制剂注入器的制造方法

制剂注入器的制造方法
【专利摘要】本发明提供一种可以容易地提高制剂的治疗效果的制剂注入器。该制剂注入器具备：外针(10)，其形成为具有前端侧开口(15)及基端侧开口(16)的直管状，且在前端侧具有基准穿刺部(12)；和内针(20)，其可装卸地插入外针(10)内，且在前端侧具有周边穿刺部(22)，内针(20)构成为能够通过基部侧的进退操作，使周边穿刺部(22)从前端侧开口(15)出没，在从外针(10)拔出内针(20)的状态下，能够从前端侧开口(15)注入从基端侧开口(16)供给的制剂，其中，外针(10)以周边穿刺部(22)向夹着包含轴线的平面与基准穿刺部(12)相反的一侧突出的方式导引内针(20)。
【专利说明】制剂注入器

【技术领域】
[0001]本发明涉及用于向患者的体内注入制剂的制剂注入器，更详细而言，涉及可以刺激体内提高制剂的治疗效果的制剂注入器。

【背景技术】
[0002]作为现有的制剂注入器，例如已知有专利文献I公开的药剂注入导管。该药剂注入导管中，前端具有注入针的内管可滑动地插入外管内。内管形成有药剂注入管腔，使内管的注入针从外管突出，穿刺病变部位，可以注入药剂。
[0003]现有技术文献
[0004]专利文献
[0005]专利文献1:日本特开2001 - 104487号公报


【发明内容】

[0006]上述现有的药剂注入导管可进行局部的穿刺及药剂注入，另一方面，因在体内给予的刺激不充分，所以在提高治疗效果方面具有改良的余地。
[0007]在此，本发明的目的在于，提供一种可以容易地提高制剂的治疗效果的制剂注入器。
[0008]本发明的所述目的通过以下的制剂注入器实现，该制剂注入器具备:外针，其形成为具有前端侧开口和基端侧开口的直管状，且在前端侧具有基准穿刺部；和内针，其可装卸地插入所述外针内，且在前端侧具有周边穿刺部，所述内针构成为，能够通过基部侧的进退操作，使所述周边穿刺部从所述前端侧开口出没，在从所述外针拔出所述内针的状态下，能够从所述前端侧开口注入从所述基端侧开口供给的制剂，其中，所述外针以所述周边穿刺部向夹着包含轴线的平面与所述基准穿刺部相反的一侧突出的方式导引所述内针。
[0009]在该制剂注入器中，优选所述基准穿刺部的穿刺方向与所述外针的轴线平行，优选所述周边穿刺部随着从所述前端侧开口的推进，远离所述轴线。
[0010]优选所述内针具备限制从所述前端侧开口的突出长度的卡止部。在该构成中，优选所述卡止部由从基端侧朝向前端侧渐渐缩径的锥形部构成，优选与所述前端侧开口的周缘卡止。
[0011]优选所述前端侧开口以中心相对于所述外针的中心偏心的方式形成于在所述外针的前端侧形成的倾斜面，优选所述基准穿刺部的前端在正面观察时，配置于夹着所述外针的中心与所述前端侧开口的中心相反的一侧。
[0012]所述外针在基部侧具备可识别所述周边穿刺部相对于所述基准穿刺部的位置的标记部。
[0013]在上述的各制剂注入器中，优选所述外针能够插入将骨彼此接合的关节的间隙，能够在通过所述基准穿刺部穿刺一方的骨的软骨的状态下，通过所述周边穿刺部穿刺另一方的骨的软骨。
[0014]根据本发明，可以提供可以容易地提高制剂的治疗效果的制剂注入器。

【专利附图】

【附图说明】
[0015]图1是本发明的一个实施方式的制剂注入器的平面图；
[0016]图2是图1所示的制剂注入器的外针的主要部分立体图；
[0017]图3是表示图1所示的制剂注入器的使用状态的主要部分截面图；
[0018]图4是用于说明使用了图1所示的制剂注入器的治疗方法的一例的概略图；
[0019]图5是本发明的其它实施方式的制剂注入器的主要部分截面图。

【具体实施方式】
[0020]以下，参照附图对本发明的实施方式进行说明。图1是本发明的一个实施方式的制剂注入器的平面图。制剂注入器I具备外针10和可装卸地插入外针10的内针20，图1中分开表不外针10和内针20。
[0021]外针10具备由不锈钢等金属、聚乙烯等合成树脂等构成的挠性主体11，在主体11的前端侧设置有尖锐的基准穿刺部12。主体11是在前端侧及基端侧分别具有前端侧开口15及基端侧开口 16的直管。主体11的基端侧设置有筒状的安装部13。在安装部13可以通过螺合等安装供给制剂等的注射器(未图示)的前端部。这样构成的外针10可从前端侧开口 15喷出从基端侧开口 16供给的液态的制剂及清洗水等，可以进行制剂的注入及外针10的清洗等。
