紫杉醇联合参一胶囊与EGFR-TKIs在制备治疗EGFR突变阳性NSCLC药物中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及紫杉醇联合参一胶囊逆转晚期非小细胞肺癌（NSCLC）EGFR-TKI药物（吉非替尼或厄洛替尼）的获得性耐药EGFR-TKIs耐药的NSCLC细胞应用紫杉醇可以明显上调miRNA-1水平，但目前临床上单用紫衫醇化疗时，患者副反应较大，临床应用有限。参一胶囊是一种目前广泛应用的抗肿瘤药物，可以明显改善抗肿瘤药物引起的副反应，且可以通过影响肿瘤细胞信号传导相关基因的表达、抑制新生血管生成等途径增加抗肿瘤药物的抗肿瘤作用。基于上述研究结果，我们率先在临床中将紫杉醇联合参一胶囊用于晚期NSCLC产生EGFR-TKIs获得性耐药后的治疗，以期提高疗效。
【专利说明】紫杉醇联合参一胶囊与EGFR-TKI s在制备治疗EGFR突变阳性NSCLC药物中的应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及紫杉醇联合参一胶囊与EGFR-TKIs在制备治疗EGFR突变阳性NSCLC药物中的应用，具体来说是紫杉醇联合参一胶囊逆转晚期NSCLCEGFR-TKI药物(吉非替尼或厄洛替尼)的获得性耐药。
【背景技术】
[0002]晚期NSCLC患者已经失去手术根治的机会，只能采取放疗、化疗或靶向治疗等姑息性治疗手段。肿瘤难以治疗原因有很多，其中耐药性的出现是其重要的原因之一，尽管化疗药物前期有效，但后期由于产生耐药性，导致药效下降，服用剂量增加，毒副作用增加，且目前没有什么好的方法逆转耐药性，所以逆转这种耐药性是世界亟需解决的问题。
[0003]EGFR-TKIs是表皮生长因子受体-酪氨酸激酶的靶向抑制剂，通过阻断癌细胞生长和存活相关的信号转导通路从而影响癌细胞增殖、存活及生长过程，发挥抗肿瘤的作用，且应用方便，副反应轻微。EGFR突变阳性的患者初期选择EGFR-TKIs治疗，虽然能明显改善患者的生活质量，并延长生存期。然而令人惋惜的是应用EGFR-TKIs —段时间后也均不可避免的会产生耐药，从而影响病人生存，所以探索逆转EGFR-TKI耐药的治疗手段迫在眉睫。
[0004]目前EGFR-TKIs的获得性耐药机制有EGFRT790M 二次突变，MET基因获得性扩增，PI3K表达上调等。临床研究中我们首次发现，EGFR-TKIs耐药的NSCLC患者血液中的miRNA-1明显下调，miRNA-1为抑癌基因。细胞实验中我们发现使用紫杉醇可以使EGFR-TKIs耐药细胞株中的miRNA-1明显上调。紫杉醇是一种新型抗微管药物，其抗肿瘤机制与抑制微管解聚，抑制有丝分裂，促使细胞周期停滞，促进细胞凋亡等有关；但单药应用紫杉醇副反应较大，临床应用有限。参一胶囊具有明显的抗肿瘤作用，作用的机制主要是抑制肿瘤细胞增殖、浸润和转移、抑制新生血管生成、促进肿瘤细胞凋亡，并影响肿瘤细胞信号传导相关基因的表达和增强免疫力等，且能明显减轻抗肿瘤药物引起的副反应，提高肿瘤患者的生活质量。因此临床选择紫杉醇联合参一胶囊来探索其是否可以逆转这种耐药及可能的作用机制。
[0005]
【发明内容】
:
本发明提供了 NSCLC患者出现EGFR-TKIs耐药后，能够逆转这种耐药的有效方案。
[0006]本发明的技术方案为:
紫杉醇和EGFR-TKIs序贯治疗在EGFR突变阳性NSCLC患者中的应用，具体用法为紫杉醇175mg/ m2，dl ;吉非替尼250mg/次或厄洛替尼150mg/次，每日一次，d5_19，口服；21天为一个疗程。参一胶囊20mg/次，每日两次，饭前空腹口服，8周为一个疗程。
