大兴安岭野生泽漆总黄酮的新型制备方法
【专利摘要】本发明属于天然有机化学领域，涉及一种从大兴安岭野生泽漆里提取总黄酮的新方法，特别是涉及一种利用超高压(离子液体作为溶剂)提取，聚酰胺藕联大孔树脂吸附，高速逆流色谱分离纯化总黄酮的新方法。本发明优点：1、离子液体与超高压结合，具有提取更快、更高效的优势。并且工艺简便易行，有效成分提取充分，生物碱含量高。2、聚酰胺藕联大孔树脂吸附纯化技术，能很好的富集总生物碱，进一步纯化有效成分。树脂易处理、分离速度快、费用低，可以工业化使用。3、高速逆流色谱技术具有操作灵活、高效、分离速度快、制备量大、费用低等优点，并且可以工业化使用。本发明利用上述技术所得总黄酮含量高，纯度高达98.3％。
【专利说明】大兴安岭野生泽漆总黄酮的新型制备方法
【技术领域】:
[0001]本发明属于天然有机化学领域，涉及一种从大兴安岭野生泽漆里提取总黄酮的新方法，特别是涉及一种利用超高压(离子液体作为溶剂)提取，聚酰胺藕联大孔树脂吸附，高速逆流色谱分离纯化总黄酮的新方法。
【背景技术】:
[0002]泽漆，别名五朵云、五风草，一年生或二年生草本。高10~30cm，无毛或仅分枝略具疏毛，基部紫红色，上部淡绿色。叶互生；倒卵形或匙形，长I~3cm，宽0.7~1cm，先端微凹，边缘中部以上有细锯齿，无柄。蒴果球形，直径约3mm，3裂，光滑。种子褐色，卵形，长约2_，有明显凸起网纹，具白色半圆形种阜。含有黄酮类化合物槲皮素_3，5- 二半乳糖甙，泽漆皂甙、泽漆醇。泽漆辛、苦、微寒，有毒；有利尿消肿、化痰散结、解毒杀虫之功效。中医及临床常用其治疗腹水、水肿、肺结核、痰多喘咳、癣疮等。
[0003]国内一般用有机溶剂提取法提取总黄酮，常用甲醇、乙醇为溶剂。近年来也有采用微波辅助离子液体法提取总黄酮，用大孔树脂进行纯化的报道。传统方法提取总黄酮需要几小时至十几小时，操作温度高且得率低，能耗大。
[0004]本发明的不同之处在于主要采用超高压技术(离子液体作为溶剂)提取，聚酰胺藕联大孔树脂吸附，再用高速逆流色谱分离纯化。通过以上技术提取、纯化的总黄酮具有较强的抗氧化能力， 产品不仅得率高，而且纯度高，采用HPLC法进行检测，含量最高可达98.3%。
【发明内容】
:
[0005]本发明优点:提取快捷、产品纯度高，大大提高了提取速度，同时极大提高总黄酮有效成分含量，克服了常规提取纯度低、得率低的缺点。
[0006]为实现上述目的，本发明采用的技术方案是:
[0007]—种采用超高压提取技术(离子液体作为溶剂)，聚酰胺藕联大孔树脂吸附，再用高速逆流色谱分离纯化，得到高纯度总黄酮的新方法，其步骤如下:
[0008](I)超高压提取:泽漆全草切断，以不同浓度离子液体溶液为溶剂，在一定料液t匕、适当超高压力下处理几分钟；
[0009](2)精滤处理:采用聚四氟乙烯膜，过滤精度0.1y m，在一定温度和压力下精滤处理；
[0010](3)聚酰胺树脂吸附及洗脱:
[0011]采用一定目数的聚酰胺粉末，控制上样液浓度，上样液体积，室温下以一定流速吸附饱和；解吸时先除杂，再用一定浓度的乙醇溶液解吸，控制流速，收集洗脱液，检测总黄酮
含量;
[0012](4)大孔树脂二次吸附及洗脱:
[0013]选用不同型号的大孔树脂，控制上样液质量浓度，上样速率；先用2BV去离子水冲洗树脂，再用不同浓度的乙醇溶液，以一定流速洗脱，收集洗脱液，检测总黄酮含量；
[0014](5)真空冷冻干燥:收集总黄酮溶液，在适当温度、干燥压力下冷冻干燥；
