一种包裹疏水性抗癌药物的叶酸-聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物胶束及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了包裹疏水性抗癌药物的双亲性缓释靶向共聚物胶束及其制备方法。其制备方法为，先制备双氨基聚乙二醇聚合物，后通过双氨基聚乙二醇聚合物制备单氨基聚乙二醇叔丁酯聚合物，后和丙交酯交联得到叔丁氧基酰胺基聚乙二醇-聚乳酸聚合物再与三氟乙酸反应得到端氨基聚乙二醇-聚乳酸聚合物，与活化的叶酸避光反应得叶酸-聚乙二醇-聚乳酸聚合物。该化合物具有疏水端的亲水性、生物相容性和水溶性，能减少蛋白质对材料的吸附和细胞的粘附，延长药物在血液中的循环时间，形成的共聚物具有可修饰性；低分子量的肿瘤靶向化合物与和亲水性的聚乙二醇-4000链段键合构成亲水段。疏水段为聚乳酸，疏水性抗癌药物包埋进疏水段，降低毒副作用。
【专利说明】一种包裹疏水性抗癌药物的叶酸-聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物胶束及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及嵌段共聚物胶束【技术领域】，具体涉及ー种包裹疏水性抗癌药物的叶酸-聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物胶束及其制备方法。
【背景技术】
[0002]疏水性药物常用的有阿霉素、卡培他滨等。其中卡培他滨(Capecitabine)在1998年第一次在瑞士上市，由瑞士 Hoffmannn-LaRoche公司研发的。是ー种新型的ロ服的氟胞嘧啶核苷类似物，它是5-Fu的前体药物，本身无毒性，在生物体内酶的作用下代谢为五氟尿嘧啶(5-Fu)，它可以在体内选择肿瘤活化，肿瘤组织中的5-Fu的浓度高，降低了 5-Fu的全身毒性。但是在临床的使用中，为了减少抗肿瘤药物对细胞的影响，一般采用静脉推注的方法来维持药物的速度。于是我们考虑采用聚合物胶束作为药物的载体，起到药物缓释的作用。
[0003]1984年Bader等首先提出用嵌段共聚物胶束作用药物的载体，近20年来人们对此进行了大量研究。两亲型嵌段共聚物在水中溶解后可自发的形成亲水外壳和疏水性内核组成的高分子胶束，将药物通过化学键合或物理包埋的方式结合到一疏水链段，对包裹的药物起到增溶的效果。胶体粒径约为l(Tl00nm，纳米级的粒径和亲水性的外壳，使它在生物体内不易被皮内系统吞噬，減少了蛋白质和细胞的吸附，延长了在血液内的循环时间。而且纳米级的粒径也使它表现很好的生物膜穿透力，所以嵌段共聚物作为药物载体有很好的优越性。
[0004]中国专利02124114.7公开了聚乙二醇_b_聚乳酸两亲性二嵌段共聚物的制备方法；中国专利01118448.5公开了聚乳酸一聚乙二醇共聚物为佐剂的こ肝疫苗；中国专利201210086290.7公开了ー种聚乳酸-聚乙二醇的合成方法；中国专利03100498.9公开了ー种聚乳酸-聚乙二醇嵌段共聚物的制备方法；王方等[王方，汪朝阳，赵耀明.聚乙二醇改性聚乳酸类材料的合成及应用，合成树脂及塑料，2003 (06)]对聚乙二醇改性聚乳酸类材料进行研究；杨卓理等[杨卓理，杨可伟，李馨儒.两性霉素B的聚乙二醇-聚乳酸胶束的制备及其体外释动力学，中国药学杂志2007(07)]对两性霉素B的聚乙二醇-聚乳酸胶束的研究。但上述现有技术制得的水凝胶普遍存在力学強度低，药物释放性能差的问题。引入聚乙二醇-4000增加了聚乳酸的亲水性，可提高载体的生物相容性和分散性；引入疏水段的聚乳酸控制药物的释放速度。中科院、成都有机化学所都已经用该材料制备空白微球并包封膜蛋白和白蛋白，证明了该共聚物可以较好的包封蛋白；但是经查阅文献，尚无该种共聚物包裹卡培他滨的有关实验研究的报道。