[0007]有益效果
1、本发明在细胞水平发现EGFR-TKIs耐药细胞株在经过紫杉醇处理后，miRNA-1的表达水平明显升高，野生型细胞miRNA-Ι未见明显改变，这说明紫杉醇很有可能用于NSCLC患者EGFR-TKIs耐药的治疗。之后本发明在临床上证实，对EGFR-TKIs耐药阳性的NSCLC患者再次应用化疗或加大EGFR-TKIs的剂量，均不能显著改善患者的生存质量和生存期。但我们惊奇的发现NSCLC患者EGFR-TKIs耐药后应用紫杉醇联合参一胶囊确实能够上调miRNA-1，使NSCLC患者对EGFR-TKIs重新敏感，从而逆转这种耐药，且副反应较轻，明显提高了肿瘤患者的生活质量，为再次应用EGFR-TKIs提供契机，重新获得收益，增加了疗效，延长了病人的生存期，具有很大应用前景和市场价值。
[0008]2、耐药性作为一种世界难题，特别是肿瘤治疗领域，能否逆转耐药成为亟待解决的难题之一，本发明首次发现紫杉醇和参一胶囊这两种常用抗肿瘤药物的联合可以逆转EGFR-TKIs耐药，具有极大现实的意义，为本领域治疗该肿瘤提供了新的思路，值得推广。
【专利附图】
【附图说明】
[0009]图1.H1975/PC-9/H820/A549细胞中miRNA-Ι在紫杉醇作用前后的变化；
图2.患者张某和侯某联合应用紫杉醇和参一胶囊前后血浆中miRNA-Ι相对表达量的变化。
【具体实施方式】
[0010]实施例1
1.细胞培养:细胞培养应用RPM1-1640培养基(内含10% FBS、青霉素和链霉索)传代培养细胞株H1975、PC-9、H820、A549 (这四种细胞均购自美国ATCC公司。所述的H1975细胞存在EGFR 19外显子缺失、20外显子T790M突变，对吉非替尼耐药；H820细胞存在含EGFR 19外显子缺失、T790M突变及c-Met基因扩增，对吉非替尼耐药；PC_9细胞存在EGFR19外显子缺失，对吉非替尼敏感；A549细胞为EGFR野生型细胞株，对吉非替尼耐药)。在37°C、含5% C02的孵箱中进行细胞培养，每1?2天更换培养液1次。该四种细胞为贴壁细胞，当细胞生长到融合度为90%左右时，使用胰酶消化，并用吸管反复吹打使其离开培养瓶底壁，然后离心收集提取RNA。
[0011]2.Real-time PCR:应用Trizol提取总RNA。紫外分光光度计测0.D值，计算RNA的浓度。所有试剂均为ABI (AppliedB1systems, USA)公司产品，将RNA用RT试剂盒(P/N 4366596)在ABI Prism 7900HT系统中反转成cDNA。cDNA在特异的TaqMan探针hsa-miR-1 ( P/N: 4373090)和内参U6 (P/N: 4373381)的参与下进行定量检测。数据运用公式RQ=2- ΔΔ Ct进行分析，每种样本均经过3次独立实验验证。
[0012]实验结果:H1975/PC-9/H820三株细胞经过紫杉醇处理后miRNA-Ι的表达量升高，野生型A549细胞miRNA-Ι未见明显改变，见图1。
[0013]实施例2
患者张某，女性，47岁，因咳嗽，咳痰三个月于2006年10月入院。辅助检查:胸部CT (2007-01-05):两肺结节，少量胸腔积液。查骨ECT提示全身多发骨病变，考虑肺癌伴骨转移；头颅MR未见明显异常；2007-01-20行肺穿刺病理示:转移性或侵润性腺癌；肿瘤指标正常。临床分期:CT4N3M1 IV期(骨转移、肺转移)既往体健，无烟酒嗜好。
