胃肠外诺如病毒疫苗配制剂的制作方法
【专利摘要】本发明涉及包含单价诺如病毒病毒样颗粒混合物的单剂胃肠外疫苗组合物。还公开了通过施用此类组合物在人受试者中赋予针对诺如病毒感染的保护性免疫的方法。
【专利说明】胃肠外诺如病毒疫苗配制剂
[0001]对相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2011年7月11日提交的美国临时专利申请61/506，447的优先权，其全部内容通过提及并入本文。
发明领域
[0003]本发明属于疫苗，特别是诺如病毒疫苗领域。另外，本发明涉及制备疫苗组合物的方法及诱导和评估人中针对诺如病毒的保护性免疫应答的方法。
[0004]发明背景[0005]诺如病毒是不可培养的人类杯状病毒，已经成为非细菌性胃肠炎的流行性爆发的单一最重要起因(Glass等，2000; Hardy等，1999)。在灵敏的分子诊断测定法的开发之前，对诺如病毒的临床意义的重视不够。原型基因小组I (genogroup I)诺沃克病毒(NV)基因组的克隆和自重组杆状病毒表达系统生成病毒样颗粒(VLP)引起了测定法的开发，其揭示了分布广泛的诺如病毒感染(Jiang等1990; 1992)。
[0006]诺如病毒是单链、正义RNA病毒，含有不分段的RNA基因组。病毒基因组编码三个可读框，其中后两个分别规定主要衣壳蛋白和次要结构蛋白的生成(Glass等2000)。当在真核表达系统中以高水平表达时，NV和某些其它诺如病毒的衣壳蛋白自组装成在结构上模拟天然诺如病毒病毒体(virion)的VLP。当通过透射电子显微术观看时，VLP在形态上与自人粪样品分离的感染性病毒体不可区分。
[0007]针对诺如病毒的免疫应答是复杂的，而且现在正在阐明保护的关联(correlate)。用天然病毒实施的人志愿者研究证明了粘膜衍生的记忆免疫应答提供免于感染的短期保护并提示疫苗介导的保护是可行的(Lindesmith等2003;Parrino等1997;Wyatt等，1974)。
[0008]虽然由于VLP的可得性和它们被大量生成的能力，诺如病毒不能在体外培养，但是在定义诺如病毒衣壳的抗原拓扑学和结构拓扑学方面已经取得了可观的进步。VLP保留病毒衣壳蛋白的真实构象(authentic confirmation),但是缺乏感染性遗传物质。结果，VLP模拟病毒与细胞受体的功能相互作用，由此引发适宜的宿主免疫应答，但是缺乏繁殖或引起感染的能力。与NIH联合，贝勒医学院(Baylor College of Medicine)在学术性的、调查人发起的I期临床试验中研究了人志愿者中针对NV VLP的体液、粘膜和细胞免疫应答。口服施用VLP在健康成人中是安全的且有免疫原性的(Ball等1999;Tacket等2003)。但是，需要相对大量的多剂VLP以观察免疫应答。在其它学术中心，在动物模型中进行的临床前实验已经证明了当与细菌外毒素佐剂一起鼻内施用时针对VLP的免疫应答的增强(Guerrero 等 2001; Nicollier-Jamot 等 2004; Periwal 等 2003; Souza 等(2007)Vaccine Vol.25(50):8448-59)。然而，人中针对诺如病毒的保护性免疫仍然难以捉摸，因为人中保护性免疫应答的指标仍然尚未清楚鉴定(Herbst-Kralovetz等(2010) ExpertRev.Vaccines9(3), 299 - 307)。
[0009]发明概述[0010]本发明部分基于如下的发现，即单剂诺如病毒疫苗在胃肠外施用时在人中引发快速的、强力的针对诺如病毒的保护性免疫应答。因而，本发明提供了一种在人中引发针对诺如病毒的保护性免疫的方法，其包括对所述人胃肠外施用不超过单剂疫苗组合物，所述组合物包含原型基因小组I和/或原型基因小组II诺如病毒VLP，其中与施用所述组合物前所述人中的滴度相比，所述组合物至少诱导诺如病毒特异性血清抗体滴度的3倍升高。在某些实施方案中，在施用所述单剂组合物的7天内诱导诺如病毒特异性抗体滴度的升高。在一些实施方案中，经由静脉内、皮下、皮内、或肌肉内施用路径对所述人施用所述疫苗组合物。在一个实施方案中，通过肌肉内施用路径对所述人施用所述疫苗组合物。