另外，在共聚物的亲水段(聚乙二醇-4000)接上叶酸，叶酸的主动靶向性是通过叶酸受体介导细胞内化将叶酸摄入。在这种核壳胶束的亲水性表面连接叶酸分子能明显的增加和叶酸受体的肿瘤细胞之间的亲和カ和选择性，也增强对肿瘤细胞的细胞毒性。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于提供包裹疏水性抗癌药物的叶酸-聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物胶束及其制备方法，该嵌段共聚物胶束在水中能自发的形成球形胶束、载药量和包封率高、具备体内长循环、粒径在100纳米以下。
[0006]一种包裹疏水性抗癌药物的叶酸-聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物胶束，是将疏水性抗癌药物包埋在两亲型嵌段共聚物的疏水端即聚乳酸端中，在聚乙二醇-4000端接上小分子的靶向剂而得到。其中疏水性抗癌药物包括阿霉素或卡佩他滨；其中两亲型嵌段共聚物为聚乙二醇-聚乳酸；其中靶向剂为叶酸。
[0007]包裹疏水性抗癌药物的叶酸-聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物胶束的制备方法，包括以下步骤:
(1)双氨基聚乙二醇(NH2-PEG-NH2)的制备:
取15~25g聚乙二醇-4000溶于3(T50ml的二氯甲烷溶液中，加入三こ胺，其中三こ胺和聚乙二醇-4000的质量比为1:12~14，于(T4°C下滴加浓度为0.3^0.4g/mL的对甲苯磺酰氯的二氯甲烷溶液，其中对甲苯磺酰氯与聚乙二醇-4000的质量比为1:2~3，在室温反应6^!，旋转蒸发溶液，然后滴至无水こ醚中，经过抽滤得到聚乙二醇-对甲苯磺酸酯的粗品，再经过反复的溶解沉淀去除多余的对甲苯磺酰氯，于真空干燥箱中干燥48飞0h，得到聚乙二醇-对甲苯磺酸酯纯品；
将得到的聚乙二醇-对甲苯磺酸酯纯品和体积分数为25~30%氨水置于耐压容器中，其中聚乙二醇-对甲苯磺酸酯在氨水中的浓度为0.5^0.66g/mL，在100~140で下密闭反应6~8h，冷却至室温，用二氯甲烷萃取，在有机层中加入氢氧化钠调节pH至8.5^9,搅拌2~3h后静置，分出有机层，水洗至中性，蒸干后得到双氨基聚乙二醇(NH2-PEG-NH2);` (2)单氨基聚乙二醇叔丁酯(BOC-PEG-NH2)的合成:
将步骤(1)得到的NH2-PEG-NH2溶于0.r0.3M的NaHCO3水溶液中，其中NH2-PEG-NH2在NaHCO3水溶液的浓度为0.2^0.3g/mL,调节pH为8.5^9,在室温下搅拌f 2h ;将二碳酸二叔丁酯溶于15~20mL 二氧六环中，其中二碳酸二叔丁酯与NH2-PEG-NH2的质量比为
0.07~0.1:1，冷却后在冰水浴环境下滴加到NH2-PEG-NH2的水溶液中，再在室温下搅拌2lh，后调节溶液的pH值至l(Tll，通过旋转蒸发除去溶剤，剩下的固体用过量的二氯甲烷溶解，通过过滤除去不溶物，将溶液滴至(T4°C的冷こ醚中，真空干燥箱中干燥，得到单氨基聚乙二醇叔丁酯(BOC-PEG-NH2)；
(3)叔丁氧基酰胺-聚乙二醇-聚乳酸(B0C-PEG-PLA)的制备:
将步骤(2)制得的BOC-PEG-NH2和丙交酯按质量比为l:l(Tl5混合均匀，加入聚合管中，真空封闭聚合管聚合，在12(T140°C反应36~48h，将得到的产物用二氯甲烷溶解，后滴加到(T4°C的冷甲醇中，析出的产物放到真空干燥箱中干燥，得到叔丁氧基酰胺基-こ二醇-聚乳酸(B0C-PEG-PLA)，备用；
(4)端氨基聚乙二醇-聚乳酸(NH2-PEG-PLA)的制备:
将制得的叔丁氧基酰胺基-聚乙二醇-聚乳酸(B0C-PEG-PLA)置于2(T30 mL 二氯甲烷中，其中B0C-PEG-PLA在二氯甲烷中的浓度为0.04~0.05g/mL，滴入I~2 mL的三氟こ酸，室温下搅拌2飞h，然后滴入-2(T0°C的冷甲醇中，析出产物放到真空干燥箱中干燥。
