因此，本公开的另一个方面是自TwHF植物的根去除皮的方法，所述方法与使用去皮刀例如弯刀、小刀或蔬菜去皮器自所述根剥去皮或切掉皮相比较需要较少的劳动强度。这些抑制的方法是费力的且不适于商业制造。本发明所述的方法适于转化为商业制造环境并且包括将皮与冻干的根部分的根核分尚，由此制备TwHF植物的冻干的去皮的根部分。尽管预期去皮方法可用于去皮TwHF植物部分(例如根)，但还预期本发明公开的去皮方法可用于具有期望自植物或植物部分去除的皮的多种裸子植物和被子植物的植物部分(例如根或茎)。
[0124]通过本领域已知的任何方法将冻干的根部分的皮与根核分离。例如，在一些实施方案中，将皮与根核分离包括通过机械力将冻干的皮与根核的附着机械地破坏。在一些实施方案中，通过将冻干的根部分与压辊或其他压缩根部分的工具接触而产生机械力。在一些实施方案中，通过将冻干的根部分与研磨剂接触产生机械力。示例性的研磨剂包括但不限于冻干的根部分、金属物体、玻璃物体、木制物体、陶瓷物体、绳、皮革、砂、岩石、水泥、混凝土、石榴石、玻璃纤维、氧化铝、氧化硅、金刚石和本领域中已知的任何其他研磨剂。在一些实施方案中，研磨剂为金属物体例如螺栓、螺钉、钉子或金属碎片。这样的金属物体可以获自任何五金商店。在一个实施方案中，研磨剂为螺栓。在一些实施方案中，螺栓为至少3英寸长。在其他实施方案中，螺栓的长度小于I英寸，例如长度为1/2英寸或更低的螺栓。在一个实施方案中，螺栓的长度为1/2英寸，具有3/8英寸头。
[0125]制备冻干的去皮的根的方法可以在本领域中已知的任何装置中进行。在一些实施方案中，所述装置为包括压辊的任何适合的大小的设备，优选地，其中可施加至根部分的压力的大小是可调的。在其他实施方案中，所述装置为选自由以下组成的组的设备:鼓式去皮设备、环状去皮设备和连枷去皮设备。在某些实施方案中，所述装置为鼓式去皮设备且所述研磨剂为松散的物质，存在的重量比为研磨剂:冻干的根部分为12:1.在一些实施方案中，研磨剂与冻干的根部分的重量比为11:1、10:1、9:1、8:1、7:1、6:1、5:1、4:1、3:1、2:1或1:1。研磨剂与冻干的根部分的重量比取决于根部分的大小和研磨剂的密度，并且可以由本领域技术人员确定。在一些实施方案中，研磨剂不是单独的试剂，而是去皮鼓的内投影、去皮鼓的平坦的或不平坦的内表面、环状去皮设备的平坦的或不平坦的内表面、多股连枷、或与多股连枷连接的多个物体。
[0126]在一些实施方案中，分离步骤包括在真空下将冻干的根部分与研磨剂混合(commingling),持续时间足以使皮自冻干的根部分释放,其中释放的皮通过真空自排出口去除，由此将皮与根核分离。在一些实施方案中，冻干的根部分与研磨剂一起翻转，持续至少5分钟、10分钟、15分钟、20分钟、25分钟、30分钟、35分钟、40分钟、45分钟、50分钟、55分钟、I 小时、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12 小时或更高。
[0127]无论使用何装置或设备将皮自根部分去除，当通过肉眼观察根部分上明显没有皮时完成去皮过程。任选地，去皮过程的持续时间通过对于TwHF根皮的标志物例如雷公藤红素的分析测定，如下所述。
[0128]在一些实施方案中，所述方法还包括将研磨剂与去皮的根部分分离。在一些实施方案中，对于将研磨剂与去皮的根部分分离，期望利用可磁化(例如铁磁)的金属物体作为研磨剂。在这样的实施方案中，一旦去皮过程完成，则装置内部或外部的磁铁通过磁铁去除金属物体。在一些实施方案中，一旦去皮过程完成，则将滚筒磁化，可磁化的金属物体保留在滚筒中，而去皮的根部分自滚筒去除。
[0129]本发明还提供了TwHF 植物例如雷公藤(Tripterygiumwilforii Hook F.var.Shiloh)植物的冻干的去皮的根部分,其中所述根部分基本上不含皮。在一些实施方案中，TwHF植物的冻干的去皮的根部分包含的皮少于尺寸相当的TwHF植物的新鲜的根部分的2%或1%。皮的存在可以通过肉眼确定，或通过使用如下所述的皮标志物测定。在一些实施方案中，冻干的根部分包 含的皮少于尺寸相当的TwHF植物的新鲜的根部分的1%。在一些实施方案中，冻干的去皮的根部分包含的皮少于尺寸相当的TwHF植物的新鲜的根部分的0.9%、0.8%、0.7%、0.6%、0.5%、0.4%、0.3%、0.2%、0.1% 或更低。
[0130]存在于TwHF植物的皮中的化合物可以用作用于确定是否有可检测的量的皮存在于冻干的去皮的根部分中的标志物。雷公藤红素为存在于TwHF植物的皮中的三萜抗氧化剂化合物。因此，在一些实施方案中，鉴定TwHF植物的冻干的去皮的根部分的配制物中的残留的皮的方法包括测定冻干的去皮的根部分的配制物中皮标志物(例如雷公藤红素)的量，其中在冻干的去皮的根部分的配制物中较低量的皮标志物将所述配制物鉴定为包含较低量的残留的皮。冻干的根部分中的雷公藤红素的量可以通过本领域中已知的方法例如NMR、HPLC或Annexin V/PT染色分析(雷公藤红素为NF- κ β抑制剂)测定。
