一种抗阴道感染免疫球蛋白复合抑菌剂的制作方法
【专利摘要】本发明涉及生物医药领域，尤其是涉及一种抗阴道感染免疫球蛋白复合抑菌剂。所述复合抑菌剂的有效活性组份由蛋黄免疫球蛋白IgY、壳聚糖和三氯生组成。所述的抗阴道感染免疫球蛋白复合抑菌剂用于制备治疗阴道炎的药物，能抑制阴道内细菌及念珠菌而不破坏阴道内正常菌群的生态平衡，还可防止阴道干涩，没有副作用，适合于预防和早期阴道炎的治疗。
【专利说明】一种抗阴道感染免疫球蛋白复合抑菌剂
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物医药领域，尤其是涉及一种抗阴道感染免疫球蛋白复合抑菌剂。
【背景技术】
[0002] 阴道炎是妇科门诊常见的疾病，其中最常见的是霉菌性阴道炎，由念珠菌感染所 致。念珠菌感染最常见的症状是白带多，外阴及阴道灼热瘙痒，外因性排尿困难，典型的白 带呈凝乳状或为片块状，阴道粘膜高度红肿，可见白色鹅口疮样斑块附着，易剥离，其下为 受损粘膜的糜烂基底，或形成浅溃疡，严重者可遗留瘀斑。妊娠期霉菌性阴道炎的瘙痒症状 尤为严重，甚至坐卧不宁，痛苦异常，也可有尿频、尿痛等症状。念珠菌性阴道炎的治疗方法 包括：局部用药，使用咪康唑栓剂、克霉唑栓剂、制霉菌素栓剂；全身用药(反复发作或不能 阴道给药的患者)使用氟康唑、伊曲康唑、酮康唑。这些药物多有副作用，还会抑制阴道内正 常菌群活性从而破坏阴道内正常的生态平衡。不适合妊娠期治疗，也不能用于预防。
【发明内容】
[0003] 为了克服这些问题，本发明公开了一种抗阴道感染免疫球蛋白复合抑菌剂，能抑 制阴道内细菌及念珠菌，适合于预防和早期阴道炎的治疗。
[0004] 本发明涉及一种抗阴道感染免疫球蛋白复合抑菌剂，一种抗阴道感染免疫球蛋白 复合抑菌剂，所述复合抑菌剂的有效活性组份由蛋黄免疫球蛋白IgY、壳聚糖和三氯生组 成。
[0005] 所述复合抑菌剂中，蛋黄免疫球蛋白IgY的含量按抗体效价计为100-50000滴度， 壳聚糖的含量按重量计为〇. 01%-1%，三氯生的含量按重量计为〇. 001%-1%。更优选地，所述 蛋黄免疫球蛋白IgY的含量按抗体效价计为1000-10000滴度，所述壳聚糖的含量按重量计 为0. 1%-0. 5%，所述三氯生的含量按重量计为0. 01%-0. 1%。
[0006] 所述复合抑菌剂的其它组分包括弱酸盐缓冲液、聚乙二醇和香精。
[0007] 所述弱酸盐缓冲液的浓度为5-200mM、pH为3-6. 5,聚乙二醇的含量按重量计为 1%-20%，香精的含量按重量计为0. 001%-0. 5%。
[0008] 更优选地，所述弱酸盐缓冲液的pH为3. 5-5。
[0009] 所述蛋黄免疫球蛋白IgY的制备方法如下： (1)抗原制备：将经裂解灭活的病原体与大豆油及大豆磷脂按2 :1:0. 8的质量比例混 合后用超声波乳化制得抗原乳化液，备用；所述的病原体为白色念珠菌、嗜血杆菌、棒状杆 菌、加特纳菌中的任一种或两种以上组合。
[0010] (2)蛋黄免疫球蛋白IgY抗体制备：用抗原乳化液免疫母鸡，收集鸡蛋，分离出蛋 黄；根据蛋黄重量加1-10倍量的〇. 1-10%甘露醇水溶液稀释蛋黄，离心，收集含抗体的上清 液，纯化抗体，用PBS缓冲液调整纯化抗体效价，分装、储存，备用。
[0011] 上述原料中采用的菌种可以由本领域技术人员通过常规的菌种分离、鉴定方法获 得，也可通过商业渠道，如中国微生物菌种网-北京北纳创联生物技术研宄院获得。本发明 所述的菌液均为通过单菌种纯化培养后获得的培养液。
[0012] 本发明还提供了一种所述抗阴道感染免疫球蛋白复合抑菌剂的制备方法，其特征 在于：先混合蛋黄免疫球蛋白IgY和聚乙二醇溶液，然后加入弱酸盐缓冲液混匀，再加入壳 聚糖溶液混匀，然后再加入三氯生溶液，混匀，最后加入香精混匀，经〇. 2M-0. 45P滤膜过滤 后分装。
[0013] 本发明还保护了所述的抗阴道感染免疫球蛋白复合抑菌剂在制备治疗阴道炎的 药物中的应用。
[0014] 本发明的免疫球蛋白复合抑菌剂是一种温和的免疫增强剂和抗菌剂，能抑制阴道 内细菌及念珠菌而不破坏阴道内正常菌群的生态平衡，还可防止阴道干涩，没有副作用，适 合于预防和早期阴道炎的治疗。