[0008](5)叶酸-聚乙二醇-聚乳酸(FA-PEG-PLA)的制备:将叶酸溶于二甲基亚砜(DMSO)中，其中叶酸在二甲基亚砜(DMSO)的浓度为
0.05^0.lg/mL, N2保护下室温避光反应12tTl8h，得到活化叶酸；
将制得的NH2-PEG-PLA和活化叶酸溶于二氯甲烷中，其中NH2-PEG-PLA和叶酸质量比为6^10:1，NH2-PEG-PLA和活化叶酸在二氯甲烷的浓度为0.2^0.3g/mL,混合均匀，在N2的保护下于室温避光搅拌12~24h，然后滤出不溶物，旋转蒸发浓缩溶液，然后滴加到(T4°C的冷甲醇中，析出产物放到真空干燥箱中干燥，得到叶酸-聚乙二醇-聚乳酸(FA-PEG-PLA)共聚物；
(6)将FA-PEG-PLA共聚物和疏水性抗癌药物溶于二甲基甲酰胺中，其中FA-PEG-PLA共聚物和疏水性抗癌药物的质量比5~10:1，FA-PEG-PLA共聚物和疏水性抗癌药物在二甲基甲酰胺中的浓度为0.12^2.2g/mL，不断地搅拌至溶解；
(7)将溶液移至透析袋中，用蒸馏水透析24~36h，毎:T4h换一次蒸馏水；
(8)将透析袋中的 胶束溶液高速离心，抽滤除杂，除去未包埋的药物，冷冻干燥得包裹阿霉素的叶酸-聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物胶束，干燥器中保存。
[0009]上述制备方法中，步骤(6)中所述疏水性抗癌药物包括阿霉素或卡佩他滨。
[0010]上述制备方法中，步骤(7)中所述透析袋的截留分子量(MwCO)低于聚合物分子量，分子量选用3500~4000。
[0011]本发明的优点在于制备的过程比较简单，而且载药效果比较好。合成的壳核胶束具有很好的稳定性，在疏水段接上ー种新型的ロ服疏水性抗癌药，利用疏水药物的抗癌作用，胶束同时起到缓释的作用，使其抗癌的作用更好的发挥出来。
【专利附图】
【附图说明】
[0012]图1为本发明实施例1制备的阿霉素的叶酸-聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物胶束的体外释药曲线。
【具体实施方式】
[0013]以下实施例将进ー步举例说明属于本发明范围内的优选的实施方案。这些实施例只出于举例说明的目的而给出并且不解释为对本发明的限制，因为在不背离本发明的实质或范围的前提下本发明可以有许多的变化方案。
[0014]实施案例1:
(I)双氨基聚乙二醇(NH2-PEG-NH2)的制备
取15g聚乙二醇-4000溶于50mL的二氯甲烷溶液中，加入1.25g三こ胺，于(TC下滴加含7.5g对甲苯磺酰氯25mL的二氯甲烷溶液，在室温反应6h。旋转蒸发溶液，然后滴至无水こ醚中。经过抽滤得到聚乙二醇-对甲苯磺酸酯的粗品，再经过反复的溶解沉淀去除多余的对甲苯磺酰氯，于真空干燥箱中干燥48h，得到聚乙二醇-对甲苯磺酸酯纯品。
[0015]将得到的聚乙二醇-对甲苯磺酸酯纯品IOg和20mL体积分数为25%氨水置于耐压容器中，100°C下密闭反应8h，冷却至室温，用二氯甲烷萃取。在有机层中加入氢氧化钠调节pH至8.5，搅拌2h后静置，分出有机层，水洗至中性，蒸干后得到双氨基聚乙二醇。
[0016](2)单氨基聚乙二醇叔丁酯(BOC-PEG-NH2)的合成
取4g上面得到的NH2-PEG-NH2溶于20mL的0.1M的NaHCO3的水溶液中，调节pH为8.5，在室温下搅拌lh。取0.32g 二碳酸二叔丁酯溶于15mL 二氧六环中，冷却后在冰水浴环境下滴加到NH2-PEG-NH2的水溶液中。再在室温下搅拌6h。之后调节溶液的pH值至10，通过旋转蒸发除去溶剂，剩下的固体用过量的二氯甲烷溶解，通过过滤除去不溶物，将溶液滴至(TC的冷こ醚中，真空干燥箱中干燥。
[0017](3)叔丁氧基酰胺基聚乙二醇-聚乳酸(B0C-PEG-PLA)的制备
