本发明属于植物提取物领域，具体涉及一种具有麻醉作用的甘肃陇南花椒提取物组分及其制备方法。
技术背景：
花椒(Pericarpium Zanthoxyli)为芸香科植物青椒(Zanthoxylum schinifolium sieb.et Zucc.)或花椒(Zanthoxylum bungeanum Maxim.)的干燥成熟果皮，有秦椒、川椒、岩椒等几十种品种，为常用温里药。在《中华人民共和国药典》中规定：花椒是传统中药，具有“温中止痛，杀虫止痒”的药效。
现代研究成果显示国内外花椒属植物的化学成分主要有生物碱、酰胺、木脂素、香豆素、挥发油和脂肪酸等，对心血管系统、消化系统、免疫机能、凝血功能、镇痛、镇静、抗炎、局部麻醉、抑菌和杀疥螨作用、抗肿瘤等均有较强的药理活性。如何有效地将传统文献记载和当今科研成果相结合，即寻找两者结合的切入点是目前当务之急，因此有必要进一步考证花椒功效，为深入挖掘其药用价值及提高相应产品附加值提供参考。
陇南市地处甘肃省东南部，有适宜花椒生长的自然气候环境和悠久的栽培历史。陇南花椒是地方名优特色农产品，因品质优良又被称为“大红袍花椒”，1993年荣获国家外贸部进出口产品优质奖；1994年荣获全国林业名特优新产品博览会金奖；2006年荣获中国杨凌农业高新技术博览会“后稷奖”。2000年陇南武都被国家林业局授予首批“中国名特优经济林花椒之乡”。2011年“武都花椒”获得国家工商总局颁发的“武都花椒地理标志证明”注册证书。在甘肃省大力发展特色农业产业化的大背景下，陇南花椒已成为当地政府重点发展的优势特色产业之一。
本发明的发明人作为甘肃陇南大红袍花椒研究的重要单位甘肃中医药大学的科研人员，对甘肃陇南花椒已经进行了多年的研究，在对甘肃陇南花椒多年的持续研究中意外发现，甘肃陇南花椒的提取物具有一定麻醉作用，但是科研人员研究发现，只有在特定提取、纯化方法下制备的陇南花椒提取物才具有较好的麻醉作用，而常规的水提、醇提的陇南花椒提取物的麻醉作用并不理想。发明人对此课题进行了多年的研究，经过大量的实验研究，发明人确定了具有麻醉作用最好的陇南花椒提取物及其制备工艺。经实验研究验证，该陇南花椒提取物具有非常好的麻醉效果。
此外，发明人还发现，本发明提供的陇南花椒提取物在治疗风湿性关节炎、防治甘露醇所致静脉损伤等方面也具有优异的作用效果。
本发明所用的花椒均为甘肃陇南大红袍花椒药材，由陇南花椒有限公司提供。
技术实现要素：
：
本发明的目的是提供一种花椒提取物。
本发明的另一目的是提供该提取物的制备方法。
本发明的另一目的是提供该提取物的质量检测方法。
本发明提供了该提取物在制备麻醉药物中的应用。
本发明还提供了该提取物在制备治疗风湿性关节炎药物中的应用。
本发明还提供了该提取物在制备防治甘露醇所致静脉损伤药物中的应用。
本发明还提供了该提取物在制备防治肿瘤药物中的应用。
本发明的目的是通过以下方式实现的：
一种具有麻醉作用的甘肃陇南花椒提取物，该花椒提取物是采用如下方法制备的：
(1)将花椒粉碎，置烘箱内40℃～50℃烘干3h～5h后，加15～25倍量50％～60％丙酮水溶液，于60℃～70℃水浴回流提取2次～4次，每次70min～80min，合并提取液，回收 丙酮，得到花椒总提取物浸膏；
(2)将得到的花椒总提取物浸膏以氯仿:甲醇＝50:5的混合溶液在40℃～50℃水浴条件下搅拌溶解，过滤，滤液在40℃～50℃水浴中减压浓缩后进行柱层析分离；
(3)选用D101B型大孔吸附树脂进行柱层析分离，树脂柱径高比为1:7～9，上样体积6BV～8BV，水洗4BV～6BV除杂，以乙酸乙酯:0.2mol/L磷酸二氢钠溶液＝100:5的洗脱剂7BV～9BV洗脱，流速为2BV/h～4BV/h，收集洗脱液，洗脱液浓缩，干燥，即得。
所述花椒提取物优选是采用如下方法制备的：
(1)将花椒粉碎，置烘箱内40℃烘干5h后，加15倍量55％丙酮水溶液，于60℃水浴回流提取4次，每次70min，合并提取液，回收丙酮，得到花椒总提取物浸膏；
(2)将得到的花椒总提取物浸膏以氯仿:甲醇＝50:5的混合溶液在50℃水浴条件下搅拌溶解，过滤，滤液在50℃水浴中减压浓缩后进行柱层析分离；
(3)选用D101B型大孔吸附树脂进行柱层析分离，树脂柱径高比为1:7，上样体积8BV，水洗4BV除杂，以乙酸乙酯:0.2mol/L磷酸二氢钠溶液＝100:5的洗脱剂9BV洗脱，流速为2BV/h，收集洗脱液，洗脱液浓缩，干燥，即得。
