多色的pH可激活的荧光纳米平台的制作方法

多色的pH可激活的荧光纳米平台的制作方法
【专利摘要】本发明涉及pH可调的、高度可激活的多色荧光纳米平台，以及在多个应用中使用所述纳米平台的方法，所述应用包括但不限于研究基本的细胞生理学过程，例如胞吞小泡中的pH调节、内体/溶酶体成熟以及pH对受体循环和亚细胞器运输的影响。
【专利说明】多色的pH可激活的灭光纳米平台
[0001] 本申请要求于2012年4月5日提交的美国临时申请序列号61/620, 774和于2013 年3月14日提交的美国非临时申请序列号13/827, 197的权益，其整体通过引用并入本文。
[0002] 发明背景
[0003] 本发明在国家卫生研究院授予的基金号ROl EB013149的政府支持下进行。政府 享有本发明的某些权利。 1.

【技术领域】
[0004] 本发明一般地涉及分子和细胞生物学、纳米技术和荧光传感器的领域。更特别地， 其涉及用于检测PH变化的纳米平台。 2.

【背景技术】
[0005] 由于荧光成像能够提供微观、中观和宏观水平的时空信息，所以其已成为研究活 细胞中的生物学分子、通路和过程的一种重要工具（参见例如，Tsien，R.Y. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2003,4, SS16 ；ffeissleder, R. , Nature2008,452, 580 ；Fernandez-Suarez, M., Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2008,9,929)。荧光报道分子大致可分为两类：内在表达的荧光蛋 白（例如，GFP)或外部施用的荧光探针（例如，合成染料）。通过靶蛋白的特异性标记以及 蛋白质功能的活细胞成像，荧光蛋白报道子已经很大地影响了基础生物科学的研究（参见 例如，Giepmans，B.N. G. Science 2006,312,217;Gross，S.，Cancer Cell 2005,7,5)。夕卜 部成像探针已被广泛用于多种细胞和动物成像研究。
[0006] 最近，响应于生理学刺激例如离子和氧化还原电位、酶促表达和pH的可激活成 像探针在探测细胞生理学过程中受到了相当大的关注（参见例如，de Silva，A.P.，Chem. Rev. 1997,97,1515 ； Zhang, J. , Nat. Rev. Mo I. Cell Biol. 2002,3,906 ；Lee, S. , Chem. Commun. 2008,4250 ；Kobayashi, H. ；Chem. Res. 2010,44,83 ；Lovell, J. F. , Chem. Rev. 2010, 110,2839 ;Ueno, T.，Nat. Methods 2011，8,642)。在这些刺激中，pH 作为一个重要的生 理学参数尤为突出，其在细胞内（PHi)环境和细胞外（pHe)环境二者中都起着关键作用 (Alberts, B. , Molecular Biology of the Cell ;第 5 版；Garland Science ：New York, 2008)。例如，真核细胞中细胞内区室（例如胞吞小泡）的pH受到小心控制，并且直接影 响许多过程，例如膜转运、受体循环、溶酶体降解以及病毒进入细胞（Maxfield，F. R.，Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2004,5,121 ；Izumi, H. , Cancer Treat. Rev. 2003, 29, 541 ；Nishi, T., Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2002, 3,94)。最近，异常调节的（desregulated) pH 被认为是癌症 的另一个特点，因为癌细胞表现出"逆转的" pH梯度，具有高于细胞外pH (pHe)之组成型升 高的胞质 pH(Webb，B. A.，Nat. Rev. Cancer 2011，11，671)。
[0007] 虽然已报道了多种pH敏感性荧光探针（Kobayashi，Η·，Chem.Rev.2010，110， 2620 ;Han，J.Y.，Chem. Rev. 2010,110, 2709)，但是其pH灵敏性主要来源于对荧光团具有 pH依赖性的光诱导电子转移（PeT)性质的可电离残基。这些荧光剂的一个潜在缺点是其 宽的 pH 响应（Δ pH ?2),如 Henderson-Hasselbalch 方程所述（Atkins，P.，Physical Chemistry ;Oxford University Press, 2009)。这种敏锐的pH响应缺乏使其难以检测酸性 胞内细胞器之间的细微pH差异（例如，早期内体与溶酶体之间< 1的pH差异）（Maxfield， F. R. , Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2004, 5,121 ；Casey, J. R. , Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2010, 11,50)或者实体瘤中的 pHe (6. 5-6. 9) (Webb, B. A.，Nat. Rev. Cancer 2011，11，671 ;Zhang， X.，J. Nucl. Med. 2010, 51，1167.)相对于正常组织环境（7. 4)的差异。此外，对于小分子染 料来说，同时控制PH转变点和发射波长（特别是在近IR的范围内）是困难的。最近对开 发pH敏感性突光纳米颗粒的尝试主要采用与小分子pH敏感性染料缀合的聚合物（Srikun， D. , J.Chem. Sci. 2011,2,1156 ；Benjaminsen, R. V., ACS Nano 2011,5,5864 ；Albertazzi, L.，J. Am. Chem. Soc. 2010,132,18158 ;Urano, Υ·，Nat. Med. 2009,15,104)，或者使用 pH 敏 感性接头与 pH 不敏感的染料缀合（Li, C.，Adv.Funct.Mater.2010,20,2222 ;Almutairi， A.，J. Am. Chem. Soc. 2007,130,444.)。这些纳米探针设计也产生了宽的pH响应并且缺乏微 调pH转变点的能力。