[0011]单剂疫苗组合物可以包含约5μ g至约150 μ g剂量的原型基因小组I诺如病毒VLP、原型基因小组II诺如病毒VLP、或这两者。在单剂疫苗组合物包含原型基因小组I和原型基因小组II诺如病毒VLP两者的实施方案中，每种VLP的剂量可以是相同的或不同的。在一个实施方案中，组合物包含不超过50 μ g原型基因小组I诺如病毒VLP。在另一个实施方案中，组合物包含不超过25 μ g原型基因小组I诺如病毒VLP。在又一个实施方案中，组合物包含不超过150 μ g原型基因小组II诺如病毒VLP。在又一个实施方案中，组合物包含不超过50 μ g原型基因小组II诺如病毒VLP。诺如病毒VLP可以是单价VLP或多价VLP。
[0012]在本发明的一些方面，疫苗组合物中的原型基因小组I诺如病毒VLP包含自原型基因小组I病毒株衍生的衣壳蛋白。在一个实施方案中，原型基因小组I诺如病毒VLP包含自原型基因小组I，基因型I诺如病毒衍生的衣壳蛋白。在另一个实施方案中，原型基因小组I诺如病毒VLP包含来自诺沃克病毒的衣壳蛋白。在本发明的其它方面，疫苗组合物中的原型基因小组II诺如病毒VLP包含自原型基因小组II病毒株衍生的衣壳蛋白。在一些实施方案中，原型基因小组II诺如病毒VLP包含来自原型基因小组II，基因型4诺如病毒的衣壳蛋白。在某些实施方案中，原型基因小组II诺如病毒VLP是自表达原型基因小组II诺如病毒共有序列生成的VLP。在一个具体的实施方案中，原型基因小组II诺如病毒VLP包含具有序列SEQ ID NO:1的衣 壳蛋白。
[0013]在某些实施方案中，疫苗组合物进一步包含至少一种佐剂。优选地，佐剂不是细菌外毒素佐剂。在一个实施方案中，佐剂是to 11样受体激动剂，诸如单磷酰脂质A (MPL)、鞭毛蛋白、或CpG。在另一个实施方案中，佐剂是氢氧化铝(例如明矾)。在某些实施方案中，疫苗组合物包含两种佐剂，诸如MPL和氢氧化铝。在一些实施方案中，疫苗组合物可以进一步包含缓冲剂，诸如L-组氨酸、咪唑、琥珀酸、Tris、和柠檬酸。疫苗组合物可以配制为干粉末或液体。在一个实施方案中，疫苗组合物配制为液体(例如水性配制剂)。
[0014]附图简述
[0015]图1:泛ELISA测定法的结果，所述泛ELISA测定法测量来自用安慰剂(盐水)或含有5，15，50，或150 μ g原型基因小组1.1诺如病毒VLP和原型基因小组I1.4诺如病毒VLP之每种的疫苗配制剂肌肉内免疫的人志愿者的组合血清IgG，IgA，和IgM水平。在第一次免疫后7和21天时及第二次免疫后7和28天时对每个剂量水平显示抗G1.1 (A)和抗GI1.4(B)抗体的几何均值滴度。志愿者在研究第O天和第28天接受免疫。
[0016]图2:泛ELISA测定法的结果，所述泛ELISA测定法测量来自用安慰剂(盐水)或含有5，15，50，或150 μ g原型基因小组1.1诺如病毒VLP和原型基因小组I1.4诺如病毒VLP之每种的疫苗配制剂肌肉内免疫的人志愿者的组合的血清IgG，IgA，和IgM水平。在第一次免疫后7和21天时及第二次免疫后7和28天时对每个剂量水平显示抗G1.1 (A)和抗GI1.4(B)抗体的几何均值倍数升高。志愿者在研究第O天和第28天接受免疫。
[0017]图3:泛ELISA测定法的结果，所述泛ELISA测定法测量来自用安慰剂(盐水)或含有5，15，50，或150 μ g原型基因小组1.1诺如病毒VLP和原型基因小组I1.4诺如病毒VLP之每种的疫苗配制剂肌肉内免疫的人志愿者的组合的血清IgG，IgA，和IgM水平。在第一次免疫后7和21天时及第二次免疫后7和28天时对每个剂量水平显示抗G1.1 (A)和抗GI1.4(B)抗体的百分比血清响应率(即，与免疫前滴度相比抗体滴度的4倍升高)。志愿者在研究第O天和第28天接受免疫。
[0018]图4 =ELISA测定法的结果，所述ELISA测定法测量来自用安慰剂(盐水)或含有5，15，或50 μ g原型基因小组1.1诺如病毒VLP和原型基因小组I1.4诺如病毒VLP之每种的疫苗配制剂肌肉内免疫的人志愿者的血清IgA。在第一次免疫后7和21天时及第二次免疫后7和28天时对每个剂量水平显示抗G1.1 (A)和抗GI1.4 (B)抗体的几何均值滴度。志愿者在研究第O天和第28天接受免疫。