[0131]在一些实施方案中，与尺寸相当的TwHF植物的新鲜的根部分的皮中存在的雷公藤红素的量相比较，冻干的去皮的根部分包含小于10%的雷公藤红素。在一些实施方案中，与尺寸相当的TwHF植物的新鲜的根部分的皮中存在的雷公藤红素的量相比较，冻干的去皮的根部分包含小于 5%、4%、3%、2%、1%、0.9%、0.8%、0.7%、0.6%、0.5%、0.4%、0.3%、0.2%、0.1%或更低的雷公藤红素。在一些实施方案中，如果去除皮的步骤包括使用鼓和研磨剂且已在根上鉴定出残留的皮，则重复翻转过程直至雷公藤红素不能被检测到。
[0132]IV.TwHF植物的提取物的制备方法
[0133]由TwHF植物的根制备提取物的方法是本领域中已知的。常规的提取方法包括将植物物质(例如TwHF植物的去皮的根)磨、研磨、或粉碎；在包含足量的提取剂流体(例如醇)的溶液中提取所述植物物质；和收集所述流体以获得提取物混合物(例如醇提取物)。提取物混合物还可以通过自提取物混合物去除固体物质而进一步被加工。通过本领域中已知的任何方法将固体物质自提取物去除，所述方法包括但不限于过滤和离心。在一些实施方案中，使用本发明中描述的冻干和去皮方法将TwHF植物的根或根部分去皮。在其他实施方案中，TwHF植物的根或根部分为已使用本领域中已知的方法去皮的新鲜的根或部分。
[0134]可以通过任何常规的研磨方法实施TwHF植物的去皮的根的磨、研磨或粉碎，以增加暴露于提取剂流体的根核的表面积。
[0135]在一些实施方案中，用于提取方法中的提取剂流体为溶剂。适合的提取剂流体包括但不限于水、醇、水溶液、卤代烃、酯、和超临界流体。适合的醇包括伯醇例如乙醇、正丙醇、正丁醇、正戊醇、正己醇、正辛醇、正壬醇和正癸醇，以及仲醇例如异丙醇、异丁醇、和例如丁烷至癸烷之一的仲醇衍生物。对于在室温和约一个大气压(atm)下为气体的那些较低分子量的化合物，预期使用其中所述化合物为液体状态的加压提取。在一个实施方案中，提取剂流体为乙醇。在提取过程期间引入醇流体的益处是醇流体与可摄取的产品相容，并且因此适用于制备用于引入丸剂、胶囊剂、片剂、和本领域中已知的其他可摄入的形式的提取物。
[0136]在一个方面，所述提取步骤包括将任选地经研磨的去皮的根部与过量的提取剂流体组合，例如每单位体积的经研磨的根2-20体积的提取剂流体，将组合的物质搅拌,持续时间足以将所关注的化合物自经研磨的根提取出来。在一些实施方案中，将包含提取剂流体和经研磨的根的混合物搅拌约30分钟、I小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时或更长。任选地，将混合物在回流下搅拌。提取过程在室温和提取剂流体的沸点之间的温 度下进行。
[0137]在一些实施方案中，将混合物过滤并将滤液浓缩，直至浓缩的滤液为初始的滤液的体积的一部分。在一些实施方案中，相对于初始的滤液，浓缩的滤液小于1、0.9,0.8,0.7、
0.6,0.5,0.4,0.3,0.2、0.1或更低的体积。在一些实施方案中，使用提取剂流体对任选地经研磨的根进行一系列的提取。在这样的实施方案中，将根再次与过量的提取剂流体组合并且重复提取过程。随后将获自各提取的滤液组合并如下所述浓缩。
[0138]通过本领域中已知的方法实现滤液的浓缩，例如通过使用真空去除挥发性流体例如溶剂。滤液的浓缩在任何温度下发生。在一些实施方案中，温度不超过50°C。还预期在约 20°C、25°C、30°C、35°C、40°C、45°C、55°C、60°C、65°C、或 70°C 的温度下将滤液浓缩。
[0139]在一些实施方案中，溶剂置换包括在所述提取中(美国专利第5，294，443号；第5，550，340号;第5，580，562号；第5，846，742号；第5，916，564号，其公开整体援引加入本文)。在这样的实施方案中，提取步骤包括将浓缩的滤液与相对于初始的根质量过量(体积比)的极性有机溶剂(例如乙酸乙酯)组合以制备提取物混合物，其也可以被如上所述浓缩。极性有机溶剂(例如乙酸乙酯)与在提取步骤中用于制备提取物的醇溶剂不同。重复此步骤直至溶剂置换将提取物混合物中的提取剂流体的浓度降低至15重量％或更低。在一些实施方案中，重复此步骤,直至提取物混合物中的提取剂流体的浓度为10重量％、9重量％、8重量％、7重量％、6重量％、5重量％、4重量％、3重量％、2重量％、I重量％或更低。提取剂流体的浓度可以通过本领域已知的方法(例如NMR)测定。
[0140]在一些实施方案中，将提取物混合物过滤以除去不溶的组分，且进一步通过本发明中所述的方法之一加工经过滤的提取物溶液。
[0141]V.将TwHF植物的醇提取物加工成为可自由流动的固体的方法