[0014]患者入院后于2007-01-17行GP方案(吉西他滨+顺钼)化疗两周期，复查CT，疗效评价为疾病进展；症状无缓解；肿瘤指标正常。患者继续予以DP方案(多西他赛+顺钼)化疗两周期，复查CT，评价疗效为疾病进展；症状无缓解；肿瘤指标正常。化疗出现耐药。于2007-05-20患者开始口服易瑞沙(吉非替尼250mg/次，每日一次)治疗，复查CT(2007-06-03)提示病灶缩小；副反应轻微；29个月后，CT检查(2009-11-13)提示:病灶较前增大并出现转移灶；无明显症状；肿瘤标志物正常。患者出现易瑞沙耐药。于2010-01-06给予紫杉醇175mg/m2，dl ;易瑞沙250mg/次，每日一次，d5_19，口服；21天为一个疗程；参一胶囊20mg/次，每日两次，8周为一个疗程的治疗。两个疗程后复查CT，提示疾病稳定。随访检测外周血发现miRNA-Ι水平较前下降(见图2)。继续予以易瑞沙250mg/次，每日一次，期间复查CT，提示疾病稳定。最终因经济原因停用易瑞沙，疾病进展，于2012年6月患者死亡。
[0015]小结:此患者应用易瑞沙治疗获得了明显收益，疾病在控制了 29月后出现耐药，疾病进展；后续给予紫杉醇联合参一胶囊、易瑞沙序贯治疗，病人重新获益，说明紫杉醇联合参一胶囊使吉非替尼耐药的NSCLC患者对吉非替尼重新敏感，逆转耐药。此患者的总生存期达到了 5年8个月。
[0016]患者侯XX，女，70岁，因咳嗽、胸闷就诊；2007年7月经PET、MR以及肺穿刺活检确诊为肺腺癌伴肾上腺转移；既往无吸烟史。
[0017]2007年7月予以DP(多西他赛+顺钼)方案化疗；两周期后疗效评价为疾病稳定；又予以两周期此方案化疗后疗效评价为疾病进展；2007年11月予以单药吉西他滨维持治疗两周期；2008年6月检查发现转移病灶，且肺部病灶增大，疾病进展。
[0018]2008-6-20日开始口服特罗凯(厄洛替尼)，150mg/天；每月使用磷酸盐静滴一次；服药后两月行CT检查，提示肺部病灶稳定，部分转移病灶消失；副反应轻微；2009年6月，在特罗凯治疗第12个月时，肿瘤学标志物持续升高；同时肺部病灶增大。出现特罗凯耐药。于2009年8月开始予以紫杉醇175mg/m2，dl ;厄洛替尼150mg/次，每日一次，d5_19，口服；21天为一个疗程；参一胶囊20mg/次，每日两次，8周为一个疗程的治疗。两个疗程后复查CT，提示疾病稳定。随访检测外周血发现miRNA-Ι水平较前下降(见图2)。继续予以特罗凯150mg/次，每日一次，期间复查CT，提示疾病稳定；副反应轻微。最终因经济原因停用特罗凯，疾病进展，于2012年10月患者死亡。
[0019]小结:此患者在化疗出现耐药后开始服用特罗凯治疗，疗效明显，11个月的缓解期之后开始出现耐药，经紫杉醇联合参一胶囊、厄洛替尼的序贯治疗后，病人重新获益，总生存期达到了 5年3个月。
【权利要求】
1.紫杉醇联合参一胶囊与EGFR-TKIs在制备治疗EGFR突变阳性NSCLC药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的紫杉醇联合参一胶囊与EGFR-TKIs在制备治疗EGFR突变阳性NSCLC药物中的应用，其特征在于紫杉醇175mg/ m2，dl ;吉非替尼250mg/次或厄洛替尼150mg/次，每日一次，d5-19，口服；21天为一个疗程；参一胶囊20mg/次，每日两次，8周为一个疗程。
【文档编号】A61K31/337GK104306386SQ201410496308
【公开日】2015年1月28日 申请日期:2014年9月25日 优先权日:2014年9月25日
【发明者】郭人花, 冯静, 向程程, 喻绍敏, 金时代, 束永前 申请人:江苏省人民医院