取Ig上面得到的BOC-PEG-NH2和IOg丙交酯混合均匀，加入聚合管中，真空封闭聚合管聚合，在140°C反应36h。将得到的产物用二氯甲烷溶解，后滴加到0°C的冷甲醇中，析出的产物放到真空干燥箱中干燥，备用。
[0018](4)端氨基聚乙二醇-聚乳酸(NH2-PEG-PLA)的制备
取制得的B0C-PEG-PLA 0.8g置于20mL 二氯甲烷中，滴入ImL的三氟こ酸，室温下搅拌4h，然后滴入-200C的冷甲醇中，析出产物放到真空干燥箱中干燥。
[0019](5)叶酸-聚乙二醇-聚乳酸(FA-PEG-PLA)的制备
取Ig叶酸溶于20mL的二甲基亚砜(DMSO)中，N2保护下室温避光反应12h，得到活化的叶酸。称取6gNH2-PEG-PLA和Ig活化的叶酸溶于35mL 二氯甲烷中，混合均匀，在N2的保护下于室温避光搅拌12h，然后滤出不溶物，旋转蒸发浓缩溶液，然后滴加到0°C冷甲醇中，析出黄色固体放到真空干燥箱中干燥，最終得到FA-PEG-PLA共聚物。
[0020](6)将IgFA-PEG-PLA共聚物和0.2g疏水性抗癌药物卡佩他滨溶于IOmL 二甲基甲酰胺中，不断地搅拌至溶解。
[0021](7)将溶液移至透析袋(截留分子量选用4000)中，用蒸馏水透析24h，每3h换ー次蒸馏水。
[0022](8)将透析袋中的胶束溶液高速离心，抽滤除杂，除去未包埋的药物，冷冻干燥得包裹阿霉素的叶酸-聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物胶束，干燥器中保存。
[0023]包裹卡佩他滨的叶酸-聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物胶束体外释放的测定:精密称取200mg冻干样品溶于5mLPBS缓冲液(pH=7.4)中，然后置于截留分子量为4000的透析袋中，将透析袋放入试管中，加入PBS缓冲液至总体积为10 mL，密封后，保持温度在37± 1°C,60 rpm下置于Forma 481型摇床(Forma公司，美国)中振摇，分别于12h、24h、48h、72h、96h、120h、144h、168h取样，利用紫外分光光度法测定上清液中的药物浓度，每次取透析液10mL，并补充PBS缓冲溶液10mL。释放度=释放介质中药物的量/含药胶束中的药物含量X 100%。释放总时间为7天，根据时间和累积释放百分比得到药物释放曲线。结果如图1所示，可以看出24h前释药速度快，释药量约占总药量的37.8%。168h后释药量约占总药量的54.4%。近似于零级释放。突释效应小，表现出良好的缓释性能。
[0024]实施案例2:
包裹卡佩他滨的叶酸-聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物胶束的制备:
(I)双氨基聚乙二醇(NH2-PEG-NH2)的制备
取20g聚乙二醇-4000溶于50mL的二氯甲烷溶液中，加入1.54g三こ胺，于2°C下滴加含Sg对甲苯磺酰氯的23mL 二氯甲烷溶液，在室温反应7h。旋转蒸发溶液，然后滴至无水こ醚中。经过抽滤得到聚乙二醇-对甲苯磺酸酯的粗品，再经过反复的溶解沉淀去除多余的对甲苯磺酰氯，与真空干燥箱中干燥54h，得到聚乙二醇-对甲苯磺酸酯纯品。
[0025]将得到的聚乙二醇-对甲苯磺酸酯纯品IOg和17.5mL体积分数为28%氨水置于耐压容器中，120°C下密闭反应7h，冷却至室温，用二氯甲烷萃取。在有机层中加入氢氧化钠调节PH至8.8，搅拌3h后静置，分出有机层，水洗至中性，蒸干后得到双氨基聚乙二醇。
[0026](2)单氨基聚乙二醇叔丁酯(BOC-PEG-NH2)的合成