【发明内容】

[0008] 本发明的多个实施方案提供了 pH可调的、可高度激活的多色荧光纳米平台，以及 在多个应用中使用所述纳米平台的方法，所述应用包括但不限于，研究基本的细胞生理学 过程，例如胞吞小泡中的pH调节、内体/溶酶体成熟，以及pH对受体循环和亚细胞器运输 的影响。
[0009] 在一个实施方案中，本发明提供了 pH响应系统，其包含：第一纳米颗粒群，其中 所述第一纳米颗粒包含（i)含有亲水聚合物区段和疏水聚合物区段的第一嵌段共聚物以 及（ii)第一荧光染料，并且，其中所述第一纳米颗粒具有第一 PH转变点和第一发射光谱。 在一些实施方案中，所述pH响应系统还包含第二纳米颗粒群，其中所述第二纳米颗粒包含 (i)含有亲水聚合物区段和疏水聚合物区段的第二嵌段共聚物以及（ii)第二荧光染料，并 且，其中所述第二纳米颗粒具有与所述第一纳米颗粒的第一 PH转变点不同的第二pH转变 点，以及与所述第一纳米颗粒的第一发射光谱不同的第二发射光谱。在本发明的某些方面 中，所述PH响应系统还包含至少第三纳米颗粒群，其中第三纳米颗粒包含（i)含有亲水聚 合物区段和疏水聚合物区段的第三嵌段共聚物以及（ii)第三荧光染料，并且，其中所述第 三纳米颗粒具有与所述第一纳米颗粒和所述第二纳米颗粒的PH转变点不同的第三pH转变 点，以及与所述第一纳米颗粒和所述第二纳米颗粒的发射光谱不同的第三发射光谱。在一 些实施方案中，所述PH响应的系统还包含至少第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十或 更多纳米颗粒群。这些第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十或更多纳米颗粒各自将具有 与所述系统中其他纳米颗粒群的PH转变点不同的pH转变点，以及与所述系统中其他纳米 颗粒群的发射光谱不同的发射光谱。
[0010] 嵌段共聚物的亲水聚合物区段可为任意合适的亲水聚合物。这样的亲水聚合物的 实例包括但不限于：聚（氧化乙烯）（PEO)、聚（甲基丙烯酸磷脂酰胆碱）（MPC)和聚乙烯吡 咯烷酮（PVP)。
[0011] 嵌段共聚物的疏水聚合物区段可为任意合适的疏水聚合物。这样的疏水聚合物的 实例包含聚（2-(二异丙基氨基）乙基甲基丙烯酸酯）（roPA)、聚（2-(二丁基氨基）乙基甲 基丙烯酸酯）（roBA)、聚（2-(六亚甲基亚氨基）乙基甲基丙烯酸酯）（PC7A)、聚（2-(五亚 甲基亚氨基）乙基甲基丙烯酸酯）（PC6A)，以及PCT/US2011/00148或PCT/US2011/047497 中公开的亲水聚合物。
[0012] 如上所述，所述纳米颗粒包含嵌段共聚物和荧光染料。在本发明的某些方面 中，所述纳米颗粒通过使前体共聚物（precursor copolymer)与疏水单体（例如，DPA、 DBA、C7A、C6A)以及包含伯氨基团的单体如2-氨基乙基甲基丙烯酸酯（AMA)反应来合 成。前体共聚物的实例包括但不限于：PE0 114-b-P (DPA75-Co-AMA6)、MAL-PE0114_b-PDPA 88、 PE0114_b_P(C7A65_co _AMA6)、PE0114_b_P (DPA74-Co-AMA1)、PE0114 _b_P(DPA77_co_AMA 3)、 PE0114-b-P (DPA8ci-Co-AMA6)、PE0114-b-P (DBA65-Co-AMA3)、PE0114-b-P (C7A65-c〇-AMA3)和 PE0114-b-P(C6A81-c〇-AMA3)。在某些实施方案中，AMA上的自由氨基可与荧光染料分子缀合。
[0013] 本文采用的嵌段共聚物可为均聚物或杂聚物（heteropolymer)。均聚物可通过一 种类型的单体亚单元聚合来制备。杂聚物可通过对至少两种不同的单体亚单元聚合来制 备。如下文所示，使多种比例的具有不同疏水性的两种或更多种单体共聚使得其能够进一 步微调本文所公开的系统、纳米颗粒和胶束的pH响应。
[0014] 荧光染料的非限制性实例包括罗丹明、BODIPY?、香豆素和花菁（cyanine) 染料。突光染料的另一些非限制性实例包括：红色突光方酸菁染料（squarine dye) 例如2,4_双[1，3,3-三甲基-2-亚二氢吲哚基甲基]环丁烯二基鎗-1，3-二氧代 物、红外染料例如2,4_双[3,3_二甲基-2-(1Η-苯并[e]亚二氢吲哚基甲基）]环 丁烯二基鎗-1，3-二氧代物、或者橙色荧光方酸菁染料例如2,4-双[3, 5-二甲 基-2-吡咯基]环丁烯二基鎗-1，3-二氧代物、量子点、Alexa Fluor?染料、AMCA、 B〇mPY?630/650、B〇mPY?650/665、 BODIP\?-FL、BODlPY?-R6G、B()DIPY?-TMR、BODIPY⑨-T Cascade Blue?、CyDye?(包括但不限于 Cy2?、Cy3? 和 Cy5?)、6-FAM?、荧光素、HEX?、 6-JOE、Oregon Green?488、Oregon Greeil?500、Oregon Greeu?514、Pacific Blue?、REG、藻胆蛋白（包括但不限于藻红蛋白和别藻蓝蛋白）、Rhodamine Green?、 Rhodamine Red?、ROX?、TAMRA?、TET?、四甲基罗丹明或 Texas Red?。
[0015] 在本发明的某些方面中，荧光染料是pH不敏感的荧光染料。在一些实施方案中， 荧光染料具有小的斯托克斯位移（Stokes shift)。在一些具体的实施方案中，斯托克斯位 移为 Δ λ < 40nm。
[0016] 在一些实施方案中，纳米颗粒选自 PDBA-BDY、PDPA-TMR、PDPA-C55、PC7A-C55、 PC6A-C75和PDPA-CMN。如下文中更详细描述的，"BDY"是指BODIPY?.染料，"TMR"是指 罗丹明染料，"C55"和"C75"是指花菁染料，并且"CMN"是指香豆素染料。在一些特定的实 施方案中，所述 pH 响应系统包含 PDBA-BDY、PDPA-TMR、PC7A-C55、PC6A-C75 和 PDPA-CMN 中 的至少两种、三种或全部四种。如在下文中详细讨论的，所述纳米颗粒根据其环境的pH可 为单体形式或胶束形式。