所述花椒提取物还可以优选采用如下方法制备：
(1)将花椒粉碎，置烘箱内50℃烘干3h后，加25倍量50％丙酮水溶液，于70℃水浴回流提取2次，每次80min，合并提取液，回收丙酮，得到花椒总提取物浸膏；
(2)将得到的花椒总提取物浸膏以氯仿:甲醇＝50:5的混合溶液在40℃水浴条件下搅拌溶解，过滤，滤液在40℃水浴中减压浓缩后进行柱层析分离；
(3)选用D101B型大孔吸附树脂进行柱层析分离，树脂柱径高比为1:9，上样体积6BV，水洗6BV除杂，以乙酸乙酯:0.2mol/L磷酸二氢钠溶液＝100:5的洗脱剂7BV洗脱，流速为4BV/h，收集洗脱液，洗脱液浓缩，干燥，即得。
所述花椒提取物还可以优选采用如下方法制备：
(1)将花椒粉碎，置烘箱内45℃烘干4h后，加20倍量60％丙酮水溶液，于65℃水浴回流提取3次，每次75min，合并提取液，回收丙酮，得到花椒总提取物浸膏；
(2)将得到的花椒总提取物浸膏以氯仿:甲醇＝50:5的混合溶液在45℃水浴条件下搅拌溶解，过滤，滤液在45℃水浴中减压浓缩后进行柱层析分离；
(3)选用D101B型大孔吸附树脂进行柱层析分离，树脂柱径高比为1:8，上样体积7BV，水洗5BV除杂，以乙酸乙酯:0.2mol/L磷酸二氢钠溶液＝100:5的洗脱剂8BV洗脱，流速为3BV/h，收集洗脱液，洗脱液浓缩，干燥，即得。
所述的花椒提取物，可采用高效液相色谱法对单叶芸香品碱进行含量测定：
(1)色谱条件：采用HypersilDs色谱柱；流动相：比例为20～40：60～80的乙腈-水；检测波长：190～210nm；柱温：15～25℃；流速：0.5～1.5mL·min-1；进样量：5～20μL；
(2)对照品溶液制备：精密称取干燥至恒重的单叶芸香品碱对照品适量，加甲醇溶解制成对照品溶液；
(3)供试品溶液的制备：精密称取本发明花椒提取物，加甲醇，加热回流，提取液回流溶剂并浓缩至干，残渣加水溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤，正丁醇提取液回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，摇匀，滤过，取滤液，即得供试品溶液；
(4)测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各5～20μL，注入高效液相色谱仪，进行检测。
其中，优选采用高效液谱法对单叶芸香品碱进行含量测定：
(1)色谱条件：采用HypersilDs色谱柱；流动相：比例为30：70的乙腈-水；检测波长：200nm；柱温：20℃；流速：1.0mL·min-1；进样量：10μL；
(2)对照品溶液制备：精密称取80℃干燥至恒重的单叶芸香品碱对照品适量，加甲醇溶解制成每1mL含0.2mg的对照品溶液；
(3)供试品溶液的制备：精密称取本发明花椒提取物10mL，加甲醇40mL，加热回流4h，提取液回流溶剂并浓缩至干，残渣加水10mL溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取5次，每次20mL，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次15mL，正丁醇提取液回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解并转移至10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取滤液，即得供试品溶液；
(4)测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，进行检测。
所述的花椒提取物，采用气相色谱法对香桧烯、葎草烯进行含量测定：
(1)色谱条件：色谱柱：ZB-WAX弹性石英毛细管柱；载气：N2，0.5～1.5mL·mL-1；氢气，30～50mL·mL-1；空气，300～500mL·min-1；分流比：5～15：1；进样口温度：240～260℃，检测器温度：290～310℃；程序升温：初始80℃，每分钟5℃升至120℃，每分钟10℃升至180℃，保持3.5min；内标法；