[0022]图2是从正面上方观察图1所示的外针10的前端侧的立体图。如图1及图2所示，外针10的前端面形成为倾斜面14，在该倾斜面14形成有前端侧开口 15。前端侧开口15的中心Cl相对于外针10的轴线通过的中心C2偏心，前端侧开口 15在比倾斜面14的中心C2靠上部开口。基准穿刺部12的前端12a夹着外针10的中心C2位于前端侧开口 15的中心Cl的相反侧，以从倾斜面14的下部突出的方式设置。基准穿刺部12也可以代替使其从倾斜面14突出，而将倾斜面14的下部自身作为基准穿刺部12。在外针10的安装部13，为了能够在外针10的基部侧识别基准穿刺部12及前端侧开口 15的周向的位置，而在上部设置有标记部13a。
[0023]如图1所示，内针20与外针10的主体11 一样，具备由金属、合成树脂等材料构成的挠性的主体21。主体21是实心的棒材。主体21的前端侧形成有从基端侧朝向前端侧渐渐缩径的锥形部26，在锥形部26的前端形成有尖锐的周边穿刺部22。在主体21的基部侧设置有把持部23。内针20通过将前端侧插入外针10的基端侧开口 16，握住把持部23进行进退操作，可以使周边穿刺部22从前端侧开口 15进退。
[0024]具备上述构成的制剂注入器I如果将内针20插入外针10，如图3(a)箭头所示，以使周边穿刺部22从前端侧开口 15突出的方式使内针20推进时，如图3(b)所示，锥形部26的下部与前端侧开口 15的周缘抵接。如果使内针20进一步推进，则周边穿刺部22如图3(b)的箭头所示，以沿着前端侧开口 15的法线方向的方式改变方向，进一步从前端侧开口15突出。而且，如图3(c)所示，锥形部26的外周全部与前端侧开口 15卡止，内针20与外针10卡止。
[0025]本实施方式的制剂注入器I如图3(a)?(C)所示，以周边穿刺部22向夹着包含外针10的轴线L的横断面(与图3的纸面正交的平面)与基准穿刺部12相反一侧突出的方式在外针10的内部引导内针20，因此，与基准穿刺部12进行的穿刺同时，可以通过周边穿刺部22穿刺远离基准穿刺部12的穿刺位置的位置。因此，在注入制剂前，由于可以容易地刺激注入制剂的部位的周边，所以可以提高制剂的治疗效果。
[0026]图4是作为使用了本实施方式的制剂注入器I的治疗方法的一例，用于说明人体的膝关节的治疗方法的图。如图4所示，在构成的膝关节50的股骨51和胫骨52的间隙插入外针10的前端部，在通过基准穿刺部12穿刺胫骨52的软骨52a (或股骨51的软骨51a)的状态下，使内针20推进，通过周边穿刺部22穿刺股骨51的软骨51a(或胫骨52的软骨52a)。由此，刺激股骨51及胫骨52的软骨51a、52a。如果在将基准穿刺部12穿刺的状态下，使外针10转动，就可以通过周边穿刺部22迅速容易地穿刺基准穿刺部12的周边的其它部位。这样，通过基准穿刺部12穿刺股骨51及胫骨52的软骨51a、52a的多个位置，并且通过周边穿刺部22穿刺基准穿刺部12进行的各穿刺位置的周边多个位置，由此可以有效地刺激体内。之后，从外针10拔出内针20，将收纳制剂的注射器等安装在安装部13，从前端侧开口 15向膝关节50的间隙供给制剂，由此，通过制剂和体内刺激的协同效果，可以实现治疗效果的提闻。
[0027]本实施方式的制剂注入器I如图3(a)?(C)所示，基准穿刺部12的穿刺方向与外针10的轴线L平行，与之相对，周边穿刺部22随着从前端侧开口 15的推进而远离轴线L。根据这样的构成，通过周边穿刺部22可以容易地穿刺远离基准穿刺部12的穿刺位置的位置，由于通过周边穿刺部22可以扩大可穿刺的区域，所以可以更高效地进行体内刺激的给予。
[0028]本实施方式的制剂注入器I通过内针20的锥形部26与前端侧开口 15的周缘部卡止，限制突出长度，因此，在使外针10转动，并反复进行周边穿刺部22的进退的情况下，可以抑制周边穿刺部22过度推进，提供适度的刺激，可以高效且安全地进行穿刺。内针20从前端侧开口 15的突出长度根据制剂注入器I的使用用途适当设定即可。例如，在用于图4所示的膝关节治疗的情况下，在用基准穿刺部12穿刺股骨51及胫骨52的软骨51a、52a的一方的状态下，以可以用周边穿刺部22穿刺另一方的方式设定突出长度即可。在本实施方式中，如图3(c)所示，以基准穿刺部12的前端和处于最大突出位置的周边穿刺部22的前端存在于与外针10的轴线L正交的同一平面P上的方式设定内针20的突出长度。
[0029]本实施方式的制剂注入器I由于在外针10的基端侧设置有标记部13a，所以即使在将外针10的前端侧插入体内的状态下，也可以容易地通过标记部13a掌握周边穿刺部22相对于基准穿刺部12的位置。因此，可以高效地进行希望的穿刺作业。
