免疫原性组合产品的制作方法

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：：本公开涉及免疫学领域。更具体地讲，本公开涉及用于诱发免疫应答以对抗呼吸道病原体的方法。由于呼吸道直接接触环境并且暴露于大量空气中的生物体，所以呼吸道是最频发病原生物体感染的部位。此类感染可以导致症状和从普通感冒到支气管炎、毛细支气管炎和肺炎的疾病以及严重和慢性状况。常见的呼吸道感染致病原既包括病毒（如鼻病毒、冠状病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒及其它副粘病毒、腺病毒）也包括细菌（如链球菌、白喉棒杆菌、百日咳杆菌、流感嗜血杆菌和结核分枝杆菌）。已经生产了有效疫苗以保护儿童和成人免受许多这些呼吸道病原体侵害。然而，已经证明，开发能有效对抗其它呼吸道病原体的疫苗具有挑战性。因此，能有效对抗呼吸道病原体的安全有效的疫苗的新策略对于尤其是保护幼儿、老人及其它脆弱个体而言是必要的。发明简述本公开涉及免疫原性组合产品，其包含a)免疫原性组分，其含有呼吸道病原体的肽或多肽抗原；和b)免疫原性组分，其含有编码该相同呼吸道病原体的抗原的核酸，其中所述这些免疫原性组分被配制成用于同时（例如，共定位的）施用。更具体地讲，所述呼吸道病原体是呼吸道合胞病毒（RSV）。本公开还涉及此类免疫原性组合产品的用途，以及施用此类免疫原性组合产品以诱发特异于所述呼吸道病原体的免疫应答的方法。附图简述图1是根据各种方案免疫后RSVA中和滴度的图示。图2是根据各种方案免疫后干扰素-γ(IFNγ)产量的图示。图3是根据各种方案免疫后RSVA中和滴度的图示。图4是根据各种方案免疫后RSVM2-1-特异性CD8+T细胞的图示。图5是根据各种方案免疫后中和滴度的图示。图6是根据各种方案免疫后肺部RSV滴度的图示。图7是根据各种方案免疫后Th1与Th2T细胞的比率的图示。图8是在对根据各种方案免疫的个体进行攻毒后肺部粘液分泌细胞的数量的图示。图9是在对根据各种方案免疫的个体进行攻毒后支气管肺泡灌洗(BAL)液中嗜酸性粒细胞的数量的图示。图10是根据各种方案免疫后RSVA中和滴度的图示。图11是根据各种方案免疫后RSVM2-1-特异性CD8+T细胞的图示。图12是在对根据各种方案免疫的个体进行攻毒后肺部病毒滴度的图示。图13是根据各种方案免疫后Th1与Th2T细胞的比率的图示。图14是在对根据各种方案免疫的个体进行攻毒后RSVM2-1-特异性CD8+T细胞的图示。图15是在对根据各种方案免疫的个体进行攻毒后肺部粘液分泌细胞的数量的图示。发明详述引言开发针对某些呼吸道病原体的安全有效的疫苗已经被证明颇具挑战性。本公开涉及具有提高的免疫原性功效的改善的组合物及方法。更具体地讲，本公开提供了用于同时并且优选地共定位施用的免疫原性组合产品，其诱发强力的B和T细胞应答，从而提高针对呼吸道病原体的免疫原性、安全性，并最终提高保护。本公开的一个方面涉及免疫原性组合产品，其包含：a)至少第一免疫原性组分，其包含呼吸道病原体的肽或多肽抗原；和b)至少第二免疫原性组分，其包含编码该相同呼吸道病原体的抗原的核酸；其中所述第一免疫原性组分和所述第二免疫原性组分被配制用于同时施用。在某些实施方案中，所述呼吸道病原体是病毒，如副粘病毒。在一个特定的实施方案中，所述呼吸道病原体是呼吸道合胞病毒（RSV）。在此类实施方案中，所述抗原可以选自RSV抗原，包括：融合蛋白（F）、附着蛋白（G）、基质蛋白（M2–其可包括M2-1（在本文中可写作M2.1）和M2-2基因产物之一或两者）和核蛋白（N）。在特定的实施方案中，所述多肽抗原组分含有F蛋白抗原，该F蛋白抗原在构象上被限制为融合前或融合后的构象。在所述免疫原性组合产品的某些实施方案中，所述第一组分的抗原和由所述第二组分的核酸编码的抗原共享充分的序列同一性，如约70%的序列。在示例性实施方案中，所述免疫组合包含：第一组分，其包含具有下列氨基酸序列的多肽；和/或第二组分，其包含编码具有下列氨基酸序列的多肽的核酸：a)包含SEQIDNO:2的多肽；b)与SEQIDNO:2具有至少80%序列同一性的多肽，所述多肽包含对应于天然存在的RSV毒株的RSVF蛋白多肽的氨基酸序列；或c)与SEQIDNO:2具有至少80%序列同一性的多肽，所述多肽包含不对应于天然存在的RSV毒株的氨基酸序列。在某些实施方案中，所述第一免疫原性组分含有而第二免疫原性组分编码同源抗原。此类同源抗原可能在序列上相同或不相同。例如，所述抗原可以具有部分相同的氨基酸序列。优选地，此类抗原包含一个或多个相同或重叠的免疫原性表位。例如，用于诱发特异于RSV的免疫应答的一个示例性免疫原性组合产品包含：第一免疫原性组分，其含有具有RSVF蛋白的至少约500个氨基酸的多肽；第二免疫原性组分，其含有编码相同或不相同多肽（例如，具有RSVF蛋白的至少约500个氨基酸）的核酸。当不相同时，RSVF蛋白多肽在F1和F2结构域内具有至少80%的序列同一性。优选地，所述第一免疫原性组分的多肽和/或由所述第二免疫原性组分编码的多肽包含或是RSVF蛋白的胞外结构域(FTM-)。在某些实施方案中，所述第一免疫原性组分和/或所述第二免疫原性组分含有（例如，呼吸道病原体的，特别是RSV的）多种抗原。如上所述，所述第一免疫原性组分含有呼吸道病原体的肽或多肽（或其片段）抗原。此类肽或多肽可以任选地为颗粒形式，如VLP或病毒颗粒，或纳米级生物颗粒。同样，如上所述，所述第二免疫原性组分含有编码呼吸道病原体的抗原的核酸。脱氧核糖核酸和核糖核酸都是合适的。优选地，所述核酸是除质粒DNA之外的核酸。所述核酸可以被包含在DNA或RNA载体，如可复制载体（例如，病毒复制子、自扩增核酸）中，或在病毒（例如，活的减毒病毒）或病毒载体（例如，复制型或复制缺陷型病毒载体）中。合适的病毒载体包括但不限于：腺病毒、改良安卡拉痘苗病毒（MVA）、副粘病毒、新城疫病毒、甲病毒、逆转录病毒、慢病毒、腺相关病毒（AAV）、水疱性口炎病毒和黄病毒。任选地，所述病毒载体为复制缺陷型。在一个实施方案中，所述第一组分含有RSVF蛋白抗原，而所述第二组分含有编码RSVF抗原和RSVM及N抗原的核酸。更具体地讲，所述第一组分含有在构象上被限制为融合前构象的RSVF蛋白抗原，而所述第二组分含有编码RSVFΔTM抗原和RSVM2-1及N抗原的核酸，其中在所述RSVFΔTM抗原与所述RSVM2-1之间包含了自切割位点，而在所述RSVM2-1与N抗原之间包含了柔性接头。所述免疫原性组合产品的第一和第二免疫原性组分可以被配制（例如，连同药学上可接受的缓冲剂、载体、赋形剂和/或佐剂）在不同的组合物中。作为另外一种选择，所述第一和第二免疫原性组分可以被共配制在单一组合物中用于施用（在制造时，例如，在适于保存、分配和施用的稳定共制剂中，或在施用前递送时）。当所述第一和第二免疫原性组分被配制在不同组合物中时，优选地将它们共定位施用于相同部位或其附近。例如，所述第一和第二免疫原性组分可以通过注射而被胃肠外施用（例如，经由选自肌内、透皮、皮内、皮下的施用途径）于相同侧面或肢体（同侧施用）。作为另外一种选择，所述第一和第二免疫原性组分可以经由粘膜、鼻内、口腔、舌下或喷雾途径施用，或以粉末（颗粒）或液体形式递送至肺部。在含有佐剂的制剂中，所述佐剂可以包含：一种或多种金属盐（氢氧化铝、磷酸铝、硫酸铝钾、硫酸羟基磷酸铝、氢氧化钙、氟化钙、磷酸钙、六水合硝酸铈(III)、七水合硫酸锌）、3-D-单磷酰脂A(MPL)、皂草苷、油和水乳液、和/或纳米颗粒。本公开的另一方面涉及上述免疫原性组合产品在医药上的用途，例如，用于预防、减少或治疗个体（如人类个体，例如，新生儿及婴儿、儿童、青少年、成人例如孕妇或老年人）中由呼吸道病原体引起的感染或与之相关的疾病。因此，还包括了用于通过施用上述免疫原性组合产品以诱发特异于病原体的免疫应答的方法。所述施用可以是在疫苗接种方案中，其用于预防、减少或治疗由呼吸道病原体（如引起上呼吸道和/或下呼吸道和/或肺部感染的病毒或细菌）引起的感染或与之相关的疾病。如上所述，在一个具体的实施方案中，所述用途、方法（或疫苗接种方案）是用于预防、减少或治疗由副粘病毒（如呼吸道合胞病毒(RSV)）引起的感染或与之相关的疾病。在此类方法、用途或疫苗接种方案中，所述第一和第二免疫原性组分被同时施用（在相同时间或大约相同的时间），并且通常在相同部位或其附近（例如，当通过注射施用时，为同侧）。当通过注射施用时，所述第一和第二免疫原性组分可以被共配制，或单独配制，在这种情况下，设想了使用多腔注射器或通过无针装置（如透皮贴剂）施用所述第一和第二免疫原性组分。在一些实施方案中，所述方法、用途或疫苗接种方案同时和/或共局部施用所述第一和第二免疫原性组分诱发特异于病原体的免疫应答，其大于由分开施用或使用所述第一免疫原性组分和所述第二免疫原性组分时所诱发的免疫应答的加和效应。优选地，施用本文公开的免疫原性组合产品诱发体液免疫应答、细胞免疫应答或同时诱发体液免疫应答和细胞免疫应答。还公开了含有本文所述的免疫原性组合产品的试剂盒。此类试剂盒还优选地包括用于施用所述免疫原性组合产品的至少一种装置，如一个或多个预填充注射器，例如，多腔注射器，或无针装置，如透皮贴剂。术语除非另行说明，否则本文中所用的全部技术与科学术语具有与本公开所属领域普通技术人员通常所理解的相同的含义。分子生物学常用术语的定义可见于：BenjaminLewin,GenesV,由OxfordUniversityPress出版,1994(ISBN0-19-854287-9);Kendrew等人(编撰),TheEncyclopediaofMolecularBiology,由BlackwellScienceLtd.出版,1994(ISBN0-632-02182-9);和RobertA.Meyers(编撰),MolecularBiologyandBiotechnology:aComprehensiveDeskReference,由VCHPublishers,Inc.出版,1995(ISBN1-56081-569-8)。除非上下文另行明确指出，否则单数术语“一（个、种……）”和“该”包括复数指代物。类似地，除非上下文另行明确指出，否则单词“或”旨在包括“和”。术语“复数”指代两个（种）或更多个（种）。还应当理解，就核酸或多肽所给出的所有碱基大小或氨基酸大小以及所有分子量或分子质量值均为近似值，并提供以用于说明。另外，相对于物质（如抗原）的浓度或水平而给出的数字界限旨在是近似值。因此，当指明浓度为至少（例如）200pg时，意味着该浓度应当理解为至少近似（或“约”或“~”）200pg。尽管与本文所述那些类似或等同的方法和材料可用于实践或测试本公开，但仍然在下文中描述了合适的方法和材料。术语“包含（comprises）”意为“包含（includes）”。因此，除非上下文另有要求，否则单词“包含（comprises）”及变型如“包含（comprise）”和“包含（comprising）”将理解为表明包括所述化合物或组合物（例如，核酸、多肽、抗原）或步骤，或化合物或步骤的群组，但并不排除任何其它化合物、组合物、步骤或其群组。缩写“例如（e.g.）”源自拉丁文exempligratia，并且在本文中被用于指示非限制性实例。因此，缩写“例如（e.g.）”与术语“例如（forexample）”同义。为了便于审查本公开的各个实施方案，提供了下列术语解释。在本公开的上下文中可以提供额外的术语和解释。术语“免疫原性”，当指代例如组合物时，意指该组合物能够诱发特异性（例如，针对病原体如呼吸道病原体的）免疫应答。“免疫原性表位”是特异性免疫应答（例如，B细胞应答和/或T细胞应答）所指向的抗原的一部分，例如，经由T细胞受体和/或抗体的特异性结合。“免疫原性组合物”或“免疫原性组分”是适于向人类或动物个体施用（例如，在实验设定中）的组合物，其能够诱发特异性免疫应答。因此，免疫原性组合物包含一种或多种抗原（例如，多肽抗原或编码多肽抗原的核酸）或抗原表位。免疫原性组合物还可以包含能够诱发或增强免疫应答的一种或多种额外的组分，如赋形剂、载体和/或佐剂。在某些情况下，施用免疫原性组合物以诱发免疫应答，所述免疫应答保护个体免于病原体诱导的症状或状况。在一些情况下，通过在个体暴露于病原体之后抑制所述病原体（例如，呼吸道病原体）的复制来防止（或减少或改善）该病原体引起的症状或疾病。在本公开的上下文中，术语免疫原性组合物将理解为涵盖旨在出于诱发针对呼吸道病原体的保护性或姑息性免疫应答的目的而向个体或个体的群体施用的组合物（即，疫苗组合物或疫苗）。在本公开的上下文中，“免疫原性组分”指代优先与一种或多种额外的免疫原性组分或组合物联合使用的免疫原性组合物。“免疫原性组合产品”是包含或包括不止一种（多种）替代“免疫原性组分”的免疫原性组合物。“免疫应答”是免疫系统的细胞（如但不限于：B细胞、T细胞、NK细胞、单核细胞、树突状细胞或多形核细胞）对刺激的应答。免疫应答可以是B细胞应答，其导致产生特异性抗体，如抗原特异性中和抗体。免疫应答也可以是T细胞应答，如CD4+应答或CD8+应答。在一些情况下，所述应答特异于特定的抗原（即，“抗原特异性应答”）。如果该抗原来源于病原体，则所述抗原特异性应答是“病原体特异性应答”。“保护性免疫应答”是这样的免疫应答，其抑制病原体的有害功能或活性，减少病原体引起的感染，或减少由该病原体的感染导致的症状（包括死亡）。