[0142]在另一个方面，本发明描述了将TwHF植物的醇提取物加工成为可自由流动的固体的方法。在一些实施方案中，所述方法包括获得TwHF植物的醇提取物，将所述醇提取物与非极性有机溶剂组合以制备提取物/非极性有机溶剂混合物；过滤所述提取物/非极性有机溶剂混合物以分离固体沉淀并干燥所述固体沉淀，由此将所述醇提取物加工成为可自由流动的固体形式。在一些实施方案中，所述醇提取物为在组合步骤之前经过溶剂置换的混合物，其中所述溶剂置换包括将所述醇提取物中的醇置换为极性有机溶剂(例如乙酸乙酯)。在这样的实施方案中，在组合步骤中将提取物/乙酸乙酯混合物与非极性有机溶剂组合。 [0143]适合的非极性有机溶剂包括C4-C10直链的或支链的烷烃和环烷烃。在一些实施方案中，非极性有机溶剂为直链的烷烃例如戊烷、己烷、庚烷、辛烷、壬烷或癸烷。在一些实施方案中，非极性有机溶剂为庚烷。在其他实施方案中，非极性有机溶剂为支链的烷烃例如异戊烷、异己烷、异庚烷、异辛烷、异壬烷或异癸烷。在一些实施方案中，非极性有机溶剂为异辛烷。
[0144]组合步骤包括将醇提取物(或提取物/乙酸乙酯混合物)与相对于原始根质量过量体积例如2-20体积的非极性有机溶剂接触、混合、或置于一起，以制备掺合物。在一些实施方案中，组合步骤在真空下发生。在一些实施方案中，重复组合步骤直至掺合物中非极性有机溶剂的水平不能被检测到。将掺合物过滤以分离或收集固体沉淀物质，并使用非极性有机溶剂进行一次或多次洗涤。掺合物的过滤可以通过本领域中已知的常规方法进行，并且可以任选地被重复。
[0145]在可选的方面，所述方法包括在真空下将提取物与赋形剂组合，以制备提取物/赋形剂混合物；并干燥浓缩的混合物，由此制备可自由流动的固体形式的提取物。组合步骤包括将提取物与适量的例如0.5-20倍(重量/重量)的赋形剂(与提取物中的总固体含量相比较)接触、混合、或置于一起，并任选地搅拌，持续时间足以使赋形剂与提取物混合。还预期使用相对于提取物的固体含量为约I倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、11倍、12倍、13倍、14倍、15倍、16倍、17倍、18倍、19倍(重量)过量的赋形剂。适
用于本发明中所述的方法中的赋形剂包括微晶纤维素(MCC)、麦芽糊精、Aerosil? (热解硅石)、玉米淀粉、和Neusi I in (偏硅酸铝镁)。在一些实施方案中，所述赋形剂为MCC。在一些实施方案中，组合步骤包括在完全真空下，在不超过50°C (例如约20°C、3(TC、35°C、36。。、37。。、38。。、39。。、40。。、41。。、42。。、43。。、44。。、45。。、46。。、47。。、48。。、或约 49 °C )的温度下将提取物/赋形剂混合物浓缩，直至浓缩的赋形剂混合物中达到约80%的干固体含量。
[0146]上述加工方法的干燥步骤包括将经洗涤的固体或浓缩的赋形剂混合物干燥，持续时间足以将溶剂自经洗涤的固体或浓缩的赋形剂混合物去除。在一些实施方案中，干燥步骤进行约8-24小时的时长。特别地，预期将经洗涤的固体或浓缩的赋形剂混合物干燥约9小时、10小时、11小时、12小时、13小时、14小时、15小时、16小时、17小时、18小时、19小时、20小时、21小时、22小时、23小时、24小时或更高。还预期将经洗涤的固体或浓缩的赋形剂混合物干燥小于8小时。经洗涤的固体或浓缩的赋形剂混合物可以在本领域已知的任何干燥设备中干燥，所述干燥设备包括但不限于盘式干燥器、真空烘箱或烘箱。在一些实施方案中，经洗涤的固体(或浓缩的赋形剂混合物)在约20 0C、25 °C、30 °C、35 °C、40 °C、45 °C、或约50°C的温度下干燥。在干燥过程完成之后，干燥的固体为可自由流动的固体的形式。
[0147]TwHF的提取物包含大于200种化合物，包括二萜、三萜、倍半萜、β -谷固醇、卫矛醇、和糖苷。示例性的化合物包括但不限于雷公藤甲素、雷公藤羟内酯、美登木酸(雷公藤春碱)及其甲酯、雷酚内酯、雷酚内酯甲醚、雷酚萜醇、雷公藤碱己、雷公藤次碱、雷公藤晋碱、和雷公藤增碱。在一些实施方案中，期望测定自由流动的固体中这些化合物中的一种或多种的量。样品中的化合物的测定可以通过本领域已知的方法例如NMR或HPLC测定。
[0148]通过本发明中描述的方法制备的可自由流动的固体包含浓缩水平的雷公藤甲素和雷公藤羟内酯。在一些实施方案中，通过本发明描述的方法制备的可自由流动的固体包含以每克可自由流动的固体计浓度为至少100 μ g、至少200 μ g、至少300 μ g、至少400 μ g、至少 500 μ g、600μ g、700 μ g、800 μ g、900 μ g、1000 μ g、1100 μ g、1200 μ g、1300 μ g、1400 μ g, 1500 μ g, 1600 μ g, 1700 μ g, 1800 μ g,2000 μ g 或更高的雷公藤甲素。在一些实施方案中，可自由流动的固体包含以每克可自由流动的固体计浓度为SOOygAOOyg、700 μ g>800 μ g>900 μ g>1000 μ g>1100 μ g>1200 μ g>1300 μ g>1400 μ g>1500 μ g>1600 μ g、1700 μ g、1800 μ g、2000 μ g或更高的雷公藤羟内酯。
