用于治疗周围血管疾病的组合物和方法
【专利摘要】本发明涉及用于治疗周围血管疾病(PVD)的组合物和方法。特别地，本发明提供了基于使用血管紧张素(1-7)肽或其功能性等价物、类似物或衍生物，血管紧张素(1-7)受体激动剂，ACE2和/或ACE2活化剂的用于治疗严重肢体缺血及相关疾病、病症或病况的组合物和方法。
【专利说明】用于治疗周围血管疾病的组合物和方法
[0001] 相关申请的夺叉引用
[0002] 本申请要求2012年2月10日提交的美国临时专利申请序号61/597,223和2012 年10月30日提交的美国临时专利申请序号61/720, 301的优先权，这两项申请的全部内容 均通过引用并入本申请。
[0003] 序列表
[0004] 本说明书涉及于2013年2月7日以文件名为"Sequence_Listing"的ASCII, txt 的电子形式提交的序列表。该.txt文件于2013年1月31日生成，大小为39KB。所述序列 表的全部内容通过引用并入本申请。
[0005] 背景
[0006] 周围血管疾病（PVD)通常的特征为心脏或脑以外的血管部分或完全阻塞，周围血 管疾病可能由动脉粥样硬化、炎症过程引起，结果导致狭窄、栓塞或血栓形成，以及其他疾 病。周围动脉疾病（PAD)是PVD的一种形式，其中存在流向各种内脏和/或肢体的动脉血 供部分或完全阻塞。PAD的风险因素包括血液胆固醇升高、糖尿病、吸烟、高血压、缺乏运动 和肥胖。据信在50岁以上的人士中约有5%患有PAD。PAD的症状取决于动脉阻塞的位置 和程度。PAD最常见的症状是间歇性跛行，表现为在行走时出现疼痛（通常在小腿）而在休 息时疼痛消失。随着时间的推移，PAD的严重程度增加，运动持续较短时间后就出现症状。 当PAD变得更加严重时，症状可以包括夜间疼痛和痉挛，足部或脚趾疼痛或刺痛，当将腿部 抬高时疼痛加重并且当将腿部垂下（例如在床沿外）时疼痛消失，以及溃疡不愈合。PAD最 终会达到严重肢体缺血（CLI)阶段，其特征通常为皮肤生疮（sore)不愈合、溃疡、坏疽和/ 或四肢感染。在很多情况下，可能需要截肢。
[0007] PVD(例如PAD)可以通过改变生活方式、药物、血管成形术和相关疗法或手术治 疗。尽管这些疗法缓解症状，并且甚至可以改善生存，但是其均不能逆转疾病过程并且直接 修复持久损伤。血管生成（angiogenesis)受损是缺血性疾病的特征之一。治疗性血管生 成的最确定的靶点是VEGF及其受体。然而，缓解缺血的临床试验是令人失望的。因此，对 PVD (例如PAD如CLI)或与受损的血管生成相关的其他疾病、病症或病况的治疗仍是主要的 尚未被满足的医疗需求。
[0008] 发明概沭
[0009] 除了其他以外，本发明提供了一种改进的和更有效的治疗周围血管疾病（PVD)如 严重肢体缺血（CLI)以及与血管生成受损相关的其他疾病、病症或病况的基于血管紧张素 (1-7)肽或其功能等价物、类似物或衍生物，血管紧张素（1-7)受体激动剂，ACE2和/或 ACE2活化剂的疗法。本发明部分地基于预料不到的发现，该发现是在动物后肢缺血模型 中给予称为血管紧张素（1-7)的短的七氨基酸肽能够有效地恢复血流，改善肢体功能和减 少缺血性截肢。这一发现特别令人惊讶，因为在本发明之前，据报道血管紧张素（1-7)通 过减少血管内皮生长因子-A而具有显著的抗血管生成活性，血管内皮生长因子-A是一 种主要的促血管生成蛋白（参见，Soto-Pantoja D.R?等，"Angiotensin-(1-7) inhibits tumor angiogenesis in human lung cancer xenografts with a reduction in vascular endothelial growth factor,"（血管紧张素（1-7)通过减少血管内皮生长因子在人肺癌 移植瘤中抑制肿瘤血管生成）Mol. Cancer Ther., 2009 ;8 (6): 1676-83)。然而，如在下述实 施例章节中所详细描述的，本申请发明人成功地证明了在动物后肢缺血模型中给予与天然 存在的血管紧张素（1-7)相同的具有7个氨基酸的血管紧张素肽能够有效地恢复血流，从 而改善肢体功能，减少组织坏死和缺血性截肢。因此，与此前的报道相反，本发明提供了一 种基于血管紧张素的疗法，所述疗法能够用于刺激治疗性的血管生成以及治疗严重肢体缺 血和与血管生成受损相关的其他疾病、病症或病况。