可以如下测量保护性免疫应答，例如，通过在噬斑减少测定法中抑制病毒复制或噬斑形成，或通过功能性抗体应答，通过减少病征或症状，或通过体内测量对病原体攻毒的抗性。“抗原”是可以刺激动物体内抗体产生和/或T细胞应答的化合物、组合物或物质，包括注射、吸收或以其它方式引入到动物（如人类）体内的组合物。术语“抗原”包括所有相关的抗原表位。术语“表位”或“抗原决定簇”指代B和/或T细胞所响应于的抗原上的位点。“优势抗原表位”或“优势表位”是这样的表位，针对其产生了功能上显著的宿主免疫应答，例如，抗体应答或T细胞应答。在一些情况下，对一种或多种优势表位的宿主应答提供了对抗病原体的保护性免疫应答。术语“T细胞表位”指代当结合至合适的MHC分子时，T细胞（经由T细胞受体）所特异性结合的表位。“B细胞表位”是抗体（或B细胞受体分子）所特异性结合的表位。术语“多肽”指代这样的聚合物，其中单体是氨基酸残基，其通过酰胺键接合在一起。术语“多肽”或“蛋白质”，如本文所用，旨在涵盖任何氨基酸序列并且包括经修饰的序列如糖蛋白。术语“多肽”特别旨在涵盖天然存在的蛋白质，以及重组或合成生产的那些。术语“片段”，在涉及多肽时，指代多肽的一部分（即，子序列）。术语“免疫原性片段”指代所有这样的多肽片段，其保留了全长参考蛋白或多肽的至少一个主要免疫原性表位。术语“肽”指代氨基酸聚合物（通过酰胺键接合），其长度通常小于100个氨基酸（例如，长度小于50、或小于40、或小于30、或小于25、或小于20、或小于15、或小于10个氨基酸）。肽或多肽内的取向通常列举为N-末端至C-末端的方向，由单个氨基酸的氨基和羧基部分的取向定义。多肽是从N或氨基-末端向C或羧基-末端进行翻译的。术语“核酸”和“多核苷酸”指代长度为至少10个碱基的核苷酸的聚合形式。核苷酸可以是核糖核苷酸、脱氧核糖核苷酸、或任一核苷酸的经修饰的形式。该术语包括DNA或RNA的单链和双链或正和负的形式。所谓“分离的”核酸（或多核苷酸）意指这样的核酸（或多核苷酸），其没有与在其所来源的生物体的天然存在的基因组中紧邻的两个编码序列（一个在5′端而一个在3′端）紧邻。在一个实施方案中，多核苷酸编码多肽。核酸的5′和3′方向是根据单个核苷酸单元的连接性来定义的，并且根据脱氧核糖（或核糖）环的碳的位置来命名的。核酸序列的信息（编码）内容以5′至3′的方向读取。在核酸的语境中，术语“载体”指代这样的核酸，其能够并入或携带得自不同来源的核酸（“插入序列”），并在被引入到细胞（例如，宿主细胞）中时，复制和/或表达该插入的多核苷酸序列。核酸载体可以是DNA或RNA。术语载体将理解为包括，例如，质粒、粘粒、噬菌体、病毒载体、自主复制的病毒核酸、复制子、人工染色体，等。“佐剂”是以非特异性的方式提高免疫应答产生的试剂。常用佐剂包括：矿物质悬浮剂(明矾、氢氧化铝、磷酸铝)，抗原被吸附其上；乳液，包括油包水和水包油(及其变型，包括复乳液和可逆乳液)、脂糖、脂多糖、免疫刺激核酸(如CpG寡核苷酸)、脂质体、Toll样受体激动剂(特别是，TLR2、TLR4、TLR7/8和TLR9激动剂)以及此类组分的各种组合。“疫苗接种方案”指代确定的施用免疫原性组合物或免疫原性组合物的组合的方案（例如，顺序）以诱发所需的特异于抗原（或多种抗原）的免疫应答。术语“同时”或“同时地”意指在相同时间或大约相同的时间。同时施用免疫原性组合产品意指在相同时间或大约相同的时间施用两种或更多种免疫原性组分。在疫苗接种方案的上下文中，该术语应当理解为意指施用两种或更多种免疫原性组分以诱发动力学相关的免疫应答（例如，初次应答，或再刺激或加强再次或记忆应答的应答）。通常，同时施用（例如，免疫原性组合产品的）两种或更多种免疫原性组分发生在0至10天之间。通常，同时施用发生在相隔不超过约7天，如约5天，优选不迟于约3天，如在24小时内，如在约8小时或更短时间内。一般，同时施用两种或更多种免疫原性组分发生在约2小时或更短时间内，这样在2小时、1小时内或约30分钟或约10分钟内施用第一种和至少第二种免疫原性组合物或组分。在一些情况下，同时施用是在相同时间以例如一次或多次注射进行。有关向个体施用不止一种免疫原性组合物的术语“共施用”是指同时施用所述不止一种免疫原性组合物。术语“共定为地”是指将两种组合物（例如，免疫原性组合物或免疫原性组合产品的免疫原性组分）施用到接受个体身上相同（或大约相同）的位置。所述相同位置在本文中将理解为意指相同或大致相同的部位或孔洞。例如，在粘膜施用的情况下，可以将免疫原性组合产品施用到相同孔洞（例如，口或鼻）。在胃肠外施用的情况下，共定位是指靠近身体上相同（或大致相同）的部位，如相同部位（例如，通过相同装置），或约10cm以内，或更常见地约5cm以内，如约2cm以内或1cm以内。在一些情况下，所述两种或更多种组分被合并（共配制）在单一组合物中用于施用到相同部位。术语“同侧”或“同侧地”，在胃肠外施用的情况下，是指总体上两侧对称的生物体（如哺乳动物，例如，人或动物个体）身体的同一侧。与术语同侧相对的是术语“对侧”，其指代总体上两侧对称的生物体的相对侧。“个体”是活的多细胞脊椎生物。在本公开的上下文中，所述个体可以是实验个体，如非人动物，例如，小鼠、棉花大鼠，或非人灵长类。或者，所述个体可以是人类个体。免疫原性组合产品本公开涉及能够例如在未经试验的个体中诱发强力T细胞和B细胞应答的免疫原性组合产品。本文公开的免疫原性组合产品含有：a)至少第一免疫原性组分，其包含肽或多肽抗原；和b)至少第二免疫原性组分，其包含编码抗原的核酸。含有所述肽或多肽抗原和所述编码抗原的核酸的免疫原性组分被配制成用于向接受者同时施用。当同时施用时，所述第一和第二免疫原性组分诱发，相比各组分单独施用时的加和应答，更强或更广（例如，更多样化和/或在性质上更加均衡）的免疫应答。尽管保护性免疫应答可被表征为主要是B细胞应答（抗体，例如，中和抗体）或T细胞应答（例如，CD8+T细胞应答），但在一些情况下，生成特异于病原体抗原（相同的或不同的）强力的B细胞和强力的T细胞应答是期望且有利的。遗憾的是，许多疫苗接种方案不成比例地诱发B细胞或T细胞应答而在互补应答上并没有保护性增加。无法同时诱发B和T细胞应答在保护幼婴上可以是尤其重要的，这既是由于婴儿免疫系统的相对不成熟，并且还由于母源抗体的存在。典型的疫苗方案涉及反复施用相同的免疫原性组合物（例如，疫苗）。第一次施用（方便起见，定名为引发施用或“引发”）诱导特异于抗原上存在的一个或多个免疫原性表位的B和/或T细胞前体的增殖和成熟（诱导阶段）。第二次（以及在一些情况下后续的）施用（方便起见，定名为加强施用或“加强”）进一步刺激并潜在地选择由先前施用诱发的细胞回忆应答。因此，对B细胞或T细胞免疫应答的偏向通过后续施用相同的免疫原性组合物而被放大。在某些情况下，所述第一次施用是给未经试验的个体。本发明是基于这样的证明，同时施用蛋白质（或肽）抗原与编码该相同病原体的抗原的核酸，正如病原体特异性中和抗体所证实的那样，能够诱发特异于该抗原的B和T细胞应答并且其超过（同时在量和质上）通过单独和/或相继施用所述两种组合物所诱发的累积应答。此外，可以实现该组合而没有免疫干预，所述免疫干预在多种（例如，相关的）抗原的组合中被频繁地观察到。在一些情况下，免疫干预显著减弱所诱发的免疫应答以致使得联合疫苗接种达不到预期目的。之前已经不仅在针对呼吸道病原体的疫苗（例如，联合疫苗）的背景中，还在母源抗体与疫苗接种处于生命早期的婴儿（例如，从新生儿期到大约6个月大期间）之间的干预的背景中，报道了免疫干预。如上所用，“同时（concurrent）”或“同时（simultaneous）”施用指代相同的持续的免疫应答。优选地，在相同时间施用两种组合物（同时施用DNA+蛋白质），然而，一种化合物可以在另一种（初始）施用的数分钟内（例如，在同一次医疗预约或就诊时）、数小时内，或数周时间内（优选0-10天）被施用并仍然被视为“同时”，因为它们均在相同的持续的免疫应答期间起作用。通常，当施用多肽时，一旦抗原暴露于免疫系统，免疫应答就将启动，因此该免疫应答被视为即刻的。相比之下，当施用核酸时，在施用后3-7天观察到抗原的峰值表达（体内），并且因此，当与蛋白质疫苗接种的动力学相比时，抗原暴露于免疫系统可被视为“延迟的”。无论动力学上的差异如何，通过了解到它们均功能性地存在于持续的免疫应答的过程中，所以核酸与多肽的共施用可以被视为“同时的”。为了将两种免疫原性组分（即多肽以及由所施用的核酸表达的多肽二者）几乎同时提供给免疫系统，可以设想这样的制剂，其中以如下方式控制所述多肽：在施用后，其从制剂中被延迟释放。这允许首先从多核苷酸表达多肽，其随后由从制剂中延迟释放的多肽进行补充。在本文公开的免疫原性组合产品的一个具体实施方案中，涉及同时施用核酸和蛋白质两者，其中所述蛋白质（多肽）以延迟释放颗粒的形式提供或施用，旨在使抗原在短时期内避开免疫系统。优选地，此时期为0-10天。通常，同时施用以相隔不超过约7天，如约5天的间隔进行，并且更通常间隔不超过约3天，如在24小时内，如在约8小时或更短时间内。一般，同时施用两种或更多种免疫原性组分发生在约2小时或更短时间内，这样在2小时、1小时内，或约30分钟内，或约20分钟或约10分钟内，或约5分钟内，或约2分钟内施用第一种和至少第二种免疫原性组合物或组分。在一些情况下，同时施用是在相同时间以例如一次或多次注射进行。设想了同时施用可以在单次医疗预约或就诊时方便地进行。无论同时（concurrent或simultaneous）施用的不同模式或可能性如何，如上所述，重要的是，在持续免疫应答的诱导阶段中提供这两种免疫原性组分。与此相比，引发加强概念指代2种单独的免疫应答：(i)用多核苷酸初次引发免疫系统，然后是(ii)在初次免疫应答已经建立后许多周或月用多肽再次或加强免疫系统。核酸和蛋白质组分可以因此作为两个单独的事件或联合（混合的）施用以允许一次施用。优选地，所述核酸和蛋白质组分是混合的。混合可以在使用之前才进行，或在制造（和配制）这两种组分时进行，或在其间任何时间进行。已经证实，所公开的免疫原性组合产品规避免疫干预，并且相比单独施用基于蛋白质或基于核酸的疫苗中的任一者，具有更优越的或更广的（例如，更多样化和/或更均衡）免疫原性。所公开的免疫原性组合产品特别适用于诱发针对呼吸道病原体，尤其是针对RSV的免疫应答。呼吸道病原体应当理解为意指感染上呼吸道（鼻腔、咽和喉）和/或下呼吸道（气管、支气管、肺）细胞的病原体，在严重的情况下，引起支气管炎、毛细支气管炎和/或肺炎。呼吸道病原体既包括细菌也包括病毒。感染呼吸道的细菌病原体包括，例如，肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟氏菌以及流感嗜血杆菌和卡他莫拉菌，其涉及社区获得性肺炎(CAP)和慢性支气管炎的急性加重(AECB)。白喉棒杆菌是上呼吸道感染，白喉，的致病剂，而百日咳杆菌引起百日咳（whoopingcough或Pertussis）。引起呼吸道感染的其它细菌包括：肺炎衣原体、肺炎支原体和嗜肺军团菌。在细菌呼吸道病原体中还包括：结核分枝杆菌，其引起（除其它表现外）肺结核；炭疽芽孢杆菌，其在被吸入后引起致命的呼吸道感染；以及鼠疫杆菌，其能够引起肺鼠疫。广泛的病毒也感染并引起呼吸道疾病。最主要地，病毒呼吸道病原体包括：正粘病毒科的成员（例如，流感病毒）和副粘病毒科的成员（包括呼吸道合胞病毒(RSV)）、偏肺病毒(例如，人类偏肺病毒，hMPV)、副流感病毒(PIV)，以及引起麻疹(麻疹病毒)、腮腺炎(腮腺炎病毒)和新城疫的病毒。腺病毒也是常见的呼吸道病原体。尽管不太频繁，但某些冠状病毒(例如，SARS病毒)可以引起严重的呼吸道疾病。另外，风疹病毒，一种引起风疹的披膜病毒，可以导致呼吸道感染。因此，在本公开的上下文中，广义地讲，细菌呼吸道病原体和病毒呼吸道病原体均是本文所述的免疫原性组合产品与方法的合适的靶标。在某些实施方案中，所述呼吸道病原体被选为细菌。在用于预防或减少（或治疗）由细菌呼吸道病原体引起的感染或疾病的免疫原性组合产品（如本文所述）中，所述免疫原性组合产品包含选自细菌的抗原，如选自以下细菌的抗原：肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟氏菌、流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌、白喉棒杆菌、百日咳杆菌、肺炎衣原体、肺炎支原体、嗜肺军团菌、结核分枝杆菌、炭疽芽孢杆菌和鼠疫杆菌。在用于预防或减少（或治疗）由病毒呼吸道病原体引起的感染或疾病的免疫原性组合产品的实施方案中，所述免疫原性组合产品包含选自病毒的抗原，如选自以下病毒的抗原：正粘病毒（如流感病毒）、副粘病毒（如呼吸道合胞病毒(RSV)）、偏肺病毒、副流感病毒(PIV)、麻疹病毒(Morbillivirus)、腮腺炎病毒(Rubulavirus)、新城疫病毒、腺病毒、冠状病毒(如SARS病毒)、风疹病毒和披膜病毒。因此，在某些实施方案中，所述呼吸道病原体可以是流感病毒，而所述蛋白质（或肽）抗原和所述由核酸编码的抗原是流感病毒的抗原。合适的流感病毒抗原包括：血凝素(HA)、神经氨酸酶(NA)、核蛋白(NP)和基质(M)蛋白。在特定的实施方案中，所述抗原被选为包括同源抗原。即，所述多肽抗原和所述由核酸编码的抗原均被选为HA抗原、NA抗原、NP抗原和/或M抗原。在这种情况下，HA、NA、NP和/或M抗原可以是相同的或不相同的。