[0019]图5 =ELISA测定法的结果，所述ELISA测定法测量来自用安慰剂(盐水)或含有5，15，或50 μ g原型基因小组1.1诺如病毒VLP和原型基因小组I1.4诺如病毒VLP之每种的疫苗配制剂肌肉内免疫的人志愿者的血清IgA。在第一次免疫后7和21天时及第二次免疫后7和28天时对每个剂量水平显示抗G1.1(A)和抗GI1.4(B)抗体的几何均值倍数增加。志愿者在研究第O天和第28天接受免疫。
[0020]图6 =ELISA测定法的结果，所述ELISA测定法测量来自用安慰剂(盐水)或含有5，15，或50 μ g原型基因小组1.1诺如病毒VLP和原型基因小组I1.4诺如病毒VLP之每种的疫苗配制剂肌肉内免疫的人志愿者的血清IgA。在第一次免疫后7和21天时及第二次免疫后7和28天时对每个剂量水平显示抗G1.1 (A)和抗GI1.4(B)抗体的百分比血清响应率(即，与免疫前滴度相比抗体滴度的4倍升高)。志愿者在研究第O天和第28天接受免疫。志愿者在研究第O天和第28天接受免疫。
[0021]图7 =ELISA测定法的结果，所述ELISA测定法测量来自用安慰剂(盐水)或含有5，15，或50 μ g原型基因小组1.1诺如病毒VLP和原型基因小组I1.4诺如病毒VLP之每种的疫苗配制剂肌肉内免疫的人志愿者的血清IgG。在第一次免疫后7和21天时及第二次免疫后7和28天时对每个剂量水平显示抗G1.1 (A)和抗GI1.4 (B)抗体的几何均值滴度。志愿者在研究第O天和第28天接受免疫。
[0022]图8 =ELISA测定法的结果，所述ELISA测定法测量来自用安慰剂(盐水)或含有5，15，或50 μ g原型基因小组1.1诺如病毒VLP和原型基因小组I1.4诺如病毒VLP之每种的疫苗配制剂肌肉内免疫的人志愿者的血清IgG。在第一次免疫后7和21天时及第二次免疫后7和28天时对每个剂量水平显示抗G1.1(A)和抗GI1.4(B)抗体的几何均值倍数增加。志愿者在研究第O天和第28天接受免疫。
[0023] 图9 =ELISA测定法的结果，所述ELISA测定法测量来自用安慰剂(盐水)或含有5，15，或50 μ g原型基因小组1.1诺如病毒VLP和原型基因小组I1.4诺如病毒VLP之每种的疫苗配制剂肌肉内免疫的人志愿者的血清IgG。在第一次免疫后7和21天时及第二次免疫后7和28天时对每个剂量水平显示抗G1.1 (A)和抗GI1.4(B)抗体的百分比血清响应率(即，与免疫前滴度相比抗体滴度的4倍升高)。志愿者在研究第O天和第28天接受免疫。志愿者在研究第O天和第28天接受免疫。
[0024]图10:泛ELISA测定法的结果，所述泛ELISA测定法测量来自在指定的时间点时用如 El Kamary 等(2010) J Infect Dis, Vol.202 (11): 1649-1658 中描述的鼻内单价诺如病毒疫苗(LV01-103组)或如实施例1中描述的肌肉内二价诺如病毒疫苗(LV03-104组)免疫的人志愿者的组合的血清IgG，IgA，和IgM水平。人志愿者接受安慰剂或两剂肌肉内或鼻内疫苗配制剂。肌肉内二价诺如病毒疫苗含有5μ g原型基因小组1.1诺如病毒VLP和原型基因小组I1.4诺如病毒VLP之每种。鼻内单价疫苗含有100 μ g原型基因小组1.1诺如病毒。在第二次免疫后用活的诺如病毒攻击接受鼻内疫苗或安慰剂的志愿者。
[0025]图11:对在用5μ g剂量的肌肉内二价诺如病毒疫苗(A)或安慰剂(B)免疫前第O天和免疫后第7天自人志愿者获得的外周血单个核细胞的FACS分析。CD19+PBMC是粘膜靶向的，如α 4/β 7归巢受体和趋化因子CCRlO受体表达证明的。
[0026]发明详述
[0027]本发明涉及在受试者中引发针对诺如病毒感染的保护性免疫的方法。具体而言，本发明提供了在人中引发针对诺如病毒的保护性免疫的方法，其通过对人胃肠外施用不超过单剂包含诺如病毒VLP和任选地至少一种佐剂的疫苗，其中疫苗赋予保护免于或改善诺如病毒感染的至少一种症状。令人惊讶地，发明人已经发现了对人肌肉内施用不超过单剂包含诺如病毒VLP的疫苗组合物诱导快速的(即在免疫的7天内)血清血清转化(即高于疫苗接种前水平的抗原特异性血清抗体滴度的至少三倍升高)，其指示针对诺如病毒感染和疾病的保护性免疫应答。由此单剂疫苗组合物诱导的免疫应答在与人攻击研究中通过施用活病毒在天然感染的情况中观察到的抗体滴度相似的高抗体滴度达到稳定水平。令人感兴趣地，加强剂量的疫苗是不需要的，因为免疫应答在进一步施用额外的疫苗剂量后没有升闻。