[0030]在本实施方式中，前端侧开口 15形成于外针10的前端侧的倾斜面14上，但如图5(a)所示，也可以将前端侧开口 15形成于外针主体11的侧壁。该情况下，以导向部件18的导向面18a与内针20的前端侧相对向的方式将该导向部件18插入主体11的前端侧，由此，如图5(b)所示，内针20的前端侧沿着导向面18a导入前端侧开口 15，所以可以顺畅地进行内针20的推进。另外，在该构成中，代替将基准穿刺部12设置在外针10的主体11，也可以将其设置在导向部件18。另外，在图5中，与图1?图3同样的构成部分标注相同的符号。
[0031]另外，在本实施方式中，在内针20的前端侧形成锥形部26，锥形部26的周缘与前端侧开口 15的周缘卡止，由此限制内针20从前端侧开口 15的突出长度，但用于限制这样的突出长度的卡止部也不一定是锥形部26。例如，如图5(a)及(b)所示，构成为通过在内针20的基端侧固定环状部件261，通过内针20的推进，环状部件261与外针10的主体11的基端面卡止，由此，可将内针20的突出长度设定在希望的值。
[0032]本发明的制剂注入器如后所述，可以优选用于骨间接合部的治疗，但不限于该用途，也可以用于骨间接合部以外的源自中胚层的脏器(例如，真皮、肌肉、骨-软骨、性腺、输精管、输卵管、子宫、心包膜、胸膜、腹膜、心内膜、血管内膜等)的治疗。
[0033]作为注入膝关节等骨间接合部的制剂，也可使用透明质酸、类固醇等目前用于关节治疗的公知的制剂，但可以优选使用包含脂肪细胞的细胞制剂。
[0034]本发明的发明人发现，如果对申诉关节痛的患者注入脂肪细胞，则可早期缓解症状且持续其效果。另外，发现如果组合注入脂肪细胞和脂肪干细胞，则不仅缓解上述关节痛，而且关节内的骨组织及软骨组织可有效地再生。另外，发现在它们注入前，通过使用本发明的制剂注入器带给注入部位附近适度的刺激，治疗效果更好。即，通过使用本发明的制剂注入器，本发明可以提供下述方式的动物或人体的治疗方法。
[0035]项1.一种治疗方法，其通过使用本发明的制剂注入器穿刺目的部位，给疾患部位带来刺激后，在疾患部位注入包含脂肪细胞的细胞制剂。
[0036]项2.如项I所述的治疗方法，细胞制剂还包含中胚层系干细胞。
[0037]项3.如项2所述的治疗方法，所述中胚层系干细胞是脂肪干细胞。
[0038]项4.如项2或3所述的治疗方法，相对于I个脂肪细胞，中胚层系干细胞含I?10个。
[0039]项5.如项I?4中任一项所述的治疗方法，脂肪细胞是被Y射线照射过的细胞。
[0040]项6.如项I?5中任一项所述的治疗方法，疾患部位是骨间接合部。
[0041]项7.如项6所述的治疗方法，骨间接合部的疾患选自脊椎疾患、关节疾患、自身免疫疾患及骨坏死症中的任一种。
[0042]根据本发明的治疗方法，通过脂肪细胞及存在于脂肪细胞周边的ECM(细胞外基质)等改善关节等的滑动，可以早期缓解关节痛，在缓解骨间接合部等疾患引起的疼痛方面可以得到优异的效果。另外，例如，通过在椎间盘等注入细胞制剂，起到缓冲的作用，发挥使椎体活动更好地进行(改善)的效果。另外，细胞制剂对关节痛的缓解效果长期持续。
[0043]另外，如果上述细胞制剂包含脂肪细胞和中胚层系干细胞，则通过脂肪细胞缓解骨间接合部等疾患引起的疼痛，期间，促进由中胚层系干细胞带来的骨组织、软骨组织、软组织等关节内的组织再生。另外，通过组合使用脂肪细胞和中胚层系干细胞，不但缓解上述的疼痛，而且通过脂肪细胞的功能而在患部保持中胚层系干细胞，进一步促进中胚层系干细胞的生存效率及组织再生效率，因此，包含脂肪细胞和中胚层系干细胞的细胞制剂对骨间接合部等疾患的治疗更有效。
[0044]目前，在采用培养脂肪干细胞等中胚层系干细胞进行组织修复的方法的情况下，在培养等过程中有可能被污染(污染)，也可能在移植后引起感染症。然而，在用于本发明的治疗方法的细胞制剂中所含的脂肪细胞及中胚层系干细胞不经过细胞培养的工序，可从吸取的脂肪等直接分离浓缩，所以可以不与外界孔空气接触而制备得到。因此，不用担心感染症等。另外，用于本发明的治疗方法的细胞制剂通常使用由要求骨间接合部疾患治疗的患者本人提取的脂肪细胞及中胚层系干细胞制备，所以没有免疫排斥反应的问题，安全性闻。
[0045]1.细朐制剂