如果不相同，则所述两种抗原还是可以包含一个或不止一个在序列上相同的同源表位。或者，如果不相同，则所述两种抗原可以包含一个或不止一个选自不同的流感血清型的同源表位。在实施例中所示的某些优选的实施方案中，所述呼吸道病原体是除流感之外的病毒，如副粘病毒（例如，RSV、hMPV或PIV）。因此，此类免疫原性组合产品包含副粘病毒的抗原。在一个具体的实施方案中，所述组合被选为包含RSV的抗原。如上所述，呼吸道合胞病毒（RSV）是副粘病毒科的病原性病毒。在本文公开的免疫原性组合产品的背景中，合适的RSV抗原可以选自：融合蛋白(F)、附着蛋白(G)、基质蛋白(M2)和核蛋白(N)。术语“F蛋白”或“融合蛋白”或“F蛋白多肽”或“融合蛋白多肽”指代具有RSV融合蛋白多肽的全部或部分氨基酸序列的多肽或蛋白质。类似地，术语“G蛋白”或“G蛋白多肽”指代具有RSV附着蛋白多肽的全部或部分氨基酸序列的多肽或蛋白质。术语“M蛋白”或“基质蛋白”或“M蛋白多肽”指代具有RSV基质蛋白的全部或部分氨基酸序列的多肽或蛋白质。类似地，术语“N蛋白”或“核衣壳蛋白”或“N蛋白多肽”指代具有RSV核蛋白的全部或部分氨基酸序列的多肽或蛋白质。已经描述了两组人类RSV毒株，A和B组，其主要基于G糖蛋白抗原性的差异。迄今为止，已经分离出了大量的RSV毒株，其中任一者均适于本文公开的免疫原性组合产品的抗原的背景。由GenBank和/或EMBL登录号指示的示例性毒株可见于美国专利申请公布号2010/0203071(WO2008114149)，出于公开适用于本文公开的免疫原性组合产品的RSVF和G蛋白的核酸和多肽序列的目的，其通过引用并入本文中。示例性M和N蛋白的核酸和蛋白质序列可见于，例如，美国专利申请公布号2014/0141042(WO2012/089833)，出于公开适用于本文公开的免疫原性组合产品的RSVM和N蛋白的核酸和多肽序列的目的，将其并入本文中。另外的RSV毒株（及其F、G、M和N蛋白抗原）很可能被分离，并涵盖在RSV抗原的属内。类似地，RSV属涵盖了由天然存在的（例如，此前或后续鉴定出的毒株）通过基因漂移或人工合成和/或重组而产生的变体。有记录的RSV毒株基因组及其替代核酸和由其编码的蛋白质（特别是F、G、M和N蛋白）的序列可以由本领域普通技术人员通过搜索GenBank(在万维网(http://www)上于ncbi.nlm.nih.gov/genbank)而容易地确定。在某些优选的实施方案中，所述多肽抗原是F蛋白多肽抗原。特别适合作为本文公开的免疫原性组合产品的背景中的多肽抗原组分是在构象上受限的F多肽抗原。之前已经描述了构象上受限的F蛋白的融合前(PreF)和融合后(PostF)构象。此类构象上受限的F蛋白通常包含经工程改造的RSVF蛋白胞外结构域。F蛋白胞外结构域多肽是RSVF蛋白的一部分,其包含RSVF蛋白的细胞外结构域的全部或部分并且缺少(例如，通过缺失或置换)功能性跨膜结构域，其可以例如在细胞培养中以可溶形式（未附接至膜）表达。本领域已经描述了构象上受限于融合前构象的示例性F蛋白抗原并在例如美国专利No.8,563002(WO2009079796)；美国专利申请公布No.US2012/0093847(WO2010/149745)；US2011/0305727(WO2011/008974)；US2014/0141037和WO2012158613中详细公开，出于说明融合前F多肽(和核酸)及其生产方法的目的，其各自通过引用并入本文中。通常，所述抗原是多肽三聚体的形式。提供了融合前构象的F蛋白的实例另外出版物包括：McLellan等人，Science,Vol.340:1113-1117;McLellan等人，Science,Vol342:592-598和Rigter等人，PLOSOne,Vol.8:e71072，其各自也可以被用在本文公开的免疫原性组合产品的背景中。同样，构象上受限于融合后构象的F蛋白抗原也是本领域熟知的并且可以被用在本文公开的免疫原性组合产品的背景中。通常，所述抗原是多肽三聚体的形式。融合后构象上受限的F蛋白多肽的实例在例如US2011/0305727(WO2011/008974)和Swanson等人，PNAS,Vol.108:9619-9624中详细公开，出于说明融合后F多肽和核酸及其生产方法的目的，其各自通过引用并入本文中。例如，稳定在融合前构象中的F蛋白多肽通常包含F蛋白的胞外结构域（例如，可溶性F蛋白多肽），其包含至少一种修饰以稳定所述F蛋白的融合前构象。例如，所述修饰可以选自：添加三聚化结构域(通常在C末端)、缺失一个或多个弗林蛋白酶裂解位点(在氨基酸~105-109和~133-136处)、缺失pep27结构域、在疏水性结构域(例如，HRA和/或HRB)中置换或添加亲水性氨基酸。在实施方案中，构象上受限的PreF抗原包含RSVF蛋白多肽的F2结构域(例如，氨基酸1-105)和F1结构域(例如，氨基酸137-516)而不含干预性弗林蛋白酶裂解位点，其中所述多肽还包含位于所述F1结构域C末端的异源三聚化结构域。任选地，所述PreF抗原还包含改变糖基化(例如，增加糖基化)的修饰，如置换一个或多个位于对应于RSVF蛋白的氨基酸~500-502处的氨基酸。另外或可替换地，所述构象上受限于融合前构象的F多肽可以包含至少两个引入的半胱氨酸残基，其彼此紧邻并形成二硫键以稳定所述融合前RSVF多肽。例如，这两个半胱氨酸可以彼此在约10Å内。例如，半胱氨酸可以被引入到位置165和296。示例性PreF抗原由SEQIDNO:2表示。在其它实施方案中，构象上受限的F抗原可以包含选自以下的一种或多种修饰：1)对一个或两个弗林蛋白酶裂解位点的一种或多种修饰(例如，突变)，2)对融合肽的一种或多种修饰，3)对p27接头的一种或多种修饰，4)添加的寡聚序列；和/或提供蛋白酶裂解位点的添加序列。在实施方案中，所述F抗原包含三个RSVF胞外结构域多肽（其各自包含内源HRA区和任选地内源HRB区）和至少一个寡聚多肽，其中所述三个胞外结构域多肽和所述至少一个寡聚多肽形成六螺旋束，前提条件是所述RSVF多肽的内源HRA区不是所述六螺旋束的一部分。所述三聚体可以被表征为：所形成的六螺旋束包含所述HRB区。在一个特定的优选实施方案中（详述于实施例中），所述F蛋白多肽是具有选自以下的氨基酸序列的蛋白质：a)包含SEQIDNO:2的多肽；b)与SEQIDNO:2具有至少80%序列同一性的多肽，所述多肽包含对应于天然存在的RSV毒株的RSVF蛋白多肽的氨基酸序列；和c)与SEQIDNO:2具有至少95%序列同一性的多肽，所述多肽包含不对应于天然存在的RSV毒株的氨基酸序列。确定序列同一性的方法是本领域熟知的，并且适用于上述抗原多肽以及编码它们的核酸（例如，如下所述）。各种程序和比对算法描述于：Smith和Waterman,Adv.Appl.Math.2:482,1981;Needleman和Wunsch,J.Mol.Biol.48:443,1970;Higgins和Sharp,Gene73:237,1988;Higgins和Sharp,CABIOS5:151,1989;Corpet等人，NucleicAcidsResearch16:10881,1988;以及Pearson和Lipman,Proc.Natl.Acad.Sci.USA85:2444,1988中。Altschul等人，NatureGenet.6:119,1994提供了序列比对方法和同源性计算的详细考量。NCBI基本局部比对搜索工具(BLAST)(Altschul等人，J.Mol.Biol.215:403,1990)可得自若干来源，包括国家生物技术信息中心(NCBI,Bethesda,MD)和互联网，用于与序列分析程序blastp、blastn、blastx、tblastn和tblastx结合使用。可在互联网上的NCBI网站上得到如何使用此程序确定序列同一性的说明。在一些情况下，所选抗原相对于其衍生自的天然存在的毒株的氨基酸序列具有一个或多个氨基酸修饰。此类差异可以是添加、缺失或置换一个或多个氨基酸。变体的差异通常不超过约1%或2%或5%或10%或15%或20%的氨基酸残基。例如，相比参考多肽，如SEQIDNO:2的参考F抗原多肽序列，变体抗原多肽序列可以包含1或2，或最多5，或最多约10，或最多约15，或最多约50，或最多约100个氨基酸差异。因此，RSVF蛋白抗原的背景中的变体通常与参考蛋白（例如，SEQIDNO:2中所示的参考序列）共享至少80%或85%，更常见地，至少约90%或以上，如95%，或甚至98%或99%的序列同一性，并且包括本文公开的任何示例性PreF和/或PostF抗原(例如，参见美国专利No.8,563002(WO2009079796)；美国专利申请公布No.US2012/0093847(WO2010/149745);US2011/0305727(WO2011/008974);US2014/0141037;WO2012158613;McLellan等人，Science,Vol.340:1113-1117;McLellan等人，Science,Vol342:592-598;Rigter等人，PLOSOne,Vol.8:e71072;US2011/0305727(WO2011/008974)以及Swanson等人，PNAS,Vol.108:9619-9624。作为本公开的特征而包括的另外的变体是F抗原（包括PreF和PostF抗原），其包含选自在美国专利申请公布号2010/0203071(WO2008114149)中公开的天然存在的变体的核苷酸或氨基酸序列的全部或部分。另外的变体可以通过基因漂移产生，或可以使用定点或随机诱变或通过重组两个或更多个预先存在的变体而人工产生。此类另外的变体也适于本文公开的F抗原的背景中。例如，所述修饰可以是置换一个或多个氨基酸(如两个氨基酸、三个氨基酸、四个氨基酸、五个氨基酸、最多至约十个氨基酸或更多)，其不改变所得F(例如，PreF或PostF)抗原的构象或免疫原性表位。作为另外一种选择或除此之外，所述修饰可以包括缺失一个或多个氨基酸和/或添加一个或多个氨基酸。事实上，如果需要，所述多肽结构域中的一个或多个可以是合成多肽，其不对应于任何单个毒株，但包含来自多个毒株或甚至来自通过比对多个RSV病毒多肽毒株而推断出的共有序列的组分子序列。有关共有RSVF(以及M和N)蛋白抗原的实例，参见，US2014/0141042(WO2012/089833)，其通过引用并入本文中，用于教导示例性F、M和N共有序列多肽抗原的设计。在某些实施方案中，所述多肽结构域中的一个或多个通过添加构成标签的氨基酸序列进行修饰，其有助于后续加工或纯化。此类标签可以是抗原或表位标签、酶标签或多组氨酸标签。通常，所述标签位于所述蛋白的一端或另一端，如在所述抗原或融合蛋白的C-末端或N-末端。除了多肽或肽抗原之外，本文公开的免疫原性组合产品还包含第二免疫原性组分，其含有编码该相同呼吸道病原体的抗原（如所述第一免疫原性组分中所含肽或多肽抗原）的核酸。设想了所述核酸是除质粒DNA之外的核酸。所述核酸可以是复制型或复制缺陷型载体的形式，如病毒载体。许多适用于将免疫原性核酸引入到个体中的病毒载体是本领域已知的，并且既包括DNA病毒也包括RNA病毒。适用于编码本文公开的免疫原性组合产品的背景中的抗原的实例包括，例如：腺病毒载体(复制型或复制缺陷型)、痘病毒载体（包括牛痘病毒载体，如改良安卡拉痘苗病毒（MVA）、NYVAC、禽痘载体、金丝雀痘（ALVAC）和鸡痘病毒（FPV））、甲病毒载体（如辛德毕斯病毒、SemlikeForest病毒（SFV）、罗斯河病毒和委内瑞拉马脑炎（VEE）病毒）及其嵌合体和复制子、疱疹病毒载体（例如，巨细胞病毒（CMV）衍生的载体）、沙粒病毒载体（如淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒（LCMV）载体）、麻疹病毒载体、水疱性口炎病毒载体、伪狂犬病毒、腺相关病毒、逆转录病毒、慢病毒、病毒样颗粒以及许多其它病毒载体。在一个具体的实施方案中，所述载体是腺病毒。对于本领域普通技术人员而言，腺病毒载体的生产和使用是熟知的。在本文公开的免疫原性组合产品的上下文中，设计、生产和使用含有呼吸道病原体的抗体的腺病毒载体的公开内容的实例可见于，例如，美国专利申请公布号US2014/0141042(WO2012/089833)。有关腺病毒载体的另外的细节可见于，例如，美国专利No.8,216,834(WO2005/071093)；和美国专利申请公布号US2012/0027788(WO2010/086189)；美国专利申请公布号US20050214323中。用于本发明中的腺病毒载体可来源于一系列哺乳动物宿主。已经分离出了超过100种不同的感染各种哺乳动物物种的腺病毒血清型，其中51种来源于人类。因此，所述腺病毒载体中的一种或多种可衍生自人腺病毒。此类人源性腺病毒的实例是Ad1、Ad2、Ad4、Ad5、Ad6、Ad11、Ad24、Ad34、Ad35，特别是Ad5、Ad11和Ad35。已经基于多项生物学、化学、免疫学和结构标准而将人和非人腺病毒血清型分为六个亚属（A-F）。尽管基于Ad5的载体已经被广泛用于多个基因疗法临床试验，但是由于自然感染在一般人群中造成的预先存在的免疫，Ad5和其它人类C组腺病毒载体的使用可能受到限制。Ad5和其它人类C组成员往往是最血清阳性的血清型之一。