一种t7肽修饰的zl006长循环脂质体及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种T7肽修饰的ZL006长循环脂质体，包括磷脂、胆固醇、甲氧基-聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺、T7肽-聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺、治疗有效量的ZL006。本发明还公开了其制备方法。本发明T7肽修饰的ZL006长循环脂质体将药物ZL006包封于脂质双分子层中，大大提高药物在体内的循环时间；T7肽修饰提高其透过血脑屏障的能力，有效专一地将治疗脑卒中药物运输到大脑卒中部位，最大限度发挥药物的治疗作用，同时减少全身毒副作用。
【专利说明】一种T7肽修饰的ZL006长循环脂质体及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及医药【技术领域】，具体涉及一种Τ7肽修饰的ZL006长循环脂质体及其制
备方法。
【背景技术】
[0002]随着人类社会的老龄化趋势和全球生态环境的恶化，脑部疾病的发病率正呈逐年上升的趋势，成为危害人类生命和健康的重大疾病。其中，脑卒中是一种高致死、高致残、高复发的神经系统疾病，被列为人类仅次于心血管疾病和恶性肿瘤的第三大杀手。临床上80%以上的脑卒中属于缺血性脑卒中，所以，对缺血性脑卒中的药物治疗研究具有重大的临床意义。研究显示:脑组织在缺血条件下，兴奋性氨基酸(如谷氨酸)过度释放，引起N-甲基-D天门冬氨酸受体(NMDAR)过度激活，导致通过NMDAR-PSD-95-nNOS途径病理性一氧化氮(NO)释放增多，提示缺血性脑卒中的产生可能与细胞浆内的nNOS和细胞膜上新PSD95结合增多有关。ZL006是一种小分子nN0S-PSD-95解偶联剂，其化学名为4-(2-羟基-3，5-二
氯苄胺基)-2-羟基苯甲酸。结构如下式所示:
[0003]
【权利要求】
1.一种T7肽修饰的ZL006长循环脂质体，其特征在于，包括磷脂、胆固醇、甲氧基-聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺、Τ7肽-聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺、治疗有效量的ZL006 ;所述Τ7肽-聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺是由Τ7肽和马来酰亚胺-聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺通过共价连接而成的线性嵌段共聚物，所述Τ7肽是在噬菌体展示技术筛选得到的序列HAIYPRH的多肽的一端增加一个半胱氨酸；其中，胆固醇与磷脂的摩尔比为1:6~2:1，甲氧基-聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺与磷脂的摩尔比为1:800~100:800，Τ7肽-聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺与磷脂的摩尔比为0.1:800~100:800, ZL006与磷脂的质量比为1:4~1:10。
2.根据权利要求1所述的Τ7肽修饰的ZL006长循环脂质体，其特征在于，所述磷脂为蛋黄卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、1-硬脂酰基-2-油酰基磷脂酰胆碱、1-棕榈酰基-2-油酰基磷脂酰胆碱、1-肉豆蘧酰基-2-油酰基磷脂酰胆碱、1-硬脂酰基-2-棕榈酰基磷脂酰胆碱、1-硬脂酰基-2-肉豆蘧酰基磷脂酰胆碱、1-棕榈酰基-2-硬脂酰基磷脂酰胆碱、1-棕榈酰基-2-肉豆蘧酰基磷脂酰胆碱、1-肉豆蘧酰基-2-硬脂酰基磷脂酰胆碱、1-肉豆蘧酰基-2-棕榈酰基磷脂酰胆碱、二芥酰基磷脂酰胆碱、二油酰基磷脂酰胆碱、二硬脂酰基磷脂酰胆碱、二棕榈酰基磷脂酰胆碱、二肉豆蘧酰基磷脂酰胆碱、二月桂酰基磷脂酰胆碱、二癸酰基磷脂酰胆碱、1-棕榈酰基-2-油酰基磷脂酰甘油、二芥酰磷脂酰甘油、二油酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰甘油、1，2-棕榈酰磷脂酰甘油、二肉豆蘧酰磷脂酰甘油、二月桂酰磷脂酰甘油、1-棕榈酰基-2-油酰基基磷脂酰乙醇胺、二芥酰基磷脂酰乙醇胺、二油酰基磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺、二肉豆蘧酰基磷脂酰乙醇胺、二油酰基磷脂酰丝氨酸、二硬脂酰基磷脂酰丝氨酸、二棕榈酰基磷脂酰丝氨酸、二肉豆蘧酰基磷脂酰丝氨酸、二棕榈酰磷脂酸、二硬脂酰磷脂酸、二肉豆蘧酰磷脂酸、脑磷脂、神经鞘磷脂中的一种或几种。
3.根据权利要求1所述的Τ7肽修饰的ZL006长循环脂质体，其特征在于，所述甲氧基-聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺和Τ7肽-聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺中的磷脂酰乙醇胺为二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺、二油酰基磷脂酰乙醇胺、二芥酰基磷脂酰乙醇胺、二肉豆蘧酰基`磷脂酰乙醇胺、二月桂酰磷脂酰乙醇胺、1-棕榈酰基-2-油酰基磷脂酰乙醇胺中的一种或多种。
4.根据权利要求1所述的Τ7肽修饰的ZL006长循环脂质体，其特征在于，所述甲氧基-聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺和Τ7肽-聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺中的聚乙二醇重均分子量为400~5000。
5.权利要求1~4任一所述的Τ7肽修饰的ZL006长循环脂质体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤: 步骤一、将马来酰亚胺-聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺溶于N，N- 二甲基甲酰胺中得到马来酰亚胺-聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺溶液，Τ7肽溶于ρΗ=6.5~7.5的磷酸盐缓冲液中得到Τ7肽溶液；将马来酰亚胺-聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺溶液和Τ7肽溶液分别滴加到ρΗ=6.5~7.5的磷酸盐缓冲液中，氮气保护，搅拌10~14h，得到反应液，其中，T7肽和马来酰亚胺-聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺的摩尔比为1:1~5:1 ; 步骤二、将步骤一得到的反应液蒸发除去N，N- 二甲基甲酰胺，再透析除去未反应的T7肽和马来酰亚胺-聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺，之后冷冻干燥得到T7肽-聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺；步骤三、采用乙醇或乙醚注入法制备T7肽修饰的ZL006长循环脂质体，按配方量将磷月旨、胆固醇、甲氧基-聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺、T7肽-聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺、ZL006溶入乙醇或乙醚中，混合均匀,得到混合溶液；在350~500rpm、45~60°C条件下将混合溶液加入到pH=5~6的磷酸盐缓冲液中，搅拌15~30min ;之后蒸发除去乙醇或乙醚,超声减小粒径，再分别过0.45 μ m和0.22 μ m的微孔滤膜；最后用截留分子量3000MW的超滤离心管离心，得到所述T7肽修饰的ZL006长循环脂质体。
6.根据权利要求5所述的T7肽修饰的ZL006长循环脂质体的制备方法，其特征在于，步骤三所述离心的条件为在20~25°C下4000~5000rpm离心2~3h。
7.权利要求1~4任一所述的T7肽修饰的ZL006长循环脂质体通过静脉给药作为脑卒中治疗药物的靶 向递送物的应用。
【文档编号】A61K47/42GK103860468SQ201410049462
【公开日】2014年6月18日 申请日期:2014年2月12日 优先权日:2014年2月12日
【发明者】徐群为, 辛洪亮, 王中元, 赵越, 吴 琳, 王宝彦, 吕玲燕 申请人:南京医科大学