[0028]本发明提供了包含一种或多种诺如病毒抗原的疫苗组合物。“诺如病毒”、“诺如病毒(NOR) ”及本文中的语法等同物指杯状病毒科(Caliciviridae)的诺如病毒属的成员。在一些实施方案中，诺如病毒可包括一组相关的、正义单链RNA、无包被病毒，其对于人类或非人哺乳类物种可以是感染性的。在一些实施方案中，诺如病毒能在人类中引起急性胃肠炎。诺如病毒也可称作小圆结构病毒(SRSV)，当通过电子显微术观看时，其具有限定的表面结构或粗糙的边缘。
[0029]诺如病毒内包括至少5种原型基因小组(GI，GII, GUI, GIV，和GV)。GI, GII,和GIV诺如病毒在人中是感染性的，而GIII诺如病毒主要感染牛物种。最近已经从小鼠分离出 GV(Zheng 等(2006)Virology, Vol346:312-323)。代表性 GIII 是耶拿(Jena)和纽布利(Newbury)株，而Alphatron,劳德代尔堡(Fort Lauderdale),和圣克劳德(Saint Cloud)株代表GIV。GI和GII组可以基于遗传分类进一步分成遗传簇或基因型(Ando 等(2000)J.1nfectious Diseases, Vol.181(Supp2):S336-S348;Lindell 等(2005) J.Clin.Microbiol., Vol.43(3):1086 - 1092)。如本文中使用的，术语遗传簇与术语基因型可互换使用。在原型基因小组I内，存在有至今已知的8种GI簇(及原型病毒株名称):G1.1(诺沃克(NV-USA93)) ;G1.2(南安普顿(Southhampton) (S0V-GBR93))；G1.3 (沙原(Desert Shield) (DSV-USA93)) ;G1.4(旅游客船病毒(Cruise Ship virus)/千叶(Chiba)(千叶-JPN00)) ;G1.5(318/Musgrove(Musgrov-GBR00)) ;G1.6(海塞(Hesse)(海塞-DEU98)) ；G1.7 (Wnchest-GBROO)；和 G1.8(拳师(Boxer) -USA02)。在原型基因小组II内，存在有至今已知的19种GII簇(及原型病毒株名称):GI1.1(夏威夷(夏威夷-USA94)) ;GI1.2(雪山病毒 /Melksham(Msham_GBR95)) ；GI1.3(多伦多(多伦多-CAN93)) ；GI1.4(布里斯托尔(Bristol)/Lordsdale (Bristol-GBR93))；GI1.5 (290/Hillingdon(Hilingd-GBROO)) ；GI1.6 (269/Seacroft (Seacrof-GBROO))；GI1.7(273/利兹(Leeds)(利兹-GBR00)) ;GI1.8 (539/阿姆斯特丹(Amsterdam)(阿姆斯特丹-NLD")) ；GI1.9 (378 (VABeach-USAOl)), GI1.10(爱尔福特(Erfurt)-DEUOl)；GI1.11 (SW9180JPN01) ；GI1.12 (ffor11ey-GBROO) ；GI1.13 (Faytvi1-USA02)；GI1.14(M7-USA03) ；GI1.15(J23-USA02) ；GI1.16 (Tiffin-USA03) ；GI1.17(CSE1-USA03)；GI1.18(QW101/2003/US)和 GI1.19(QW170/2003/US)。
[0030]“诺如病毒”在本文中还指重组诺如病毒病毒样颗粒(rNOR VLP)。在一些实施方案中，在细胞中至少重组表达由0RF2编码的诺如病毒衣壳蛋白(例如在Sf9细胞中自杆状病毒载体)可以导致衣壳蛋白自发的自组装成VLP。在一些实施方案中，在细胞中至少重组表达由ORFl和0RF2编码的诺如病毒蛋白(例如在Sf9细胞中自杆状病毒载体)可以导致衣壳蛋白自发的自组装成VLP。VLP在结构上类似于诺如病毒，但是缺乏病毒RNA基因组，并且因此不是感染性的。因而，“诺如病毒”包括可以为感染性的病毒体或非感染性颗粒，其包括有缺陷的颗粒。