[0046]脂肪细胞(fat cell)是具有合成、贮存、排出脂肪的功能的，形成脂肪组织的细胞。另外，脂肪细胞因完全分化，所以不进行细胞分裂。脂肪细胞中存在白色脂肪细胞及褐色脂肪细胞，但在本发明中，即可以使用它们中任一种，也可以使用两者混合物。本发明中，脂肪细胞的来源没有特别地限定，例如，使用哺乳类脂肪细胞，优选使用灵长类的脂肪细胞，更优选使用人类脂肪细胞。本发明中，作为脂肪细胞，可以单独仅使用脂肪细胞，也可以使用存在于脂肪细胞周边的细胞外基质(extracellular matrix:ECM)与脂肪细胞的混合物。具体而言，本发明中，作为脂肪细胞，即可以原样使用所提取的脂肪组织，或者也可以使用从提取的脂肪组织去除细胞外基质的物质。
[0047]脂肪细胞从脂肪组织提取。作为脂肪组织的提取方法，没有特别限定，可以从目前公知的方法中适当选择，例如可以例举脂肪吸取、脂肪切除、除脂术等。由脂肪吸取进行的提取由于较容易且低侵袭，所以优选。从提取的脂肪得到脂肪细胞的方法没有特别地限定，优选列举下述2.细胞制剂的制备方法中记载的方法。
[0048]另外，用于本发明的细胞制剂还可以包含中胚层系干细胞。由于还包含中胚层系干细胞，所以可促进骨间接合部的组织再生，进一步提高细胞制剂的治疗效果。
[0049]在用于本发明的治疗方法的细胞制剂中所使用的中胚层系干细胞主要指分化为骨、软骨、心肌、脂肪等属于中胚层系的组织的细胞的中间干细胞。中胚层系干细胞的来源没有特别限定，例如，使用哺乳类的中胚层系干细胞，优选使用灵长类的中胚层系干细胞，更优选使用人类中胚层系干细胞。
[0050]作为中胚层系干细胞，具体而言，可以例示脂肪干细胞、骨髄干细胞、造血干细胞等，这些干细胞可以按照目前公知的方法，根据细胞的种类，从各组织得到。
[0051]在本发明中，作为中胚层系干细胞，优选可以例示脂肪干细胞。脂肪干细胞可以从脂肪组织提取。作为脂肪干细胞的供给源的脂肪组织，与上述的脂肪细胞一样，可以通过脂肪吸取、脂肪切除、除脂术等任一的方法提取，但从防止脂肪干细胞的流出及损伤，能够更安全地提取的观点出发，优选脂肪吸取。另外，从所提取的脂肪中得到脂肪干细胞的方法优选可以例举下述2.细胞制剂的制备方法中记载的方法。
[0052]在用于本发明的治疗方法的细胞制剂包含中胚层系干细胞的情况下，优选使用脂肪细胞和中胚层系干细胞混合的状态的细胞制剂。在用于本发明的治疗方法的细胞制剂包含中胚层系干细胞的情况下，作为细胞制剂中的中胚层系干细胞的含量，只要是能够得到骨间接合部的疾患的治疗效果的范围，就没有特别限定，认为中胚层系干细胞的含量越多，越能够得到更优异的治疗效果，例如，可以列举相对于I个脂肪细胞，中胚层系干细胞至少为I个以上，优选为5个以上，更优选为I?10个，进一步优选为5?10个。另外，在通过包含工序(Ic)及(2c)的下述方法(c)制备得到的细胞制剂的情况下，可以列举每ImL该细胞制剂，中胚层系干细胞通常10万个以上，优选为15万个以上，更优选为15?20万个。
[0053]在用于本发明的治疗方法的细胞制剂中，以自身移植为目的，通过使用来源于自己的脂肪细胞(及中胚层系干细胞)，不仅能够早期改善症状，而且还可以回避免疫排斥反应。但是，不限制使用来源于他人的脂肪细胞(及中胚层系干细胞)制备用于本发明的治疗方法的细胞制剂。在使用来源他人的细胞的情况下，优选对在移植前从他人提取的脂肪细胞(包含在脂肪细胞周边存在的细胞外基质(ECM))，进行例如Y射线照射等用于去除抗原性的处理。中胚层系干细胞通常是不具备免疫原性的细胞，但根据需要，也可以使用进行过上述处理的细胞。
[0054]作为用于本发明的治疗方法的细胞制剂的优选的一例，可以列举包含脂肪细胞和脂肪干细胞的细胞制剂。通常，脂肪组织中包含脂肪细胞和脂肪干细胞。因此，包含脂肪细胞和脂肪干细胞的细胞制剂即可以原样使用所提取的脂肪组织，也可以使用从所提取的脂肪组织去除杂质(例如，在脂肪提取时注入的麻醉液(所谓肿胀液(tumescent liquid))、老化的脂肪细胞、血液、组织液等)的制剂，从提取的脂肪组织中去除杂质和一部分脂肪细胞的制剂等。作为该细胞制剂的制备方法的优选的例子，可以列举后述的方法(a)?(C)。
[0055]另外，在用于本发明的治疗方法的细胞制剂中，根据需要，可以添加目前公知的药学上可接受的载体、赋形剂、消炎剂、镇痛剂、免疫抑制剂等。另外，也可以添加胶原蛋白、成纤维细胞、生长因子、增殖因子、细胞因子等。
[0056]用于本发明的治疗方法的细胞制剂的投入量只要是可以得到对骨间接合部的疾患的治疗效果的范围，就没有特别限定，可以根据投入部位的大小、疾患的部位、疾患的程度、患者的性別、体格等适当设定，例如，可以例举以脂肪细胞数换算，10万?400万个，优选20万?200万个，更优选20万?100万个。例如，在使用通过包含工序(Ic)及(2c)的下述方法(c)得到的细胞制剂的情况下，其投入量可以例举0.5?20mL，优选为I?10mL，更优选为I?5mL。例如，对于膝关节，可以投入细胞制剂I?20mL，优选I?10mL，更优选5?10mL，对于椎间盘，可以投入细胞制剂0.5?20mL，优选I?15mL，更优选I?2mL。