[0015](6)分相:称取总黄酮提取物，选择HSCCC溶剂系统，按比例将各种溶剂加入分液漏斗中，震荡使溶液充分混合，放置过夜。分相平衡后分出上相和下相；
[0016](7)HSCCC分离纯化:以溶剂系统的上相为固定相，下相为流动相，调整转速，以一定流速泵入流动相，分离总黄酮提取物；
[0017](8)检测:采用高效液相色谱法，紫外检测器在一定波长进行检测，泽漆总黄酮纯度为95%以上。
【具体实施方式】:
[0018]实施案例1:
[0019]一种采用超高压提取技术(离子液体作为溶剂)，聚酰胺藕联大孔树脂吸附，再用高速逆流色谱分离纯化，得到高纯度总黄酮的新方法，其步骤如下:
[0020](I)超高压提取:1kg泽漆全草切断，以50%浓度的1-辛基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐溶液为溶剂，料液比1:8，200MPA压力下处理4min ；
[0021](2)精滤处理:收集提取液，采用聚四氟乙烯膜，过滤精度0.1 ii m，在60°C，0.2MPa压力下精滤处理；
[0022](3)聚酰胺树脂吸附及洗脱:
[0023]采用80目的聚酰胺粉末，上样液浓度控制在0.5mg / mL,上样液体积2BV，室温下以2BV / h流速吸附饱和；解吸时先`用2BV水除杂，再用75%乙醇解吸，洗脱体积为4BV，流速2BV / h，收集洗脱液。经测定，总黄酮纯度为72.36% ；
[0024](4)大孔树脂二次吸附及洗脱:
[0025]接着用DM130大孔树脂二次吸附纯化，上样液质量浓度为3mg / ml,上样速率2BV / h，上样体积4BV / h;洗脱时先用2BV去离子水冲洗树脂，再用80%浓度的乙醇溶液，以IBV / h流速洗脱，洗脱体积为5BV ;收集洗脱液，经测定，总黄酮纯度为81.29% ；
[0026](5)真空冷冻干燥:收集总黄酮溶液，在预冻温度_15°C，工作压力20Pa，升华温度55°C，解析温度60°C下冷冻干燥；
[0027](6)分相:称取总黄酮提取物300mg，采用乙酸乙酯-甲醇-水(4:1:3) HSCCC溶剂系统，按比例将各种溶剂加入分液漏斗中，震荡使溶液充分混合，放置过夜。分相平衡后分出上相和下相；
[0028](7)HSCCC分离纯化:以溶剂系统的上相为固定相，下相为流动相，调整转速700r / min,以2.0mL / min流速泵入流动相,分离总黄酮提取物；
[0029](8)检测:采用高效液相色谱法，紫外检测器进行检测，总黄酮纯度为97.7%。
[0030]实施案例2:
[0031]-种采用超高压提取技术(离子液体作为溶剂)，聚酰胺藕联大孔树脂吸附，再用高速逆流色谱分离纯化，得到高纯度总黄酮的新方法，其步骤如下:
[0032](I)超高压提取:2kg泽漆全草切断，以60%浓度的1- 丁基-3-甲基咪唑溴盐溶液为溶剂，料液比1:10，300MPA压力下处理3min ；
[0033](2)精滤处理:收集提取液，采用聚四氟乙烯膜，过滤精度0.liim，在65°C，0.3MPa压力下精滤处理；
[0034](3)聚酰胺树脂吸附及洗脱:
[0035]采用100目的聚酰胺粉末，上样液浓度控制在1.5mg / mL,上样液体积3BV，室温下以3BV / h流速吸附饱和；解吸时先用3BV水除杂，再用80%乙醇解吸，洗脱体积为5BV，流速3BV / h，收集洗脱液。经测定，总黄酮纯度为73.65% ；
[0036](4)大孔树脂二次吸附及洗脱:
