一种从蒙药蓝盆花中制备总黄酮的方法
【专利摘要】本发明公开了一种从蒙药蓝盆花中提取和纯化总黄酮的方法，70％乙醇16倍量回流提取3次，每次2.5h；样品液中生药量与干树脂重量比为1∶2.1，色谱柱径高比为1∶25，流速控制在4BV/h，吸附完全后，用去离子水洗脱至洗脱液无色用，再用90％乙醇7BV洗脱，控制流速为4BV/h，收集洗脱液，减压浓缩至干，得到的总黄酮纯度28％以上。本发明提取纯化工艺方法简便、易行，可为蓝盆花有效部位的进一步研究奠定基础。
【专利说明】一种从蒙药蓝盆花中制备总黄酮的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于制药工程【技术领域】，涉及一种从蒙药蓝盆花中制备总黄酮的方法。
【背景技术】
[0002] 蒙药蓝盆花来源于川续断科植物窄叶蓝盆花Scabiosa comosa Fisch. Ex Roem. et Schult和华北蓝盆花Scabiosa tschilliensis Grunning的干燥花序，蒙药名为陶森-陶 日莫，属于蒙医专用、常用药材。主产于内蒙古、黑龙江、吉林、辽宁、河北等省区。味甘、涩， 性钝、燥、腻、重、凉，具清热、清"协日"之功效，蒙医临床用于肺热、肝热、咽喉热等病，主治 肝火头痛、发烧、肺热咳嗽、黄疸等病，蒙医临床治疗肝炎的方剂多有蓝盆花，如给旺-9、额 力根-7等，且具有良好的疗效。现代药理研究显示蓝盆花总黄酮具有抗炎、解热、抗氧化、 降血压、抑制血小板聚集、镇静，保护肾缺血再灌注损伤、提高机体免疫功能等多种作用；芹 菜素具有抑制ADP诱导的血小板聚集作用，从中分离鉴定的三萜皂苷具抑制胰脂肪酶的作 用。同属植物的药理活性研究报道极少，仅报道从该属植物S. hymettia中分离得到的部分 黄酮类、环烯醚萜类、香豆素类显示不同程度的抗菌活性。
[0003] 目前，国内学者曾对蓝盆花总黄酮的提取工艺进行了研究报道，尚未检索到有关 蒙药蓝盆花有效部位研究方面的报道和专利，更无有效部位纯化工艺研究报道，现有的制 剂均为生药粉直接入药，工艺简单，标准提取物的制备是目前解决这一问题的有效途径之 O
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于克服上述蒙药蓝盆花现有制备工艺中存在的技术缺陷，提供一 种从蒙药蓝盆花中制备总黄酮的方法。本发明采用乙醇回流提取法提取蓝盆花中总黄酮， 采用大孔吸附树脂富集纯化蓝盆花总黄酮，方法简单方便、工艺稳定、重现性良好，适于工 业化推广，对有效利用蒙药蓝盆花药材、推动药材的现代研究和应用方面具有重要意义。其 具体技术方案为：
[0005] 在蒙药蓝盆花现有药效物质基础研究结果的基础上，结合临床实践，研究出一种 从蒙药蓝盆花中制备总黄酮的方法。本方法特点：采用乙醇回流法提取总黄酮，依次通过单 因素实验和正交实验，以出膏率和总黄酮的浸出率为考察指标，运用统计学方法分析实验 结果，确定最佳提取工艺；采用大孔吸附树脂纯化富集蓝盆花总黄酮，通过静态-动态吸附 解吸实验确定最优纯化树脂和最佳纯化工艺；方法简单方便、工艺稳定、重现性良好，适于 工业化推广。
[0006] 一种从蒙药蓝盆花中提取总黄酮的方法，包括以下步骤：
[0007] (a)蒙药蓝盆花总黄酮的提取：蓝盆花药材，以6?16倍量50%?90%乙醇回流 提取1?4次，每次1?3h，合并提取液，回收乙醇，使制成生药浓度为0. 08gmL?0. 2g/ml 的提取液，备用；
[0008] (b)蒙药蓝盆花总黄酮的纯化：选取 S-8、D101、AB-8、HPD100、HPD400、X-5、D4020、 D3520、NKA-9型等常用大孔吸附树脂，按常规方法预处理后，以去离子水为溶媒湿法装柱， 径高比为I : 10?1 : 25;将提取液按样品液中生药量与干树脂重量比为1 : 15? 1 : 1.5上样，流速控制在l-4BV/h，吸附完全后，用去离子水洗脱至洗脱液无色，再用 10-7(?￥的60%?90%乙醇洗脱，控制流速为1?48￥/11，收集洗脱液，回收溶剂至干，产物 中总黄酮纯度为16. 56%?31. 95%。
[0009] 进一步优选，步骤（a)中：蓝盆花药材适量，以16倍量70%乙醇回流提取3次，每 次2. 5h，合并提取液，回收乙醇，制成生药浓度为0. 2g/ml的提取液，备用。
[0010] 步骤（b)中：选取S-8型大孔吸附树脂，按常规方法预处理后，以去离子水为溶媒 湿法装柱，径高比为1 : 25;将提取液按样品液中生药量与干树脂重量比为1 : 2.1上样， 流速控制在4BV/h，吸附完全后，用去离子水洗脱至洗脱液无色，再用7BV的90%乙醇洗脱， 控制流速为4BV/h，收集洗脱液，回收溶剂至干，产物中总黄酮纯度在28%以上，可有效去 除杂质。