对现有载体的免疫可能由于在治疗期间暴露于所述载体而发展。这些类型的对血清阳性载体的预先存在或发展的免疫可能限制基因疗法的有效性或疫苗接种的效果。因此在追求能够规避宿主免疫应答的基因递送系统中，替代的腺病毒血清型构成非常重要的靶标。此类替代血清型的范围之一是来源于非人灵长类的那些，尤其是分离自黑猩猩、倭黑猩猩和大猩猩的腺病毒。参见美国专利6,083,716，其描述了两种黑猩猩腺病毒的基因组。已经证明，非人猿猴腺病毒载体能以与人类腺病毒载体同样的效率诱导针对转基因产物的强力免疫应答(Fitzgerald等人J.Immunol.170:1416;(Colloca等人(2012)ScienceTranslationalMedicine4:1-9;Roy等人(2004)Virology324:361-372;Roy等人(2010)JournalofGeneMedicine13:17-25)。非人灵长类腺病毒可以分离自该动物的肠系膜淋巴结或粪便，并且可以在HEK293细胞中体外复制。尽管存在这些相似性，非人猿猴腺病毒依然在系统发生和免疫上不同于更常见的人类血清型(Ad2和Ad5)。因此，所述腺病毒载体中的一种或多种可来源于非人灵长类腺病毒，例如，黑猩猩腺病毒,如选自以下血清型中的一种：ChAd3、ChAd63、ChAd83、ChAd155、Pan5、Pan6、Pan7和Pan9。具体地讲，所述病毒可能是非人腺病毒,如猿猴腺病毒,并且特别是黑猩猩腺病毒如ChAd155、Pan5、6、7或9。此类毒株的实例在WO03/000283中有述，并且可得自美国典型培养物保藏中心，10801UniversityBoulevard,Manassas,Virginia20110-2209，以及其它来源。所需的黑猩猩腺病毒毒株包括：Pan5[ATCCVR-591]、Pan6[ATCCVR-592]和Pan7[ATCCVR-593]。作为另外一种选择，腺病毒载体可衍生自来源于倭黑猩猩的非人猿猴腺病毒，如PanAd1、PanAd2或PanAd3。本文所述的此类载体的实例可见于例如WO2005/071093、WO2010/086189和GB1510357.5。使用非人猿猴腺病毒被认为优于使用人类腺病毒血清型，这是因为其缺乏预先存在的免疫，特别是缺乏针对靶标群体中的腺病毒的交叉中和抗体。相比在某些候选人类腺病毒载体情况下的35%，所述黑猩猩腺病毒与预先存在的中和抗体应答的交叉反应仅存在于2%的靶标群体中。所述黑猩猩腺病毒不同于更常见的人类亚型Ad2和Ad5，但更接近于亚组E的人Ad4（其并非常见亚型）。Pan6与Pan5、7和9不太密切相关。本发明的腺病毒可能是复制缺陷型。这意味着，相比野生型病毒，其在非互补细胞中的复制能力下降。这可能通过突变所述病毒而实现，例如通过缺失涉及复制的基因，例如缺失E1a、E1b、E3或E4基因。根据本发明的腺病毒载体可能来源于包含功能性E1缺失的复制缺陷型腺病毒。因此，根据本发明的腺病毒载体可能是由于缺乏表达腺病毒E1a和E1b的能力（即，功能性缺失E1a和E1b）而导致的复制缺陷型。所述重组腺病毒还可能在其它基因中具有功能性缺失[参见WO03/000283]例如，缺失E3或E4基因。所述腺病毒延迟早期基因E3可从腺病毒序列（其构成所述重组病毒的一部分）中被消除。E3的功能对于生产所述重组腺病毒颗粒不是必要的。因此，没有必要替换此基因产物的功能从而包装可用于本发明的重组腺病毒。在一个具体的实施方案中，所述重组腺病毒具有功能上缺失的E1和E3基因。此类载体的构建在Roy等人，HumanGeneTherapy15:519-530,2004中有述。重组腺病毒还可被构建成具有E4基因的功能性缺失，但是保留E4ORF6功能可能是有利的。根据本发明的腺病毒载体还可含有延迟早期基因E2a的缺失。缺失还可发生在所述腺病毒基因组的晚期基因L1至L5中的任一者上。类似地，中期基因IX和IVa的缺失可能是有用的。其它缺失可发生在其它结构或非结构腺病毒基因上。以上缺失可单独使用，即，用于本发明中的腺病毒序列可仅含有E1缺失。或者，整个基因或其部分的缺失（能有效破坏其生物活性）可以任意组合使用。例如，在一个示例性载体中，腺病毒序列可具有：E1基因和E4基因缺失，或E1、E2a和E3基因缺失，或E1和E3基因缺失(如E1a和E1b的功能性缺失以及至少部分E3缺失)，或E1、E2a和E4基因缺失，有或没有E3缺失，等等。此类缺失可能是这些基因的部分或完全缺失，并且可能与其它突变（如温度敏感突变）组合使用以实现所需结果。用于本发明中的腺病毒载体包括PanAd3(WO2010/086189)和ChAd155(GB1510357.5)。腺病毒载体可以在其中所述病毒能够复制的任何合适的细胞系中生产。具体地讲，可以使用互补细胞系，其提供了所述病毒载体缺失的因素，这些缺失的因素导致其受损的复制特性（如E1和/或E4）。没有限制地，此类细胞系可以是HeLa[ATCC登录号CCL2]、A549[ATCC登录号CCL185]、HEK293、KB[CCL17]、Detroit[例如，Detroit510,CCL72]和WI-38[CCL75]细胞，等等。这些细胞系均可得自美国典型培养物保藏中心，10801UniversityBoulevard,Manassas,Virginia20110-2209。其它合适的亲代细胞系可得自其它来源，如PER.C6©细胞，如以ECACC号96022940保藏在应用微生物学与研究中心(CAMR,UK)的欧洲动物细胞培养物保藏中心(ECACC)的细胞所示，或Her96细胞(Crucell)。在另一个实施方案中，所述病毒载体是痘病毒载体。在优选的实施方案中，所述痘病毒选自：美国专利号6,761893(WO02/42480);美国专利号7,964,395;美国专利号7,964,396;美国专利申请公布号US2013/0183335(WO2012/048817);和PCT专利申请公布号WO2014/019718，其提供了示例性载体及用于生产适于如本文公开的免疫原性组分的背景中的MVA载体的方法。前述每一者均通过引用并入本文中，用于教导合适的MVA载体及方法。在另一个实施方案中，所述病毒载体是甲病毒载体，如甲病毒复制子或其它自我复制RNA载体。示例性甲病毒载体及用于生产并递送适用于本文公开的免疫原性组合产品的背景中的载体的方法在例如US20090104226(WO2006078294);US20110300205(WO2011005799);US20130195968(WO2012/006376);US20130177639(WO2012006377);WO2013006838;和WO2013006842中有述，并将其有关适于所公开的免疫原性组合产品的背景中的示例性自我复制RNA载体的公开内容各自并入本文中。在本文公开的免疫原性组合产品的上下文中，所述呼吸道病原体的多肽抗原和由核酸编码的该相同病原体的抗原可以是相同或不同的。优选地，在本文公开的免疫原性组合产品的上下文中，所述两种免疫原性组分是同源的（由于来自共同的进化前体而相关联），并因此共享至少部分序列同一性（如上所确定的）。在一些实施方案中，所述免疫原性组合产品的所述第一免疫原性组分和由所述第二免疫原性组分编码的抗原包含至少一种相同或同源的抗原。在某些实施方案中，所述抗原是不相同的，在这种情况下，所述抗原可以包含部分相同的氨基酸序列，例如，使得其包含至少一个相同或部分相同的免疫原性表位。部分相同的表位可以例如选自该病原体的另一菌株（毒株）或血清型的同源抗原的对应部分。在所述免疫原性组合产品的某些实施方案中，所述第一组分的抗原和由所述第二组分的核酸编码的抗原共享充分的序列同一性，如在其整个或部分长度上约70%的序列同一性，例如，约75%的同一性、约80%的同一性、约85%的同一性、约90%的同一性或约或大于95%的同一性。在其中一种组分包含（或编码）一种抗原而另一种组分包含（或编码）多种抗原的实施方案中，序列同一性是在对应的抗原之间进行比较的。作为说明，在其中所述第一组分含有RSVF蛋白抗原而所述第二组分含有编码RSVF抗原以及RSVM和N抗原的核酸的实施方案中，序列同一性是在F蛋白之间进行比较（而不考虑M和N蛋白组分）。当各组分包含多种抗原时，预期至少一种达到70%序列同一性的阈值。例如，在一个诱发特异于RSV的免疫应答的优选的实施方案中，所述免疫原性组合产品包含含有RSVF蛋白抗原的第一免疫原性组分。所述第二免疫原性组分含有编码RSVF蛋白的核酸。在实施方案中，所述免疫原性组分之一或两者可以是RSVF蛋白(FΔTM)的胞外结构域。在实施方案中，所述抗原是相同的。在另一个实施方案中，所述F蛋白抗原在序列上不相同。例如，在以下更详细描述的一个示例性实施方案中，所述第一免疫原性组分包含多肽抗原（其为构象上受限的F蛋白抗原），而所述第二免疫原性组分包含编码具有不同序列的F蛋白多肽（其在构象上不受限，例如，如US2012/0027788中所述设计的共有序列F蛋白多肽）的核酸（例如，腺病毒载体）。在一个实施方案中，所述第一组分含有RSVF蛋白抗原，而所述第二组分含有编码RSVF抗原和RSVM及N抗原的核酸。更具体地讲，所述第一组分含有在构象上被限制为融合前构象的RSVF蛋白抗原，而所述第二组分含有编码RSVFΔTM抗原和RSVM2-1及N抗原的核酸，其中在所述RSVFΔTM抗原与所述RSVM2-1之间包含了自切割位点，而在所述RSVM2-1与N抗原之间包含了柔性接头。更具体地讲，所述第一组分可含有SEQIDNO:2所示的RSV蛋白抗原，而所述第二组分可含有携带SEQIDNO:3所示的核酸插入序列的腺病毒载体。任选地，所述免疫原性组分之一或两者包含多种抗原。通常，这些选自相同的靶标病原体。然而，设想了这样的实施方案，其中所述免疫原性组合产品包含多种病原体的抗原。免疫原性组分及组合在本文公开的免疫原性组合产品的上下文中，所述包含（核酸和蛋白质）的免疫原性组分可以被配制成以单个免疫原性组合物或不同免疫原性组合物的形式施用。当被配制成以单个组合物的形式施用时，所述组分可以在施用前混合或在制造过程中稳定地共配制。本文公开的免疫原性组合物通常含有药学上可接受的载体或赋形剂。药学上可接受的载体和赋形剂是众所周知的并且可以由本领域技术人员选择。形容词“药学上可接受的”表明该指代物适合向个体（例如，人类或动物个体）施用。Remington’sPharmaceuticalSciences,byE.W.Martin,MackPublishingCo.,Easton,PA,第15版(1975)描述了适于治疗和/或预防组合物（包括免疫原性组合物）的药物递送的组合物和制剂(包括稀释剂)。例如，在本文公开的免疫原性组分及组合的上下文中，所述载体或赋形剂可以优选地包含缓冲剂。任选地，所述载体或赋形剂还含有稳定溶解度和/或稳定性的至少一种组分。增溶剂/稳定剂的实例包括洗涤剂，例如，月桂酰基肌氨酸和/或吐温。可选的增溶剂/稳定剂包括精氨酸和形成玻璃的多元醇（如蔗糖、海藻糖等）。许多药学上可接受的载体和/或药学上可接受的赋形剂是本领域已知的，并且在例如Remington’sPharmaceuticalSciences,byE.W.Martin,MackPublishingCo.,Easton,PA,第15版(1975)中有述。因此，合适的赋形剂和载体可以由本领域技术人员选择以生产适于通过选定施用途径而向个体递送的制剂。合适的赋形剂包括但不限于：甘油、聚乙二醇（PEG）、山梨醇、海藻糖、N-月桂酰肌氨酸钠盐、L-脯氨酸、非洗涤剂磺基甜菜碱、盐酸胍、尿素、氧化三甲胺、KCl、Ca2+、Mg2+、Mn2+、Zn2+及其它二价阳离子相关的盐、二硫苏糖醇、二硫赤藓糖醇（Dithioerytrol）和β-巯基乙醇。其它赋形剂可以是洗涤剂（包括：Tween80、Tween20、TritonX-00、NP-40、EmpigenBB、辛基葡糖苷、月桂酰基麦芽糖苷、Zwittergent3-08、Zwittergent3-0、Zwittergent3-2、Zwittergent3-4、Zwittergent3-6、CHAPS、脱氧胆酸钠、十二烷基硫酸钠、十六烷基三甲基溴化铵）。任选地，所公开的免疫原性组合产品还包含佐剂，所述佐剂还可与所公开的疫苗方案、方法、用途和试剂盒一起使用。在某些实施方案中，所述含有呼吸道病原体的多肽抗原的免疫原性组分与佐剂一起配制。在其它实施方案中，所述含有编码呼吸道病原体抗原的核酸的免疫原性组分与佐剂一起配制。在实施方案中，两种免疫原性组分均以含有佐剂的组合物的形式施用。通常，将所述佐剂与所述抗原组分混合（例如，在施用前或稳定地配制）。当所述组合免疫原性组合物将被施用给特定年龄组的个体时，选择对于该个体或个体群体安全并有效的佐剂。因此，当配制用于施用给老年个体（如年龄超过65岁的个体）的组合免疫原性组合物时，选择对于老年个体安全并有效的佐剂。类似地，当预期将所述组合免疫原性组合物施用给新生或婴幼个体（如介于出生到两岁之间的个体）时，选择对于新生儿和婴儿安全并有效的佐剂。在选择对于新生儿和婴儿安全并有效的佐剂的情况下，佐剂剂量可以被选择为通常施用给成人个体的剂量的稀释量（例如，分数剂量）。另外，当经由施用所述组合免疫原性组合物的施用途径施用时，通常选择佐剂以增强免疫应答的所需方面。例如，当配制用于鼻腔施用的组合免疫原性组合物时，蛋白体和protollin是优选的佐剂。