[0017] pH响应系统可包含具有处于任何期望pH范围中之pH转变点的纳米颗粒。在一 些具体的实施方案中，所述系统包含两个或更多个纳米颗粒群，其中，每个纳米颗粒群的pH 转变点为口^12.0至口!111.0、口!14.0至口!19.0、口!14.8至口!18.4、口!15.0至口!18.0、口!15.0 至 pH 7· 4、ρΗ 5· 2 至 pH 7· 2、ρΗ 5· 7 至 pH 6· 9、ρΗ 5· 7 至 pH 6· 5 或 pH 6· 4 至 pH 8· 4。在 一个实施方案中，所述系统包含至少四个纳米颗粒群，其pH转变点为约pH 5. 2、6. 4、6. 9和 7. 2。在另一个实施方案中，所述系统包含至少四个纳米颗粒群，其pH转变点为约pH 5. 7、 5. 94、6. 18和6. 42。在另一些实施方案中，所述系统包含至少两个纳米颗粒群，其pH转变 点为约pH 6. 21和pH 6.9。
[0018] pH响应系统是可高度激活的。在本发明的某些方面中，所述系统中纳米颗粒的pH 响应（ApHich^)小于2个pH单位、小于1.5个pH单位、小于1个pH单位、小于0.75个 pH单位、小于0. 5个pH单位或小于0. 25个pH单位。
[0019] pH响应系统可包含具有在任何期望范围内的荧光发射光谱的纳米颗粒。在本发明 的某些方面中，所述纳米颗粒的突光发射光谱为400nm至850nm、500nm至820nm或506nm 至808nm。在一个实施方案中，所述系统包含至少四个纳米颗粒群，其发射光谱为506nm、 580nm、707nm 和 808nm。
[0020] 在一些实施方案中，纳米颗粒还包含祀向部分（targetng moiety)。在一些实施 方案中，靶向部分是抗体或抗体片段。在一些实施方案中，抗体是西妥昔单抗。在另一些实 施方案中，抗体片段是西妥昔单抗的Fab i片段。在另一些实施方案中，靶向部分结合细胞 表面受体。在另一些实施方案中，靶向部分是信号肽。在一些实施方案中，信号肽是环精氨 酸-甘氨酸-天冬氨酸肽（cRGD)肽。在一些实施方案中，信号肽将纳米颗粒导引至细胞 核、线粒体、内质网、叶绿体、质外体或过氧化物酶体。在另一些实施方案中，靶向部分是小 分子。在一些实施方案中，小分子是叶酸。
[0021] 在另一些实施方案中，本发明包括含有单一纳米颗粒的pH响应系统，所述单一纳 米颗粒具有嵌段共聚物和荧光染料，并且，其中所述纳米颗粒群具有如上文所述的PH转变 点和发射光谱。在一些实施方案中，单一纳米颗粒还包含祀向部分。
[0022] 在某些实施方案中，纳米平台利用在生理学范围（pH 5.0至7. 4)内具有可调pH 转变之超pH响应的基于四甲基罗丹明（TMR)的纳米颗粒。pH响应纳米颗粒的pH诱导的 胶束化可与荧光淬灭结合使用，从而提供pH响应的荧光纳米颗粒。例如，在一个实施方案 中，一系列多色的pH可激活荧光纳米颗粒提供了对发射波长（500nm至820nm)和pH转变 点（5.0至7. 4)的独立控制。在特别的实施方案中，具有不同发射波长的纳米颗粒具有敏 锐的pH响应（打开/关闭状态之间的Λ pH < 0. 25)。
[0023] 在另一个实施方案中，本发明提供了包含至少一个、两个、三个、四个、五个、六个、 七个、八个、九个、十个或更多个纳米颗粒群之系列的组合物，每个纳米颗粒群具有pH转变 点和发射光谱，其中所述系列中每一纳米颗粒群的PH转变点和发射光谱与系列中其他纳 米颗粒群的PH转变点和发射光谱不同。所述纳米颗粒包含嵌段共聚物和荧光染料。在一 个实施方案中，所述系列中纳米颗粒群的至少一种包含H)BA-BDY、H)PA-TMR、TOPA-C55、 PC7A-C55、PC6A-C75或H)PA-CMN。在另一个实施方案中，所述系列包含I3DBA-BDY纳米颗粒 群、PDPA-TMR纳米颗粒群和PC7A-C55纳米颗粒群。在一些实施方案中，纳米颗粒群包含含 有约10%马来酰亚胺的共聚物。如下文中详细讨论的，纳米颗粒根据其环境的pH可为单体 形式或胶束形式。
[0024] 所述系列中的纳米颗粒包含嵌段共聚物和荧光染料。在本发明的某些方面中，所 述纳米颗粒通过使前体共聚物与包含荧光染料的化合物反应来合成。前体共聚物的实例包 括但不限于：PE0114-b-P (DPA75-Co-AMA6)、MAL-PE0114-b-PDPA 88、PE0114-b-P(C7A65-c〇-AMA6)、 PE0114_b_P (DPA74-Co-AMA1) > PE0114_b_P (DPA77_co_AMA3) > PE0114_b_P (DPA8〇_co_AMA6) > PE0114-b-P (DBA65-Co-AMA3)、PE0114-b-P (C7A65-c〇-AMA3)和 PE0114-b-P (C6A81-c〇-AMA3)。
[0025] 在一些实施方案中，纳米颗粒由包含以下的共聚物或其可药用盐，及其立体异构 体、同位素变体和互变异构体来合成：
[0026] a)根据下式的聚合物：
[0027]

【权利要求】
1. 一种pH响应系统，其包含： 第一纳米颗粒群，其中所述第一纳米颗粒包含（i)含有亲水聚合物区段和疏水聚合物 区段的第一嵌段共聚物以及（ii)第一荧光染料，并且，其中所述第一纳米颗粒具有第一 PH 转变点和第一发射光谱；以及 第二纳米颗粒群，其中所述第二纳米颗粒包含（i)含有亲水聚合物区段和疏水聚合物 区段的第二嵌段共聚物以及（ii)第二荧光染料，并且，其中所述第二纳米颗粒具有与所述 第一纳米颗粒的第一 PH转变点不同的第二pH转变点和与所述第一纳米颗粒的第一发射光 谱不同的第二发射光谱。
2. 根据权利要求1所述的pH响应系统，其还包含至少第三纳米颗粒群，其中所述第三 纳米颗粒包含（i)含有亲水聚合物区段和疏水聚合物区段的第三嵌段共聚物以及（ii)第 三荧光染料，并且，其中所述第三纳米颗粒具有与所述第一纳米颗粒和所述第二纳米颗粒 的PH转变点不同的第三pH转变点以及与所述第一纳米颗粒和所述第二纳米颗粒的发射光 谱不同的第三发射光谱。