(2)内标溶液的制备：取环己酮适量，加无水乙醇溶解并稀释制成溶液，摇匀，作为内标溶液；
(3)供试品溶液的制备：精密量取本品，置容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，再精密量取，置容量瓶中，精密加入内标溶液，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀；
(4)对照品溶液的制备：精密称取香桧烯对照品、葎草烯对照品适量，加无水乙醇溶解并稀释制成含香桧烯及葎草烯的对照品储备溶液，备用；
(5)测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各5～20μL，注入气相色谱仪，进行检测。
其中，采用气相色谱法对香桧烯、葎草烯进行含量测定，优选步骤如下：
(1)色谱条件：色谱柱：ZB-WAX弹性石英毛细管柱；载气：N2，1.0mL·mL-1；氢气，40mL·mL-1；空气，400mL·min-1；分流比：8：1；进样口温度：250℃，检测器温度300℃；程序升温：初始80℃，每分钟5℃升至120℃，每分钟10℃升至180℃，保持3.5min；内标法；
(2)内标溶液的制备：取环己酮适量，加无水乙醇溶解并稀释制成每1mL含12.5mg的溶液，摇匀，作为内标溶液；
(3)供试品溶液的制备：精密量取花椒提取物1.0g，置10mL容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，再精密量取1.0mL，置10mL容量瓶中，精密加入内标溶液1.0mL，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀；
(4)对照品溶液的制备：精密称取香桧烯对照品、葎草烯对照品适量，加无水乙醇溶解并稀释制成含香桧烯0.301mg·mL-1及葎草烯0.901mg·mL-1的对照品储备溶液，备用；
(5)测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10μL，注入气相色谱仪，进行检测。
所述的花椒提取物，可以采用药学中常规的制药方法制备成外用制剂或者气雾剂。
所述外用制剂优选制备为外用膏剂、巴布剂、外用液。
所述的花椒提取物采用药学中常规的制药方法制备成外用药物制剂
所述的花椒提取物可用于制备防治甘露醇所致静脉损伤药物。
本发明所述的花椒提取物可用于制备治疗风湿性关节炎药物。
通过如下实验研究验证本发明的技术效果：
实验一：本发明提取物雾化吸入对大鼠麻醉效果的实验研究
在现有的麻醉术中异氟醚的麻醉效果显著，本实验尝试通过在现有麻醉药物对照研究的基础上，参照药物雾化标准以本发明提取物对比西药制剂进行动物麻醉实验，观察本发明麻醉药物的疗效是否可以替代西药制剂。
1材料
1.1实验动物清洁级健康SD大鼠50只，雌雄各半，体质量(220±20)g，由甘肃中医药 大学动物实验中心提供。饲养于实验动物中心，饲养温度(20±2)℃，饲料、水、垫料由专人及时加换。
1.2实验材料
1.2.1本发明提取物：
处方：花椒20Kg
制备方法：
(1)取花椒粗粉(40目)20Kg，置烘箱内45℃烘干4h后，加20倍量60％丙酮水溶液，于65℃水浴回流提取3次，每次75min，合并提取液，回收丙酮，得到花椒总提取物浸膏；
(2)将得到的花椒总提取物浸膏以氯仿:甲醇＝50:5的混合溶液在45℃水浴条件下搅拌溶解，过滤，滤液在45℃水浴中减压浓缩后进行柱层析分离；
(3)选用D101B型大孔吸附树脂进行柱层析分离，树脂柱径高比为1:8，上样体积7BV，水洗5BV除杂，以乙酸乙酯:0.2mol/L磷酸二氢钠溶液＝100:5的洗脱剂8BV洗脱，流速为3BV/h，收集洗脱液，洗脱液浓缩，干燥，得本发明花椒提取物10.4g。
1.2.2对比提取物A：
处方：花椒20Kg
制备方法：取花椒粗粉(40目)20Kg，加10倍量70％乙醇于室温下浸渍提取2次，每次2天，合并提取液，过滤，滤液减压回收乙醇，浓缩，干燥，得对比提取物A 21.5g。
1.2.3对比提取物B：
处方：花椒20Kg