[0057]细胞制剂的投入使用本发明的制剂注入器，通过基准穿刺部穿刺骨间接合部的疾患部位(例如，关节腔、椎间盘(椎间圆盘)等)的附近位置等，并且通过周边穿刺部在基准穿刺部进行穿刺的位置的周边多个位置进行穿刺后进行。这样，穿刺目的部位，对疾患部位或其附近带来有效的刺激后，投入细胞制剂，由此可以提高治疗效果。穿刺的目的部位例如可以作为疾患部位及其附近部位，但不必限定于此，也可以是能够刺激疾患部位及其附近的其它位置。
[0058]用于本发明的治疗方法的细胞制剂对骨间接合部的疾患发挥优异的治疗效果。骨间接合部是指骨的连结部分，包含通过软骨或软骨和纤维性结缔组织的组合连接的软骨性连结、通过包含软骨及关节囊的滑膜连接的滑膜性连结、以及由纤维性结缔组织连接的纤维性的连结，但在本发明中，特别指通过软骨性连结及滑膜性连结连接的具有可动性的部分。作为骨间接合部，具体而言，可以例示脊椎关节、膝关节、足关节、足趾关节、股关节、手关节、肘关节、肩关节、手指关节、肩锁关节、骶髂关节等。另外，例如在膝关节的情况下，在上述骨间接合部还包含韧带、半月板等软组织，在脊椎关节的情况下，在上述骨间接合部还包含盘(椎间盘)等。
[0059]另外，骨间接合部的疾患可以例举突出(脱出)、变形、变性、炎症等，具体而言，可以例示椎间盘突出、变形性脊椎炎等脊椎疾患，变形性关节炎(包含变形性股关节炎、变形性膝关节炎等)、慢性关节炎等关节疾患，风湿性关节炎等自身免疫性疾患，膝关节特发性骨坏死症、股骨头坏死症等骨坏死症等，优选可以例举椎间盘突出、变形性关节炎、慢性关节炎、膝关节特发性骨坏死症、股骨头坏死症。
[0060]对具有这些疾患的患者投入细胞制剂时，也可以根据需要在以公知的方法进行处置后投入。例如，只要是椎间盘突出的情况，在以目前公知的方法去除脱出的椎间盘后，投入(注入)细胞制剂即可。通过细胞制剂所包含的脂肪细胞的作用，缓解由骨间接合部的疾患所引起的疼痛(关节痛)，另外，在包含中胚层系干细胞的情况下，通过该细胞的作用，骨间接合部的骨组织、软骨组织、软组织等再生。
[0061]2.细胞制剂的制备方法
[0062]在本发明中，可以提取脂肪细胞，根据需要进行分离、浓缩，作为细胞制剂制备。另夕卜，在制备包含脂肪细胞和中胚层系干细胞的细胞制剂的情况下，可以使用作为这些细胞的混合物提取的细胞制剂，也可以分别提取各细胞，之后，混合两者作为细胞制剂。例如，在中胚层系干细胞为脂肪干细胞的情况下，能够从与脂肪细胞相同的组织同时制备，很简便，因此优选从脂肪组织得到脂肪细胞和脂肪干细胞的混合物作为细胞制剂。另外，更简便地，也可以使用包含这些细胞的脂肪组织。
[0063]从脂肪组织制备细胞制剂时，作为优选的方法，可以例示下述方法(a)?(C)。但是，不限制从脂肪以外的组织制备细胞制剂，在从脂肪组织以外的组织(例如，血液、骨髄液、肌肉等)制备细胞制剂时，也可以基于下述方法，考虑细胞的种类及性质设定适当条件，制备细胞制剂。以下，对方法(a)?(C)分别详述。
[0064]方法(a)
[0065]制备用于本发明的治疗方法的细胞制剂的方法(a)包括:(Ia)从提取的脂肪去除液体部分，得到细胞部分的工序。
[0066]在此，提取的脂肪是指通过脂肪吸取、脂肪切除、除脂术等从脂肪组织提取的、月旨肪组织来源的细胞部分及液体部分的混合物。细胞部分包含脂肪细胞、脂肪干细胞及杂质(血细胞、死活细胞、老化细胞等)。另外，液体部分包含肿胀液、细胞组织液等。
[0067]就液体部分和细胞部分的分离而言，简便而言，可以通过静置所提取的脂肪，使细胞部分沉降而分离。液体部分的除去方法没有特别地限制，例如，可以例举倾析、吸取等。另夕卜，根据需要，也可以进行离心分离，过滤等。
[0068]就离心分离及过滤的条件而言，只要不损伤脂肪细胞及脂肪干细胞，且可以去除杂质，就没有特别限定，例如，可以例举以700?2500Xg进行I?15分钟的条件，优选以2000?2200 Xg进行5?10分钟的条件。
[0069]另外，如果是进行过滤的情况，则通过使提取的脂肪通过具有例如10?300 μ m、优选10?150 μ m、更优选10?100 μ m、进一步优选15?20 μ m的孔大小的网状过滤器，去除在提取血液、组织液、脂肪的部位投入的麻醉药(肿胀液)等，可以在过滤器上得到脂肪细胞及脂肪干细胞的混合物。另外，也可以在具备这种网状过滤器的容器中填充所提取的包含杂质的脂肪，供给离心分离。