3. 根据权利要求2所述的pH响应系统，其还包含至少第四纳米颗粒群，其中所述第四 纳米颗粒包含（i)含有亲水聚合物区段和疏水聚合物区段的第四嵌段共聚物以及（ii)第 四荧光染料，并且，其中所述第四纳米颗粒具有与所述第一、第二和第三纳米颗粒的PH转 变点不同的第四PH转变点以及与所述第一、第二和第三纳米颗粒的发射光谱不同的第四 发射光谱。
4. 根据权利要求1所述的pH响应系统，其中所述亲水聚合物区段选自聚（氧化乙烯） (PEO)、聚（甲基丙烯酸磷脂酰胆碱）（MPC)和聚乙烯吡咯烷酮（PVP)。
5. 根据权利要求1所述的pH响应系统，其中所述疏水聚合物区段选自：聚（2-(二异 丙基氨基）乙基甲基丙烯酸酯）（H)PA)、聚（2-(二丁基氨基）乙基甲基丙烯酸酯）（TOBA)、 聚（2-(六亚甲基亚氨基）乙基甲基丙烯酸酯）（PC7A)和聚（2-(五亚甲基亚氨基）乙基甲 基丙烯酸酯）（PC6A)。
6. 根据权利要求1所述的pH响应系统，其中所述第一和第二纳米颗粒由 选自以下的前体共聚物合成：PE0114-b-P (DPA75-Co-AMA6)、MAL-PE0114_b-PDPA 88、 PE0114_b_P(C7A65_co _AMA6)、PE0114_b_P (DPA74-Co-AMA1)、PE0114 _b_P(DPA77_co_AMA 3)、 PE0114-b-P (DPA8ci-Co-AMA6)、PE0114-b-P (DBA65-Co-AMA3)、PE0114-b-P (C7A65-c〇-AMA3)和 PE0114_b_P (C6A81_co_AMA3)。
7. 根据权利要求I所述的pH响应系统，其中所述第一或第二纳米颗粒中至少一种的所 述嵌段共聚物包含至少两种具有不同疏水性的单体。
8. 根据权利要求1所述的pH响应系统，其中所述第一和第二纳米颗粒的所述嵌段共聚 物包含不同摩尔分数的至少两种具有不同疏水性的单体。
9. 根据权利要求1所述的pH响应系统，其中所述第一和第二荧光染料是pH不敏感的 荧光染料。
10. 根据权利要求1所述的PH响应系统，其中所述第一和第二荧光染料具有A入 < 40nm的斯托克斯位移。
11. 根据权利要求1所述的PH响应系统，其中所述第一和第二荧光染料选自罗丹明、 B0DIPY、香豆素和花菁染料。
12. 根据权利要求1所述的pH响应系统，其中所述第一和第二纳米颗粒选自 PDBA-BDY、PDPA-TMR、PDPA-C55、PC7A-C55、PC6A-C75 和 PDPA-CMN。
13. 根据权利要求3所述的pH响应系统，其中所述第一、第二、第三和第四纳米颗粒是 PDBA-BDY、PDPA-TMR、PC7A-C55 和 PC6A-C75。
14. 根据权利要求1所述的pH响应系统，其中所述第一和第二纳米颗粒的pH转变点为 pH 5. O 至 pH 8. 0。
15. 根据权利要求1所述的pH响应系统，其中所述第一和第二纳米颗粒的pH转变点为 pH 5. 7 至 pH 6. 9。
16. 根据权利要求14所述的pH响应系统，其中所述第一和第二纳米颗粒的pH转变点 选自 pH 5. 2、pH 6. 4、pH 6. 9 和 pH 7. 2。
17. 根据权利要求14所述的pH响应系统，其中所述第一和第二纳米颗粒的pH转变点 选自 pH 6. 42、pH 6. 18、pH 5. 94 和 pH 5. 7。
18. 根据权利要求14所述的pH响应系统，其中第一纳米颗粒群具有约pH 6. 21的pH 转变点，并且第二纳米颗粒群具有约pH 6. 9的pH转变点。
19. 根据权利要求1所述的pH响应系统，其中所述第一和第二纳米颗粒的发射光谱为 500nm 至 820nm。
20. 根据权利要求1所述的pH响应系统，其中所述第一和第二纳米颗粒的pH响应 (A PH1Q-9Q%)小于1个pH单位。
21. 根据权利要求1所述的pH响应系统，其中所述第一和第二纳米颗粒的pH响应 (A PH1Q_9Q%)小于 0? 25 个 pH 单位。
22. 根据权利要求1所述的pH响应系统，其中所述第一和第二纳米颗粒的至少一种还 包含祀向部分。
23. 根据权利要求22所述的pH响应系统，其中所述靶向部分是抗体或抗体片段。
24. 根据权利要求23所述的pH响应系统，其中所述抗体是西妥昔单抗。
25. 根据权利要求23所述的pH响应系统，其中所述抗体片段是西妥昔单抗的Fab'片 段。
26. 根据权利要求22所述的pH响应系统，其中所述靶向部分结合细胞表面受体。
27. 根据权利要求22所述的pH响应系统，其中所述靶向部分是信号肽。
28. 根据权利要求27所述的pH响应系统，其中所述信号肽是环精氨酸-甘氨酸-天冬 氨酸肽（cRGD)肽。
29. 根据权利要求27所述的pH响应系统，其中所述信号肽将所述纳米颗粒导引至细胞 核、线粒体、内质网、叶绿体、质外体或过氧化物酶体。
30. 根据权利要求22所述的pH响应系统，其中所述靶向部分是小分子。
31. 根据权利要求30所述的pH响应系统，其中所述小分子是叶酸。
32. -种pH响应系统，其包含具有嵌段共聚物和荧光染料的单一纳米颗粒，并且，其中 所述纳米颗粒群表现出PH转变点和发射光谱。
33. 根据权利要求32所述的pH响应系统，其还包含靶向部分。
34. -种组合物，其包含至少两个或三个纳米颗粒群的系列，每个纳米颗粒群都具有 PH转变点和发射光谱，其中所述系列中每一纳米颗粒群的pH转变点和发射光谱与所述系 列中其他纳米颗粒群的pH转变点和发射光谱不同。
35. 根据权利要求34所述的组合物，其中所述至少两个或三个纳米颗粒群由包含以下 的共聚物或其可药用盐，及其立体异构体、同位素变体和互变异构体合成：
R2a、R2b、R3a、R3b、R4a、R 4b、R4。、R4d和R5各自独立地为H或者经取代的或未经取代的烷基； R6a和R6b各自独立地为经取代的或未经取代的烷基、经取代的或未经取代的芳基或者 经取代的或未经取代的杂芳基；或者R6a和R6b与其所连接的N原子一起形成杂环； R7是包含染料的部分； 下标n为10至200的整数； 并且其中所述共聚物是无规共聚物。
36. 根据权利要求35所述的组合物，其中A1具有下式：
O