[0037]接着用D312大孔树脂二次吸附纯化，上样液质量浓度为4mg / ml，上样速率3BV / h，上样体积5BV / h;洗脱时先用3BV去离子水冲洗树脂，再用90%浓度的乙醇溶液，以2BV / h流速洗脱，洗脱体积为6BV，收集洗脱液，经测定，总黄酮纯度为80.17%，；
[0038](5)真空冷冻干燥:收集总黄酮溶液，在预冻温度_20°C，工作压力25Pa，升华温度50°C，解析温度65°C下冷冻干燥；
[0039](6)分相:称取总黄酮提取物200mg，采用正己烷-醋酸乙酯-乙醇-水(5:3:2:
4)HSCCC溶剂系统，按比例将各种溶剂加入分液漏斗中，震荡使溶液充分混合，放置过夜。分相平衡后分出上相和下相；
[0040](7)HSCCC分离纯化:以溶剂系统的上相为固定相，下相为流动相，调整转速800r / min,以3.0mL / min流速泵入流动相,分离总黄酮提取物；
[0041](8)检测:采用 高效液相色谱法，紫外检测器进行检测，总黄酮纯度为97.1%。
[0042]实施案例3:
[0043]一种采用超高压提取技术(离子液体作为溶剂)，聚酰胺藕联大孔树脂吸附，再用高速逆流色谱分离纯化，得到高纯度总黄酮的新方法，其步骤如下:
[0044](I)超高压提取:5kg泽漆全草切断，以70%浓度的1-羟乙基-3-甲基六氟磷酸盐溶液为溶剂，料液比1:12，400MPA压力下处理2min ；
[0045](2)精滤处理:收集提取液，采用聚四氟乙烯膜，过滤精度0.1 ii m，在60°C，0.4MPa压力下精滤处理；
[0046](3)聚酰胺树脂吸附及洗脱:
[0047]采用200目的聚酰胺粉末，上样液浓度控制在1.0mg / mL,上样液体积2BV，室温下以4BV / h流速吸附饱和；解吸时先用4BV水除杂，再用85%乙醇解吸，洗脱体积为6BV，流速4BV / h，收集洗脱液。经测定，总黄酮纯度为74.4% ；
[0048](4)大孔树脂二次吸附及洗脱:
[0049]接着用DlOl大孔树脂二次吸附纯化，上样液质量浓度为4.5mg / ml，上样速率4BV / h ;上样体积6BV / h ;洗脱时先用2BV去离子水冲洗树脂，再用85%浓度的乙醇溶液，以3BV / h流速洗脱，洗脱体积7BV,收集洗脱液，经测定，总黄酮纯度为82.93%,；
[0050](5)真空冷冻干燥:收集总黄酮溶液，在预冻温度_25°C，工作压力30Pa，升华温度50°C，解析温度60°C下冷冻干燥；
[0051](6)分相:称取总黄酮提取物200mg，采用氯仿-甲醇-丁醇-水(4:3:2: I) HSCCC溶剂系统，按比例将各种溶剂加入分液漏斗中，震荡使溶液充分混合，放置过夜。分相平衡后分出上相和下相；
[0052](7)HSCCC分离纯化:以溶剂系统的上相为固定相，下相为流动相，调整转速850r / min,以2.0mL / min流速泵入流动相,分离总黄酮提取物；[0053] (8)检测:采用高效液相色谱法，紫外检测器进行检测，总黄酮纯度为98.3%。
【权利要求】
1.一种采用超高压提取技术(离子液体作为溶剂)，聚酰胺藕联大孔树脂吸附，再用高速逆流色谱分离纯化，得到高纯度总黄酮的新方法，其步骤如下: (1)超高压提取:泽漆全草切断，以不同浓度离子液体溶液为溶剂，在一定料液比、适当超高压力下处理几分钟； (2)精滤处理:采用聚四氟乙烯膜，过滤精度0.1y m，在一定温度和压力下精滤处理； (3)聚酰胺树脂吸附及洗脱: 采用一定目数的聚酰胺粉末，控制上样液浓度，上样液体积，室温下以一定流速吸附饱和；解吸时先除杂，再用一定浓度的乙醇溶液解吸，控制流速，收集洗脱液，检测总黄酮含量; (4)大孔树脂二次吸附及洗脱: 选用不同型号的大孔树脂，控制上样液质量浓度，上样速率；先用2BV去离子水冲洗树月旨，再用不同浓度的乙醇溶液，以一定流速洗脱，收集洗脱液，检测总黄酮含量； (5)真空冷冻干燥:收集总黄酮溶液，在适当温度、干燥压力下冷冻干燥；` (6)分相:称取总黄酮提取物，选择HSCCC溶剂系统，按比例将各种溶剂加入分液漏斗中，震荡使溶液充分混合，放置过夜。