[0149]通过本发明所述的方法(使用冻干的去皮的根部分、或冻干的去皮的根核、作为提取过程中的起始原料)制备的可自由流动的固体包含低水平的皮化合物例如雷公藤红素。因此，可自由流动的固体具有低水平的任何皮毒素。在一些实施方案中，通过本发明所述的方法制备的可自由流动的固体包含以每mg可自由流动的固体计不大于2.5 μ g的雷公
藤红素。
[0150]在一些实施方案中，可自由流动的固体的(雷公藤甲素+雷公藤羟内酯的总重量)/(雷公藤红素的总重量)的比例为I或更高。在一些实施方案中，所述比例高于1.3(例如 1.35,1.36,1.37,1.38,1.39,1.4,1.41,1.42,1.43,1.44,1.45,1.46,1.47,1.48,1.49、
1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10 或更
高)。在一些实施方案中，(雷公藤甲素+雷公藤羟内酯)/(雷公藤红素)的重量比为至少1.46。在一些实施方案中，(雷公藤甲素+雷公藤羟内酯)/(雷公藤红素)的重量比为至少 1.36。
[0151]V1.将TwHF植物的天然提取物加工成为可自由流动的固体的方法
[0152]TwHF植物的天然提取物为蜡状的、无定型的固体，要求特殊的方式以制备可用的药品产品。本发明描述了将TwHF的天然提取物加工成为可自由流动的固体(例如可流动的粉末)的方法。
[0153] 在一个方面，所述方法包括将天然提取物与非极性有机溶剂组合以制备其混合物；将混合物过滤以分离或收集固体沉淀并将所述固体沉淀干燥，由此制备可自由流动的固体形式的提取物。适合的非极性有机溶剂包括任意C4-C10直链的或支链的烷烃和环烷烃。在一些实施方案中，非极性有机溶剂为直链的烷烃例如戊烷、己烷、庚烷、辛烷、壬烷或癸烷。在一些实施方案中，非极性有机溶剂为庚烷。在其他实施方案中，非极性有机溶剂为支链的烷烃例如异戊烷、异己烷、异庚烷、异辛烷、异壬烷或异癸烷。在一些实施方案中，非极性有机溶剂为异辛烷。[0154]在一些实施方案中，将非极性有机溶剂/提取物混合物过滤以分离或收集固体沉淀物质。非极性有机溶剂/提取物混合物的过滤可以通过本领域已知的常规方法实施。一旦收集，则将所述固体用非极性有机溶剂进行一次或多次洗涤。
[0155]在另一个实施方案中，所述方法包括将TwHF植物的天然提取物与极性有机溶剂(例如醇)混合以制备提取物/极性有机溶剂混合物；在真空下在不高于50°C的温度下将所述提取物/极性有机溶剂混合物与赋形剂组合，以制备浓缩的混合物；和在适于自混合物去除剩余的极性溶剂的温度下干燥所述浓缩的混合物，由此制备可自由流动的固体形式的天然提取物。适用于此加工方法中的极性有机溶剂包括但不限于乙醇、乙酸乙酯、异丙醇、正丁醇、正丙醇和甲醇。在一些实施方案中，极性有机溶剂为乙醇。
[0156]在一些实施方案中，添加步骤包括将过量的例如0.5-20倍的赋形剂(重量/体积)引入极性溶剂/提取物混合物中并任选地搅拌，其持续时间足以将赋形剂混合入极性溶剂/提取物混合物以制备赋形剂混合物。还预期混合相对极性溶剂/提取物混合物约I倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、11倍、12倍、13倍、14倍、15倍、16倍、17倍、18倍、19倍过量(重量/体积)的量的赋形剂。适用于本发明中所述的方法中的赋形剂包括微晶纤维素(MCC)、麦芽糊精、Aerosil?'(热解硅石)、玉米淀粉、和Neusilin (偏硅酸铝镁)。在一些实施方案中，所述赋形剂为MCC。
[0157]在其中将赋形剂添加至有机溶剂/提取物混合物的实施方案中，未实施过滤步骤。
[0158]随后将经洗涤的固体或赋形剂混合物干燥，持续时间足以将有机溶剂分别地自所述固体或赋形剂混合物去除。在一些实施方案中，干燥步骤进行约8-24小时的时长。特别地，预期将经洗涤的固体或赋形剂混合物干燥约9小时、10小时、11小时、12小时、13小时、14小时、15小时、16小时、17小时、18小时、19小时、20小时、21小时、22小时、23小时、24小时或更高。还预期将经洗涤的固体或赋形剂混合物干燥小于8小时。经洗涤的固体或赋形剂混合物可以在空气中干燥或在本领域已知的任何干燥设备中干燥，所述干燥设备包括但不限于盘式干燥器、真空烘箱或烘箱。在一些实施方案中，经洗涤的固体或赋形剂混合物在约20°C、25°C、30°C、35°C、40°C、45°C、或约50°C的温度下在干燥装置中干燥。
[0159]VI1.TwHF提取物的药物组合物和给药途径