相比之下，当所述组合免疫原性组合物被配制成用于肌内施用时，包含3D-MPL、角鲨烯(例如，QS21)、脂质体和/或油和水乳液中的一种或多种的佐剂是优选的。一种适合与本文公开的免疫原性组合产品一起使用的佐剂是无毒细菌脂多糖衍生物。合适的无毒脂质A衍生物的实例是单磷酰脂质A，或更具体地讲，3-脱酰基单磷酰脂质A(3D–MPL)。3D-MPL以MPL的名称由GlaxoSmithKlineBiologicalsN.A.销售，并且在整个本文件中被称为MPL或3D-MPL。参见，例如，美国专利No.4,436,727;4,877,611;4,866,034和4,912,094。3D-MPL主要促进具有IFN-γ(Th1)表型的CD4+T细胞应答。3D-MPL可以根据GB2220211A中所公开的方法生产。在化学上，其为具有3、4、5或6个酰化链的3-脱酰基单磷酰脂质A的混合物。在本公开的组合物中，可以使用小颗粒3D-MPL。小颗粒3D-MPL的粒径使得其可以通过0.22µm过滤器无菌过滤。此类制备物在WO94/21292中有述。脂多糖，如3D-MPL，可以1至50µg/人类剂量的免疫原性组合物的量使用。此类3D-MPL可以如下水平使用：约25µg，例如20-30µg，适当地21-29µg或22至28µg或23至27µg或24至26µg，或25µg。在另一个实施方案中，所述人类剂量的免疫原性组合物包含如下水平的3D-MPL：约10µg，例如5至15µg，适当地6至14µg，例如7至13µg或8至12µg或9至11µg，或10µg。在另外的实施方案中，所述人类剂量的免疫原性组合物包含如下水平的3D-MPL：约5µg，例如1至9µg，或2至8µg或适当地3至7µg，或4µg，或5µg。在其它实施方案中，所述脂多糖可以是β(1-6)葡糖胺二糖，如美国专利No.6,005,099和欧洲专利No.0729473B1中所述。根据这些参考文献的教导，本领域技术人员将容易地能够生产各种脂多糖，如3D-MPL。尽管如此，这些参考文献中的每一者均通过引用并入本文中。除了上述的免疫刺激剂（其在结构上类似于LPS或MPL或3D-MPL）之外，作为以上MPL结构的子部分的酰化单糖和二糖衍生物也是合适的佐剂。在其它实施方案中，所述佐剂是合成的脂质A衍生物，其中的一些被描述为TLR-4激动剂，并且包括但不限于：OM174(2-脱氧-6-o-[2-脱氧-2-[(R)-3-十二烷酰氧基四-癸酰基氨基]-4-o-膦酰基-β-D-吡喃葡萄糖基]-2-[(R)-3-羟基十四烷酰基氨基]-α-D-吡喃葡萄糖基二氢磷酸酯)，(WO95/14026);OM294DP(3S,9R)–3--[(R)-十二烷酰氧基十四酰基氨基]-4-氧代-5-氮杂-9(R)-[(R)-3-羟基十四烷酰基氨基]癸-1,10-二醇,1,10-双(磷酸二氢酯)(WO99/64301和WO00/0462);和OM197MP-AcDP(3S-,9R)-3-[(R)-十二烷酰氧基十四酰基氨基]-4-氧代-5-氮杂-9-[(R)-3-羟基十四烷酰基氨基]癸-1,10-二醇,1-磷酸二氢酯10-(6-氨基己酸)(WO01/46127)。可以使用的其它TLR4配体是烷基氨基葡糖苷磷酸酯（AGP），如在WO98/50399或美国专利No.6,303,347中公开的那些（还公开了AGP的制备方法），合适地RC527或RC529或AGP的药学上可接受的盐，如在美国专利No.6,764,840.中公开的。一些AGP是TLR4激动剂，而一些则是TLR4拮抗剂。这两者均被认为可用作佐剂。能够通过TLR-4引起信号应答的其它合适的TLR-4配体(Sabroe等人，JI2003第1630-5页)是，例如，来自革兰氏阴性菌的脂多糖及其衍生物或其片段，特别是LPS的无毒衍生物(如3D-MPL)。其它合适的TLR激动剂是：热休克蛋白(HSP)10、60、65、70、75或90；表面活性蛋白A、透明质酸寡糖、硫酸乙酰肝素片段、纤粘蛋白片段、纤维蛋白原肽和b-防御素-2、以及胞壁酰二肽(MDP)。在一个实施方案中，所述TLR激动剂是HSP60、70或90。其它合适的TLR-4配体如WO2003/011223和WO2003/099195中所述，如在WO2003/011223的第4-5页或WO2003/099195的第3-4页上所公开的化合物I、化合物II和化合物III，并且特别是在WO2003/011223中公开的那些化合物，如ER803022、ER803058、ER803732、ER804053、ER804057、ER804058、ER804059、ER804442、ER804680和ER804764。例如，一种合适的TLR-4配体是ER804057。另外的TLR激动剂也可用作佐剂。术语“TLR激动剂”指代这样的试剂，其能够作为直接配体或间接地通过生成内源或外源配体而通过TLR信号通路引起信号应答。此类天然或合成的TLR激动剂可以被用作可选的或额外的佐剂。在Kaisho&Akira,BiochimicaetBiophysicaActa1589:1-13,2002中提供了有关TLR作为佐剂受体的作用的简要综述。这些潜在的佐剂包括但不限于针对TLR2、TLR3、TLR7、TLR8和TLR9的激动剂。因此，在一个实施方案中，所述佐剂和组合免疫原性组合物还包含选自以下的佐剂：TLR-1激动剂、TLR-2激动剂、TLR-3激动剂、TLR-4激动剂、TLR-5激动剂、TLR-6激动剂、TLR-7激动剂、TLR-8激动剂、TLR-9激动剂或其组合。在本公开的一个实施方案中，使用了TLR激动剂，其能够通过TLR-1引起信号应答。适当地，所述能够通过TLR-1引起信号应答的TLR激动剂选自：三酰化脂肽(LP)；可溶于苯酚的调控蛋白；结核分枝杆菌LP；S-(2,3-双(棕榈酰氧基)-(2-RS)-丙基)-N-棕榈酰-(R)-Cys-(S)-Ser-(S)-Lys(4)-OH，三盐酸(Pam3Cys)LP，其模仿细菌脂蛋白的乙酰化氨基末端；以及来自博氏疏螺旋体的OspALP。在可供选择的实施方案中，使用了TLR激动剂，其能够通过TLR-2引起信号应答。适当地，所述能够通过TLR-2引起信号应答的TLR激动剂是以下中的一种或多种：来自结核分枝杆菌、博氏疏螺旋体或梅毒螺旋体的脂蛋白、肽聚糖、细菌脂肽；来自包括金黄色葡萄球菌在内的物种的肽聚糖；脂磷壁酸、甘露糖醛酸、奈瑟氏菌属孔蛋白、细菌菌毛、耶尔森氏菌毒力因子、CMV病毒粒子、麻疹血凝素和来自酵母的酵母多糖。在可供选择的实施方案中，使用了TLR激动剂，其能够通过TLR-3引起信号应答。适当地，所述能够通过TLR-3引起信号应答的TLR激动剂是双链RNA(dsRNA)，或聚肌胞(PolyIC)（一种与病毒感染相关的分子核酸模式）。在可供选择的实施方案中，使用了TLR激动剂，其能够通过TLR-5引起信号应答。适当地，所述能够通过TLR-5引起信号应答的TLR激动剂是细菌鞭毛蛋白。在可供选择的实施方案中，使用了TLR激动剂，其能够通过TLR-6引起信号应答。适当地，所述能够通过TLR-6引起信号应答的TLR激动剂是分枝杆菌脂蛋白、二酰化LP和可溶于苯酚的调控蛋白。另外的TLR6激动剂在WO2003/043572中有述。在可供选择的实施方案中，使用了TLR激动剂，其能够通过TLR-7引起信号应答。适当地，所述能够通过TLR-7引起信号应答的TLR激动剂是单链RNA(ssRNA)、洛索立宾、在位置N7和C8的鸟苷类似物、或咪唑并喹啉化合物或其衍生物。在一个实施方案中，所述TLR激动剂是咪喹莫特。另外的TLR7激动剂在WO2002/085905中有述。在可供选择的实施方案中，使用了TLR激动剂，其能够通过TLR-8引起信号应答。适当地，所述能够通过TLR-8引起信号应答的TLR激动剂是单链RNA(ssRNA)、具有抗病毒活性的咪唑并喹啉分子，例如雷西莫特(R848)；雷西莫特还能够被TLR-7识别。可以使用的其它TLR-8激动剂包括在WO2004/071459中描述的那些。在可供选择的实施方案中，使用了TLR激动剂，其能够通过TLR-9引起信号应答。在一个实施方案中，所述能够通过TLR-9引起信号应答的TLR激动剂是HSP90。作为另外一种选择，所述能够通过TLR-9引起信号应答的TLR激动剂是细菌或病毒DNA、含有未甲基化CpG核苷酸（尤其是被称为CpG基序的序列上下文）的DNA。含有CpG的寡核苷酸主要诱导Th1应答。此类寡核苷酸是众所周知的并且在例如WO96/02555、WO99/33488以及美国专利No.6,008,200和5,856,462中有述。适当地，CpG核苷酸是CpG寡核苷酸。适用于所述组合免疫原性组合物中的寡核苷酸是含有CpG的寡核苷酸，任选地含有由至少三个、适当地至少六个或更多个核苷酸分隔开的两个或更多个二核苷酸CpG基序。CpG基序是胞嘧啶核苷酸后接鸟嘌呤核苷酸。所述CpG寡核苷酸通常是脱氧核苷酸。在特定的实施方案中，所述寡核苷酸的核苷酸间是二硫代磷酸酯或适当地硫代磷酸酯键，但是磷酸二酯和其它核苷酸间键也是可能的。具有混合的核苷酸间键合的寡核苷酸也是可能的。用于生产硫代磷酸酯寡核苷酸或二硫代磷酸酯的方法在美国专利No.5,666,153、5,278,302以及WO95/26204中有述。可以用在所公开的免疫原性组合产品中并且与所公开的免疫方案、方法、用途和试剂盒一起使用（例如，其单独或与3D-MPL或本文所述的另一种佐剂组合使用）的其它佐剂是皂草苷，如QS21。皂草苷在Lacaille-Dubois,M和WagnerH.(1996.Areviewofthebiologicalandpharmacologicalactivitiesofsaponins.Phytomedicinevol2第363-386页)中有教导。皂草苷是类固醇或三萜烯糖苷，其在植物界和海洋动物界中广泛分布。皂草苷以在水中形成胶体溶液（其在摇动时起泡）并且沉淀胆固醇而著称。当皂草苷靠近细胞膜时，其在膜中生成孔状结构而引起膜破裂。红细胞溶血是此现象的实例，其是某些但非所有皂草苷的特性。已知皂草苷在全身施用的疫苗中用作佐剂。本领域已经充分研究了单独的皂草苷的佐剂和溶血活性(Lacaille-Dubois和Wagner，同上)。例如，QuilA（来源于南美洲树木皂树(QuillajaSaponariaMolina)树皮）及其级分在US5,057,540和“Saponinsasvaccineadjuvants”,Kensil,C.R.,CritRevTherDrugCarrierSyst,1996,12(1-2):1-55;以及EP0362279B1中有述。包含QuilA的级分的名为免疫刺激复合物(ISCOMS)的粒状结构是溶血性的，并且已经用于疫苗生产中(Morein,B.,EP0109942B1;WO96/11711;WO96/33739)。溶血性皂草苷QS21和QS17(HPLC纯化的QuilA级分)已经被描述为强力的全身性佐剂，并且其生产方法在美国专利No.5,057,540以及EP0362279B1中被公开，所述文献通过引用并入本文中。已经被用于全身疫苗接种研究的其它皂草苷包括来源于其它植物物种如满天星和肥皂草的那些(Bomford等人，Vaccine,10(9):572-577,1992)。QS21是Hplc纯化的来源于皂树树皮的无毒级分。用于生产QS21的方法在美国专利No.5,057,540中被公开。含有QS21的非反应原性佐剂制剂在WO96/33739中有述。上述参考文献以引用方式并入本文中。所述免疫活性皂草苷，如QS21，可以1至50µg/人类剂量的组合免疫原性组合物的量使用。有利地，QS21以如下水平使用：约25µg，例如20-30µg，适当地21-29µg或22-28µg或23-27µg或24-26µg，或25µg。在另一个实施方案中，所述人类剂量的组合免疫原性组合物包含如下水平的QS21：约10µg，例如5至15µg，适当地6-14µg，例如7-13µg或8-12µg或9-11µg，或10µg。在另外的实施方案中，所述人类剂量的组合免疫原性组合物包含如下水平的QS21：约5µg，例如1-9µg，或2-8µg或适当地3-7µg或4-6µg，或5µg。已经证明，当与抗原一起配制时，此类包含QS21和胆固醇的制剂是成功的佐剂。因此，例如，所公开的免疫原性组合产品的多肽可以与包含QS21和胆固醇的组合的佐剂一起提供。任选地，所述佐剂可以作为另外一种选择或除此之外包含矿物盐如铝盐（例如，氢氧化铝、磷酸铝、硫酸铝钾、羟基磷酸硫酸铝）或钙盐（例如，氢氧化钙、氟化钙、磷酸钙）。适于所述佐剂制剂的其它盐类包括硝酸铈（III）六水合物和硫酸锌七水合物。例如，含有3D-MPL和铝盐（例如，氢氧化铝或“明矾”）组合的佐剂适用于配制含有如本文所述的呼吸道病原体的抗原的组合免疫原性组合产品。作为另外一种选择，此类矿物盐佐剂可不与非矿物盐佐剂组合使用，即，所述组合免疫原性组合物可仅佐以一种或不止一种矿物盐佐剂如氢氧化铝、磷酸铝和磷酸钙等。适用于本文公开的免疫原性组合产品的另一类佐剂包括基于OMP的免疫刺激组合物。基于OMP的免疫刺激组合物特别适合作为粘膜佐剂，例如，用于鼻内施用。