一种防治新生家畜腹泻的复合益生菌喷雾剂及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种防治新生家畜腹泻的复合益生菌喷雾剂，同时公开了一种该喷雾剂的制备方法，其中防治新生家畜腹泻的复合益生菌喷雾剂是由以下重量份的原料制备而成：吸附载体200-1000份，包被载体400-2000份，益生菌组合100-200份。该制剂具有调理新生幼畜的肠道微生态平衡，保持肠道的正常生理功能，增强机体免疫力，提高机体抗病能力，尤其能有效预防幼畜生理性和病理性的腹泻。本发明剂型独特，应用方便高效，更适合新生幼畜的使用，适合在畜牧业生产中推广应用。
【专利说明】一种防治新生家畜腹泻的复合益生菌喷雾剂及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于兽药【技术领域】，具体涉及一种防治新生家畜腹泻的复合益生菌喷雾剂及其制备方法。
【背景技术】 [0002]新生家畜(包括猪、牛、羊、马等)腹泻病一直是困扰养殖业的难题之一，也是目前危害养殖业的主要疾病。据统计，在规模化的养猪场和养羊场，新生仔猪和羔羊腹泻病的发病率高达75%和62%，腹泻病的发生不仅导致幼畜死亡率增高、成活率下降，而且使幼畜生长性能降低、饲料转化率下降，增大了养殖成本，降低养殖效益，每年由此带来的经济损失可数十亿元。引起新生幼畜腹泻的原因是多方面的，第一，病原性因素，包括细菌、病毒、寄生虫等病原体感染引起；第二，应激性因素:包括环境的改变、外界的刺激等。第三，生理性因素，由于幼畜缺乏先天免疫力和消化机能发育不完善。其中机体自身的因素占主导，由于新生幼畜的免疫系统和消化系统没有发育完全，尤其是消化道内的正常菌群区系没有完全建立，对外界的抵抗力很弱，幼畜在和外界接触或吃乳的过程中，接触病原微生物引起腹泻。这种腹泻发病期为出生到断奶后I个月。目前，在养殖业上对新生幼畜腹泻的防治主要是疫苗预防和抗生素的治疗，由于疫苗免疫是特异性免疫，加之病原易发生变异，故疫苗预防的效果是有限的，而且成本较高，除了养猪业上，其它养殖业并未使用疫苗来防治该病；现阶段，在养殖业中，用抗生素预防和治疗幼畜腹泻非常普遍，但随着抗生素的广泛应用，由此引出的一系列问题引起人们的高度重视，尤其是幼畜长期或大量使用抗生素会抑制免疫器官的发育，破坏肝、肾等实质器官，造成免疫抑制。另外，抗生素的使用会毫无选择的杀死有益菌群，引起肠道菌群失调，从而诱发腹泻及其它疾病的发生。近年来，研究发现在幼龄动物使用抗生素可诱发抗生素相关性腹泻，因此世界各国纷纷采取强制措施，对饲用抗生素种类、使用方法、剂量等方面严加限制，欧美的一些国家明令禁止在动物养殖及饲料中添加使用抗生素。因此，养殖业生产中急需一种高效、无毒副作用的制剂来预防和治疗幼畜腹泻病。
[0003]益生菌制剂是一类微生物活菌制剂，其具有维持肠道微生态平衡、抑制病原菌的定植和繁殖、增强机体免疫功能、产生有益的代谢产物和减少胺、吲哚等有害物质产生等功效，现逐渐被人们认识并成为抗生素替代产品之一。近年来，国内外开发了许多益生菌制剂，多以乳酸杆菌、双歧杆菌和芽孢杆菌等为主的单一或复合制剂。不同类型的制剂针对不同生理阶段的动物产生的效果是不一样的，如有些制剂对幼龄动物有很好的效果，但对成年动物效果不佳。目前我们查新了关于益生菌制剂方面的中国专利和相关文献，发现大多以饲料添加剂的形式出现，而新生幼畜还不能吃饲料，故这样的益生菌制剂在新生幼畜应用中受到了限制。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是提供一种防治新生家畜腹泻的复合益生菌喷雾剂，以克服现有产品的不足，更适合新生家畜使用，本发明能使有益菌群尽早定植在幼畜肠道内，达到肠道微生态的平衡，从而预防和治疗幼畜腹泻病的发生。