取5g上面得到的NH2-PEG-NH2溶于20mL的0.2M的NaHCO3的水溶液中，调节pH为8.8，在室温下搅拌2h。取0.4g 二碳酸二叔丁酯溶于ISmL 二氧六环中，冷却后在冰水浴环境下滴加到NH2-PEG-NH2的水溶液中。再在室温下搅拌6h。之后调节溶液的pH值至11，通过旋转蒸发除去溶剂，剩下的固体用过量的二氯甲烷溶解，通过过滤除去不溶物，将溶液滴至2 °C的冷こ醚中，真空干燥箱干燥。
[0027](3)叔丁氧基酰胺基聚乙二醇-聚乳酸(B0C-PEG-PLA)的制备
取Ig上面得到的BOC-PEG-NH2和12.5g丙交酯混合均匀，加入聚合管中，真空封闭聚合管聚合，在130°C反应42h。将得到的产物用二氯甲烷溶解，后滴加到2°C冷甲醇中，析出的产物放到真空干燥箱中干燥，备用。
(4)端氨基聚乙二醇-聚乳酸(NH2-PEG-PLA)的制备
取制得的B0C-PEG-PLA 1.0g置于25mL 二氯甲烷中，滴入1.5 mL的三氟こ酸，室温下搅拌5h，然后滴入-20°C的冷甲醇中，析出产物放到真空干燥箱中干燥。
[0028](5)叶酸-聚乙二醇-聚乳酸(FA-PEG-PLA)的制备
取1.5g叶酸溶于20mL的二甲基亚砜(DMSO)中，N2保护下室温避光反应12h，得到活化的叶酸。称取8gNH2-PEG-PLA和Ig活化的叶酸溶于38mL 二氯甲烷中混合均匀，在N2的保护下于室温避光搅拌18h，然后滤出不溶物，旋转蒸发浓缩溶液，然后滴加到2°C冷甲醇中，析出黄色固体放到真空干燥箱中干燥，最終得到FA-PEG-PLA共聚物。
[0029](6)将1.5gFA-PEG-PLA共聚物和0.2g阿霉素溶于IOmL 二甲基甲酰胺中，不断地搅拌至溶解。
[0030](7)将溶液移至透析袋(截留分子量选用4000)中，用蒸馏水透析30h，每3h换ー次蒸馏水。
[0031](8)将透析袋中的胶束溶液高速离心，抽滤除杂，除去未包埋的药物，冷冻干燥得包裹阿霉素的叶酸-聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物胶束，干燥器中保存。
[0032]对该实施例制得的包裹阿霉素的叶酸-聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物胶束进行药物释放检測，24h前释药速度快，释药量约占总药量的35.7%。168h后释药量约占总药量的53.2%。近似于零级释放。突释效应小，表现出良好的缓释性能。
[0033]实施案例3:
包裹卡佩他滨的叶酸-聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物胶束的制备:
(I)双氨基聚乙二醇(NH2-PEG-NH2)的制备
取25g聚乙二醇-4000溶于50mL的二氯甲烷溶液中，加入1.786g三こ胺，于(TC下滴加含8.33g对甲苯磺酰氯的21mL的二氯甲烷溶液，在室温反应8h。旋转蒸发溶液，然后滴至无水こ醚中。经过抽滤得到聚乙二醇-对甲苯磺酸酯的粗品，再经过反复的溶解沉淀去除多余的对甲苯磺酰氯，放真空干燥箱中干燥60h，得到聚乙二醇-对甲苯磺酸酯纯品。
[0034]将得到的聚乙二醇-对甲苯磺酸酯纯品IOg和15mL体积分数为30%氨水置于耐压容器中，140°C下密闭反应6h，冷却至室温，用二氯甲烷萃取。在有机层中加入氢氧化钠调节PH至9，搅拌3h后静置，分出有机层，水洗至中性，蒸干后得到双氨基聚乙二醇。[0035](2)单氨基聚乙二醇叔丁酯(BOC-PEG-NH2)的合成
取6g上面得到的NH2-PEG-NH2溶于20mL的0.3M的NaHCO3的水溶液中，调节pH为9，在室温下搅拌2h。取0.6g 二碳酸二叔丁酯溶于20mL 二氧六环中，冷却后在冰水浴环境下滴加到NH2-PEG-NH2的水溶液中。再在室温下搅拌8h。之后调节溶液的pH值至11，通过旋转蒸发除去溶剂，剩下的固体用过量的二氯甲烷溶解，通过过滤除去不溶物，将溶液滴至4°C冷こ醚中，真空干燥箱干燥。
[0036](3)叔丁氧基酰胺基聚乙二醇-聚乳酸(B0C-PEG-PLA)的制备
