地西他滨和奥沙利铂在制备治疗肾细胞癌组合药物中应用的制作方法

地西他滨和奥沙利铂在制备治疗肾细胞癌组合药物中应用的制作方法
【专利摘要】本发明提供地西他滨和奥沙利铂在制备治疗肾细胞癌组合药物中的应用，其中地西他滨和奥沙利铂的优选摩尔浓度比值为1:5～1:8，组合药是由地西他滨和奥沙利铂与药学上可接受的辅料制成。本发明经体内、外实验研究证明，地西他滨对奥沙利铂治疗肾细胞癌具有明显的协同作用，该结果扩大了它们临床应用的范围。本发明提供的组合药可增强奥沙利铂在肾细胞癌小鼠模型肿瘤细胞中的积聚，同时增强肾细胞癌小鼠模型对奥沙利铂的敏感性。
【专利说明】地西他滨和奥沙利铂在制备治疗肾细胞癌组合药物中应用

【技术领域】
[0001] 本发明属医药领域，涉及地西他滨与奥沙利钼在制备治疗肾细胞癌组合药物中应 用，地西他滨与奥沙利钼组合用时能显著增强奥沙利钼治疗肾细胞癌中的作用。

【背景技术】
[0002] 肾细胞癌是泌尿生殖系肿瘤中死亡率最高的癌症，也是最常见的肾实体肿瘤，其 发病率约占肾恶性肿瘤的90%，占癌症综合发病率的2?3%。除早期局部性肾癌可通过 外科手术治愈外，转移性肾细胞癌的治疗一直未取得突破性进展。化学治疗是目前治疗肿 瘤的主要手段之一，但是肾细胞癌的多药耐药性常常导致化疗失败。
[0003] 联组合用药是目前肿瘤化学药物治疗的主流治疗方案，其主要目的是为了增强疗 效。药物组合用可能产生的药效学上的药物相互作用包括协同作用、相加作用及拮抗作用。 协同作用是指药物组合用的治疗效果优于各单一药物的治疗效应之和。反之，若药物组合 用的治疗效果低于各单一药物治疗效应总和则为拮抗作用。药物协同作用产生的积极效果 包括：1)增强疗效；2)在保证疗效的基础上减少用药剂量以降低毒副作用；3)延缓或减弱 肿瘤细胞对药物的耐受性。因此，临床药物治疗应充分利用药物间的协同作用，优化治疗效 果。
[0004] 地西他滨（Dacogen，Eisai)是一种DNA甲基转移酶抑制剂，已于2006年被FDA批 准用于治疗骨髓增生异常综合征，但其对于实体肿瘤的疗效并不理想。奥沙利钼为第三代 钼类抗癌药物，通过与基因组DNA结合，影响细胞活性。与第一代钼类抗癌药顺钼相比，奥 沙利钼具有更广谱的抗肿瘤活性，且肾毒性显著降低。但体外实验已经证明肾细胞系对奥 沙利钼不敏感。近年来，地西他滨与钼类药物组合用药以逆转实体肿瘤对钼类抗癌药的耐 受性已有报道。


【发明内容】

[0005] 本发明的目的是提供地西他滨和奥沙利钼在制备治疗肾细胞癌组合药物中的应 用，其中地西他滨和奥沙利钼的优选摩尔浓度比值为1:5?1:8。本发明提供的组合药可增 强奥沙利钼在肾细胞癌小鼠模型肿瘤细胞中的积聚，同时增强肾细胞癌小鼠模型对奥沙利 钼的敏感性。总之，地西他滨和奥沙利钼组合用药能协同增强它们对肾细胞癌细胞系的药 物敏感性。
[0006] 本发明提供的地西他滨和奥沙利钼组合药是由地西他滨和奥沙利钼与药学上可 接受的辅料制成，药物剂型为固体制剂或液体制剂，选用口服制剂、注射液、冻干粉针剂、大 输液剂型、贴剂、软膏剂、凝胶剂、软胶囊剂或栓剂。
[0007] 本发明提供一种地西他滨和奥沙利钼组合在制备治疗肾细胞癌药物中的应用。地 西他滨是一种DNA甲基转移酶抑制剂，已用于骨髓增生异常综合征的治疗。本发明经体内、 外实验研究证明，地西他滨对奥沙利钼治疗肾细胞癌具有明显的协同作用，该结果扩大了 它们临床应用的范围。同时，这种协同作用是地西他滨通过增强奥沙利钼在肾细胞癌小鼠 模型肿瘤细胞中的积聚，同时增强肾细胞癌小鼠模型对奥沙利钼的敏感性实现的。