[0031]诺如病毒的非限制性例子包括诺如病毒原型基因小组I株Hu/NoV/西切斯特(West Chester)/2001/USA, GenBank 登录号 AY502016 ;千叶病毒(CHV, GenBankAB042808);诺如病毒原型基因小组2株Hu/NoV/布拉多克高地(Braddock Heights)/1999/USA, GenBank登录号AY502015 ;诺如病毒原型基因小组2株Hu/NoV/费耶特(Fayette)/1999/USA, GenBank登录号AY502014 ;诺如病毒原型基因小组2株Hu/NoV/费尔菲尔德(Fairfield)/1999/USA，GenBank登录号AY502013 ;诺如病毒原型基因小组2株Hu/NoV/桑达斯基(Sandusk`y)/1999/USA，GenBank登录号AY502012 ;诺如病毒原型基因小组2株Hu/NoV/坎顿(Canton)/1999/USA，GenBank登录号AY502011 ;诺如病毒原型基因小组2株Hu/NoV/蒂芬(Tiffin)/1999/USA, GenBank登录号AY502010 ;诺如病毒原型基因小组2株!111/^0￥/^341/2002/^34，661^&1^登录号4￥50200 ;诺如病毒原型基因小组I株Hu/NoV/威斯康星(Wisconsin)/2001/USA，GenBank登录号AY502008 ;诺如病毒原型基因小组I株Hu/NoV/CS-841/2001/USA，GenBank登录号AY502007 ;诺如病毒原型基因小组2株Hu/NoV/海勒姆(Hiram) /2000/USA, GenBank登录号AY502006 ;诺如病毒原型基因小组2株Hu/NoV/通托加尼(Tontogany)/1999/USA，GenBank登录号AY502005 ;诺沃克病毒，完整基因组，GenBank 登录号 NC.sub.一001959 ;诺如病毒 Hu/GI/ 小樽(Otofuke)/1979/JP 基因组RNA，完整基因组，GenBank登录号AB187514 ;诺如病毒Hu/北海道(Hokkaido)/133/2003/JP, GenBank 登录号 AB212306 ;诺如病毒悉尼(Sydney) 2212，GenBank 登录号 AY588132 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GenBank 登录号 AY588024 ;诺如病毒 Hu/NLV/ 牛津 /B5S23/2003/UK, GenBank 登录号 AY588023 ;诺如病毒 Hu/NLV/ 牛津 /B6S2/2003/UK，GenBank 登录号AY588022 ;诺如病毒 Hu/NLV/ 牛津 /B6S6/2003/UK，GenBank 登录号 AY588021 ;诺沃克样病毒隔离群Bo/ThirsklO/OO/UK，GenBank登录号AY126468 ;诺沃克样病毒隔离群Bo/Penrith55/00/UK, GenBank 登录号 AY126476 ;诺沃克样病毒隔离群 Bo/Aberystwyth24/00/UK, GenBank 登录号 AY126475 ;诺沃克样病毒隔离群 Bo/Dumfries/94/UK，GenBank 登录号AY126474 ;诺如病毒NLV/IF2036/2003/伊拉克，GenBank登录号AY675555 ;诺如病毒 NLV/IF1998/2003/ 伊拉克，GenBank 登录号 AY675554 ;诺如病毒 NLV/BUDS/2002/USA，GenBank 登录号 AY660568 ;诺如病毒 NLV/ 巴黎岛(Paris Island)/2003/USA, GenBank 登录号AY652979 ;雪山病毒，完整基因组，GenBank登录号AY134748 ;诺沃克样病毒NLV/劳德代尔堡(Fort Lauderdale) /560/1998/US, GenBank 登录号 AF414426 ；Hu/ 诺如病毒 / 广岛 /1999/JP(9912-02F) ,GenBank 登录号 AB044366 ;诺沃克样病毒株 11MSU-MW, GenBank 登录号AY274820 ;诺沃克样病毒株B-1SVD，GenBank登录号AY274819 ;诺如病毒原型基因小组 2 株 Hu/NoV/法明顿山(Farmington Hills)/2002/USA, GenBank 登录号 AY502023 ;诺如病毒原型基因小组2株Hu/NoV/CS-G4/2002/USA，GenBank登录号AY502022 ;诺如病毒原型基因小组2株Hu/NoV/CS-G2/2002/USA，GenBank登录号AY502021 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;诺沃克样病毒 NLV/迈阿密海滩(Miami Beach)/326/1995/US, GenBank登录号 AF414424 ;诺沃克样病毒 NLV/ 怀特河(White River)/290/1994/US, GenBank 登录号 AF414423 ;诺沃克样病毒 NLV/ 新奥尔良(New Orleans) /306/1994/US, GenBank登录号AF414422 ;诺沃克样病毒LV/卡纳维拉尔港(Port Canaveral)/301/1994/US,GenBank 登录号 AF414421 ;诺沃克样病毒 NLV/檀香山(Honolulu)/314/1994/US，GenBank登录号 AF414420 ;诺沃克样病毒 NLV/ 里士满(Richmond) /283/1994/US，GenBank 登录号 AF414419 ;诺沃克样病毒 NLV/威斯多佛(Westover)/302/1994/US，GenBank 登录号AF414418 ;诺沃克样病毒 NLV/UK3-17/12700/1992/GB，GenBank 登录号 AF414417 ；诺沃克样病毒NLV/迈阿密/81/1986/US，GenBank登录号AF414416 ;雪山株，GenBank登录号U70059 ;沙原病毒(Desert Shield virus)DSV395, GenBank 登录号 U04469 ;诺沃克病毒，完整基因组，GenBank登录号AF093797 ;夏威夷杯状病毒，GenBank登录号U07611 ;南安普敦病毒(Southampton virus), GenBank 登录号 L07418 ;诺沃克病毒(SRSV-KY-89/89/J)，GenBank 登录号 L23828 ;诺沃克病毒(SRSV-SMA/76/US)，GenBank 登录号 L23831 ；坎伯威尔病毒(Camberwell virus), GenBank登录号U46500 ;人杯状病毒株Melksham,GenBank 登录号 X81879 ;人杯状病毒(calicivirus)株 MX，GenBank 登录号 U22498 ;小呼肠孤病毒(Minireovirus) TV24，GenBank登录号U02030 ;及诺沃克样病毒NLV/格温内思(Gwynedd)/273/1994/US，GenBank登录号AF414409 ;通过提及将所有病毒的序列(如到本申请的提交日进入的)收入本文。别的诺如病毒序列披露于下列专利公开文本中:W02005/030806, W02000/79280, JP2002020399, US2003129588,美国专利 N0.6，572，862，W01994/05700,和W005/032457，通过提及将它们全部完整收入本文。关于诺如病毒的序列比较和遗传多样 性和种系发生分析的讨论，还可见Green等(2000) J.1nfect.Dis.,Vol.181(增刊 2):S322-330 ;Wang 等(1994) J.Virol., Vol.68:5982-5990 ；Chen 等(2004)J.Virol.，Vol.78:6469-6479 ；Chakravarty 等(2005)J.Virol.，Vol.79:554-568 ；Hansman 等(2006)J.Gen.ViroI.，Vo I.87:909-9 19 ;Bu11 等(2006)J.Cl in.Micr0., Vol.44(2):327-333 ；Siebenga 等(2007)J.Virol., Vol.81 (18):9932-9941,及Fankhauser 等(1998) J.1nfect.Dis., Vol.178:1571-1578。将每种的核酸和相应的氨基酸序列全部通过提及完整收录。在一些实施方案中，可以将密文用于鉴定目的并且构造:分离病毒的宿主物种/属缩写/种缩写/株名称/发生的年份/起源国家。(Green等，Human Caliciviruses, in Fields Virology Vol.1841-874 (Knipe 和 Howley 主编，第4 版，Lippincott Williams&Wilkins2001))。原型基因小组 II，基因型 4 (GI1.4)病毒株(例如休斯顿，密涅瓦(Minerva)(又称为Den Haag),和劳伦斯(Laurens)(又称为Yerseke)株)在一些实施方案中是优选的。由于鉴定了新的毒株并且其遗传序列是可用的，本领域技术人员会能够使用普通技术在本发明的组合物和方法中采用使用这些当代毒株得到的VLP。如此，本发明涵盖自此类毒株制成的作为合适的抗原的VLP，用于本文中描述的组合物和方法。