38. 根据权利要求34所述的组合物，其中所述至少两个或三个纳米颗粒群 由选自以下的前体共聚物合成：PE0114-b-P (DPA75-C0-AMA6)、MAL-PE0114_b-PDPA 88、 PE0114_b_P(C7A65_co _AMA6)、PE0114_b_P (DPA74-Co-AMA1)、PE0114 _b_P(DPA77_co_AMA 3)、 PE0114-b-P (DPA8ci-Co-AMA6)、PE0114-b-P (DBA65-Co-AMA3)、PE0114-b-P (C7A65-c〇-AMA3)和 PE0114_b_P (C6A81_co_AMA3)。
39. 根据权利要求34所述的组合物，其中所述至少两个或三个纳米颗粒群包含含有不 同摩尔分数的至少两种具有不同疏水性之单体的嵌段共聚物。
40. 根据权利要求34所述的组合物，其中所述纳米颗粒群包含约10 %的含马来酰亚胺 的共聚物。
41. 根据权利要求34所述的组合物，其中所述至少两个或三个纳米颗粒群包含具有 A入<40nm之斯托克斯位移的pH不敏感的荧光染料。
42. 根据权利要求34所述的组合物，其中所述至少两个或三个纳米颗粒群包含 PDBA-BDY、PDPA-TMR、PDPA-C55、PC7A-C55、PC6A-C75 或 PDPA-CMN。
43. 根据权利要求34所述的组合物，其包含TOBA-BDY纳米颗粒群、PDPA-TMR纳米颗粒 群和PC7A-C55纳米颗粒群。
44. 根据权利要求34所述的组合物，其中所述系列的pH转变点为pH 5. 0至pH 8. 0。
45. 根据权利要求34所述的组合物，其中所述系列的pH转变点为pH 5. 7至pH 6.9。
46. 根据权利要求34所述的组合物，其中第一纳米颗粒群具有约pH5. 2的pH转变点， 第二纳米颗粒群具有约pH 6. 4的pH转变点，并且第三纳米颗粒群具有约pH 6. 9的pH转 变点。
47. 根据权利要求34所述的组合物，其中第一纳米颗粒群具有约pH5. 7的pH转变点， 第二纳米颗粒群具有约pH 5. 94的pH转变点，第三纳米颗粒群具有约pH 6. 18的pH转变 点，并且第四纳米颗粒群具有约PH6. 42的pH转变点。
48. 根据权利要求34所述的组合物，其中第一纳米颗粒群具有约pH6. 21的pH转变点， 并且第二纳米颗粒群具有约pH 6. 9的pH转变点。
49. 根据权利要求34所述的组合物，其中所述系列的发射光谱为500nm至820nm。
50. 根据权利要求34所述的组合物，其中所述系列的pH响应（A pH1(l_9(l%)小于IfpH 单位。
51. 根据权利要求34所述的组合物，其中所述系列的pH响应（A PH1Q_9Q%)小于0.25 个pH单位。
52. 根据权利要求34所述的组合物，其中所述纳米颗粒的至少一种还包含靶向部分。
53. 根据权利要求52所述的组合物，其中所述靶向部分是抗体或抗体片段。
54. 根据权利要求53所述的组合物，其中所述抗体是西妥昔单抗。
55. 根据权利要求53所述的组合物，其中所述抗体片段是西妥昔单抗的Fab'片段。
56. 根据权利要求52所述的组合物，其中所述靶向部分结合细胞表面受体。
57. 根据权利要求52所述的组合物，其中所述靶向部分是信号肽。
58. 根据权利要求57所述的组合物，其中所述信号肽是cRGD肽。
59. 根据权利要求57所述的组合物，其中所述信号肽将所述纳米颗粒导引至细胞核、 线粒体、内质网、叶绿体、质外体或过氧化物酶体。
60. 根据权利要求52所述的组合物，其中所述靶向部分是小分子。
61. 根据权利要求60所述的组合物，其中所述小分子是叶酸。
62. -种组合物，其还包含具有共聚物和荧光染料的单一纳米颗粒，并且，其中纳米颗 粒群表现出pH转变点和发射光谱。
63. 根据权利要求62所述的组合物，其还包含靶向部分。
64. -种组合物，其包含至少两个或三个胶束群，其中每一胶束包含嵌段共聚物和荧光 染料，并且，其中每一胶束群具有与其他胶束群的PH转变点和发射光谱不同的转变点和发 射光谱。
65. 根据权利要求64所述的组合物，其中所述至少两个或三个胶束群由包含以下的共 聚物或其可药用盐，及其立体异构体、同位素变体和互变异构体合成： a) 根据下式的聚合物：
b) 根据式A1的单体；以及 c) 根据式A2的单体； 其中 A1和A2各自独立地选自
R2a、R2b、R3a、R3b、R4a、R 4b、R4。、R4d和R5各自独立地为H或者经取代的或未经取代的烷基； R6a和R6b各自独立地为经取代的或未经取代的烷基、经取代的或未经取代的芳基或者 经取代的或未经取代的杂芳基；或者R6a和R6b与其所连接的N原子一起形成杂环； R7是包含染料的部分； 下标n为10至200的整数； 并且其中所述共聚物是无规共聚物。
66. 根据权利要求65所述的组合物，其中A1具有下式：
67. 根据权利要求65所述的组合物，其中A2具有下式：
6 8.根据权利要求6 4所述的组合物，其中所述至少两个或三个胶束群由 选自以下的前体共聚物合成：PE0114-b-P (DPA75-Co-AMA6)、MAL-PE0114_b-PDPA 88、 PE0114_b_P(C7A65_co _AMA6)、PE0114_b_P (DPA74-Co-AMA1)、PE0114 _b_P(DPA77_co_AMA 3)、 PE0114-b-P (DPA8ci-Co-AMA6)、PE0114-b-P (DBA65-Co-AMA3)、PE0114-b-P (C7A65-c〇-AMA3)和 PE0114_b_P (C6A81_co_AMA3)。
69. 根据权利要求64所述的组合物，其中所述至少两个或三个胶束群中至少一个的嵌 段共聚物包含至少两种具有不同疏水性的单体。
70. 根据权利要求64所述的组合物，其中所述至少两个或三个胶束群的嵌段共聚物包 含不同摩尔分数的至少两种具有不同疏水性的单体。
71. 根据权利要求64所述的组合物，其中所述纳米颗粒群包含约10%的含马来酰亚胺 的共聚物。
72. 根据权利要求64所述的组合物，其中所述荧光染料是具有A A <40nm之斯托克 斯位移的pH不敏感的荧光染料。
73. 根据权利要求64所述的组合物，其中所述荧光染料具有A A <40nm的斯托克斯 位移。
74. 根据权利要求64所述的组合物，其中所述至少两个或三个胶束群包含TOBA-BDY、 PDPA-TMR、PDPA-C55、PC7A-C55、PC6A-C75 或 PDPA-CMN。
75. 根据权利要求64所述的组合物，其包含TOBA-BDY胶束群、TOPA-TMR胶束群和 PC7A-C55胶束群。