[0070]这样，可以得到去除了液体部分的、包含脂肪细胞(包含细胞外基质)及脂肪干细胞的脂肪组织，可以将其作为细胞制剂。
[0071]方法(b)
[0072]在制备用于本发明的治疗方法的细胞制剂的方法(b)中，包含下述:
[0073](Ib)从提取的脂肪去除液体部分，得到细胞部分的工序；
[0074](2b)从上述工序(Ib)中得到的细胞部分的至少一部分离脂肪细胞和脂肪干细胞的工序。
[0075]在此，工序(Ib)如上述方法(Ia)所述。在工序(2b)，在制备包含脂肪细胞的细胞制剂时，可以将工序(Ib)中得到的细胞部分的全部提供给工序(2b)的处理，也可以仅使用分离的脂肪细胞。另外，在制备包含脂肪细胞和脂肪干细胞的细胞制剂的情况下，从在工序(Ib)得到的细胞部分的至少一部分、优选从一半量分离脂肪干细胞，再将添加于由工序(Ib)得到的细胞部分中，由此可以制备包含脂肪细胞和脂肪干细胞的细胞制剂。
[0076]在此,作为分尚脂肪干细胞的方法，例如可举出日本特表2005-519883号公报记载的方法。更具体而言，通过分解细胞间的结合可以容易地分离脂肪细胞和脂肪干细胞，所以在细胞部分添加蛋白质分解酶。作为蛋白质分解酶，可以例示胶原酶，胰蛋白酶，脂肪酶等，即可以单独使用选自它们中的一种，也可以组合使用两种以上。
[0077]作为从酶处理过的细胞部分分离脂肪细胞和脂肪干细胞的方法，没有特别限定，可以从目前公知的方法适当选择，例如，可以列举离心分离、过滤等。作为离心分离的条件，只要是能够不损伤脂肪细胞及脂肪干细胞而分离的方法，就没有特别限定，例如，可以例举以100?500Xg进行O?20分钟、优选以100?300Xg进行5?10分钟的条件。通过进行这种离心分离，脂肪干细胞作为沉淀物得到，上清液中脂肪细胞被浓缩。另外，在进行过滤的情况下，通过使细胞部分或其悬浮液通过具有10?100 μ m、优选10?50 μ m、更优选15?20μπι孔大小的网状过滤器，在过滤器上可以得到脂肪干细胞，在滤液中可以得到脂肪细胞。
[0078]优选酶处理过的脂肪细胞及脂肪干细胞在分离后进行清洗处理，清洗可以通过磷酸缓冲溶液(PBS)、生理盐水、林格液、右旋糖酐等进行。清洗处理可以根据需要重复多次，在清洗后回收细胞时，根据需要也可以进行离心分离。作为离心分离的条件，按照上述的从酶处理过的细胞部分分离脂肪细胞和脂肪干细胞时所采用的条件即可。
[0079]可以将在本工序(2b)分离的脂肪细胞清洗后，作为细胞制剂使用。使用以本方法(b)得到的脂肪细胞而获得的细胞制剂在骨间接合部的疾患所引起的疼痛的缓解方面发挥优异的效果。
[0080]另外，本方法(b)也可以包含工序(3b):在上述工序(2b)之后，混合在上述工序(Ib)得到的细胞部分、和在工序(2b)得到的脂肪干细胞。在本工序(3b)中，混合在工序(Ib)得到的细胞部分、和在工序(2b)得到的脂肪干细胞，可以得到包含脂肪细胞及脂肪干细胞的细胞制剂。这样制备的细胞制剂以高浓度包含脂肪干细胞，不仅对缓解骨间接合部的疾患所引起的疼痛有效，而且对于骨间接合部的组织再生发挥优异的效果。
[0081]方法(C)
[0082]制备用于本发明的治疗方法的细胞制剂的方法(C)包含下述:
[0083](Ic)从提取的脂肪去除液体部分，得到细胞部分的工序；以及
[0084](2c)从上述工序(Ic)中得到的细胞部分去除杂质，得到脂肪细胞及脂肪干细胞的浓缩物的工序。
[0085]在此，工序(Ic)如上述方法(Ia)所述。在工序(2c)，从细胞部分去除杂质进行浓缩。作为去除杂质及浓缩的方法，没有特别限定，可以从目前公知的方法适当选择，简便而言，通过使用例如日本特表2007-533396号公报记载的具备重量过滤器的注射器，去除从破坏的脂肪细胞游离的自由油、死活细胞、老化细胞等杂质，得到健康的脂肪细胞及脂肪干细胞的浓缩物。这种注射器可以在商业上获得，具体可以例示用于LIPOMAX-SC而制造的注射器(Medikan Corp.制，韩国首尔)。
[0086]更具体而言，在内部具备过滤器的注射器中填充所提取的脂肪，通过离心分离将脂肪分离为液体部分和细胞部分，再通过过滤器，分离自由油(排出油)。在此，分离的液体部分在工序(Ic)不完全分离，混合于细胞部分中。即，在注射器中，上层分离有自由油，中间层分离有脂肪细胞及脂肪干细胞的浓缩物，下层分离有液体部分，通过废弃中间层以外的部分，可以得到健康的脂肪细胞及脂肪干细胞的浓缩物，可以将其作为细胞制剂使用。这样得到的细胞制剂由于选择健康的脂肪细胞和脂肪干细胞浓缩，所以难以产生移植后的坏死、钙化等，在骨间接合部的疾患的症状的缓解、治疗中更为有效。