取Ig上面得到的BOC-PEG-NH2和15g丙交酯混合均匀，加入聚合管中，真空封闭聚合管聚合，在140°C反应36h。将得到的产物用二氯甲烷溶解，后滴加到4°C冷甲醇中，析出的产物放到真空干燥箱中干燥，备用。
[0037](4)端氨基聚乙二醇-聚乳酸(NH2-PEG-PLA)的制备
取制得的B0C-PEG-PLA 1.5g置于30mL 二氯甲烷中，滴入2mL的三氟こ酸，室温下搅拌6h，然后滴入-200C的冷甲醇中，析出产物放到真空干燥箱中干燥。
[0038](5)叶酸-聚乙二醇-聚乳酸(FA-PEG-PLA)的制备
取2g叶酸溶于20mL的二甲基亚砜(DMSO)中，N2保护下室温避光反应12h，得到活化的叶酸。称取IOgNH2-PEG-PLA和Ig活化的叶酸溶于50mL 二氯甲烷中，混合均匀，在N2的保护下于室温避光搅拌24h，然后滤出不溶物，旋转蒸发浓缩溶液，然后滴加到4°C冷甲醇中，析出黄色固体放到真空干燥箱中干燥，最終得到FA-PEG-PLA共聚物。
[0039](6)将2g`FA-PEG-PLA共聚物和0.2g疏水性抗癌药物卡佩他滨溶于IOmL 二甲基甲酰胺中，不断地搅拌至溶解。
[0040](7)将溶液移至透析袋(截留分子量选用4000)中，用蒸馏水透析36h，每4h换ー次蒸馏水。
[0041](8)将透析袋中的胶束溶液高速离心，抽滤除杂，除去未包埋的药物，冷冻干燥得包裹阿霉素的叶酸-聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物胶束，干燥器中保存。
[0042]对该实施例制得的包裹阿霉素的叶酸-聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物胶束进行药物释放检測，24h前释药速度快，释药量约占总药量的31.2%。168h后释药量约占总药量的48.7%。近似于零级释放。突释效应小，表现出良好的缓释性能。
【权利要求】
1.一种包裹疏水性抗癌药物的叶酸-聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物胶束，其特征在干，由疏水性抗癌药物包埋在两亲型嵌段共聚物的疏水端即聚乳酸端中，且在聚乙二醇-4000端接上小分子的靶向剂而得。
2.根据权利要求1所述的ー种包裹疏水性抗癌药物的叶酸-聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物胶束，其特征在于，所述疏水性抗癌药物包括阿霉素或卡佩他滨；所述两亲型嵌段共聚物为聚乙二醇-聚乳酸；所述靶向剂为叶酸。
3.一种包裹疏水性抗癌药物的叶酸-聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物胶束的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)双氨基聚乙二醇(NH2-PEG-NH2)的制备: 取15~25g聚乙二醇-4000溶于3(T50ml的二氯甲烷溶液中，加入三こ胺，其中三こ胺和聚乙二醇-4000的质量比为1:12~14，于(T4°C下滴加浓度为0.3^0.4g/mL的对甲苯磺酰氯的二氯甲烷溶液，其中对甲苯磺酰氯与聚乙二醇-4000的质量比为1:2~3，在室温反应6^!，旋转蒸发溶液，然后滴至无水こ醚中，经过抽滤得到聚乙二醇-对甲苯磺酸酯的粗品，再经过反复的溶解沉淀去除多余的对甲苯磺酰氯，于真空干燥箱中干燥48飞0h，得到聚乙二醇-对甲苯磺酸酯纯品； 将得到的聚乙二醇-对甲苯磺酸酯纯品和体积分数为25~30%氨水置于耐压容器中，其中聚乙二醇-对甲苯磺酸酯在氨水中的浓度为0.5^0.66g/mL，在100~140で下密闭反应6~8h，冷却至室温，用二氯甲烷萃取，在有机层中加入氢氧化钠调节pH至8.5~9，搅拌疒3h后静置，分出有机层，水洗至中性，蒸干后得到双氨基聚乙二醇(NH2-PEG-NH2); (2)单氨基聚乙二醇叔丁酯(BOC-PEG-NH2)的合成: 