[0160]本公开预期经压片、包囊、或另外配制用于口服给药的包含通过本发明描述的方法制备的可自由流动的固体的组合物。所述组合物可以以如美国食品和药物管理局所定义的药物组合物、保健品组合物(即膳食补充剂)、或食品或饮料添加剂的形式提供。上述组合物的剂型没有具体地限制。例如，混悬剂、乳剂、片剂、丸剂、胶囊剂、缓释的制剂、散剂、栓剂、脂质体、微颗粒剂、微胶囊剂等全部预期作为适合的剂型。
[0161]所述组合物典型地包括一种或多种适合的稀释剂、填充剂、盐、崩解剂、粘结剂、润滑剂、助流剂、润湿剂、控释的基质、着色剂、调味剂、载体、赋形剂、缓冲剂、稳定剂、增溶剂、商业佐剂、和/或本领域已知的其他添加剂。
[0162]可以使用用作药用运载体、赋形剂、或介质的任何药学上可接受的(即如本领域已知的无菌的和可接受地无毒的)液体、半固体、或固体稀释剂。示例性的稀释剂包括但不限于聚氧化乙烯山梨聚糖单月桂酸酯、硬脂酸镁、磷酸钙、矿物油、可可脂、和可可属的油、羟基苯甲酸甲酯和羟基苯甲酸丙酯、滑石、褐藻酸盐、碳水化合物，特别是甘露醇、α -乳糖、无水乳糖、纤维素、蔗糖、右旋糖、山梨糖醇、改性的右旋糖酐、阿拉伯胶、和淀粉。这样的组合物可以影响功能性化合物的物理状态、体内释放率和体内清除率。
[0163]药学上可接受的填充剂可以包括例如乳糖、微晶纤维素、磷酸二钙、磷酸三钙、硫酸钙、右旋糖、甘露醇、和/或蔗糖。在药物组合物中也可以使用包括磷酸三钙、碳酸镁、和氯化钠的盐作为填充剂。
[0164]粘结剂可用于将包含可自由流动的固体的组合物固定，以形成硬片剂。示例性的粘结剂包括来自有机产品的物质例如阿拉伯胶、西黄蓍胶、淀粉和明胶。其它适合的粘结剂包括甲基纤维素(MC)、乙基纤维素(EC)和羧甲基纤维素(CMC)。
[0165]经加工的TwHF提取物的量和给药方案基于与给药目的相关的多种因素，例如人或动物的年龄、性别、体重、激素水平、或人或动物的营养需要。在一些实施方案中，TwHF提取物以约0.001mg/kg体重至约10g/kg体重的量每日给药至动物。在一些实施方案中，经加工的TwHF提取物以每天约0.005mg/kg体重、或每天约0.01、或约0.05、或约0.1、或约
0.2、或约0.3、或约0.4、或约0.5、或约0.6、或约0.7、或约0.8、或约0.9、或约1、或约2、或约3、或约4、或约5、或约6、或约7、或约8、或约9、或约10mg/kg体重的量给药至动物。
[0166]典型的方案可以包括多次给药经加工的TwHF提取物。在一个实施方案中，经加工的TwHF提取物每天给药一次。在另一个实施方案中，经加工的TwHF提取物每天给药两次或三次。经加工的TwHF提取物可以在任何时间给药至对象。在一些实施方案中，在餐前或餐后同时地给药经加工的TwHF提取物。
[0167]使用经加工的TwHF提取物的治疗继续至少约I周。还预期持续约2周、3周、I个月、2个月、3个月、4个 月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、I年、5年、
或多至终生治疗的治疗持续期间。
[0168]本领域技术人员应理解，本发明所述的经加工的TwHF提取物可用于人用药物和兽用药物领域，以向需要其的对象提供例如雷公藤甲素或雷公藤羟内酯(或可获自TwHF植物的去皮的根的其他治疗化合物)。因此，待治疗的对象或个体可以为哺乳动物例如人类。其它适合的对象包括例如家畜例如奶牛、绵羊、猪、马和山羊；与人作伴的动物例如狗和猫；外来动物和/或动物园动物；实验室动物包括小鼠、大鼠、兔、豚鼠、和仓鼠；和家禽例如鸡、火鸡、鸭、和鹅。
[0169]提供以下实施例以更详细地描述本发明，并意图解释，而非限制，所附的权利要求。实施例1描述了示例性的冻干方法以及用于随后的自TwHF植物的根去除皮的示例性的方法以及示例性的装置。实施例2描述了冻干TwHF植物的根的可选的方法。实施例3描述了使用己烷作为加工剂由初始的基于流体的TwHF植物的提取物制备可自由流动的固体的形式的提取物。实施例4描述了使用庚烷作为加工剂由TwHF植物的提取物制备可自由流动的固体。实施例5描述了使用己烷作为加工剂由TwHF植物的乙醇提取物制备可自由流动的固体的方法。实施例6描述了使用庚烷作为共加工剂由TwHF植物的乙醇提取物大规模制备可自由流动的固体。实施例7描述了使用制剂赋形剂作为加工剂由TwHF的提取物制备可自由流动的固体的方法。实施例8公开了使用微晶纤维素作为加工剂由TwHF植物的乙醇提取物制备可自由流动的固体的可选方法。实施例9公开了包含实施例5中制备的可自由流动的固体的药物组合物。
[0170]实施例[0171]实施例1:TwHF植物的冻干的去皮的根的制备
[0172]由于具有改善的流动性质并显示出由来自雷公藤皮组分的毒素的污染降低而导致的改善的安全特性，因此根据本公开的改善的TwHF提取物更易于操作。毒素含量的降低通过以有助于以有效的方式定量或接近定量地去除皮的方式制备雷公藤根和根部分而实现。更具体地，将用于去皮的配制物中的TwHF根和/或根部分冻干。