【专利附图】

【附图说明】
[0008] 图1是地西他滨和奥沙利钼在786-0和769-P两株肾细胞癌细胞系中单独给药和 药物组合用时的药物剂量一细胞活性抑制效应曲线。
[0009] 图2-1是地西他滨和奥沙利钼在786-0肾细胞癌细胞系中的药物组合用指数效果 分析图。
[0010] 图2-2是地西他滨和奥沙利钼在769-P肾细胞癌细胞系中的药物组合用指数效果 分析图。
[0011] 图2-3是786-0和769-P两株细胞系中的药物组合用等效线图分析。
[0012] 图3是地西他滨和奥沙利钼在肾细胞癌小鼠模型上的给药方案图。
[0013] 图4是不同给药方式对肾细胞癌小鼠模型肿瘤细胞中DNA -奥沙利钼加合物形成 的影响示意图。
[0014] 图5-1是地西他滨和奥沙利钼在肾细胞癌小鼠模型上单独给药及药物合用后肿 瘤相对体积增长示意图。
[0015] 图5-2是地西他滨和奥沙利钼在肾细胞癌小鼠模型上单独给药及药物合用第20 天肿瘤重量示意图。
[0016] 图5-3是地西他滨和奥沙利钼在肾细胞癌小鼠模型上单独给药及药物合用第20 天肾细胞癌小鼠模型及分离后的肿瘤照片。
[0017] 图5-4是地西他滨和奥沙利钼在肾细胞癌小鼠模型上单独给药及药物合用肾细 胞癌小鼠模型相对体重变化示意图。

【具体实施方式】
[0018] 本发明结合附图和实施例作进一步的说明。
[0019] 实施例1 本发明提供地西他滨和奥沙利钼在制备治疗肾细胞癌组合药物中的应用，其中地西他 滨和奥沙利钼的优选摩尔浓度比值为1:5?1:8。
[0020] 实施例2地西他滨与奥沙利钼组合能协同增强肾细胞癌细胞系对这两种药物的 敏感性。
[0021] 1.试剂和材料： 肾癌细胞系 786-0 [CRL-1932 ?，ATCC]和 769-P [CRL-1933 ?，ATCC]均购自中国科 学院上海细胞库。两株细胞系均培养于RPMI-1640培养基（GIBC0,货号31800022，添加 NaHC03 1.5 g/L, glucose 2.5 g/L, Sodium Pyruvate 0· 11 g/L)中，并含优质胎牛血清 10%。培养条件为37°C，5% C02. 地西他滨购自 Sigma-Aldrich (5-Aza_2'-deoxycytidine，A3656)。奥沙利钼购自中 国食品药品检定研究院。
[0022] 2.实验方法： 地西他滨，奥沙利钼储备液及工作液配制： 以DMS0为溶剂，将地西他滨，奥沙利钼分别稀释为1000 X储备液和250 X储备液，储 存于-20 °C。
[0023] 工作液临用前现配，加药时每孔加入10 μ L工作液/200 μ L培养体系/ well : 地西他滨工作液：2 μ L储备液+98 μ L培养基4 100 μ L工作液（20 X) 奥沙利钼工作液：8 μ L储备液+ 92 μ L培养基4 100 μ L工作液（20 X) 细胞培养及加药： 按一定密度将 786-0 (200 cells/well)和 769-Ρ (1000 cells/well)细胞种于 96 孔 板，培养过夜。24 h后，向培养基中加入10 μ L预定浓度的地西他滨。奥沙利钼组及对照 组加入0.1% DMS0处理。每24 h更换新的含药培养基。72 h后，地西他滨组（DAC)的基 础培养基更换为含0.4% DMS0的完全培养基，地西他滨浓度维持不变。奥沙利钼组（0ΧΑ) 的基础培养基更换为含0.1 % DMS0的完全培养基，并加入10 μ L预定浓度的奥沙利钼。两 药组合用组（COMBO)同时加入10 μ L预定浓度的地西他滨及奥沙利钼。各组培养体系中 DMS0终浓度均为0. 5%，每个浓度点设置4份复孔。24 h后，更换各组培养基为不含药的完 全培养基，786-0继续培养48 h，其余两种细胞继续培养72 h。两株细胞系中地西他滨与奥 沙利钼的药物终浓度如表1所示。

【权利要求】
1. 一种地西他滨和奥沙利钼在制备治疗肾细胞癌组合药物中的应用，其中地西他滨和 奥沙利钼的优选摩尔浓度比值为1:5?1:8。
2. 根据权利要求1所述的一种地西他滨和奥沙利钼在制备治疗肾细胞癌组合药物中 的应用，其特征在于，所述组合药由地西他滨和奥沙利钼与药学上可接受的辅料制成。
3. 根据权利要求1所述的一种地西他滨和奥沙利钼在制备治疗肾细胞癌组合药物中 的应用，其特征在于，所述药物的剂型为固体制剂或液体制剂。
【文档编号】A61P35/00GK104147036SQ201410417386
【公开日】2014年11月19日 申请日期:2014年8月24日 优先权日:2014年8月24日
【发明者】曾苏, 刘彦卿, 郑小丽, 于琴琴, 王 华, 谭付清, 蒋惠娣, 余露山 申请人:浙江大学