[0087]作为离心分离的条件，只要是不损伤脂肪细胞及脂肪干细胞而能够分离杂质与脂肪细胞及脂肪干细胞的条件，就没有特别限定，例如，可以例举以700?2500Xg进行I?15分钟、优选以2000?2200Xg进行5?10分钟的条件。
[0088]另外，过滤器的孔的大小只要是脂肪细胞及脂肪干细胞不通过且杂质可以通过的程度，就没有特别的限定，例如10?300 μ m，优选为10?150 μ m，更优选为10?100 μ m，进一步优选为15?20μπι。
[0089]另外，本方法(C)也可以包含工序(3V ):从在工序(2c)中得到的浓缩物的至少一部分分离脂肪细胞和脂肪干细胞，将所得到的脂肪干细胞与在上述工序(2c)中得到的浓缩物混合。脂肪干细胞的分离方法如上述方法(b)的工序(2b)所述。在本工序(3V )中，当使用蛋白质分解酶分离脂肪干细胞时，可以得到在工序(2c)中得到的浓缩物每Icc通常约70万个以上、优选约150万个以上、更优选约200万个以上的脂肪干细胞。经过本工序(3c')制备的细胞制剂不仅选择健康的脂肪细胞并将其浓缩，而且还以高浓度包含脂肪干细胞，所以对骨间接合部的疾患发挥更优异的治疗效果。
[0090]另外，可以将在本工序(3V )分离的脂肪细胞清洗后，作为细胞制剂使用。在此，所得到的脂肪细胞由于选择健康的脂肪细胞并将其浓缩，所以对于缓解骨间接合部的疾患所引起的疼痛发挥更优异的效果。
[0091]另外，本方法(C)也可以包含工序(3c〃 ):在上述工序(2c)之后，使得到的浓缩物中的脂肪细胞微细化，将微细化的脂肪细胞及脂肪干细胞作为混合物分离。脂肪细胞微细化可以通过在该【技术领域】通常采用的方法进行，没有特别限定，例如，根据需要，通过钻头等切割脂肪细胞后，分离微细化的脂肪细胞和脂肪干细胞的混合物。分离方法可以采用上述离心分离的条件。在进行本工序(3c〃 )时，也可以在上述工序(2c)之后，在将浓缩物填充在注射器中的状态下，直接供给脂肪细胞微细化及离心分离。离心分离后，由于在注射器中分离有自由油、微细化的脂肪细胞及脂肪干细胞的混合物，所以废弃自由油，可以得到微细化的脂肪细胞及脂肪干细胞的混合物。
[0092]通过经过这种分离工序，可以制备以高浓度含有微细的脂肪细胞和脂肪干细胞的细胞制剂。在此，微细的脂肪细胞是指具有可以通过26?30标准规格、优选18?30标准规格的注射针的程度的大小的脂肪细胞。在本工序(3")中，可以至少进行一次使脂肪细胞微细化的处理，优选进行I?数次，更优选进行I?2次。通过使脂肪细胞微细化，可以提高细胞制剂的每单位容积的脂肪干细胞的浓度，更加显著地发挥缓解骨间接合部的疾患所引起的疼痛的效果、骨间接合部内的组织再生效果。
[0093]另外，也可以包含工序(4c"):从在工序(3c")中得到的微细化的脂肪细胞和脂肪干细胞的混合物的至少一部分分离脂肪细胞和脂肪干细胞，将所得到的脂肪干细胞与在上述工序(2c)中得到的浓缩物混合。脂肪干细胞的分离的方法如上述方法(b)的工序(2b)所述。
[0094]可以将在本工序(4c")中分离脂肪干细胞而得到的脂肪细胞清洗后，作为用于本发明的治疗方法的包含脂肪细胞的细胞制剂使用。清洗可以通过与对上述的脂肪干细胞进行的清洗处理同样的方法进行。在此得到的脂肪细胞由于选择健康的微细化的脂肪细胞并将其浓缩，所以可以更加显著地发挥缓解骨间接合部的疾患所引起的疼痛的优异效果。
[0095]在本方法(C)中，通过使用日本特表2007-533396号公报记载的注射器，可以使细胞不与外界空气接触而实施全部工序。例如，在特表2007-533396号公报记载的注射器上安装套管等，填充由脂肪吸取所提取的脂肪，原样进行杂质的去除及浓缩处理等，可以得到细胞制剂。之后，在投入细胞制剂时，也可以将注射器与本发明的制剂注入器连接，向患部投入，因此，可以制备没有污染等问题的安全性高的细胞制剂。简便而言，也可以使用商业上可得到的试剂盒进行本方法(c)，这种试剂盒具体可以例示LIPOMAX-SC (MEDIKAN Corp.制)等。
[0096]通过以上的任一方法可以得到细胞制剂，但优选方法(b)或(C)，更优选方法(C)，进一步优选经过方法(c)的工序(3")或工序(4")制备的包含微细化的脂肪细胞的细胞制剂。经过方法(c)的工序(4")得到的包含微细化的脂肪细胞的细胞制剂去除了杂质，且以高浓度含有微细化的健康的脂肪细胞，对于骨间接合部的疾患的治疗(特别是疼痛的缓解)发挥显著的效果。经过方法(c)的工序(3")得到的包含微细化的脂肪细胞及脂肪干细胞的细胞制剂不仅含有微细化的健康的脂肪细胞，还以高浓度含有脂肪干细胞。这种细胞制剂对于骨间接合部的疾患可以发挥更显著优异的效果。