【具体实施方式】
[0015] 实施例1:抗菌免疫球蛋白制备例： 1)抗原制备：分别将白色念珠菌培养液和加特纳菌培养液于90°C保温10分钟灭活后， 用超声波破碎后各取5ml混合得IOml组合菌液，加入大豆油5ml和大豆磷脂按4ml混合后 用超声波搅打2分钟，便制得组合抗原乳化液，备用。
[0016] 2)鸡蛋抗体制备：用1)中所制备的抗原乳化液免疫母鸡(皮下注射)，每只每次注 射0. 3ml，每隔12天注射一次，注射5次后开始收集鸡蛋，随后每隔1个月再补充注射一次)； 将收集来的鸡蛋分离出蛋黄，根据蛋黄重量，用加5倍体积量的0. 2%甘露醇水溶液稀释蛋 黄、搅浑后静止离心，收集含抗体的上清液；将该上清液加到经上样缓冲液平衡的DEAE离 子树脂柱，依次用不同浓度(从低到高)的NaCl缓冲液洗脱柱子，收集0. 5-0. 8mM的NaCl洗 脱的IgY抗体流分；用PBS缓冲液调纯化抗体效价至1000-5000滴度或以上，分装、低温储 存，备用。
[0017] 实施例2: -种免疫球蛋白复合抑菌剂I配方，制备方法及使用方法。
[0018] -种免疫球蛋白复合抑菌剂其主要活性成分及含量为：1).蛋黄免疫球蛋白IgY, 其含量以抗体效价计为1000滴度，2).壳聚糖，其含量按重量计为0.1%，3).三氯生，其含 量按重量计为〇. 1°/〇。
[0019] 其制备方法如下（以终产品生产量为1升为例）： 1) .根据抗体原液滴度，取适量用PBS缓冲液稀释至抗体效价计为5000滴度，配制 200ml备用； 2) .取适量聚乙二醇-20000 (PEG-20000)，用纯净水调配成30% (w/v)浓度的水溶液， 配制IOOml备用； 3) .取适量的壳聚糖溶于1%乙酸溶液中调配成含5%壳聚糖的溶液，配制20ml备用； 4) .取适量三氯生用乙醇稀释至10%三氯生溶液，配制IOml备用； 5) . A)取一水柠檬酸10. 5克，用去离子水溶解并定容至IOOOml制得50mM柠檬酸水溶 液；B)取二水柠檬酸钠14. 7克，用去离子水溶解并定容至IOOOml制得50mM柠檬酸钠水溶 液；C)取适量A)和B)，将B)逐步加到A)里，边加边测pH值，至pH4. 8为止，便得pH5的 50mM柠檬酸盐缓冲液，配制800ml以上备用； 6) .分别取上述I) 200ml和2) IOOml预混合；另取3) 20ml和5) 600ml (pH5的50mM 柠檬酸盐缓冲液）混匀后，再加入1)和2)的预混合液，再加入4) 10ml，搅拌混合后用pH5 的50mM柠檬酸盐缓冲液定容至1000ml ;最后加Iml柠檬酸香精，混匀便制得免疫球蛋白复 合抑菌剂； 7).经0. 2M-0. 45P滤膜无菌过滤后分装在阴道洗液瓶内，每瓶50ml，另配无菌密封袋 装的一次性使用阴道冲洗棒。
[0020] 使用方法：拧开洗液瓶瓶盖，撕开冲洗棒密封袋，将冲洗棒与储液瓶对接旋紧；用 者取仰卧垫高臀部或蹲势将冲洗棒插入阴道内，缓慢挤压储液瓶将洗液注入，拔出冲洗棒， 保持原姿势10分钟，以保持有效抑菌效果。
[0021] 实施例3 -种免疫球蛋白复合抑菌剂II配方，制备方法及使用方法。
[0022] -种免疫球蛋白复合抑菌剂其主要活性成分及含量为：1).蛋黄免疫球蛋白IgY, 其含量以抗体效价计为1000滴度，2).壳聚糖，其含量按重量计为0.2%，3).三氯生，其含 量按重量计为〇. 02%。
[0023] 制备方法及使用方法如实施例2所述，主要活性成分浓度根据配方作适当调整。
[0024] 实施例4一种免疫球蛋白复合抑菌剂III配方，制备方法及使用方法。
[0025] -种免疫球蛋白复合抑菌剂其主要活性成分及含量为：1).蛋黄免疫球蛋白IgY, 其含量以抗体效价计为5000滴度，2).壳聚糖，其含量按重量计为0.2%，3).三氯生，其含 量按重量计为〇. 02%。
[0026] 制备方法及使用方法如实施例2所述，主要活性成分浓度根据配方作适当调整。
[0027] 实施例5-种复合抑菌剂IV(不含免疫球蛋白）配方，制备方法及使用方法。
[0028] 一种复合抑菌剂其主要活性成分及含量为：1).壳聚糖，其含量按重量计为0. 2%， 2).三氯生，其含量按重量计为0. 02%。