[0011] 与现有技术相比，本发明的有益效果为：本发明采用乙醇提取法结合大孔吸附树 脂纯化法富集了药材中的黄酮类有效成分，得到了蒙药蓝盆花的标准提取物，提取纯化工 艺简便稳定，适于工业化，可促进蒙药蓝盆的有效利用和现代研究，并可减少临床服用剂 量、提高临床疗效和顺应性。
【专利附图】
【附图说明】
[0012] 图1是总黄酮标准曲线；
[0013] 图2是乙醇浓度对出膏率的影响；
[0014] 图3是乙醇浓度对总黄酮浸出率的影响；
[0015] 图4是乙醇用量对出膏率的影响；
[0016] 图5是乙醇用量对总黄酮浸出率的影响；
[0017] 图6是提取时间对出膏率的影响；
[0018] 图7是提取时间对总黄酮浸出率的影响；
[0019] 图8是提取次数对出膏率的影响；
[0020] 图9是提取次数对总黄酮浸出率的影响；
[0021] 图10是上样浓度对回收率的影响；
[0022] 图11是上样速度对回收率的影响；
[0023] 图12是径高比对回收率的影响；
[0024] 图13是蓝盆花总黄酮泄漏曲线；
[0025] 图14是洗脱浓度对回收率的影响；
[0026] 图15是洗脱体积对总黄酮量的影响；
[0027] 图16是不同洗脱速度对回收率的影响。
【具体实施方式】
[0028] 下面结合附图和具体实施例对本发明的技术方案作进一步详细地说明。
[0029] 实施例1蒙药蓝盆花总黄酮的提取工艺研究
[0030] 1材料、仪器及试剂
[0031] I. 1 材料
[0032] 蓝盆花药材于2009年3月购于内蒙古药材公司（产地：锡林郭勒），经内蒙古医学 院药学院乔俊缠老师鉴定为川续断科植物华北蓝盆花Scabiosa tschilliensis Grunning 的干燥花序。
[0033] 1. 2 仪器
[0034] DZF-6050型真空干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）；ES-J200-4电子天平（沈 阳龙腾电子有限公司）；AB135-S电子天平（METTLERT0LED0);永光明恒温水浴锅（北京市 永光明医疗仪器厂）；TC-15恒温电热套（海宁市华星仪器厂）；RE-52CS-1旋转蒸发器（上 海雅荣生化仪器设备有限公司）；TV-1901双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪 器）。
[0035] 1. 3 试剂
[0036] 95%乙醇（天津市科密欧化学试剂有限公司）分析纯；蒸馏水。
[0037] 2主要参数
[0038]
【权利要求】
1. 一种从蒙药蓝盆花中提取总黄酮的方法，其特征在于，包括以下步骤： (a) 蒙药蓝盆花总黄酮的提取：蓝盆花药材20g，以6?16倍量50%?90%乙醇回流 提取1?4次，每次1?3h，合并提取液，回收乙醇，使制成生药浓度为008gmL?0. 2g/ml 的提取液，备用； (b) 蒙药蓝盆花总黄酮的纯化：选取 S-8、D101、AB-8、HPD100、HPD400、X-5、D4020、 D3520、NKA-9型等常用大孔吸附树脂，按常规方法预处理后，以去离子水为溶媒湿法装柱， 径高比为1 : 10?1 : 25;将提取液按样品液中生药量与干树脂重量比为1 : 15? 1 : 1.5上样，流速控制在1?4BV/h，吸附完全后，用去离子水洗脱至洗脱液无色，再用 10-7(?￥的60%?90%乙醇洗脱，控制流速为1?48￥/11，收集洗脱液，回收溶剂至干，产物 中总黄酮纯度为16. 56%?31. 95%。
2. 根据权利要求1所述的从蒙药蓝盆花中提取总黄酮的方法，其特征在于， 步骤（a)中：蓝盆花药材，以16倍量70%乙醇回流提取3次，每次2. 5h，合并提取液， 回收乙醇，制成生药浓度为0. 2g/ml的提取液，备用； 步骤（b)中：选取S-8型大孔吸附树脂，按常规方法预处理后，以去离子水为溶媒湿法 装柱，径高比为1 : 25;将提取液按样品液中生药量与干树脂重量比为1 : 2.1上样，流速 控制在4BV/h，吸附完全后，用去离子水洗脱至洗脱液无色，再用7BV的90%乙醇洗脱，控制 流速为4BV/h，收集洗脱液，回收溶剂至干，产物中总黄酮纯度在28%以上。
【文档编号】A61K36/185GK104288189SQ201410509210
【公开日】2015年1月21日 申请日期:2014年9月18日 优先权日:2014年9月18日
【发明者】薛培凤, 赵子龙, 王娜娜, 魏慧 , 王国英, 李晓娟, 解红霞, 高建萍, 李春燕, 王丽, 王静 申请人:内蒙古医科大学