基于OMP的免疫刺激组合物是一类外膜蛋白（OMP，包括一些孔蛋白）的制备物，其来自革兰氏阴性菌，如但不限于奈瑟氏菌属物种(参见，例如，Lowell等人，J.Exp.Med.167:658,1988;Lowell等人，Science240:800,1988;Lynch等人，Biophys.J.45:104,1984;Lowell,in"NewGenerationVaccines"第2版，MarcelDekker,Inc.,NewYork,Basil,HongKong,第193页,1997;美国专利No.5,726,292;美国专利No.4,707,543)，其可用作载体或可用在免疫原（如细菌或病毒抗原）的组合物中。一些基于OMP的免疫刺激组合物可以被称为“蛋白体”，其为疏水性的并且对于人类使用是安全的。蛋白体能够自动装配到约20nm至约800nm的囊泡或囊泡样OMP簇中，并且能够与蛋白质抗原(Ags)（特别是具有疏水部分的抗原）非共价地整合、协调、关联（例如，静电地或疏水地）或以其它方式协作。导致外膜蛋白组分呈囊泡或囊泡样形式（包括多分子膜结构或一种或多种OMP的熔融球状OMP组合物）的任何制备方法均包括在蛋白体的定义中。蛋白体可以例如，如本领域所述进行制备(参见，例如，美国专利No.5,726,292或美国专利No.5,985,284)。蛋白体还可以含有来源于用于生产OMP孔蛋白的细菌(例如，奈瑟氏菌属物种)的内源脂多糖或脂寡糖(分别为LPS或LOS)，其通常将小于总OMP制备物的2%。蛋白体主要由化学提取的来自脑膜炎奈瑟氏菌的外膜蛋白(OMP)构成（大部分为孔蛋白A和B以及4类OMP），其通过洗涤剂而保持在溶液中(LowellGH.ProteosomesforImprovedNasal,Oral,orInjectableVaccines.于:LevineMM,WoodrowGC,KaperJB,CobonGS,编撰,NewGenerationVaccines.NewYork:MarcelDekker,Inc.1997;193-206)。蛋白体可以与多种抗原如来自病毒来源的纯化的或重组的蛋白质，包括本文公开的RSVF蛋白多肽，例如，通过渗滤或传统渗析工艺一起配制，或与纯化的百日咳杆菌抗原蛋白一起配制。逐步移除洗涤剂使得能够形成直径大约100-200nm的粒状疏水复合物(LowellGH.ProteosomesforImprovedNasal,Oral,orInjectableVaccines.于:LevineMM,WoodrowGC,KaperJB,CobonGS,编撰,NewGenerationVaccines.NewYork:MarcelDekker,Inc.1997;193-206)。“蛋白体：LPS或Protollin”，如本文所用，指代例如通过外源添加至少一种脂多糖而混合的蛋白体制备物，以提供OMP-LPS组合物(其可以起到免疫刺激组合物的作用)。因此，所述OMP-LPS组合物可以由Protollin基本组分中的两种构成，其包括：(1)蛋白体的外膜蛋白制备物(例如，Projuvant)，其由革兰氏阴性菌如脑膜炎奈瑟氏菌制备而成，和(2)一种或多种脂糖的制备物。脂寡糖可以是内源性的（例如，天然包含在OMP蛋白体制备物中），可以与OMP制备物混合或组合的来自外源制备的脂寡糖（例如，由不同于所述OMP制备物的培养物或微生物制备），或可以是其组合。此类外源添加的LPS可以来自与生产所述OMP制备物的细菌相同的革兰氏阴性菌或来自不同的革兰氏阴性菌。Protollin还应当理解为任选地包括脂质、糖脂、糖蛋白、小分子等及其组合。所述Protollin可以例如，如美国专利申请公布No.2003/0044425中所述进行制备。不同佐剂的组合，如本文以上所述的那些，也可以用于所公开的免疫原性组合产品中（例如，与单独组分或其混合物）。例如，正如已经指出的，QS21可以与3D-MPL一起配制。QS21:3D-MPL的比率通常将在1:10至10:1的量级；如1:5至5:1，并且通常基本上为1:1。通常，该比率的范围为2.5:1至1:1的3D-MPL:QS21。另一种组合佐剂制剂包含3D-MPL和铝盐，如氢氧化铝。在一些情况下，所述佐剂制剂包含矿物盐，如铝盐（明矾），例如磷酸铝或氢氧化铝，或磷酸钙。当例如在与3D-MPL的组合中存在明矾时，其量通常在约100µg至1mg，如约100µg，或约200µg至约750µg，如约500µg/剂量。在一些实施方案中，所述佐剂包含油和水乳液，例如，水包油乳液。水包油乳液的一个实例是在水性载体中包含：可代谢油如角鲨烯、母育酚如生育酚（例如，α-生育酚）和表面活性剂如脱水山梨醇三油酸酯(Span85™)或聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯(Tween80™)。在某些实施方案中，所述水包油乳液不含任何额外的免疫刺激物（具体地讲，其不含无毒脂质A衍生物如3D-MPL，或皂草苷如QS21）。所述水性载体可以是例如磷酸盐缓冲盐水。另外，所述水包油乳液可以含有span85和/或卵磷脂和/或三辛酸甘油酯。在另一个实施方案中，所述组合免疫原性组合物包含水包油乳液和任选地一种或多种另外的免疫刺激物，其中所述水包油乳液包含0.5-10mg可代谢油(适当地为角鲨烯)、0.5-11mg母育酚(适当地为生育酚，如α-生育酚)和0.4-4mg乳化剂。在一个特定的实施方案中，所述佐剂制剂包含以乳液（如水包油乳液）形式制备的3D-MPL。在一些情况下，所述乳液具有小于0.2µm直径的小粒径，如WO94/21292中所公开的。例如，3D-MPL的颗粒可以小到足以通过0.22微米的膜进行无菌过滤（如欧洲专利号0689454中所述）。作为另外一种选择，可以将所述3D-MPL制备在脂质体制剂中。任选地，所述含有3D-MPL（或其衍生物）的佐剂还包含另外的免疫刺激组分。所述佐剂被选择为对于所述免疫原性组合物所施用的群体是安全并有效的。对于成人和老年人群体，所述制剂通常含有相比通常见于婴儿制剂中的更多的佐剂组分。在使用水包油乳液的具体制剂中，此类乳液可以包含额外的组分，例如，如胆固醇、角鲨烯、α-生育酚和/或洗涤剂，如tween80或span85。在示例性制剂中，此类组分可以如下的量提供：1-50mg胆固醇、2至10%角鲨烯、2至10%α-生育酚和0.3至3%tween80。通常，角鲨烯:α-生育酚的比率等于或小于1，因为这提供了更稳定的乳液。在一些情况下，所述制剂还可以含有稳定剂。当含有RSVF蛋白多肽抗原的组合免疫原性组合物被配制成向婴儿施用时，佐剂的剂量被确定为对于婴儿个体是有效并相对非反应原性的。通常，婴儿制剂中佐剂的剂量低于设计为施用给成人（例如，年龄在65岁或以上的成人）的制剂中所用的剂量（例如，所述剂量可能是施用给成人的制剂中所提供剂量的分数）。例如，3D-MPL的量通常范围为1µg-200µg，如10-100µg，或10µg-50µg/剂量。婴儿剂量通常在此范围的下端，例如，约1µg至约50µg，如约2µg，或约5µg，或约10µg，至约25µg，或至约50µg。通常，当QS21被用于制剂中时，其范围是类似的（并且根据上述比率）。就油和水乳液（例如，水包油乳液）而言，提供给儿童或婴儿的佐剂的剂量可以是施用给成人个体的剂量的分数。如本文公开的或用于所公开疫苗接种方案、方法、用途和试剂盒的免疫原性组合产品通常含有免疫有效量（或其分剂量）的所述免疫原性组分（和/或多肽或核酸）并且可以通过常规技术制备。“免疫有效量”是组合物（通常，免疫原性组合物）的数量，用于诱发个体对该组合物或对该组合物中的抗原的免疫应答。通常，所需结果是产生抗原（例如，病原体）特异性免疫应答，其能够或有助于保护个体对抗病原体。然而，为了获得针对病原体的保护性免疫应答，可能需要多次施用所述免疫原性组合物。因此，在本公开的上下文中，术语免疫有效量涵盖了分剂量，其与在先或后续施用组合以有助于获得保护性免疫应答。制备免疫原性组合物（包括施用给人类个体的那些）在以下文献中有一般性描述：PharmaceuticalBiotechnology,Vol.61VaccineDesign-thesubunitandadjuvantapproach,由Powell和Newman编著,PlenurnPress,1995；NewTrendsandDevelopmentsinVaccines,由Voller等人编著，UniversityParkPress,Baltimore,Maryland,U.S.A.1978。封装在脂质体内例如由Fullerton在美国专利4,235,877中有述。将蛋白质结合至大分子例如由Likhite在美国专利4,372,945以及由Armor等人在美国专利4,474,757中公开。通常，在所述免疫原性组合物的各个剂量中抗原（例如蛋白质）的量或编码抗原的核酸的量被选择为这样的量，其在典型个体中诱导保护性（或免疫保护性）应答而没有显著的不良副作用。保护性在此上下文中不一定意指针对感染的完全保护性；其意指针对症状或疾病（尤其是与病原体相关的严重疾病）的保护。抗原的量可以根据所采用的特异性抗原（或核酸）而变化。因此，所述抗原或编码抗原的核酸以免疫有效剂量施用。本领域技术人员应当理解，所述免疫有效量可以基于如重量、年龄以及免疫和/或生理状态等参数而在个体间有所不同，使得例如婴儿剂量通常低于成人剂量，并且人类剂量可以不同于施用给实验（非人动物）个体的剂量。例如，人类剂量通常是施用给小鼠的剂量的10-20倍。通常，相对于所述多肽抗原组分，预计每个人类剂量将包含1-1000µg的每种蛋白质或抗原，如约1µg至约100µg，例如，约1µg至约50µg，如约1µg、约2µg、约5µg、约10µg、约15µg、约20µg、约25µg、约30µg、约40µg、或约50µg。作为另外一种选择，所述多肽组分可以如下量施用：50µg至250µg，如约50µg、75µg、100µg、120µg、150µg、175µg、200µg或250µg。这些量将理解为说明性的，并且以上范围内的整数或区间是可接受的。相对于所述核酸组分，类似地计算其量以向个体提供免疫有效量（在一次或多次施用中）。就核酸而言，此类量可能在1ng至100mg。例如，合适量的DNA可以是1µg至100mg。就RNA而言，合适的量可以是1ng至100µg。所述具体核酸（例如，载体）的适当量可以由本领域技术人员容易地确定。核酸组分的示例性有效量可以是：1ng至100µg，如1ng至1µg(例如，100ng-1µg)，或1µg至100µg，如10ng、50ng、100ng、150ng、200ng、250ng、500ng、750ng或1µg(或所涵盖的任何整数或包含这些量的区间)。核酸的有效量还可以包括：1µg至500µg，如1µg至200µg，如10至100µg，例如1µg、2µg、5µg、10µg、20µg、50µg、75µg、100µg、150µg或200µg，或1至200µg之间的整数或区间或分数。作为另外一种选择，核酸的示例性有效量可以是：100µg至1mg，如100µg至500µg，例如，100µg、150µg、200µg、250µg、300µg、400µg、500µg、600µg、700µg、800µg、900µg或1mg，或1µg至1mg之间的任何整数或区间。就含有所述核酸组分的重组病毒载体（例如，腺病毒）而言，其通常以1x105至1x1015个病毒颗粒的剂量施用，如1x108至1x1012(例如，1x108、5x108、1x109、5x109、1x1010、2.5x1010、5x1010、1x1011、5x1011、1x1012个颗粒)。作为另外一种选择，病毒载体可以通常1x105至1x1010个空斑形成单位(PFU)的剂量施用，如1x105PFU、5x105PFU、1x106PFU、5x106PFU、1x107PFU、5x107PFU、1x108PFU、5x108PFU、1x109PFU、5x109PFU或1x1010PFU。如上，可以施用指定范围内的任何整数或区间。通常，人类剂量将是0.5ml至2ml的体积。因此，用于本文所述的用途和方法的组合物可以被配制成例如0.5、1.0、1.5或2.0ml体积的人类剂量/单独的或合并的免疫原性组分。根据个体群体而选择在免疫原性组合物中所用的量。对于具体组合物的最佳量可以通过涉及观察个体中的抗体滴度和其它应答的标准研究来确定。在初次疫苗接种后，个体可以在约4-12周后接受第二次施用（例如，加强）。例如，当向婴儿个体施用免疫原性组合物时，初次及后续接种的施用可以与在此期间施用的其它疫苗重合。另外的配制细节可见于WO2010/149745，其通过引用并入本文中，用于提供有关配制包含RSVF蛋白抗原（如PreF类似物）的免疫原性组合物的额外细节。本文所述的免疫实施方案经由合适的施用途径进行，如胃肠外方法，包括肌内、透皮、皮内或皮肤施用。例如，所述免疫可以在皮肤上进行，其意味着将抗原引入到皮肤的真皮和/或表皮中（例如，皮内）。在某些优选的实施方案中，将所述免疫原性组合产品的两种免疫原性组分共定位施用在个体上相同或大致相同的部位，例如，相同侧面或肢体。在胃肠外施用的情况下，共定位是指靠近身体上相同（或大致相同）的部位，如相同部位（例如，通过相同装置），或约10cm以内，或更常见地约5cm以内，如约2cm以内或1cm以内。在一些情况下，所述两种或更多种组分被合并（共配制）在单一组合物中用于施用到相同部位。因此，应当理解，在一个优选的实施方案中，将所述免疫原性组分施用到两侧对称的个体（如人类）可以是施用到身体的同侧面。也就是说，含有所述多肽抗原的免疫原性组分与含有所述编码抗原的核酸的免疫原性组分同侧施用。