[0029] 制备方法按实施例2中制备方法的步骤2-7所述进行，活性成分浓度根据配方作 适当调整；使用方法按实施例2中所述的使用方法进行。
[0030] 实施例6比较几种不同配方抑菌剂的临床使用效果 临床使用效果试验方法：选取患有不同阴道炎的志愿者80名，如表1所示，不分年龄随 机分成5组，每组各16名（其中：细菌性阴道炎6人，念珠菌（霉菌）性阴道炎5人，滴 虫性阴道炎5人）。给组1-4的志愿者分别用实施例2-5所制备的复合抑菌剂I-IV，给组5 (对照组）使用生理盐水，按实施例2所述的使用方法，每天冲洗1次，连续进行15天，检查 每组志愿者的阴道炎情况并记录。各种阴道炎对应的症状减轻或消失视为有效，不变或变 得更严重的视为无效；疗效判定标准：1)细菌性阴道炎：阴道分泌物减少，鱼腥味减轻及 消失，外阴瘙痒或灼热感减轻或消失，分泌物作涂片检查时不再见到线索细胞。2)念珠菌性 阴道炎：外阴瘙痒、灼痛、性交痛等症状减轻，外阴及前庭的水肿、红斑减轻或消失，白色稠 厚呈凝乳或豆渣样的分泌物减少或消失。3)滴虫性阴道炎：阴道分泌物的稀薄脓性、黄绿 色、泡沫状和臭味等症状减轻或消失；外阴瘙痒减轻或消失；合并尿道感染减轻或消失；阴 道粘黏膜充血，散在出血斑症状减轻或消失，阴道PH降到5. 0以下。试验结果如表1所示。
[0031] 表1.比较实施例2、3、4、5所述抑菌剂临床使用效果：
【权利要求】
1. 一种抗阴道感染免疫球蛋白复合抑菌剂，其特征在于：所述复合抑菌剂的有效活性 组份由蛋黄免疫球蛋白IgY、壳聚糖和三氯生组成。
2. 根据权利要求1所述的抗阴道感染免疫球蛋白复合抑菌剂，其特征在于：所述复合 抑菌剂中，蛋黄免疫球蛋白IgY的含量按抗体效价计为100-50000滴度，壳聚糖的含量按重 量计为0. 01%-1%，三氯生的含量按重量计为0. 001%-1%。
3. 根据权利要求2所述的抗阴道感染免疫球蛋白复合抑菌剂，其特征在于：所述蛋黄 免疫球蛋白IgY的含量按抗体效价计为1000-10000滴度，所述壳聚糖的含量按重量计为 0. 1%-0. 5%，所述三氯生的含量按重量计为0. 01%-0. 1%。
4. 根据权利要求1所述的抗阴道感染免疫球蛋白复合抑菌剂，其特征在于：所述复合 抑菌剂的其它组分包括弱酸盐缓冲液、聚乙二醇和香精。
5. 根据权利要求4所述的抗阴道感染免疫球蛋白复合抑菌剂，其特征在于：所述弱酸 盐缓冲液的浓度为5-200mM、pH为3-6. 5,聚乙二醇的含量按重量计为1%-20%，香精的含量 按重量计为〇. 〇〇1%_〇. 5%。
6. 根据权利要求5所述的抗阴道感染免疫球蛋白复合抑菌剂，其特征在于：所述弱酸 盐缓冲液的pH为3. 5-5。
7. 根据权利要求1所述的抗阴道感染免疫球蛋白复合抑菌剂，其特征在于：所述蛋黄 免疫球蛋白IgY的制备方法如下： (1) 抗原制备：将经裂解灭活的病原体与大豆油及大豆磷脂按2 :1:0. 8的质量比例混 合后用超声波乳化制得抗原乳化液，备用；所述的病原体为白色念珠菌、嗜血杆菌、棒状杆 菌、加特纳菌中的任一种或两种以上组合； (2) 蛋黄免疫球蛋白IgY抗体制备：用抗原乳化液免疫母鸡，收集鸡蛋，分离出蛋黄；根 据蛋黄重量加1-10倍量的〇. 1-10%甘露醇水溶液稀释蛋黄，离心，收集含抗体的上清液，纯 化抗体，用PBS缓冲液调整纯化抗体效价，分装、储存，备用。
8. -种如权利要求4-7中任一项所述抗阴道感染免疫球蛋白复合抑菌剂的制备方法， 其特征在于：先混合蛋黄免疫球蛋白IgY和聚乙二醇溶液，然后加入弱酸盐缓冲液混匀，再 加入壳聚糖溶液混匀，然后再加入三氯生溶液，混匀，最后加入香精混匀，经0. 2M-0. 45P滤 膜过滤后分装。
9. 如权利要求1-7中任一项所述的抗阴道感染免疫球蛋白复合抑菌剂在制备治疗阴 道炎的药物中的应用。
【文档编号】A61K31/085GK104474547SQ201510006259
【公开日】2015年4月1日 申请日期:2015年1月7日 优先权日:2015年1月7日
【发明者】邹潮, 胡博志, 兰增金 申请人:蓝佳堂生物医药（福建）有限公司