[0005]为了实现以上目的，本发明提供的一种复合益生菌喷雾剂是由以下重量份的原料制备而成:吸附载体200-1000份，包被载体400-2000份，益生菌100-200份。
[0006]其中，所述的益生菌包括枯草芽胞杆菌、地衣芽孢杆菌、蜡样芽胞杆菌、乳酸杆菌、双歧杆菌、粪肠球菌、植物乳杆菌、酵母菌，嗜热链球菌中的至少三种的组合物。为达到本发明的目的，所用菌种为纯菌种，且培养菌液的活菌数不低于2 X 108CFU/ml。
[0007]本发明所述吸附载体为脱脂奶粉、大豆蛋白粉、海藻糖、乳酸钠、半胱氨酸中的任一种、两种或多种。
[0008]本发明所述包被载体为蔗糖、葡萄糖、可溶性淀粉、糊精、香精、甘露糖、沸石粉、海藻酸钠中的任一种、两种或多种。
[0009]本发明的目的还在于提供了一种防治新生家畜腹泻的复合益生菌喷雾剂的制备方法。
[0010]本发明的防治新生家畜腹泻的复合益生菌喷雾剂的制备方法包括:
[0011]I)发酵液的制备:将枯草芽胞杆菌、地衣芽孢杆菌、蜡样芽胞杆菌、乳酸杆菌、双歧杆菌、粪肠球菌、植 物乳杆菌、酵母菌，嗜热链球菌等益生菌分别接种到各自最适培养基中，在适当的条件下进行培养18-48小时达到其对数生长期，然后转接到发酵罐中进行大量培养，当达到对数生长期即发酵液中活菌浓度达到2X108CFU/ml以上时，停止培养。
[0012]2)菌体的制备:取发酵液进行高速离心，按转速为3000~6000转/分，离心15~30分钟收集菌体备用。
[0013]3)将吸附载体在110°C高压灭菌15分钟，冷却待用；按一定重量比将步骤2)所得的不同菌体混合，取其100~200份和吸附载体200~1000份混合，在低于20°C的环境中按50转/分的速度搅拌30~60分钟，使菌体彻底吸附到载体上。
[0014]4)取包被载体400~2000份和步骤3)所得混合物按一定比例混合，并按步骤3)的方法搅拌30分钟，再按比例(体积比1: 10~20)向混合物中喷入2%~8%的蔗糖溶液，继续搅拌30分钟，室温通风干燥，包装即得。
[0015]本发明喷雾剂的应用步骤是将本发明的喷雾剂按质量比1: 50~200的比例和水混合摇匀，装入喷雾器中，在幼畜出生后及哺乳时直接喷洒到母畜的乳房部位及体表即可。也可将本发明喷洒于饲料表面，供幼畜自由采食。
[0016]本发明的优点在于:1、本发明优选的益生菌均为非致病的有益菌，能定植到新生幼畜的肠道内，并大量增殖，通过优势菌群、生物拮抗、产生有益的代谢产物等作用，改善肠道微生态环境，维持肠道的正常生理功能。从而能有效预防新生幼畜生理性和病理性的腹泻。2、本发明的制备工艺选择双层包被技术，能有效保护益生菌进入幼畜胃内不被胃酸及蛋白酶破坏，进而到达肠道内发挥作用；同时该工艺能延长益生菌活性的保存期限，克服现有益生菌产品保存期限短的缺点。3、本发明剂型独特，应用方式简单有效，尤其适合于新生幼畜的使用。
[0017]通过本发明的疗效试验看出，本发明在防治新生家畜腹泻病方面疗效确实，本发明使用益生菌来预防和治疗腹泻，有效避免了应用抗生素及化学药物产生的耐药性、药物残留及疗效差等问题。同时本发明结合了新生幼畜用药的特点，将药物制成喷雾剂，在应用时，直接将其喷洒到母畜的体表及乳房上，幼畜在吃初乳时就能接触益生菌，达到迅速起效的目的。本发明应用方法简单、方便、有效，适合在畜牧业生产中推广应用。