任选地，所述两种组分在制造期间或施用前被共配制在单个免疫原性组合物中。相比其它途径（如肌内）递送，经由皮肤途径（包括皮内途径）递送可以允许更低剂量的抗原。因此，还提供了用于皮肤或皮内递送的免疫原性组合产品，其包含低剂量的呼吸道病原体的抗原，例如，低于正常肌内剂量，例如，如上提供的蛋白质或核酸组分的正常肌内剂量的50%或更低。任选地，用于皮肤或皮内递送的免疫原性组合物还包含佐剂，例如金属盐或QS21或3D-MPL或其组合。用于皮肤施用的装置包括短针装置(其具有长度为约1至约2mm的针)，如在US4,886,499、US5,190,521、US5,328,483、US5,527,288、US4,270,537、US5,015,235、US5,141,496、US5,417,662和EP1092444中所述的那些。皮肤疫苗还可通过限制针在皮肤中有效穿透长度的装置来施用，如在WO99/34850中所述的那些（通过引用并入本文中）及其功能等同物。喷射注射装置也是合适的，其经由液体喷射注射器或经由刺穿角质层并产生到达真皮的射流的针而将液体疫苗递送至真皮。喷射注射装置在例如以下文献中有述：US5,480,381、US5,599,302、US5,334,144、US5,993,412、US5,649,912、US5,569,189、US5,704,911、US5,383,851、US5,893,397、US5,466,220、US5,339,163、US5,312,335、US5,503,627、US5,064,413、US5,520,639、US4,596,556、US54,790,824、US4,941,880、US4,940,460、WO97/37705和WO97/13537。用于皮肤施用的装置还包括弹道粉末/颗粒递送装置，其使用压缩空气加速粉末形式的疫苗通过皮肤外层到达真皮。另外，常规注射器可用于皮肤施用的经典曼托法（mantoux）中。然而，使用常规注射器要求高度熟练的操作人员，因而能够准确递送而无需高度熟练的使用者的装置是优选的。用于皮肤施用的另外的装置包括贴剂，其包含如本文所述的免疫原性组合物。皮肤递送贴剂将通常包括背板，其包含固体基质（例如闭合或非闭合的外科手术敷料）。此类贴剂经由刺穿角质层的微突起而将免疫原性组合物递送到真皮或表皮。微突起通常为10Dm至2mm，例如20Dm至500Dm、30Dm至1mm、100至200、200至300、300至400、400至500、500至600、600至700、700、800、800至900、100Dm至400Dm，特别是约200Dm至300Dm或约150Dm至250Dm。皮肤递送贴剂通常包括多个微突起，例如2至5000根微针，例如1000至2000根微针。所述微突起可以是适用于刺穿角质层、表皮和/或真皮的任何形状。微突起例如可以如WO2000/074765和WO2000/074766中所公开的那样成形。所述微突起可具有纵横比为至少3:1(高度相对于基座直径)、至少约2:1、或至少约1:1。所述微突起的一种合适形状是具有多边形（例如六边形或菱形）底部的锥形。其它可能的微突起形状在例如美国已公布专利申请2004/0087992中示出。在具体的实施方案中，微突起的形状朝着基座方向变厚。阵列中微突起的数量通常为至少约100、至少约500、至少约1000、至少约1400、至少约1600、或至少约2000。微突起的面积密度，考虑到其小尺寸，可能不会特别高，但例如微突起的数量/cm2可能为至少约50、至少约250、至少约500、至少约750、至少约1000、或至少约1500。在本公开的一个实施方案中，所述组合免疫原性组合物在贴剂被放置到宿主皮肤上的5小时内被递送到个体中，例如，在4小时、3小时、2小时、1小时或30分钟内。在具体的实施方案中，所述组合免疫原性组合物在贴剂被放置到皮肤上的20分钟内被递送，例如在30秒、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18或19分钟内。所述微突起可以由技术人员已知的任何合适的材料制成。在具体的实施方案中，所述微突起的至少一部分是可生物降解的，特别是所述微突起的尖端或所述微突起的最外层。在具体的实施方案中，基本上整个所述微突起都是可生物降解的。术语“可生物降解的”，如本文所用，意指在预期的体内使用条件下（例如插入皮肤中）可降解，而与生物降解的机制无关。示例性生物降解机制包括崩解、分散、溶解、侵蚀、水解和酶降解。包含抗原的微突起的实例在WO2008/130587和WO2009/048607中被公开。可代谢微针的生产方法在WO2008/130587和WO2010/124255中被公开。用抗原涂覆微突起可以通过技术人员已知的任何方法进行，例如通过WO06/055844、WO06/055799中所公开的方法。在本文所述的方法和用途中，适用于皮肤递送（包括皮内递送）的递送装置，包括：BDSoluviaTM装置（其为用于皮内施用的微针装置）、CoriumMicroCorTM贴剂递送系统、佐治亚理工（GeorgiaTech）微针疫苗贴剂、Nanopass微针递送装置和DebiotechNanojectTM微针装置。还提供了皮肤或皮内递送装置，其含有如本文所述的组合免疫原性组分或组合（任选地与佐剂一起配制）。所述免疫原性组合产品可以经由包括如鼻内或口腔途径在内的粘膜途径施用，使抗原直接与上呼吸道粘膜接触。因此，设想了将所述免疫原性组合产品及其组分用于医药，并且特别是用于预防或治疗人类个体中的呼吸道病原体（如RSV）感染或与之相关的疾病。在此类方法和用途的具体实施方案中，所述个体是人类个体。所述人类个体可以选自：新生儿；婴儿；儿童；青少年；成人；和老年人。所述个体可以是怀有胎儿的孕妇。或者，所述个体可以不是孕妇。当所述个体是新生儿时，所述组合免疫原性组合物的施用可能在出生后1天之内、或1周之内、或1个月之内进行。结合所公开的用于诱发针对呼吸道病原体的免疫应答的方法（包括向个体施用免疫有效量的本文公开的免疫原性组合产品），所诱发的针对所述呼吸道病原体（例如，RSV）的免疫应答有利地包括保护性免疫应答，其减少或预防所述病原体（例如，RSV）感染的发生率或降低其严重程度，并且/或者减少或预防所述病原体感染后的病理反应的发生率或降低其严重程度。所述诱发的免疫应答可以是加强应答。优选地，相比未疫苗接种的个体，此类施用减少此类群组中的症状或疾病（例如，肺炎和/或呼吸窘迫与衰竭，或由于严重的呼吸道疾病而需要住院治疗）至少约50%、或至少约60%、或60至70%、或至少约70%、或至少约80%、或至少约90%。是否视为由于严重的LRTI而需要住院治疗，或具体的LRTI病例是否住院治疗，可能在各个国家间有差异，因而根据本领域熟知的明确的临床症状判定严重的LRTI可能是相比需要住院治疗而言更好的量度。当将所述免疫原性组合产品施用给婴儿时，所述组合物可以施用一次或多次。首次施用可以是在出生时或邻近的时间（例如，在出生当天或翌日），或在出生后1周内或出生后约2周内。作为另外一种选择，首次施用可以是在出生后约4周、出生后约6周、出生后约2个月、出生后约3个月、出生后约4个月，或更晚，如出生后约6个月、出生后约9个月、或出生后约12个月。如上所述，用于所公开的疫苗接种方案、方法和用途中的组合的免疫原性组分可以是如本文所述共配制的组合物，或可以是单独提供各组分的不同的组合物。此类“单独的”组合物可以试剂盒的形式提供。在此类试剂盒中，（如上所公开的）第一免疫原性组分的多肽抗原和/或第二免疫原性组分的编码抗原的核酸可以被装在（合并的或共配制的）一个容器或不止一个容器中，如在至少一个（或一个或多个）预填充注射器中。此类注射器可以是多腔（例如，双腔）注射器。就多腔注射器而言，在实施方案中，所述第一免疫原性组分被装在一个腔室内，而所述第二免疫原性组分被装在第二个腔室内。在施用前，可以混合所述两种组分并随后将其引入到个体中的相同部位（例如，通过单根针）。在另一个实施方案中，所述试剂盒包括替代的递送装置，如本文所公开的贴剂。提供了下列实施例以说明某些具体特征和/或实施方案。这些实施例不应当理解为将本发明限制于所述具体特征或实施方案。实施例实施例1：用表达RSVF、N和M2.1蛋白的腺病毒载体与佐剂化重组F蛋白联合免疫CD1小鼠相比各单独疫苗方案诱导更广泛的免疫应答。在小鼠中评价了两个剂量的联合的PanAd3RSV(含有编码SEQIDNO:4中所示的氨基酸序列的核酸插入序列的PanAd3载体)与重组F(rF)蛋白/AS04的免疫原性。用下列制剂以4周的间隔对CD1小鼠的组(n=10/组)进行两次肌内免疫接种(第一次施用/第二次施用)。在此实施例中，所述重组F蛋白被选择为构象上受限的F蛋白类似物，其经工程改造而被稳定在融合前构象（在下文的实施例中称为rF或PreF–这是SEQIDNO:2中所示的抗原）。在第5组中，通过在相同部位间隔大约10min进行2次注射而共施用腺病毒和重组蛋白。第一次施用第二次施用1PanAd3RSVIM108vpPanAd3RSVIM108vp2PanAd3RSVIN108vpMVAIM107pfu3PanAd3RSVIM108vprF蛋白0.5ug-AS044rF蛋白0.5ug-AS04rF蛋白0.5ug-AS045PanAd3RSVIM108vp+rF蛋白0.5ug-AS04PanAd3RSVIM108vp+rF蛋白0.5ug-AS04在第49天（第二次免疫接种后20天），单独采集所有小鼠的血清并使用空斑减数测定法测试RSV中和抗体的存在。简而言之，将各血清的系列稀释液与RSVA（Long毒株）在37ºC预温育。温育后，将该病毒-血清混合物转移到用Vero细胞预先接种的平板上。在每个平板上，一列细胞仅与病毒温育（100%的感染性），而2个孔不接收病毒或血清（细胞对照）。将平板在33ºC温育2小时，移除培养液并向所有的孔中加入含有0.5%CMC(低粘度羧甲基纤维素)的RSV培养液。将平板在33ºC温育3天，然后进行免疫荧光染色。对于染色，用PBS洗涤细胞单层并用1%多聚甲醛进行固定。使用商用山羊抗-RSV抗血清，接着是缀合至FITC的兔抗山羊IgG，来检测RSV阳性细胞。使用自动成像系统计算染色空斑数/孔。各血清的中和抗体滴度被测定为造成空斑数减少60%（相比不含血清的对照）的血清稀释度的倒数（ED60）。结果示于图1中。用于比较不同组的统计方法是在log10值上的方差分析(ANOVA1)。通过在第二次免疫接种后3周测量产生IFNγ的脾细胞来评价细胞应答。通过标准ELISpot测定法测定脾细胞的抗原特异性IFNγ产量。简而言之，用抗小鼠IFNγ抗体涂布多筛96孔过滤平板并在+4℃温育过夜。第二天，制备淋巴细胞并在存在跨越对应抗原的肽的情况下在Ag涂布的孔中于37℃温育16小时。过夜温育后，移除细胞并加入生物素化的抗小鼠IFNγ并在室温下温育3小时。对于显色，加入碱性磷酸酶缀合的链霉亲和素，然后加入1-StepNBT-BCIP显色溶液。通过自动读板机对平板进行采集和分析。ELISpot数据表示为IFNγ斑点形成细胞(SFC)/百万脾细胞。结果示于图2中。图1中所示的结果表明，共施用PanAd3RSV和佐剂化重组F蛋白(共施用组)诱导了最高水平的中和抗体。另外，相比两个剂量的佐剂化重组F蛋白，共施用组诱导了高得多的细胞应答（图2）。当比较共施用组与两个剂量的PanAd3RSV时观察到了相反情况：共施用组诱导了略高的T细胞应答但显著更高的中和抗体滴度。虽然引发PanAd3RSV/加强MVA组诱导了高细胞应答（图2），但该组中的中和抗体滴度显著低于在共施用组中观察到的那些（图1)。综上所述，在所有测试的疫苗方案中，共施用PanAd3RSV和佐剂化重组F蛋白导致最高的合并的体液和细胞应答。实施例2：用表达RSVF、N和M2.1蛋白的腺病毒载体与佐剂化重组F蛋白联合免疫Balb/c小鼠诱导高水平的中和抗体和CD8T细胞应答。第二次免疫接种后14天，通过在免疫接种小鼠（近交Balb/c）血液中测量中和抗体应答以及识别M2.1特异性CD8T细胞，评价联合的PanAd3RSV+rF/AS04的免疫原性。用下列制剂以3周的间隔对Balb/c小鼠的组(n=11/组)进行两次肌内免疫接种(第一次/第二次)。组第一次施用第二次施用1PanAd3RSVIM108vpPanAd3RSVIM108vp2PanAd3RSVIM108vp+rF蛋白0.5ugPanAd3RSVIM108vp+rF蛋白0.5ug(共配制的)3PanAd3RSVIM108vp+rF蛋白0.5µg-明矾PanAd3RSVIM108vp+rF蛋白0.5µg-明矾(共定位的)4PanAd3RSVIM108vp+rF蛋白0.5µg-AS04PanAd3RSVIM108vp+rF蛋白0.5µg-AS040.5ug(共定位的)5PBSPBS如实施例1中所述评价了中和抗体应答，结果示于图3中。两个剂量的由PanAd3RSV和用明矾或AS04佐剂化的重组F蛋白(PreF)构成的联合疫苗诱导了显著高于2个剂量的PanAd3RSV的滴度。通过用携带M2.182-90表位的经荧光标签的五聚体主要组织相容性复合物(MHC)I类识别全血中的M2.1特异性细胞来测量CD8T细胞应答。为此，从每只小鼠收集血液，裂解红细胞，并用荧光活力标志物、CD3、CD8和B-220抗体以及MHC五聚物对细胞进行染色。经染色的细胞通过流式细胞术（LSR,BecktonDickinson）分析并测定五聚物阳性CD8T细胞的比例（图4）。