76. 根据权利要求64所述的组合物，其中所述至少两个或三个胶束群的pH转变点为 pH 5. 0 至 pH 8. 0。
77. 根据权利要求64所述的组合物，其中所述至少两个或三个胶束群的pH转变点为 pH 5. 7 至 pH 6. 9。
78. 根据权利要求64所述的组合物，其中第一胶束群具有约pH 5. 2的pH转变点，第二 胶束群具有约pH 6. 4的pH转变点，并且第三胶束群具有约pH 6. 9的pH转变点。
79. 根据权利要求64所述的组合物，其中第一胶束群具有约pH 5. 7的pH转变点，第二 胶束群具有约pH 5. 94的pH转变点，第三胶束群具有约pH 6. 18的pH转变点，并且第四胶 束群具有约pH 6. 42的pH转变点。
80. 根据权利要求64所述的组合物，其中第一胶束群具有约pH 6. 21的pH转变点，并 且第二胶束群具有约pH 6. 9的pH转变点。
81. 根据权利要求64所述的组合物，其中所述至少两个或三个胶束群的发射光谱为 500nm 至 820nm。
82. 根据权利要求64所述的组合物，其中所述至少两个或三个胶束群的pH响应 (A PH1Q-9Q%)小于1个pH单位。
83. 根据权利要求64所述的组合物，其中所述至少两个或三个胶束群的pH响应 (A PH1Q_9Q%)小于 0? 25 个 pH 单位。
84. 根据权利要求64所述的组合物，其中所述至少一个胶束群中的胶束还包含靶向部 分。
85. 根据权利要求84所述的组合物，其中所述靶向部分是抗体或抗体片段。
86. 根据权利要求85所述的组合物，其中所述抗体是西妥昔单抗。
87. 根据权利要求85所述的组合物，其中所述抗体片段是西妥昔单抗的Fab'片段。
88. 根据权利要求84所述的组合物，其中所述靶向部分结合细胞表面受体。
89. 根据权利要求84所述的组合物，其中所述靶向部分是信号肽。
90. 根据权利要求89所述的组合物，其中所述信号肽是cRGD肽。
91. 根据权利要求89所述的组合物，其中所述信号肽将所述纳米颗粒导引至细胞核、 线粒体、内质网、叶绿体、质外体或过氧化物酶体。
92. 根据权利要求84所述的组合物，其中所述靶向部分是小分子。
93. 根据权利要求92所述的组合物，其中所述小分子是叶酸。
94. 根据权利要求64所述的组合物，其还包含杂合胶束群，其中所述胶束包含多于一 种的嵌段共聚物和多于一种的荧光染料，并且，其中所述胶束群表现出多于一个的PH转变 点以及对每个PH转变点不同的发射光谱。
95. -种组合物，其包含具有共聚物和荧光染料的单一胶束，并且，其中胶束群具有pH 转变点和发射光谱。
96. 根据权利要求95所述的组合物，其还包含靶向部分。
97. -种监测细胞内pH的方法，其包括： (a) 使细胞与根据权利要求64至94中任一项所述的组合物接触；以及 (b) 检测所述细胞中的一种或更多种荧光信号，其中检测到荧光信号指示包含相应荧 光染料的胶束已达到其pH转变点并解离。
98. 根据权利要求97所述的方法，其还包括确定所述细胞中荧光信号的分布。
99. 根据权利要求98所述的方法，其中随时间确定所述突光信号的分布。
100. 根据权利要求99所述的方法，其中在至少一个小时至多至12个小时的时间中确 定所述荧光信号的分布。
101. 根据权利要求97所述的方法，其中所述检测步骤重复至少两次。
102. 根据权利要求97所述的方法，其中所述检测步骤重复至少五次。
103. 根据权利要求97所述的方法，其中所述荧光信号的发射波长为500nm至820nm。
104. 根据权利要求97所述的方法，其中所述细胞是癌细胞、存在溶酶体贮积缺陷的细 胞或有缺陷的神经细胞。
105. 根据权利要求97所述的方法，其还包括： (a) 使所述细胞与目的化合物接触； (b) 检测所述细胞中的一种或更多种荧光信号；以及 (c) 在所述细胞与所述目的化合物接触后确定所述细胞中的一种或更多种荧光信号是 否发生变化。
106. 根据权利要求105所述的方法，其中所述目的化合物是药物。
107. 根据权利要求105所述的方法，其中所述目的化合物是抗体、肽、蛋白质、核酸或 者小分子。
108. -种监测小泡运输的方法,其包括： (a) 使细胞与包含至少第一、第二和第三胶束群的组合物在使所述细胞通过胞吞摄取 所述组合物的条件下接触，其中每一胶束包含嵌段共聚物和荧光染料，并且，其中所述第一 胶束群具有约pH 6. 3至7. 4的pH转变点和第一荧光发射光谱，所述第二胶束群具有约pH 5. 9至6. 2的pH转变点和第二荧光发射光谱，并且所述第三胶束群具有约pH 5. 0至5. 8的 pH转变点和第三荧光发射光谱； (b) 检测所述细胞中与所述第一、第二和第三荧光发射光谱对应的第一荧光信号、第二 荧光信号和第三荧光信号，其中检测到所述第一荧光信号、第二荧光信号和第三荧光信号 指示包含相应荧光染料的胶束已达到其pH转变点并解离；以及 (c) 当检测到所述第一荧光信号时确定小泡是早期内体，当检测到所述第二荧光信号 时确定小泡是晚期内体/溶酶体，并且当检测到所述第三荧光信号时确定小泡是溶酶体。
109. 根据权利要求108所述的方法，其还包括确定所述细胞中所述第一、第二和第三 突光信号的分布。
110. 根据权利要求108所述的方法，其中在至少一个小时至多至12个小时的时间中确 定所述第一、第二和第三荧光信号的分布。
111. 根据权利要求108所述的方法，其中所述检测步骤重复至少两次。
112. 根据权利要求108所述的方法，其中所述检测步骤重复至少五次。
113. 根据权利要求108所述的方法，其中所述第一、第二和第三荧光信的发射波长为 500nm 至 820nm。
114. 一种监测细胞受体循环的方法，其包括： (a) 使细胞与包含至少第一和第二胶束群的组合物接触，其中每一胶束包含嵌段共聚 物、荧光染料和受体结合部分，并且，其中所述第一胶束群具有第一 pH转变点和第一荧光 发射光谱，并且所述第二胶束群具有与所述第一 PH转变点和所述第一发射光谱不同的第 二pH转变点和第二荧光发射光谱； (b) 检测所述细胞中或其表面上与所述至少第一和第二荧光发射光谱对应的至少第一 和第二荧光信号，其中检测到所述第一和第二荧光信号指示包含相应荧光染料的胶束已达 到其PH转变点并解离；以及 (c) 确定所述细胞中或所述细胞表面上至少第一和第二荧光信号的分布。