【具体实施方式】
[0018]下面结合实例对本发明做进一步说明，但本发明不受其限制。
[0019]实施例1
[0020]本实施例的复合益生菌喷雾剂的制备方法如下:
[0021]I)将枯草芽胞杆菌、蜡样芽胞杆菌、粪肠球菌、酵母菌分别接种到各自最适培养基中，37°C培养24小时，各取培养液100mL转接到发酵罐中进行扩大培养，当发酵液中活菌浓度达到2 X 108CFU/ml以上时，停止培养。取发酵液进行离心，3000转/分进行离心20分钟，收集菌体。
[0022]2)将上述菌体按重量比为1:1: 2.5: 2均匀混合，取混合物100份、脱脂奶粉300份、甘露糖50份、半胱氨酸50份均匀混合，并按50转/分的速度搅拌30分钟，使菌体彻底吸附到载体上。
[0023]3)取糊精400份、海藻酸钠400份和步骤2)所得混合物混合，并按步骤2)的方法搅拌30分钟，再向 混合物中喷入5%的蔗糖溶液100份，继续搅拌30分钟，室温通风干燥，包装即得。
[0024]实施例2
[0025]本实施例的复合益生菌喷雾剂的制备方法如下:
[0026]I)将地衣芽孢杆菌、乳酸杆菌、双歧杆菌、嗜热链球菌分别接种到各自最适培养基中，37°C培养36小时，各取培养液100mL转接到发酵罐中进行扩大培养，当发酵液中活菌浓度达到2 X 108CFU/ml以上时，停止培养。取发酵液进行离心，4000转/分进行离心15分钟，收集菌体。
[0027]2)将上述菌体按重量比为0.5: 1.5: 2: I均匀混合，取混合物100份、脱脂奶粉200份、大豆蛋白粉200份、乳酸钠50份均匀混合，并按50转/分的速度搅拌30分钟，使菌体彻底吸附到载体上。
[0028]3)取可溶性淀粉600份、甘露糖200份、沸石粉200份和步骤2)所得混合物混合，并按步骤2)的方法搅拌30分钟，再向混合物中喷入8%的蔗糖溶液300份，继续搅拌30分钟，室温通风干燥，包装即得。
[0029]实施例3
[0030]本实施例的复合益生菌喷雾剂的制备方法如下:
[0031]I)将蜡样芽胞杆菌、双歧杆菌、粪肠球菌、植物乳杆菌、嗜热链球菌分别接种到各自最适培养基中，37°C培养24小时，各取培养液100mL转接到发酵罐中进行扩大培养，当发酵液中活菌浓度达到2X 108CFU/ml以上时，停止培养。取发酵液进行离心，4500转/分进行离心30分钟，收集菌体。
[0032]2)将上述菌体按重量比为1: 2: 2.5:1:1均匀混合，取混合物200份、脱脂奶粉100份、大豆蛋白粉300份、半胱氨酸100份均匀混合，并按50转/分的速度搅拌30分钟，使菌体彻底吸附到载体上。
[0033]3)取葡萄糖600份、可溶性淀粉600份、海藻酸钠300份和步骤2)所得混合物混合，并按步骤2)的方法搅拌30分钟，再向混合物中喷入2%的蔗糖溶液400份，继续搅拌30分钟，室温通风干燥，包装即得。
[0034]试验例1:
[0035]本试验例是按照实施例所制备的一种预防和治疗新生家畜腹泻的复合益生菌喷雾剂对新生仔猪的效果试验。
[0036]1.1试验材料
[0037]受试药物:本发明实施例的喷雾剂、实施例中的益生菌组合物(枯草芽胞杆菌、蜡样芽胞杆菌、粪肠球菌、酵母菌)、包被载体(糊精、海藻酸钠)、吸附载体(脱脂奶粉、甘露糖、半胱氨酸)，包被载体与吸附载体混合物，载体混合比例均按照实施例配制。