[0097]实施例
[0098]细胞制剂的制备
[0099]细胞制剂的制备使用LIPOMAX-SC (Medikan Corp.制，韩国首尔)试剂盒。在本细胞制剂的制备工序中，能够使细胞完全不与外界空气接触地进行。具体的方法如以下。
[0100]⑴使用注射器(LIPOMAX-SC用制造的注射器:Medikan Corp.制，韩国首尔)，从各被验者吸取脂肪。将包含提取的脂肪的注射器在室温(约25°C )静置约10分钟，分离为细胞部分和液体部分，废弃包含肿胀液的液体部分。以2200Xg对残留的细胞部分进行8分钟离心分离。通过离心分离，分离为上层(自由油)、中间层(脂肪细胞及脂肪干细胞)、下层(细胞组织液等液体部分)三层，所以，通过仅将中间层保留在注射器内而废弃上下层，得到脂肪细胞和脂肪干细胞的浓缩物。对该浓缩物进行Jelly Ring(Gelling)处理，进行比较大的脂肪细胞的微细化。Jelly Ring处理进行I?3次。在Jelly Ring中使用钻头(FillerGeller刀具:MEDIKAN社制)，切割脂肪细胞进行微细化，再以2200 X g进行5分钟离心分离，由此得到包含微细化的脂肪细胞和脂肪干细胞的混合物。将这样得到的混合物作为包含微细化的脂肪细胞和脂肪干细胞的细胞制剂在下述试验例I中使用。
[0101]另外，由于是对各患者来源的脂肪细胞及脂肪干细胞进行自身移植，因此，对各患者进行上述的操作。
[0102]试验例1.
[0103]对于变形性膝关节炎的2名女性，在膝关节注入通过上述工序(i)制备的包含微细化的脂肪细胞及脂肪干细胞的细胞制剂(5~10mL，包含约75万~200万个脂肪干细胞)。对于疾患部位、脂肪吸取的具体的部位、提取的脂肪量、细胞制剂的注入量、刺激注入部位附近的操作的有无，表示在以下的表1中。在以下的表1中，归纳了对于各被验者的处置、膝关节裂隙的测量结果、以及作为变形性膝关节炎的X射线所见的评价基准的Kellgren&Lawrence分类的评价结果。
[0104]给予注入部位的附近刺激的操作使用前端倾斜切开的针头，前后左右转动针头的前端，以穿刺时不给予过大的力的方式注意并穿刺疾患部位附近多个部位(从2个或3个部位到10个部位左右)，由此给予与使用本发明的制剂注入器的情况同等的刺激。
[0105][表 I]
[0106]

【权利要求】
1.一种制剂注入器，其特征在于，具备: 外针，其形成为具有前端侧开口和基端侧开口的直管状，且在前端侧具有基准穿刺部；和 内针，其可装卸地插入所述外针内，且在前端侧具有周边穿刺部， 所述内针构成为，能够通过基部侧的进退操作，使所述周边穿刺部从所述前端侧开口出没， 在从所述外针拔出所述内针的状态下，能够从所述前端侧开口注入从所述基端侧开口供给的制剂，其中， 所述外针以所述周边穿刺部向夹着包含轴线的平面与所述基准穿刺部相反的一侧突出的方式导引所述内针。
2.如权利要求1所述的制剂注入器，其特征在于: 所述基准穿刺部的穿刺方向与所述外针的轴线平行， 所述周边穿刺部随着从所述前端侧开口的推进，远离所述轴线。
3.如权利要求1或2所述的制剂注入器，其特征在于: 所述内针具备限制从所述前端侧开口的突出长度的卡止部。
4.如权利要求3所述的制剂注入器，其特征在于: 所述卡止部由从基端侧朝向前端侧渐渐缩径的锥形部构成，与所述前端侧开口的周缘卡止。
5.如权利要求1所述的制剂注入器，其特征在于: 所述前端侧开口以中心相对于所述外针的中心偏心的方式形成于在所述外针的前端侧形成的倾斜面， 所述基准穿刺部的前端在正面观察时，配置于夹着所述外针的中心与所述前端侧开口的中心相反的一侧。
6.如权利要求1所述的制剂注入器，其特征在于: 所述外针在基部侧具备可识别所述周边部穿刺部相对于所述基准穿刺部的位置的标记部。
7.如权利要求1所述的制剂注入器，其特征在于: 所述外针能够插入将骨彼此接合的关节的间隙，能够在通过所述基准穿刺部穿刺一方的骨的软骨的状态下，通过所述周边穿刺部穿刺另一方的骨的软骨。
【文档编号】A61M25/06GK104136066SQ201380010893
【公开日】2014年11月5日 申请日期:2013年2月22日 优先权日:2012年2月24日
【发明者】佐伯正典 申请人:佐伯正典