115. 根据权利要求114所述的方法，其中所述组合物包含至少第三胶束群，所述胶束 群具有与所述第一和第二PH转变点以及所述第一和第二发射光谱不同的第三pH转变点和 第三荧光发射光谱。
116. 根据权利要求114所述的方法，其中在至少一个小时至多至12个小时的时间中确 定所述至少第一和第二荧光信号的分布。
117. 根据权利要求114所述的方法，其中所述检测步骤重复至少两次。
118. 根据权利要求114所述的方法，其中所述检测步骤重复至少五次。
119. 根据权利要求114所述的方法，其中所述至少第一和第二荧光信号的发射波长为 500nm 至 820nm。
120. -种监测内体pH的方法，其包括： (a) 使内体与包含至少第一和第二胶束群的组合物在使所述内体摄取所述组合物的条 件下接触，其中每一胶束包含嵌段共聚物和荧光染料，并且，其中所述第一胶束群具有约PH 5. 7至6. 3的pH转变点和第一荧光发射光谱，所述第二胶束群具有约pH 5. 7至6. 3的pH 转变点和第二荧光发射光谱，其中所述第一和第二胶束群具有不同的pH转变点和不同的 荧光发射光谱； (b) 检测所述内体中与所述第一和第二荧光发射光谱对应的第一荧光信号和第二荧光 信号中的至少一个，其中检测到所述第一和/或第二荧光信号指示包含相应荧光染料的胶 束已达到其pH转变点并解离；以及 (c) 确定所述内体的pH或pH范围。
121. 根据权利要求120所述的方法，其中在至少一个小时至多至12个小时的时间中确 定所述第一和第二荧光信号的分布。
122. 根据权利要求120所述的方法，其中所述检测步骤重复至少两次。
123. 根据权利要求120所述的方法，其中所述检测步骤重复至少五次。
124. 根据权利要求120所述的方法，其中所述第一和第二突光信号的发射波长为 500nm 至 820nm。
125. 根据权利要求120所述的方法，其还包括使所述内体与至少第三和第四胶束群接 触。
126. 根据权利要求125所述的方法，其中所述第一胶束群具有约pH5. 7的pH转变点， 所述第二胶束群具有约pH 5. 94的pH转变点，所述第三胶束具有约pH 6. 18的pH转变点， 并且所述第四胶束群具有约pH 6. 42的pH转变点。
127. -种测量胞外pH的方法，其包括： (a) 使一组细胞或其胞外环境与根据权利要求64至87. 01中任一项所述的pH响应系 统或组合物接触；以及 (b) 检测细胞组中的荧光信号，其中检测到荧光信号指示包含相应荧光染料的胶束已 达到其PH转变点并解离。
128. 根据权利要求127所述的方法，其还包括确定细胞组中或其胞外环境中所述荧光 信号的分布。
129. 根据权利要求128所述的方法，其中随时间确定所述突光信号的分布。
130. 根据权利要求129所述的方法，其中在至少一个小时至多至12个小时的时间中确 定所述荧光信号的分布。
131. 根据权利要求127所述的方法，其中所述检测步骤重复至少两次。
132. 根据权利要求127所述的方法，其中所述检测步骤重复至少五次。
133. 根据权利要求127所述的方法，其中所述荧光信号的发射波长为500nm至820nm。
134. 根据权利要求127所述的方法，其中所述细胞或细胞组或其胞外环境是癌细胞或 癌细胞组或其胞外环境、具有溶酶体贮积缺陷的细胞或细胞组或其胞外环境、有缺陷的神 经细胞或神经细胞组或其胞外环境、涉及炎症的细胞或细胞组或其胞外环境、涉及感染的 细胞或细胞组或其胞外环境、涉及伤口愈合的细胞或细胞组或其胞外环境、涉及缺氧的细 胞或细胞组或其胞外环境、涉及辐射损伤的细胞或细胞组或其胞外环境、涉及创伤的细胞 或细胞组或其胞外环境或者涉及低氧血症的细胞或细胞组或其胞外环境。
135. 根据权利要求127所述的方法，其还包括： (a) 使所述细胞或其胞外环境与目的化合物接触； (b) 检测所述细胞中及其周围的一种或更多种荧光信号；以及 (c) 确定在使所述细胞与所述目的化合物接触后所述细胞中及其周围的一种或更多种 荧光信号是否发生变化。
136. 根据权利要求135所述的方法，其中所述目的化合物是药物。
137. 根据权利要求135所述的方法，其中所述目的化合物是抗体、肽、蛋白质、核酸或 者小分子。
138. -种对血管生成性肿瘤血管系统进行成像的方法，其包括： (a) 使肿瘤血管系统与根据权利要求64至94中任一项所述的包含至少两个胶束群的 组合物接触，其中每一胶束包含嵌段共聚物和荧光染料，并且，其中所述第一胶束群具有约 pH 6. 5至7. 4的pH转变点和第一荧光发射光谱，所述第二胶束群具有约pH 5. 9至6. 4的 pH转变点和第二荧光发射光谱，以及； (b) 检测所述肿瘤血管系统中与所述第一荧光发射光谱和第二荧光发射光谱对应的第 一荧光信号和第二荧光信号，其中检测到所述第一荧光信号和第二荧光信号指示包含相应 荧光染料的胶束已达到其pH转变点并解离。
139. 根据权利要求138所述的方法，其还包括确定所述肿瘤血管系统中所述第一荧光 信号和第二荧光信号的分布。
140. 根据权利要求138所述的方法，其还包含具有靶向部分的胶束。
141. 根据权利要求140所述的方法，其中所述靶向部分是cRGD肽。
142. 根据权利要求138所述的方法，其中在至少一个小时至多至12个小时的时间中确 定所述第一荧光信号和第二荧光信号的分布。
143. 根据权利要求138所述的方法，其中所述检测步骤重复至少两次。
144. 根据权利要求138所述的方法，其中所述检测步骤重复至少五次。
145. 根据权利要求138所述的方法，其中所述第一荧光信号和第二荧光信号的发射波 长为 500nm 至 820nm。
146. -种对循环肿瘤细胞进行成像的方法，其包括： (a) 使淋巴管或血流中的循环肿瘤细胞与根据权利要求64至94中任一项所述的包含 pH响应系统的组合物接触，其中所述胶束包含嵌段共聚物和荧光染料，并且具有约pH 5. 9 至6. 4的pH转变点，以及； (b) 检测所述循环肿瘤细胞中的荧光信号，其中检测到荧光信号指示包含相应荧光染 料的胶束已达到其pH转变点并解离。
147. 根据权利要求146所述的方法，其还包括确定所述淋巴系统或血流中循环肿瘤细 胞中所述第一荧光信号和第二荧光信号的分布。
148. 根据权利要求146所述的方法，其还包含具有靶向部分的胶束。