[0038]试验动物:I日龄杜χ长χ大三元杂交仔猪。
[0039]1.2试验方法 [0040]1.2.1动物分组将75头I日龄杜χ长χ大三元杂交仔猪随机分为5组，即为实验组I (本发明制剂)，实验组II (包被载体)，实验组III (吸附载体)，实验组IV(包被载体和吸附载体混合物)和对照组，每组15头。
[0041]1.2.2试验方法
[0042]将试验中的药物按1: 100的比例与水均匀混合，装入喷雾器中，直接喷洒于母猪的乳房和体表，每日4次，连续给药直到断奶(30日龄)。在试验的全过程观察记录仔猪的腹泻情况，计算腹泻率和腹泻频率；在试验前和结束后分别对各组仔猪体重测量，确定增重量。腹泻率=腹泻头数/总头数X 100%，腹泻频率=(腹泻头数X腹泻天数)/(试验头数X试验天数)X 100%。
[0043]1.3试验结果:
[0044]本发明各实施例试验效果见表1，从表1可看出，在使用本发明产品后，能显著降低新生仔猪腹泻病的发生率和腹泻频率，而且在仔猪的平均增重方面，试验组I明显的高于其它试验组和对照组。
[0045]结论:本发明复合益生菌制剂使有益菌在新生仔猪肠道内迅速定植，调整肠道微生态平衡，提高仔猪的免疫力和抗病能力，能有效防治新生仔猪腹泻，同时能显著提高新生仔猪的生长性能。本发明的剂型为喷雾剂，克服了现有剂型的给药不方便，用药量大，用药成本高等缺点，适合于养殖业中推广应用。
【权利要求】
1.一种防治新生家畜腹泻的复合益生菌喷雾剂，其特征在于:由以下重量份的原料制备而成:吸附载体200-1000份，包被载体400-2000份，益生菌组合100-200份。
2.根据权利要求1中所述防治新生家畜腹泻的复合益生菌喷雾剂，其特征在于:所述益生菌为枯草芽胞杆菌、地衣芽孢杆菌、蜡样芽胞杆菌、乳酸杆菌、双歧杆菌、粪肠球菌、植物乳杆菌、酵母菌和嗜热链球菌中的至少三种的组合。
3.根据权利要求1中所述防治新生家畜腹泻的复合益生菌喷雾剂，其特征在于:所述吸附载体为脱脂奶粉、大豆蛋白粉、海藻糖、乳酸钠，半胱氨酸中的任一种、两种或多种。
4.根据权利要求1中所述防治新生家畜腹泻的复合益生菌喷雾剂，其特征在于:所述包被载体为蔗糖、葡萄糖、可溶性淀粉、糊精、香精、甘露糖、沸石粉、海藻酸钠中的任一种、两种或多种。
5.权利要求1所述防治新生家畜腹泻的复合益生菌喷雾剂的制备方法，其特征在于: 1)将益生菌接种到各自最适培养基中，在适当的条件下进行培养18-48小时后转接到发酵罐中进行大量培养，当发酵液中活菌浓度达到2X108CFU/ml时，取发酵液进行高速离心，转速为3000~6000转/分，收集菌体后按一定比例混合。 2)将吸附载体在110°C高压灭菌15分钟，按一定的重量比与步骤I)所得益生菌混合，在低于20°C的环境中按50转/分的速度搅拌30~60分钟，使菌体彻底吸附到载体上。 3)取包被载体和步骤2)所得混合物按一定比例混合，在低于20°C的环境中按50转/分的速度搅拌30分钟，再按比例(体积比1: 10~20)向混合物中喷入2 %~8 %的蔗糖溶液，继续搅拌30分钟，室温通风干燥后，包装即得。
【文档编号】A61K9/12GK103919816SQ201410176927
【公开日】2014年7月16日 申请日期:2014年4月24日 优先权日:2014年4月24日
【发明者】杨帆, 孙爱平, 秦卫玲, 魏纪东, 马玉龙 申请人:新乡医学院