专利名称：一种防紫外线具有保护皮肤效果的蓝莓叶提取物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种可以防紫外线具有保护皮肤效果的蓝莓叶提取物。
背景技术：
紫外线UV(Ultraviolet)可分为长波黑斑效应紫外线UVA (320 400nm)、中波红斑效应紫外线UVB (275 320nm)、短波灭菌效应紫外线UVC(200 275nm)和真空紫外线UVD(100 200nm)。大量研究表明，在紫外线(UV)辐射下，皮肤会产生急性光毒性反应，导致弥散性灰黑色色素沉着和炎症因子的产生，而且细胞内氧自由基(ROS)产生超过其清除速度，过多的ROS可直接攻击细胞膜脂质和蛋白质DNA，导致了表皮和真皮细胞的广泛氧化损伤并抑制细胞增殖，最终引起皮肤炎症反应、免疫抑制、皮肤癌变及皮肤光老化等。其中以长波黑斑效应UVA为主的紫外线有很强的穿透力能够直达皮肤真皮层破坏弹性纤维和胶原蛋白纤维，能造成表皮和真皮层的广泛损伤，对真皮层的成纤维细胞损伤作用尤为明显，是皮肤真皮衰老的主要原因。因此，研制一种可以抗紫外线、减少紫外线对真皮层的成纤维细胞损伤作用的提取物是很有必要的。
发明内容
本发明提供了一种防紫外线具有保护皮肤效果的蓝莓叶提取物。本发明是通过以下技术方案实现的:将蓝莓叶粉碎后，以水为溶液加热煮沸提取三次，过滤后合并滤液并浓缩再用大孔树脂富集有效成分，分别以去离子水和不同浓度的乙醇溶液洗脱，所得各分段溶液溶剂回收、冷冻干燥后保存，其中50%乙醇洗脱得到的部位即为本发明的提取物。本发明的提取物是将IOOg蓝莓叶粉碎后，以水为溶液加热煮沸，每次加入水IOOOmL提取三次，过滤后合并滤液，浓缩提取液至400mL，先得到样品溶液；样品溶液加入DlOl大孔树脂(IOOg)层析柱，分别以去离子水(2L)和不同浓度的乙醇溶液(各浓度2L)为洗脱剂，流速约为6mL/min ;将50%乙醇溶液洗脱得到的部位溶液溶剂回收，浓溶液冷冻干燥后，进行称重并密封保存，即为本发明的提取物。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明作进一步的说明:实施例1 一种防紫外线具有保护皮肤效果的蓝莓叶提取物的制备将IOOg蓝莓叶粉碎后，以水为溶液加热煮沸，每次加入水IOOOmL提取三次，过滤后合并滤液，浓缩提取液至400mL，先得到样品溶液；样品溶液加入DlOl大孔树脂(IOOg)层析柱，分别以去离子水(2L)和不同浓度的乙醇溶液(各浓度2L)为洗脱剂，流速约为6mL/min ;将50%乙醇溶液洗脱得到的部位溶液溶剂回收，浓溶液冷冻干燥后，进行称重并密封保存，即为本发明的提取物。
实施例2提取物在UVA氧化损伤模型中对成纤维细胞的保护作用
原代成纤维细胞的提取与培养:取出生于24小时内的新生鼠背部皮肤若干块，用组织块法培养法分离真皮和表皮，眼科剪剪碎，每块约1mm2，剪切过程中可适量滴加培养液，保持湿润。取培养瓶，用眼科镊小心将剪碎的组织块夹入培养瓶中，用探针将组织块摆好，每块间距约5mm，每瓶20-30块/50ml左右，可滴加4_6滴胎牛血清。轻轻将培养瓶翻转，注入6ml含20%胎牛血清(4ml/25ml，6ml/50ml)的培养基，盖好瓶盖放入孵箱静置2_4h。待组织块贴附牢固后，缓慢侧面翻转平放，静置培养(若组织块不易贴壁，可预先在瓶底壁贴薄层血清或者鼠尾胶原)。即得原代成纤维细胞。UVA氧化损伤模型建立:将贴满培养瓶80%成纤维细胞以0.25%胰蛋白酶消化，收集细
胞悬液。细胞计数，以密度为5X IifVmL接种于96孔板，每孔IOOuL,予37°C5%C02孵
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箱中孵育，细胞贴壁后取出细胞培养板。用0.5%dDMSO溶解样品，分为纯空白组(不含DMSO
培养基)、空白组对照组(含DMSO培养基，不给药不照射)模型组(含DMSO培养基，不给药照射)、给药组(梯度为2.5ug/ml)。模型和给药组分别用5J/cm2UVA照射5min，光源离细胞15cm。照射完弃原培养液加入新鲜培养液继续孵育每组设6个复孔。设3个板平行MTT法检测细胞增殖活性通过酶标仪测各孔的吸光度(A)值。结果:如表I所示，在2.5ug/ml的浓度下，蓝莓叶提取物能明明显逆转紫外线照射对细胞增长的抑制作用。表I提取物对UVA损伤的对抗
权利要求
1.本发明是一种防紫外线具有保护皮肤效果的蓝莓叶提取物。
2.本发明的提取物是将IOOg蓝莓叶粉碎后，以水为溶液加热煮沸，每次加入水IOOOmL提取三次，过滤后合并滤液，浓缩提取液至400mL，先得到样品溶液；样品溶液加入DlOl大孔树脂(IOOg)层析柱，分别以去离子水(2L)和不同浓度的乙醇溶液(各浓度2L)为洗脱齐U，流速约为6mL/min ;将50%乙醇溶液洗脱得到的部位溶液溶剂回收，浓溶液冷冻干燥后，进行称重并密封 保存，即为本发明的提取物。
全文摘要
本发明是一种可以防紫外线具有保护皮肤效果的蓝莓叶提取物，是由蓝莓叶用水煎煮、大孔树脂富集、乙醇洗脱所得，该提取物在体外实验中均显著表现出抗紫外线、保护皮肤的活性。
文档编号A61K36/45GK103230429SQ20131017231
公开日2013年8月7日 申请日期2013年5月9日 优先权日2013年5月9日
发明者於红, 贺善安, 王天寿, 张剑 申请人:湖北紫玉蓝莓科技有限公司