[0173]将总计308g新鲜的TwHF根物质(91g中等根(长度3_10mm)、15g小根(长度
1.00-3.00mm)、29g根毛(长度1.00或更低)、30g残根和143g大根(长度10.0Omm))置于Pyrex盘中，并且在_20°C下冷冻整夜。将冻干(Labconco)室调节至_50°C，并允许平衡整夜。随后将根物质置于冻干室中，并将真空度设定为3-10毫巴的压力。将室温升至10°C，持续4小时，随后升高至25°C，持续额外的四小时，随后最终地升至35°C，持续整夜。将生成的冻干的根物质自冻干室去除。
[0174]根物质的冻干导致皮自根核开裂，其通过对冻干的根物质进行肉眼观察而观察到。为了去除皮，将冻干的根物质在平坦的表面上或在压缩设备(例如pasta iOller)中使用中等的压力挤压或辊压，以自根核去除皮。去除皮的过程产生细小的米色至粉色的粉尘或粉末，这由皮导致。获得17g干燥的去皮的根物质。
[0175]中等的压力不会将TwHF根和/或根部分粉碎，且这些物质可以容易地与任何残留的粉尘或粉末分离，确保在任何随后的根提取物中仅能找到最小量的皮毒素。对于本领域技术人员而言显而易见的是许多其他机械的或电机械的操作将被证明适于自冻干的根和/或根部分去除皮，并 且本公开预期本领域中已知的所有这样的操作。
[0176]上述实施例证明本领域已知的任何已知的冷冻TwHF根部分的方法都适用于本发明中所述的方法。此外，冻干过程可以涉及能够立即控制围绕TwHF根部分的大气压的任何装置。此外，当使用大多数冻干方法时，初始地冷冻的TwHF根部分暴露于冻干过程的时间的长度可以改变，条件是时间足以将根部分的水含量降低至可接受的水平，例如小于2%。
[0177]实施例2:制备TwHF植物的冻干的根的可选方法。
[0178]与上述讨论及其说明一致，冻干TwHF根和/或根部分的可选方法涉及使用加热架，根部分位于其上。如冻干领域的技术人员应理解的，具有足以使水处于与物质的自由表面一定距离处的尺寸的物质的冻干可以受益于将待被冻干的物质(即TwHF根和/或根部分)相对温和地加热，而不削弱有效地冻干所述物质的能力。不期望受理论的限制，人们认为温和的加热促进水分自物质的内部迁移至表面，在所述表面可以发生并确实发生升华。
[0179]此时实例描述了制备TwHF植物的冻干的根一个这样的可选的方法。简而言之，将冻干室(Labconco)的温度设为_20°C，并允许平衡整夜。将~1000g新鲜的根物质(长度为~30cm且直径为~1-1Omm)置于容器中，并在常规的冷冻器(Frigidaire)中冷冻整夜，直至根的温度为约_20°C。第二天，将包含冷冻的根的容器置于处于加热的架上的冻干室中，并将冻干室的压力设为3-10毫巴。将加热的架的温度升高至10°C，持续整夜，升高至35°C，持续8小时，随后升高至50°C，再持续8小时。将冻干的根部分自冻干室去除。通过干燥失重测定(LOD)，冻干的根部分包含小于20%水。
[0180]此实施例中提供的数据证明在冻干过程期间对TwHF根部分的温和加热是容许的，导致产生冻干的TwHF根部分。人们认为与在冻干过程期间不施加温和加热的冻干相比较，此冻干TwHF根部分的方法提供了更快速的且相似地有效的冻干TwHF根部分的方法。[0181]实施例3:使用非极性有机流体作为共加工剂自TwHF植物的天然提取物制备可自由流动的固体。
[0182]由于有效且通过去皮使得可能污染TwHF提取物的皮毒素最小化或消除所述毒素，因此根据本公开去皮的TwHF根部分为提取物制备提供了期望的基础。除了通过提供改善的去皮步骤解决毒素的问题以外，本公开还提供了改善由去皮的TwHF根部分制备的提取物的流动特性的方法。此实施例描述了使用非极性有机流体(例如己烷)作为共加工剂由TwHF植物的提取物制备可自由流动的固体的方法。
[0183]简而言之，在250mL烧杯中将获自中国TwHF植物(即中国生长的TwHF植物)的去皮的根的IOg天然提取物与IOOmL己烧(Fisher试剂等级)组合。使用不锈钢纟产将提取物破碎成片。随后在室温下将己烷/提取物混合物超声30分钟。随后将己烷/提取物混合物置于BUchner漏斗中，过滤，并用IOOmL己烷洗涤以制备包含己烷洗涤流经物的滤液(其颜色为黄色/橙色)和包含己烷/提取物混合物中的固体的渗余物(其颜色为棕色/红色)。将己烷/提取物混合物过滤直至渗余物干燥。随后使用IOOmL己烷对渗余物进行重复洗涤，直至观察到无色的滤液。在真空烘箱(100毫巴，40°C)中将渗余物干燥整夜，以自渗余物去除任何残留的己烷。干燥的渗余物为可自由流动的固体的形式，产率为6.7g。