用两个剂量的PanAd3RSV或用任何共施用方案进行疫苗接种诱导了强力的M2.1特异性CD8应答。当与中和抗体数据结合时，CD8T细胞数据表明，由共施用PanAd3RSV和用明矾或AS04佐剂化的rF组成的疫苗方案合并了强力的体液和细胞免疫应答。实施例3：用表达RSVF、N和M2.1蛋白的腺病毒载体与佐剂化重组F蛋白同时免疫Balb/c小鼠诱导强力体液免疫应答并保护免受RSV攻毒。在Balb/c小鼠中评价了两个剂量的共施用的PanAd3RSV+RSV-rF/AS04的免疫原性。用下列制剂以3周的间隔对Balb/c小鼠的组(n=13/组)进行两次肌内免疫接种：组第一次施用第二次施用1PanAd3RSVIN108vpMVAIM107pfu2PanAd3RSVIM108vpMVAIM107pfu3PanAd3RSVIN108vprF蛋白2µg-AS044PanAd3RSVIM108vprF蛋白2µg-AS045PanAd3RSVIM108vp+rF蛋白2µg-AS04PanAd3RSVIM108vp+rF蛋白2µg-AS046rF蛋白2µg-AS04rF蛋白2µg-AS047活的RSV8.3x1057pfu无疫苗8FI-RSV1/150FI-RSV1/1509PBSPBS在第5组中，通过在相同部位间隔大约10分钟进行2次注射而共施用腺病毒和重组蛋白。在第二次免疫接种后14天（研究的第35天）采集血清，在此时用2.9x106pfu活的RSVALong对动物进行鼻内攻毒。在攻毒后4天收集5只动物的肺，用于评价肺部病毒载量。在第二次免疫接种后14天，如实施例1中所述评价了中和抗体应答。如同在CD1小鼠中观察到的，在Balb/c中，共施用PanAd3RSV和佐剂化的F(PreF)蛋白导致RSV中和抗体的水平显著高于所有其它测试组，值得注意的是，两个剂量的佐剂化的F蛋白或顺序施用PanAd3RSV与MVA的组合或PanAd3RSV与重组蛋白的组合(图5)。为了测量这些示例性疫苗的功效，在RSV攻毒后4天收集肺部并单独称重以及均质化。将各个肺部均质物的系列稀释液（各8个重复）与Vero细胞一起温育，并在接种后6天，通过免疫荧光识别含有空斑的孔。使用Spearman-Kärber法测定病毒滴度用于TCID50计算并表示为每克的肺。病毒复制在所有接种疫苗的动物的肺部均受到抑制，表明所有测试的疫苗方案在此模型中均是保护性的（图6)。实施例4：用表达RSV蛋白的腺病毒载体与佐剂化重组F(PreF)蛋白同时免疫Balb/c小鼠在RSV攻毒后在肺部T细胞中诱导Th1表型并且不会诱导肺部嗜酸性粒细胞增多或粘液产生。在Balb/c小鼠中评价了用包括腺病毒载体RSV候选和佐剂化蛋白的方案疫苗接种对攻毒后肺部CD4T细胞的Th1/Th2应答、肺部嗜酸性粒细胞增多以及粘液产生的影响。使用了FI-RSV作为增强病理的阳性对照。用下列制剂以3周的间隔对Balb/c小鼠的组(n=12或13/组)进行两次肌内免疫接种：组第一次施用第二次施用1PanAd3RSVIN108vpMVAIM107pfu2PanAd3RSVIM108vpMVAIM107pfu3PanAd3RSVIN108vprF蛋白2µg-AS044PanAd3RSVIM108vprF蛋白2µg-AS045PanAd3RSVIM108vp+rF蛋白2µg-AS04PanAd3RSVIM108vp+rF蛋白2µg-AS046rF蛋白2µg-AS04rF蛋白2µg-AS047活的RSV8.3x1057pfu无疫苗8FI-RSV1/150FI-RSV1/1509PBSPBS在第5组中，通过在相同部位间隔大约10分钟进行2次注射而共施用腺病毒和重组蛋白。在第二次免疫接种后十四天（研究的第35天），用1-3x106pfu活的RSVALong对动物进行鼻内攻毒。从12只动物/组收集肺部并制备了4个集合（3个肺部/集合）。将肺部切碎并在含有LiberaseTL和DNAse的RPMI中在轨道式摇床上于37℃温育45min。然后将所有组织均质化，通过无菌100µm尼龙细胞滤器过滤，并通过离心法（Percollgradient）分离淋巴细胞。从交界面收集白细胞并与来自F抗原的重叠肽在37℃温育6h，并在温育的头30min后加入布雷菲德菌素A（BrefeldinA）。将平板在4℃保存过夜。在第二天，将细胞离心、重悬浮、洗涤、与活力标志物温育、洗涤、固定并渗透以及用针对CD4、CD8、CD45、IL-13和IFNγ的荧光标记抗体染色。在流式细胞仪(LSR,BectonDickinson)上采集细胞并测定CD45posCD4posCD8negIFNγpos/IL-13neg细胞(Th1)和CD45posCD4posCD8negIFNγneg/IL-13pos细胞(Th2)的百分比。计算了Th2/Th1细胞的比率（图7）。图7显示，当与rF/AS04制剂比较时，联合疫苗PanAd3RSV+rF/AS04使Th2/Th1比率向Th1偏移(平衡的Th2/Th1比率1由虚线标示)。所有含有rF、PanAd3RSV或MVA组合的疫苗制剂均诱导相比在FI-RSV组（一种已知诱导高水平CD4Th2细胞的疫苗方案）中观察到的低得多的Th2/Th1比率。对于组织病理学，收集了来自13只动物的左肺，充入福尔马林并在福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)的小鼠肺部组织切片上进行希氏高碘酸染色。使用图像分析软件对染色玻片进行定量分析。对于PAS阳性组织（粘液产生细胞）的定量分析，PAS阳性分段组织的面积（除以因子10）通过气道上皮细胞的周长进行标准化，并表示为平均PAS载量/毫米基底膜（BM）±标准偏差。这通常在20个气道/个体上进行，并且计算了平均PAS/mmBM/个体（图8）。图8显示，当与fF/AS04制剂比较时，联合疫苗PanAd3RSV+rF/AS04能够减少粘液产生细胞的数量。此外，所述共施用制剂和所有其它测试的PanAd3RSV-、MVA-以及fF/AS04组合在RSV攻毒后诱导显著低于FI-RSV疫苗的粘液产生细胞。从8只动物的右肺叶收集支气管肺泡灌洗(BAL)液。通过用针对CD45、CD11c和SiglecF的荧光标记抗体对BAL细胞染色进行BAL微分。在流式细胞仪(LSR,BectonDickinson)上采集细胞并测定CD45posSiglecFposCD11cneg(嗜酸性粒细胞)细胞的百分比。BAL中嗜酸性粒细胞的百分比被用作增强病理的标志物（图9）。图9显示，在PanAd3RSV+fF/AS04的共施用组以及在除FI-RSV以外的其它疫苗组中观察到极低水平的嗜酸性粒细胞。综上，图7至9中所示的数据表明，同时施用由PanAd3RSV和fF/AS04构成的疫苗与RSV攻毒引起的增强病理不相关，正如偏向Th1的肺部CD4T细胞应答以及肺部低水平的粘液产生细胞和嗜酸性粒细胞所证明。实施例5：用表达RSV蛋白的腺病毒载体与佐剂化重组F蛋白以两种蛋白和三种佐剂剂量同时免疫Balb/c小鼠在RSV攻毒后在肺部T细胞中诱导中和抗体和T细胞应答以及Th1表型，并显著降低肺部病毒载量。在Balb/c小鼠中，用包括含有表达RSVF、N和M2.1的核酸(SEQIDNO:4)的腺病毒载体(黑猩猩腺病毒155；ChAd155-RSV)RSV候选和佐剂化蛋白(PreF，SEQIDNO:2)的共施用方案，以两种蛋白和三种明矾佐剂剂量，评价了免疫接种对攻毒后肺部CD4T细胞的Th1/Th2应答、肺部嗜酸性粒细胞增多和粘液产生的免疫原性和影响。用下列制剂以3周的间隔对Balb/c小鼠的组(n=15/组)进行两次肌内同时（相隔数分钟）免疫接种：组共施用：制剂1+制剂21ChAd155-RSVIM108vp+PreF蛋白2µg和氢氧化铝(50µg)2ChAd155-RSVIM108vp+PreF蛋白2µg和氢氧化铝(17µg)3ChAd155-RSVIM108vp+PreF蛋白2µg和氢氧化铝(6µg)4ChAd155-RSVIM108vp+PreF蛋白0.2µg和氢氧化铝(50µg)5ChAd155-RSVIM108vp+PreF蛋白0.2µg和氢氧化铝(17µg)6ChAd155-RSVIM108vp+PreF蛋白0.2µg和氢氧化铝(6µg)7ChAd155-RSVRSVIM108vp+PreF蛋白2µg和AS04D(50µg)8PBS+ChAd155-RSVRSVIM108vp9PreF蛋白2µg-和氢氧化铝(50µg)+PBS10明矾吸附的FI-RSV1/15011活的RSV~3.6x106pfu12PBS+PBS免疫原性：在第35天（第二次免疫接种后14天），单独采集来自11只小鼠/组的血清并如实施例1中所述使用空斑减数测定法测试RSV中和抗体的存在。结果示于图10中。两个剂量的由同时施用的ChAd155-RSV和用明矾或AS04佐剂化的重组F(PreF)蛋白构成的联合疫苗诱导了与2个剂量的用50µg的明矾佐剂化的蛋白相似的中和抗体滴度，但显著高于两个剂量的ChAd155-RSV的滴度。ChAd155-RSV和佐剂化蛋白的组合允许明矾的剂量减少至17µg，同时保持与用50µg佐剂化的蛋白(单独或与ChAd155-RSV同时)类似的中和抗体应答。在2µg至0.2µg的蛋白剂量观察到了剂量应答，而最低水平的明矾(6µg)在两种蛋白剂量中导致更低的中和抗体滴度。通过用携带M2.182-90表位的经荧光标签的五聚体主要组织相容性复合物(MHC)I类识别全血中的M2.1特异性细胞来测量CD8T细胞应答。为此，在第二次免疫接种后14天，从5只小鼠/组收集血液。裂解红细胞，并用荧光活力标志物、CD3、CD8和B-220抗体以及MHC五聚物对细胞进行染色。通过流式细胞术(LSR,BecktonDickinson)分析经染色的细胞，并测定五聚物阳性CD8T细胞的比例（图11）。在所有用ChAd155RSV免疫的组的全血T细胞中均检测到了相似的CD8应答，但在仅用PreF蛋白免疫的组中未检测到。对攻毒的应答：用1-3x106pfu活的RSVALong对小鼠进行鼻内攻毒。在攻毒后第4天，收集肺部并单独称重以及均质化。将各个肺部均质物的系列稀释液（各8个重复）与Vero细胞一起温育，并在接种后6天，通过免疫荧光识别含有RSV空斑的孔。使用Spearman-Kärber法测定病毒滴度用于TCID50计算并表示为每克的肺（图12）。ChAd155-RSV和/或佐剂化蛋白的组中的大多数动物显示出完全保护（在肺部无法检测到病毒载量）。最低明矾剂量倾向于具有略低的保护。在攻毒后4天从4只动物/组收集肺，并如实施例4中所述进行制备。在用汇集的来自F抗原的肽再刺激淋巴细胞之后，如实施例4种所述对细胞染色用于细胞内细胞因子的流式细胞术分析，并计算Th2/Th1细胞的比率（图13）。在用汇集的来自M2.1抗原的肽以类似的方式再刺激肺淋巴细胞之后，计算表达IFNγ的CD8+T细胞的比例（图14）。图13显示，当与PreF/明矾制剂比较时，ChAd155RSV+PreF(在所有佐剂剂量中)使Th2/Th1比率向Th1偏移(平衡的Th2/Th1比率1由虚线标示)，而佐剂的选择和剂量影响甚微。所有含有ChAd155RSV+PreF组合的疫苗制剂均还诱导相比在FI-RSV组（一种已知诱导高水平CD4Th2细胞并与增强的RSV疾病相关的疫苗方案）中观察到的更低的Th2/Th1比率。图14显示，在所有共施用ChAd155RSV+PreF的组的肺部均检测到高水平的表达INFg的CD8+T细胞。在更高的蛋白剂量下，明矾的减少与更高的CD8应答相关，但佐剂水平在更低的蛋白剂量下影响甚微。仅用ChAd155RSV免疫的小鼠的肺部的CD8水平低于共施用组，并且在PreF蛋白/明矾组中无法检测到。对于组织病理学，如实施例4中所述进行希氏高碘酸染色以在福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)的小鼠肺部组织切片上定量粘液产生细胞。在Balb/cRSV攻毒模型中，粘液产生细胞与由FI-RSV诱导的增强的RSV病理相关。计算了平均PAS/mmBM/个体（图15）。图15显示，当与PreF/明矾制剂比较时，共施用ChAd155-RSV与PreF/明矾在RSV攻毒后不会增加粘液产生细胞的数量。在更高的蛋白剂量下，明矾的减少与更低的粘液产生细胞的数量相关，但佐剂水平在更低的蛋白剂量下影响更小。相比等同的ChAd155-RSV/PreF+明矾组合，ChAd155-RSV与PreF/AS04D的组合诱导了更低水平的粘液产生细胞。在仅施用ChAd155-RSV时观察到最低数量的粘液产生细胞。图10-15中的结果表明，由ChAd155RSV和佐剂化PreF蛋白抗原构成的同时施用疫苗能够在RSV攻毒时诱导保护性中和抗体应答和T细胞应答，其具有Th1/Th2平衡的CD4应答并且没有增强的病理。序列表SEQIDNO:1:示例性构象上受限的PreF抗原的核苷酸序列。SEQIDNO:2:示例性构象上受限的PreF抗原的氨基酸序列。SEQIDNO:3:编码RSV抗原的示例性核酸的核苷酸序列。SEQIDNO:4:编码RSV抗原的示例性核酸的氨基酸序列。位置1-524=FΔTM蛋白位置525-552=2a序列位置553-943=N蛋白位置944-1146=M2-1蛋白当前第1页1 2 3 当前第1页1 2 3