[0010] 因此，在一个方面，本发明提供了一种用于治疗周围血管疾病的方法，所述方法包 括如下步骤：向患有周围血管疾病的个体给予包含血管紧张素（1-7)肽的药物组合物，所 述周围血管疾病的特征为流向心脏和脑以外的一种或多种组织的血流被部分或完全阻塞， 其中所述血管紧张素（1-7)肽以治疗有效量给予，以使得周围血管疾病的至少一种症状或 特征在强度、严重程度或频率上降低或推迟发作。如本申请所使用的，术语"血管紧张素 (1-7)肽"指天然存在的血管紧张素（1-7)和天然存在的血管紧张素（1-7)的任意功能性 等价物、类似物或衍生物。如本申请所使用的，"肽"和"多肽"是可以互换使用的术语，指通 过肽键键合在一起的两个或更多个氨基酸。如本申请所使用的，术语"肽"和"多肽"包含 线形肽和环肽。
[0011] 在各种实施方式中，所述血管紧张素（1-7)肽包含天然存在的血管紧张素（1-7) 氨基酸序列 Aspi-ArgiValS-TyrklleiHise-ProYSEQ ID N0:1)。在一些实施方式中，所述 血管紧张素（1-7)肽是天然存在的血管紧张素（1-7)的功能性等价物。在某些实施方式中， 所述功能性等价物是线形肽。
[0012] 在一些实施方式中，线形肽含有分别包含在天然存在的血管紧张素（1-7)中出现 的7个氨基酸中的至少4、5或6个氨基酸的序列，在其中所述至少4、5或6个氨基酸分别 维持其在天然存在的血管紧张素（1-7)中出现的相对位置，并且各线形肽还具有促血管生 成活性。在各种实施方式中，所述至少4、5或6个氨基酸分别还保持其在天然存在的血管 紧张素（1-7)中出现的相对间距。
[0013] 在一些实施方式中，所述线形肽含有4-25个氨基酸（例如4-20、4-15、4-14、4-13、 4-12、4-11、4-10、4-9、4-8、4-7 个氨基酸）。
[0014] 在某些实施方式中，所述线形肽是所述天然存在的血管紧张素（1-7)的片段。在 各种实施方式中，所述线形肽含有在天然存在的血管紧张素（1-7)中的氨基酸取代、缺失 和/或插入。在某些实施方式中，所述线形肽具有氨基酸序列Aspi-Arg^NleS-Tyi^-Ile 5-!! is6-Pro7(SEQ ID N0:4)或氛基酸序列AspLArgS-Val^-Sei^-IleS-Hise-CysYSEQ ID N0:5)。
[0015] 在各种实施方式中，所述功能性等价物是环肽。在某些实施方式中，所述环肽包含 在氨基酸之间的连接。在一些实施方式中，所述连接位于与天然存在的血管紧张素（1-7) 中的Tyr 4和Pro7的位置对应的残基上。在某些实施方式中，所述连接是硫醚桥。在各种实 施方式中，所述环肽包含以其他方式（otherwise)与天然存在的血管紧张素（1-7)氨基酸 序列AspLArf-ValS-TyrklleiHise-ProYSEQ ID N0:1)相同的氨基酸序列，或者所述环肽 包含正亮氨酸（Nle)取代天然存在的血管紧张素（1-7)中Val3的位置。在一些实施方式 中，所述环肽是具有下式结构的4, 7-环化血管紧张素（1-7):
[0016]
【权利要求】
1. 一种治疗周围血管疾病的方法，所述方法包括如下步骤 向患有周围血管疾病的个体给予包含血管紧张素（1-7)肽的药物组合物，所述周围血 管疾病的特征为流向心脏和脑以外的一种或多种组织的血流被部分或完全阻塞，其中所述 血管紧张素（1-7)肽以治疗有效量给予，以使得周围血管疾病的至少一种症状或特征在强 度、严重程度或频率上降低或推迟发作。