[0184]为了评价所述方法放大至商业量的可放大性，还将所述方法用于更大量的天然提取物。在500mL烧杯中将获自中国TwHF植物的去皮的根的50g乙醇提取物与250mL己烷组合。TwHF的简单提取物例如乙醇提取物为难以操作的粘稠的、近似于焦油的、无定型物料。使用不锈钢铲将提取物破碎成片。随后在室温下将己烷/提取物混合物搅拌30分钟。随后将己烷/提取物混合物置于BUchner漏斗中，过滤，并用IOOmL己烷洗涤以制备包含己烷洗涤流经物的滤液(其颜色为黄色/橙色)和包含己烷/提取物混合物中的固体的渗余物(其颜色为棕色/红色)。将己烷/提取物混合物过滤直至渗余物干燥。随后使用IOOmL己烷对渗余物进行重复 洗涤，直至观察到无色的滤液。在室温下，在真空烘箱(CascadeTek ；100毫巴)中将渗余物干燥整夜，以自渗余物去除任何残留的己烷。干燥的渗余物为可自由流动的固体的形式，产率为35.5g。所述结果证明所述方法可以被放大至商业上可用的量。
[0185]这些结果显示通过暴露于非极性有机流体例如己烷而经加工的TwHF提取物将生成易于操作以将提取物配制为适于营养补充或医学治疗的形式的可自由流动的固体形式的TwHF提取物，所述形式包括但不限于例如胶囊剂、片剂、凝胶剂、乳膏剂、等的形式。期望任何C4-C10直链的或支链的烷烃或烯烃将适于将TwHF提取物加工以生成可自由流动的提取物固体。
_6] 实施例4:使用另外的非极性有机流体作为共加工剂由TwHF植物的天然提取物制备可自由流动的固体。
[0187]与实施例3中所述一致，预期任何C4-C10直链的或支链的烷烃或烯烃可用于制备可自由流动的固体形式的TwHF提取物，此实施例描述了使用非极性有机流体(例如庚烷)作为共加工剂由TwHF植物的提取物制备可自由流动的固体的方法。
[0188]在250mL烧杯中将获自中国TwHF植物的根的IOg天然提取物与IOOmL庚烷(Fisher试剂等级)组合。使用不锈钢铲将提取物破碎成片。随后在室温下将庚烷/提取物混合物搅拌约20-30分钟，直至提取物溶解。随后将庚烷/提取物混合物置于BUchner漏斗中，过滤，并用IOOmL庚烷洗涤以制备包含庚烷洗涤流经物的滤液(其颜色为黄色/浅橙色)和包含庚烷/提取物混合物中的固体的渗余物。将庚烷/提取物混合物过滤直至渗余物干燥。随后使用IOOmL庚烷对渗余物进行重复洗涤，直至观察到无色的滤液。在真空烘箱(100毫巴；50°C )中将渗余物干燥整夜，以自渗余物去除任何残留的庚烷。干燥的渗余物为可自由流动的固体的形式，产率为6.4g。
[0189]随后将所述实验放大并重复。在500mL烧杯中将获自中国TwHF植物的去皮的根的天然提取物(50g)与300mL庚烷组合。使用不锈钢铲将提取物破碎成片。随后在室温下将庚烷/提取物混合物搅拌约20-30分钟，直至提取物溶解。随后将庚烷/提取物混合物置于BUchner漏斗中，过滤，并用IOOmL庚烷洗涤以制备包含庚烷洗涤流经物的滤液(其颜色为黄色/浅橙色)和包含庚烷/提取物混合物中的固体的渗余物。将庚烷/提取物混合物过滤直至渗余物干燥。随后使用IOOmL庚烷对渗余物进行重复洗涤，直至观察到无色的滤液。在真空烘箱(CascadeTek ;100毫巴；50°C )中将渗余物干燥整夜，以自渗余物去除任何残留的庚烷。干燥的渗余物为可自由流动的固体的形式，产率为30.0g，结果证明所述方法应适于商业上可用的量。
[0190]使用己烷(实施例3)或庚烷(实施例4)加工的TwHF提取物的可自由流动的特性证明将TwHF提取物与非极性有机流体例如C4-C10直链的或支链的烷烃接触将产生易于被配制为营养补充剂或治疗剂的可自由流动的固体形式的提取物。
[0191]实施例5:使用庚烷作为共加工剂由TwHF的根的乙醇提取物制备可自由流动的固体的可选的方法。
[0192]此实施例描述了由TwHF植物的乙醇提取物制备可自由流动的固体的可选的方法。将TwHF植物的冻干的去皮的根研磨并随后与相对于根的体积为8体积的乙醇组合，并在回流下(78°C)搅拌6小时。随后将乙醇提取物过滤以制备第一滤液，并移至储罐。随后在第二次乙醇提取中将去皮的且经研磨的根与另外的8体积的乙醇组合，并在回流下(78°C)搅拌6小时。将第二乙醇提取物过滤以制备第二滤液。将第一滤液和第二滤液组合，随后在室温下在真空下浓缩，以制备浓缩的滤液混合物。相对于原始的根质量，生成的浓缩的滤液混合物为约0.9体积。
[0193]随后将浓缩的滤液混合物与相对于原始的根体积为1.2体积的乙酸乙酯组合，并在真空下浓缩，通过蒸馏去除乙醇。重复所述过程直至所述溶剂置换将乙醇浓度降低至小于15重量％(通过NMR测定)，产生乙酸乙酯混合物。将乙酸乙酯混合物与相对于原始的根体积为3.3体积的庚烷组合，以制备庚烷混合物，并将混合物在真空下浓缩，通过蒸馏去除乙酸乙酯。重复此过程，直至所述溶剂置换将乙酸乙酯的浓度降低至无法检测到的水平(通过NMR测定)。随后将庚烷混合物过滤并收集固体。用庚烷洗涤所述固体，直至流经物为无色。随后在盘式干燥器中在约40°C下将经洗涤的固体干燥约8-12小时。
[0194]干燥的物质为可自由流动的固体。此实施例确认了使用直链的C4-C10烷烃即庚烷加工TwHF植物的提取物能够生成适于治疗制剂或营养制剂的可自由流动的固体。此外，所述实施例证明存在将TwHF提取物暴露于非极性有机溶剂以制备可自由流动的固体形式的提取物的可选的方法。