将步骤(1)得到的NH2-PEG-NH2溶于0.r0.3M的NaHCO3水溶液中，其中NH2-PEG-NH2在NaHCO3水溶液的浓度为0.2^0.3g/mL,调节pH为8.5^9,在室温下搅拌f 2h ;将二碳酸二叔丁酯溶于15~20mL 二氧六环中，其中二碳酸二叔丁酯与NH2-PEG-NH2的质量比为0.07~0.1:1，冷却后在冰水浴环境下滴加到NH2-PEG-NH2的水溶液中，再在室温下搅拌2lh，后调节溶液的pH值至l(Tll，通过旋转蒸发除去溶剤，剩下的固体用过量的二氯甲烷溶解，通过过滤除去不溶物，将溶液滴至(T4°C的冷こ醚中，真空干燥箱中干燥，得到单氨基聚乙二醇叔丁酯(BOC-PEG-NH2)； (3)叔丁氧基酰胺-聚乙二醇-聚乳酸(B0C-PEG-PLA)的制备: 将步骤(2)制得的BOC-PEG-NH2和丙交酯按质量比为l:l(Tl5混合均匀，加入聚合管中，真空封闭聚合管聚合，在12(T140°C反应36~48h，将得到的产物用二氯甲烷溶解，后滴加到(T4°C的冷甲醇中，析出的产物放到真空干燥箱中干燥，得到叔丁氧基酰胺基-こ二醇-聚乳酸(B0C-PEG-PLA)，备用； (4)端氨基聚乙二醇-聚乳酸(NH2-PEG-PLA)的制备: 将制得的叔丁氧基酰胺基-聚乙二醇-聚乳酸(B0C-PEG-PLA)置于2(T30 mL 二氯甲烷中，其中B0C-PEG-PLA在二氯甲烷中的浓度为0.04~0.05g/mL，滴入I~2 mL的三氟こ酸，室温下搅拌2飞h，然后滴入-2(T0°C的冷甲醇中，析出产物放到真空干燥箱中干燥； (5)叶酸-聚乙二醇-聚乳酸(FA-PEG-PLA)的制备: 将叶酸溶于二甲基亚砜(DMSO)中，其中叶酸在二甲基亚砜(DMSO)的浓度为0.05^0.lg/mL, N2保护下室温避光反应12tTl8h，得到活化叶酸；将制得的NH2-PEG-PLA和活化叶酸溶于二氯甲烷中，其中NH2-PEG-PLA和叶酸质量比为6^10:1，NH2-PEG-PLA和活化叶酸在二氯甲烷的浓度为0.2^0.3g/mL,混合均匀，在N2的保护下于室温避光搅拌12~24h，然后滤出不溶物，旋转蒸发浓缩溶液，然后滴加到(T4°C的冷甲醇中，析出产物放到真空干燥箱中干燥，得到叶酸-聚乙二醇-聚乳酸(FA-PEG-PLA)共聚物； (6)将FA-PEG-PLA共聚物和疏水性抗癌药物溶于二甲基甲酰胺中，其中FA-PEG-PLA共聚物和疏水性抗癌药物的质量比5~10:1，FA-PEG-PLA共聚物和疏水性抗癌药物在二甲基甲酰胺中的浓度为0.12^2.2g/mL，不断地搅拌至溶解； (7)将溶液移至透析袋中，用蒸馏水透析24~36h，毎:T4h换一次蒸馏水； (8)将透析袋中的胶束溶液高速离心，抽滤除杂，除去未包埋的药物，冷冻干燥得包裹阿霉素的叶酸-聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物胶束，干燥器中保存。
4.根据权利要求3所述的ー种包裹疏水性抗癌药物的叶酸-聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物胶束的制备方法，其特征在于，步骤(6)中所述疏水性抗癌药物包括阿霉素或卡佩他滨。
5.根据权利要求3所述的ー种包裹疏水性抗癌药物的叶酸-聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物胶束的制备方法，其 特征在于，步骤(7)中所述透析袋的截留分子量(MwCO)低于聚合物分子量，分子量选用3500 4000。
【文档编号】A61K31/7068GK103520731SQ201310448501
【公开日】2014年1月22日 申请日期:2013年9月27日 优先权日:2013年9月27日
【发明者】魏坤, 魏诗琪, 邹芬 申请人:华南理工大学