149. 根据权利要求148所述的方法，其中所述靶向部分是抗体片段。
150. 根据权利要求149所述的方法，其中所述抗体片段是西妥昔单抗的片段。
151. 根据权利要求146所述的方法，其中在至少一个小时至多至12个小时的时间中确 定所述第一荧光信号和第二荧光信号的分布。
152. 根据权利要求146所述的方法，其中所述检测步骤重复至少两次。
153. 根据权利要求146所述的方法，其中所述检测步骤重复至少五次。
154. 根据权利要求146所述的方法，其中所述第一荧光信号和第二荧光信号的发射波 长为 500nm 至 820nm。
155. -种对肿瘤进行成像的方法，其包括： (a) 使所述肿瘤与根据权利要求64至94中任一项所述的包含至少两个胶束群的组 合物接触，其中每一胶束包含嵌段共聚物和荧光染料，并且，其中所述第一胶束群具有约PH 6. 5至7. 4的pH转变点和第一荧光发射光谱，所述第二胶束群具有约pH 5. 9至6. 4的pH 转变点和第二荧光发射光谱，以及； (b) 检测所述肿瘤中与所述第一荧光发射光谱和第二荧光发射光谱对应的第一荧光信 号和第二荧光信号，其中检测到所述第一荧光信号和第二荧光信号指示包含相应荧光染料 的胶束已达到其pH转变点并解离。
156. 根据权利要求155所述的方法，其还包括确定所述肿瘤中所述第一荧光信号和第 二突光信号的分布。
157. 根据权利要求155所述的方法，其还包含具有靶向部分的胶束。
158. 根据权利要求157所述的方法，其中所述靶向部分是抗体片段。
159. 根据权利要求158所述的方法，其中所述抗体片段是西妥昔单抗。
160. 根据权利要求157所述的方法，其中所述靶向部分是小分子。
161. 根据权利要求160所述的方法，其中所述小分子是叶酸。
162. 根据权利要求155所述的方法，其中在至少一个小时至多至12个小时的时间中确 定所述第一荧光信号和第二荧光信号的分布。
163. 根据权利要求155所述的方法，其中所述检测步骤重复至少两次。
164. 根据权利要求155所述的方法，其中所述检测步骤重复至少五次。
165. 根据权利要求155所述的方法，其中所述第一荧光信号和第二荧光信号的发射波 长为 500nm 至 820nm。
166. -种对转移至原发性肿瘤局部区域中之淋巴结的肿瘤进行成像的方法，其包括： (a) 使所述肿瘤与根据权利要求64至94中任一项所述的包含至少两个胶束群的组 合物接触，其中每一胶束包含嵌段共聚物和荧光染料，并且，其中所述第一胶束群具有约PH 6. 5至7. 4的pH转变点和第一荧光发射光谱，所述第二胶束群具有约pH 5. 9至6. 4的pH 转变点和第二荧光发射光谱，以及； (b) 检测所述肿瘤中与所述第一荧光发射光谱和第二荧光发射光谱对应的第一荧光信 号和第二荧光信号，其中检测到所述第一荧光信号和第二荧光信号指示包含相应荧光染料 的胶束已达到其pH转变点并解离。
167. 根据权利要求166所述的方法，其还包括确定所述肿瘤中所述第一荧光信号和第 二突光信号的分布。
168. 根据权利要求166所述的方法，其还包含具有靶向部分的胶束。
169. 根据权利要求168所述的方法，其中所述靶向部分是抗体片段。
170. 根据权利要求169所述的方法，其中所述抗体片段是西妥昔单抗。
171. 根据权利要求168所述的方法，其中所述靶向部分是小分子。
172. 根据权利要求171所述的方法，其中所述小分子是叶酸。
173. 根据权利要求166所述的方法，其中在至少一个小时至多至12个小时的时间中确 定所述第一荧光信号和第二荧光信号的分布。
174. 根据权利要求166所述的方法，其中所述检测步骤重复至少两次。
175. 根据权利要求166所述的方法，其中所述检测步骤重复至少五次。
176. 根据权利要求166所述的方法，其中所述第一荧光信号和第二荧光信号的发射波 长为 500nm 至 820nm。
177. -种对肿瘤的前哨淋巴结进行成像的方法，其包括： (a) 使所述肿瘤与根据权利要求64至94中任一项所述的包含至少两个胶束群的组 合物接触，其中每一胶束包含嵌段共聚物和荧光染料，并且，其中所述第一胶束群具有约PH 6. 5至7. 4的pH转变点和第一荧光发射光谱，所述第二胶束群具有约pH 5. 9至6. 4的pH 转变点和第二荧光发射光谱，以及； (b) 检测所述肿瘤中与所述第一荧光发射光谱和第二荧光发射光谱对应的第一荧光信 号和第二荧光信号，其中检测到所述第一荧光信号和第二荧光信号指示包含相应荧光染料 的胶束已达到其pH转变点并解离； (c) 使包含所述荧光信号的胶束的解离部分进入流出所述肿瘤的淋巴脉管系统中，并 沿着所述淋巴脉管系统运动通过所述淋巴脉管系统至淋巴结； (d) 沿着所述淋巴脉管系统检测所述淋巴脉管系统和所述淋巴结中与所述第一和第二 荧光发射光谱对应的第一和第二荧光信号，其中检测到所述第一和第二荧光信号指示包含 相应荧光染料的胶束在所述原发性肿瘤中已达到其PH转变点并解离，并沿着所述淋巴脉 管系统运动至所述淋巴脉管系统和所述淋巴结。
178. 根据权利要求177所述的方法，其还包括确定所述肿瘤中所述第一荧光信号和第 二突光信号的分布。
179. 根据权利要求177所述的方法，其还包含具有靶向部分的胶束。
180. 根据权利要求179所述的方法，其中所述靶向部分是抗体片段。
181. 根据权利要求180所述的方法，其中所述抗体片段是西妥昔单抗。
182. 根据权利要求179所述的方法，其中所述靶向部分是小分子。
183. 根据权利要求182所述的方法，其中所述小分子是叶酸。
184. 根据权利要求177所述的方法，其中在至少一个小时至多至12个小时的时间中确 定所述第一荧光信号和第二荧光信号的分布。
185. 根据权利要求177所述的方法，其中所述检测步骤重复至少两次。
186. 根据权利要求177所述的方法，其中所述检测步骤重复至少五次。
187.根据权利要求177所述的方法，其中所述第一荧光信号和第二荧光信号的发射波 长为 500nm 至 820nm。
【文档编号】A61K9/127GK104334162SQ201380028605
【公开日】2015年2月4日 申请日期:2013年4月3日 优先权日:2012年4月5日
【发明者】高进明, 周科进, 巴兰·苏梅尔 申请人:德克萨斯大学系统董事会