[0195] 实施例6:使用庚烷作为共加工剂由TwHF植物的根的乙醇提取物大规模制备可自由流动的固体。
[0196]使用量为约 100kg(n=3)、250.4kg(n-2)、250.2kg(n=3)、211.5kg(n=l)和286.6kg (η=I)的获自中国TwHF植物的去皮的根部分将实施例5中所述的过程重复多次，以制备可自由流动的固体。起始的根物质和生成的可自由流动的固体物质通过HPLC分析，以将提取物的组分分级并测定经测试的各样品中雷公藤甲素和雷公藤羟内酯的浓度。实验的结果列于表1中。
[0197]表1
[0198]
【权利要求】
1.将雷公藤(TwHF)植物的天然提取物加工以制备可自由流动的固体形式的提取物的方法，所述方法包括: (a)将所述天然提取物与醇混合，以制备提取物/醇混合物； (b)将所述提取物/醇混合物与赋形剂在真空下在不高于50°C的温度下组合，以制备浓缩的混合物；和 (c)在不高于55°C的温度下干燥所述浓缩的混合物以除去剩余的乙醇，由此制备可自由流动的固体形式的提取物。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述天然提取物是通过一次或多次乙醇提取自所述TwHF植物的根而获得的。
3.如权利要求1所述的方法，其中所述天然提取物获自所述TwHF植物的冻干的去皮的根部分。
4.如权利要求1所述的方法，其中所述赋形剂选自由以下组成的组:微晶纤维素、麦芽糊精、Aerosil? (热解硅石)、玉米淀粉和Neusilin (偏硅酸铝镁)。
5.如权利要求4所述的方法，其中所述赋形剂为微晶纤维素。
6.如权利要求1所述的方法，其中所述干燥步骤在建立不大于0.2大气压(atm)的空气压力的真空下进行。
7.将雷公藤(TwHF)植物的天然提取物加工以制备可自由流动的固体形式的提取物的方法，所述方法包括: (a)将所述天然提取物与非极性有机溶剂组合以制备其混合物； (b)过滤所述混合物以分离固体沉淀；和 (c)干燥所述固体沉淀，由此制备可自由流动的固体形式的提取物。
8.如权利要求7所述的方法，其中所述天然提取物是通过一次或多次乙醇提取自所述TwHF植物的根而获得的。
9.如权利要求7所述的方法，其中所述非极性有机溶剂选自由以下组成的组:直链C5-C10烷烃和支链C5-C10烷烃。
10.如权利要求9所述的方法，其中所述非极性有机溶剂为庚烷。
11.如权利要求7所述的方法，其中所述天然提取物获自TwHF植物的冻干的去皮的根部分。
12.通过如权利要求1所述的方法制备的可自由流动的固体形式的TwHF植物的提取物。
13.如权利要求12所述的提取物，其中每mg所述提取物包含不大于2.5μ g的雷公藤红素。
14.如权利要求12所述的提取物，其中所述提取物的(雷公藤甲素+雷公藤羟内酯)/雷公藤红素((T+Td)/C)的比例为至少1.46。
15.如权利要求12所述的提取物，其中所述提取物的(T+Td)/C的比例为至少1.36。
16.通过如权利要求7所述的方法制备的可自由流动的固体形式的TwHF植物的提取物。
17.如权利要求16所述的提取物，其中每mg所述提取物包含不大于2.5 μ g的雷公藤红素。
18.如权利要求16所述的提取物，其中所述提取物的(雷公藤甲素+雷公藤羟内酯)/雷公藤红素((T+Td)/C)的比例为约1.46。
19.如权利要求16所述的提取物，其中所述提取物的(T+Td)/C的比例为约1.36。
20.将雷公藤(TwHF)植物的醇提取物加工以制备可自由流动的固体形式的提取物的方法，包括: (a)获得TwHF植物的醇提取物；(b)将所述醇提取物中的醇置换为极性有机溶剂以形成提取物/极性有机溶剂混合物； (c)在真空下在不高于50°C的温度下将所述提取物/极性有机溶剂混合物与赋形剂组合，以制备浓缩的混合物；和 (d)在不高于55°C的温度下干燥所述浓缩的混合物，由此制备可自由流动的固体形式的醇提取物。
21.如权利要 求20所述的方法，其中所述极性有机溶剂为乙酸乙酯。
22.将雷公藤(TwHF)植物的醇提取物加工以制备可自由流动的固体形式的提取物的方法，包括: (a)获得TwHF植物的醇提取物；(b)将所述醇提取物中的醇置换为极性有机溶剂以形成提取物/极性有机溶剂混合物； (C)将所述提取物/极性有机溶剂混合物与非极性有机溶剂组合以制备提取物/非极性有机溶剂混合物； (d)过滤所述提取物/非极性有机溶剂混合物以分离固体沉淀；和 (e)干燥所述固体沉淀，由此制备可自由流动的固体形式的醇提取物。
23.如权利要求22所述的方法，其中所述非极性有机溶剂为庚烷。
【文档编号】A61K36/18GK103998050SQ201280011112
【公开日】2014年8月20日 申请日期:2012年3月1日 优先权日:2011年3月1日
【发明者】G·帕芬多夫, C·西马鲁斯蒂 申请人:植物药品有限公司