[0032]诺如病毒抗原可以是肽、蛋白质、或病毒样颗粒(VLP)的形式。在一个优选的实施方案中，诺如病毒抗原包含VLP。如本文中所使用的，“病毒样颗粒或VLP”指自诺如病毒的衣壳蛋白编码序列生成的且包含与感染性诺如病毒颗粒相似的抗原特征的病毒样颗粒、其碎片、聚集物、或部分。诺如病毒抗原也可以是VLP的衣壳单体、衣壳多聚体、蛋白质或肽片段、或其聚集物或混合物的形式。诺如病毒抗原性蛋白质或肽也可以是使用本领域已知方法生成的变性形式。
[0033]本发明的VLP可以使用本领域标准技术自全长诺如病毒衣壳蛋白诸如VPl和/或VP2蛋白或者某些VPl或VP2衍生物形成。或者，用于形成VLP的衣壳蛋白是截短的衣壳蛋白。在一些实施方案中，例如，至少一个VLP包含截短的VPl蛋白。在其它实施方案中，所有VLP包含截短的VPl蛋白。截短可以是N端或C端截短。截短的衣壳蛋白是合适地功能性衣壳蛋白衍生物。功能性衣壳蛋白衍生物能够以与由全长衣壳蛋白组成的VLP引起免疫应答的方式相同的方式引起免疫应答(如果必要，当有合适的佐剂时)。[0034]VLP可含有主要VPl蛋白和/或次要VP2蛋白。在一些实施方案中，每个VLP含有只来自一个诺如病毒基因小组的VPl和/或VP2蛋白，产生单价VLP。如本文中所使用的，术语“单价”指抗原性蛋白质衍生自单一诺如病毒基因小组。例如，VLP含有来自基因小组I病毒株的VPl和/或VP2 (例如来自诺沃克病毒的VPl和VP2)。优选的是，VLP主要由VPl蛋白构成。在本发明的一个实施方案中，抗原是单价VLP的混合物，其中所述组合物包括由来自单一诺如病毒基因小组的VPl和VP2构成的VLP并混有由来自取自多种病毒株的不同诺如病毒基因小组(例如诺沃克病毒和休斯顿病毒)的VPl和VP2构成的VLP。纯粹举例来说，所述组合物可含有来自诺如病毒基因小组I 一种或多种株的单价VLP以及来自诺如病毒基因小组II 一种或多种株的单价VLP。毒株可以基于其在给定时间的流行优势而选择。在某些实施方案中，诺如病毒VLP混合物由G1.1和GI1.4病毒株构成。更优选地，诺如病毒VLP混合物由诺沃克毒株和自原型基因小组II诺如病毒衍生的共有衣壳序列构成。自流行诺如病毒序列衍生的共有衣壳序列和用此类序列生成的VLP记载于W02010/017542，通过提及将其完整收入本文。例如，在一个实施方案中，自原型基因小组II，基因型4(GI1.4)病毒株衍生的共有衣壳序列包含SEQ ID N0:1的序列。如此，在一些实施方案中，疫苗组合物包含单价VLP的混合物，其中一种单价VLP包含来自原型基因小组I诺如病毒(例如诺沃克)的衣壳蛋白，且另一种单价VLP包含包含序列SEQ ID NO:1的共有衣壳蛋白。
【权利要求】
1.一种在人中引发针对诺如病毒(Norovirus)的保护性免疫的方法，其包括对所述人胃肠外施用不超过单剂疫苗组合物，所述组合物包含原型基因小组I诺如病毒病毒样颗粒(VLP)，其中与施用所述组合物前所述人中的滴度相比，所述组合物至少诱导诺如病毒特异性血清抗体滴度的3倍升高，且其中所述原型基因小组I诺如病毒VLP包含自原型基因小组I病毒株衍生的衣壳蛋白。
2.权利要求1的方法，其中所述组合物包含不超过150μ g所述原型基因小组I诺如病毒 VLP。
3.权利要求1的方法，其中所述组合物包含不超过50μ g所述原型基因小组I诺如病毒 VLP。
4.权利要求1的方法，其中所述组合物包含不超过25μ g所述原型基因小组I诺如病毒 VLP。
5.权利要求1的方法，其中所述组合物包含不超过15μ g所述原型基因小组I诺如病毒 VLP。
6.权利要求1的方法，其中与施用所述组合物前所述人中的滴度相比，所述组合物至少诱导诺如病毒特异性血清抗体滴度的6倍升高。