2. 根据权利要求1所述的方法，其中所述血管紧张素（1-7)肽包含天然存在的血管紧 张素（1_7)氛基酸序列 Asp1-Arg2-Val3-Tyr4-Ile 5-His6-Pro7(SEQ ID NO: 1)。
3. 根据权利要求1所述的方法，其中所述血管紧张素（1-7)肽是天然存在的血管紧张 素（1-7)的功能性等价物。
4. 根据权利要求3所述的方法，其中所述功能性等价物是线形肽。
5. 根据权利要求4所述的方法，其中所述线形肽包含含有天然存在的血管紧张素 (1-7)中出现的7个氨基酸中的至少4个氨基酸的序列， 其中所述至少4个氨基酸保持其在天然存在的血管紧张素（1-7)中出现的相对位置， 而且其中所述线形肽具有促血管生成活性。
6. 根据权利要求4所述的方法，其中所述线形肽包含含有天然存在的血管紧张素 (1-7)中出现的7个氨基酸中的至少5个氨基酸的序列， 其中所述至少5个氨基酸保持其在天然存在的血管紧张素（1-7)中出现的相对位置， 而且其中所述线形肽具有促血管生成活性。
7. 根据权利要求4所述的方法，其中所述线形肽包含含有天然存在的血管紧张素 (1-7)中出现的7个氨基酸中的至少6个氨基酸的序列， 其中所述至少6个氨基酸保持其在天然存在的血管紧张素（1-7)中出现的相对位置， 而且其中所述线形肽具有促血管生成活性。
8. 根据权利要求5-7中任意一项所述的方法，其中所述至少4、5或6个氨基酸分别进 一步保持其在天然存在的血管紧张素（1-7)中出现的相对间距。
9. 根据权利要求4-8中任意一项所述的方法，其中所述线形肽包含4-25个氨基酸。
10. 根据权利要求4-9中任意一项所述的方法，其中所述线形肽是天然存在的血管紧 张素（1_7)的片段。
11. 根据权利要求4-9中任意一项所述的方法，其中所述线形肽包含在天然存在的血 管紧张素（1-7)中的氨基酸取代、缺失和/或插入。
12. 根据权利要求11所述的方法，其中所述线形肽具有氨基酸序列Asp1-Arg2-Nle 3-Ty T4-Ile5-His6-Pro7(SEQ ID N0:4)〇
13. 根据权利要求11所述的方法，其中所述线形肽具有氨基酸序列Asp1-Arg2-Val 3-Se T4-Ile5-His6-Cys 7(SEQ ID N0:5)〇
14. 根据权利要求3所述的方法，其中所述功能性等价物是环肽。
15. 根据权利要求14所述的方法，其中所述环肽包含在氨基酸之间的连接。
16. 根据权利要求15所述的方法，其中所述连接位于与天然存在的血管紧张素（1-7) 中的Tyr4和Pro 7的位置对应的残基上。
17. 根据权利要求15或16所述的方法，其中所述连接是硫醚桥。
18. 根据权利要求14-17中任意一项所述的方法，其中所述环肽包含以其他方式与天 然存在的血管紧张素（1-7)氨基酸序列 Asp1-Arg2-Val3-Tyr4-Ile 5-His6-Pro7 (SEQ ID NO: I) 相同的氨基酸序列。
19. 根据权利要求14-17中任意一项所述的方法，其中所述环肽包含正亮氨酸（Nle)取 代天然存在的血管紧张素（1-7)中Val 3的位置。
20. 根据权利要求19所述的方法，其中所述环肽是具有下式结构的4, 7-环化血管紧张 素（1_7):
21. 根据前述任意一项权利要求所述的方法，其中所述血管紧张素（1-7)肽包含一种 或多种化学修饰以增加蛋白酶抗性、血清稳定性和/或生物利用度。
22. 根据权利要求21所述的方法，其中所述一种或多种化学修饰包含聚乙二醇化。
23. 根据前述任意一项权利要求所述的方法，其中所述心脏和脑以外的一种或多种组 织包括个体的一个或多个肢体。
24. 根据前述任意一项权利要求所述的方法，其中所述周围血管疾病是周围动脉疾病。