分相平衡后分出上相和下相； (7)HSCCC分离纯化:以溶剂系统的上相为固定相，下相为流动相，调整转速，以一定流速泵入流动相，分离总黄酮提取物； (8)检测:采用高效液相色谱法，紫外检测器在一定波长进行检测，泽漆总黄酮纯度为95%以上。
2.根据权利要求1所述的采用超高压提取技术(离子液体作为溶剂)，聚酰胺藕联大孔树脂吸附，再用高速逆流色谱分离纯化，得到高纯度总黄酮的新方法，其特征是:在所述的步骤(1)中，离子液体为1-辛基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐、1-丁基-3-甲基咪唑溴盐、1-羟乙基-3-甲基六氟磷酸盐中的任意一种，体积浓度为50-70%，料液比1:8-12，超高压力为200-400MPA，处理时间2-4min。
3.根据权利要求2所述的超高压提取技术(离子液体作为溶剂)，聚酰胺藕联大孔树脂吸附，再用高速逆流色谱分离纯化，得到高纯度总黄酮的新方法，其特征是:在所述的步骤(3)中，聚酰胺树脂为80-200目，上样液浓度控制在0.5-1.5mg / mL，上样液体积2-3BV，室温下以2-4BV / h流速吸附饱和；解析时除杂水2-4BV，乙醇解析浓度为75-85%，洗脱体积 4-6BV，流速 2-4BV / h。
4.根据权利要求3所述的超高压提取技术(离子液体作为溶剂)，聚酰胺藕联大孔树脂吸附，再用高速逆流色谱分离纯化，得到高纯度总黄酮的新方法，其特征是:在所述的步骤(4)中，大孔树脂为D312、DM130、D101中的任意一种;上样液质量浓度为3_4.5mg / ml,上样速率2-4BV / h，上样体积4-6BV / h ;洗脱时乙醇溶液浓度为80-90 %，洗脱流速为1-3BV / h，洗脱体积为5-7BV。
5.根据权利要求4所述的超高压提取技术(离子液体作为溶剂)，聚酰胺藕联大孔树脂吸附，再用高速逆流色谱分离纯化，得到高纯度总黄酮的新方法，其特征是:在所述的步骤(5)中，总黄酮溶液预冻温度为_15°C至_25°C，工作压力20-30Pa，升华温度50-55°C，解析温度60-65 °C。
6.根据权利要求5所述的超高压提取技术(离子液体作为溶剂)，聚酰胺藕联大孔树脂吸附，再用高速逆流色谱分离纯化，得到高纯度总黄酮的新方法，其特征是:在所述的步骤(6)中，离子液体为乙酸乙酯-甲醇-水(4:1:3)、正己烷-醋酸乙酯-乙醇-水(5:3:2:4)、氯仿-甲醇-丁醇-水(4:3:2:1)中的任意一种。
7.根据权利要求6所述的超高压提取技术(离子液体作为溶剂)，聚酰胺藕联大孔树脂吸附，再用高速逆流色谱分离纯化，得到高纯度总黄酮的新方法，其特征是:在所述的步骤(7)中，转速 700-850r / min，流速为 2.0-3.0mL / min。
【文档编号】A61K36/47GK103623034SQ201310631036
【公开日】2014年3月12日 申请日期:2013年11月27日 优先权日:2013年11月27日
【发明者】张亚红, 曲晓颖, 李为海 申请人:大兴安岭嘉迪欧营养原料有限公司