7.权利要求1的方法，其中所述诺如病毒VLP是单价VLP或多价VLP。
8.权利要求1的方法，其中所述组合物进一步包含原型基因小组II诺如病毒VLP，所述原型基因小组II诺如病毒VLP包含自原型基因小组II病毒株衍生的衣壳蛋白。
9.权利要求8的方法，其中所述组合物包含不超过150μ g原型基因小组II诺如病毒VLP。`
10.权利要求8的方法，其中所述组合物包含不超过50μ g原型基因小组II诺如病毒VLP。
11.权利要求8的方法，其中所述组合物包含不超过25μ g原型基因小组II诺如病毒VLP。
12.权利要求8的方法，其中所述组合物包含不超过15μ g原型基因小组II诺如病毒VLP。
13.权利要求8的方法，其中所述原型基因小组I诺如病毒VLP是诺沃克(Norwalk)病毒VLP，且所述原型基因小组II诺如病毒VLP是自表达原型基因小组II诺如病毒的共有序列生成的VLP。
14.一种在人中引发针对诺如病毒的保护性免疫的方法，其包括对所述人胃肠外施用不超过单剂疫苗组合物，所述组合物包含原型基因小组II诺如病毒病毒样颗粒(VLP)，其中与施用所述组合物前所述人中的滴度相比，所述组合物至少诱导诺如病毒特异性血清抗体滴度的3倍升高，且其中所述原型基因小组II诺如病毒VLP包含自原型基因小组II病毒株衍生的衣壳蛋白。
15.权利要求14的方法，其中所述组合物包含不超过150μ g所述原型基因小组II诺如病毒VLP。
16.权利要求14的方法，其中所述组合物包含不超过50μ g所述原型基因小组II诺如病毒VLP。
17.权利要求14的方法，其中所述组合物包含不超过25μ g所述原型基因小组II诺如病毒VLP。
18.权利要求14的方法，其中所述组合物包含不超过15μ g所述原型基因小组II诺如病毒VLP。
19.权利要求14的方法，其中所述原型基因小组II诺如病毒VLP包含自原型基因小组II，基因型4病毒株衍生的衣壳蛋白。
20.权利要求14的方法，其中与施用所述组合物前所述人中的滴度相比，所述组合物至少诱导诺如病毒特异性血清抗体滴度的6倍升高。
21.权利要求14的方法，其中所述诺如病毒VLP是单价VLP或多价VLP。
22.权利要求14的方法，其中所述组合物进一步包含原型基因小组I诺如病毒VLP，所述原型基因小组I诺如病毒VLP包含自原型基因小组I病毒株衍生的衣壳蛋白。
23.权利要求22的方法，其中所述组合物包含不超过150μ g原型基因小组I诺如病毒VLP。
24.权利要求22的方法，其中所述组合物包含不超过50μ g原型基因小组I诺如病毒VLP。
25.权利要求22的方法，其中所述组合物包含不超过25μ g原型基因小组I诺如病毒VLP。`
26.权利要求22的方法，其中所述组合物包含不超过15μ g原型基因小组I诺如病毒VLP。
27.权利要求14的方法，其中所述原型基因小组II诺如病毒VLP是自表达原型基因小组II诺如病毒的共有序列生成的VLP。
28.权利要求1至27中任一项的方法，其中所述组合物进一步包含至少一种佐剂。
29.权利要求28的方法，其中所述至少一种佐剂是Toll样受体激动剂。
30.权利要求1至27中任一项的方法，其中所述组合物进一步包含两种佐剂。
31.权利要求30的方法，其中所述两种佐剂是单磷酰脂质A和氢氧化铝。
32.权利要求1至31中任一项的方法，其中所述组合物进一步包含缓冲剂。
33.权利要求32的方法，其中所述缓冲剂选自下组:L-组氨酸、咪唑、琥珀酸、TrisjP柠檬酸。
34.权利要求1至33中任一项的方法，其中通过静脉内、皮下、皮内、或肌肉内施用路径对所述人施用所述疫苗组合物。
35.权利要求34的方法，其中通过肌肉内施用路径对所述人施用所述疫苗组合物。
36.权利要求1至35中任一项的方法，其中所述疫苗组合物配制为液体。
37.权利要求1至35中任一项的方法，其中在施用所述单剂组合物的7天内诱导诺如病毒特异性抗体滴度的升高。
38.权利要求1至35中任一项的方法，其中所述疫苗组合物赋予保护免于诺如病毒感染的一种或多种症状。
【文档编号】A61K39/125GK103874507SQ201280043691
【公开日】2014年6月18日 申请日期:2012年7月11日 优先权日:2011年7月11日
【发明者】C.理查德森, R.F.巴加特兹, P.M.门德尔曼 申请人:武田疫苗股份有限公司