25. 根据权利要求23所述的方法，其中所述周围动脉疾病是严重肢体缺血。
26. 根据前述任意一项权利要求所述的方法，其中所述周围血管疾病是急性缺血。
27. 根据权利要求1-25中任意一项所述的方法，其中所述周围血管疾病是慢性缺血。
28. 根据权利要求1-25中任意一项所述的方法，其中所述周围血管疾病是糖尿病性血 管病。
29. 根据权利要求28所述的方法，其中所述糖尿病性血管病是肾病。
30. 根据权利要求28所述的方法，其中所述糖尿病性血管病是神经病。
31. 根据前述任意一项权利要求所述的方法，其中所述血管紧张素（1-7)在心脏和脑 以外的一种或多种组织中诱导和/或增加血管生成和/或血管化。
32. 根据前述任意一项权利要求所述的方法，其中所述血管紧张素（1-7)在心脏和脑 以外的一种或多种组织中减少和/或推迟细胞死亡。
33. 根据权利要求32所述的方法，其中所述细胞死亡是凋亡。
34. 根据权利要求32所述的方法，其中所述细胞死亡是坏死。
35. 根据前述任意一项权利要求所述的方法，其中所述血管紧张素（1-7)在心脏和脑 以外的一种或多种组织中增加和/或增强细胞存活。
36. 根据前述任意一项权利要求所述的方法，其中所述治疗有效量的血管紧张素 (1-7)足以使流向心脏和脑以外的一种或多种组织的血流的部分或完全阻塞减少。
37. 根据前述任意一项权利要求所述的方法，其中所述治疗有效量的血管紧张素 (1-7)足以在心脏和脑以外的一种或多种组织中减少或推迟组织损伤。
38. 根据前述任意一项权利要求所述的方法，其中所述治疗有效量的血管紧张素足以 改善心脏和脑以外的一种或多种组织的功能。
39. 根据前述任意一项权利要求所述的方法，其中所述血管紧张素（1-7)通过胃肠外 给药。
40. 根据权利要求39所述的方法，其中所述胃肠外给药选自静脉内、皮内、吸入、透皮 (局部）、皮下和/或透粘膜给药。
41. 根据权利要求1-38中任意一项所述的方法，其中所述血管紧张素（1-7)通过口服 给药。
42. 根据权利要求41所述的方法，其中所述组合物还包含环糊精。
43. 根据前述任意一项权利要求所述的方法，其中所述血管紧张素（1-7)每两个月、每 个月、每三周、每两周、每周、每日给药或以可变间隔给药。
44. 根据前述任意一项权利要求所述的方法，所述方法还包括联合给予促血管生成剂 和血管紧张素（1-7)。
45. 根据前述任意一项权利要求所述的方法，所述方法还包括在心脏和脑以外的一种 或多种组织进行血管或血管内操作。
46. -种治疗周围血管疾病的方法，所述方法包括如下步骤 向患有周围血管疾病的个体给予包含血管紧张素转化酶2 (ACE2)的药物组合物，所述 周围血管疾病的特征为流向心脏和脑以外的一种或多种组织的血流被部分或完全阻塞。
47. -种治疗周围血管疾病的方法，所述方法包括如下步骤 向患有周围血管疾病的个体给予包含血管紧张素转化酶2(ACE2)活化剂的药物组合 物，所述周围血管疾病的特征为流向心脏和脑以外的一种或多种组织的血流被部分或完全 阻塞， 其中所述ACE2的活化剂是三氮脒（DIZE)和/或1-[(2_二甲基氨基）乙基氨 基]-4-(羟基甲基）-7- [ (4-甲基苯基）磺酰氧基]-9H-氧杂蒽-9-酮（XNT)。
48. -种治疗周围血管疾病的方法，所述方法包括如下步骤 向患有周围血管疾病的个体给予包含血管紧张素（1-7)受体激动剂的药物组合物，所 述周围血管疾病的特征为流向心脏和脑以外的一种或多种组织的血流被部分或完全阻塞， 其中所述血管紧张素（1-7)受体激动剂具有下式结构
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【文档编号】A61K45/00GK104394878SQ201380019053
【公开日】2015年3月4日 申请日期:2013年2月7日 优先权日:2012年2月10日
【发明者】R·弗兰克林 申请人:塔瑞克斯制药有限公司