制备方法：取花椒粗粉(40目)20Kg，加水煎煮三次，(一煎加水6倍量，煎煮90min；二煎加水4倍量，煎煮60min；三煎加水4倍量，煎煮30min)；药液合并浓缩至药材量与药液浓缩液量的比为1:1，加乙醇至含醇量达60％，静置24h，滤过，回收乙醇至无醇味，加水溶解，静置36h，滤过，得花椒水提取物，浓缩，干燥，得对比提取物B 23.4。
1.2.4对比提取物C：
处方：花椒20Kg
制备方法：取花椒粗粉(40目)20Kg，加水煎煮三次，(一煎加水6倍量，煎煮90min；二煎加水4倍量，煎煮60min；三煎加水4倍量，煎煮30min)；药液合并浓缩至药材量与药液浓缩液量的比为1:1，加乙醇至含醇量达60％，静置24h，滤过，回收乙醇至无醇味，加水溶解，静置36h，滤过，滤液浓缩，得花椒总浸膏；将上述总浸膏，通过聚酸胺柱进行柱层析分离，树脂柱径高比为1:7，上样体积8BV，水洗4BV除杂，以乙酸乙酯:0.2mol/L磷酸二氢钠溶液＝100:5的洗脱剂9BV洗脱，流速为2BV/h，收集洗脱液，向洗脱液中加入5倍量95％乙醇，拌入硅藻土，烘干，置索氏抽提器中，用丙酮萃取，萃取液在常压蒸馏回收丙酮，得浓缩物，将浓缩物在水浴上挥尽丙酮，对比提取物C 8.3g。
1.2.5异氟醚：由湖北信康医药化工有限公司生产。
1.3器材与设备超声雾化器，小动物吸入式气体麻醉机，智能无创血压计－鼠计测仪BP-98A。
2实验方法
2.1动物分组大鼠在相同条件下分笼饲养，考虑饲养密度，每笼5只，常规喂养标准颗粒饲料，并随机分为5组，分别为：本发明提取物雾化吸入组、对比提取物A雾化吸入组、对比提取物B雾化吸入组、对比提取物C雾化吸入组、西药异氟醚吸入组。
2.2麻醉的实施实验开始前30min将大鼠置于铺有毛毯的实验台上自由活动以适应实验环境。同时应用无创血压计，鼠尾观测，连续监测动脉血压和心率，并记录基础值。麻醉操作如下。
本发明提取物雾化吸入组：通过超声雾化器，调整超声波频率，在不破坏提取物化学性质的情况下，控制单位时间内中药雾化吸入量。维持雾化吸入1h。
对比提取物A雾化吸入组：通过超声雾化器，调整超声波频率，在不破坏提取物化学性 质的情况下，控制单位时间内中药雾化吸入量。维持雾化吸入1h。
对比提取物B雾化吸入组：通过超声雾化器，调整超声波频率，在不破坏提取物化学性质的情况下，控制单位时间内中药雾化吸入量。维持雾化吸入1h。
对比提取物C雾化吸入组：通过超声雾化器，调整超声波频率，在不破坏提取物化学性质的情况下，控制单位时间内中药雾化吸入量。维持雾化吸入1h。
西药异氟醚吸入组：通过吸入式气体麻醉机，设置异氟醚流量设为6L/min。实验过程中根据呼吸方式和心率调整异氟醚吸入浓度，出口处接气体监护仪，以监测麻醉气体浓度、氧浓度和二氧化碳浓度。调整氧流量，维持吸入氧浓度30％。吸入时间均为1h。
麻醉结束后将麻醉箱敞开接触空气，待大鼠自然清醒后放回笼中。
2.3观察指标
2.3.1一般情况
麻醉过程中大鼠保持自主呼吸，持续观察小鼠的呼吸频率、肢端和口唇颜色。
2.3.2血压、心率测定
无创血压计，连续监测动脉血压(mm/Hg)和心率(次/分)。测量麻醉前30min血压及心率，麻醉过程中平均动脉压及心率，苏醒后30min血压及心率。
2.3.3起效时间、持续时间
起效时间：记录自药物吸入开始至大鼠麻醉时间(min)(钳夹大鼠的尾根部，以反应无为标准)。持续时间：撤除雾化吸入装置后至大鼠苏醒的时间(min)。
2.4统计学处理
运用统计学软件SPSS15.0进行统计学处理，统计后数据用表示，进行正态分布检验，计量资料进行ANOVA单边方差分析，多组均数之间作两两比较，方差不齐者则用秩和检验。以P＜0.05表示差异有统计学意义，P＞0.05表示差异无统计学意义。
3结果
3.1一般情况
成功建立大鼠吸入麻醉模型，顺利完成整个实验，无中途退出和死亡。实验过程中大鼠口唇肢端部位无紫组，呼吸、心跳频率无明显减慢。监测结果见表1-1。两组之间呼吸频率和体温无显著差异(P＞005)。
表1-1两组呼吸频率、体温
3.2血压监测
平均动脉压(MAP)变化比较两组麻醉前30min，麻醉过程中平均动脉压及苏醒后30min的血压，监测结果见表1-2。组间、组内比较评价动脉压无显著差异(P＞0.05)。
表1-2两组动脉压 mm/Hg
3.3心率的测定
比较各组心率，监测结果见表1-3。组间、组内比较心率无显著差异(P＞0.05)。
表1-3两组心率比较 次/分
3.4起效时间、持续时间
与西药异氟醚吸入组比较，对比提取物A雾化吸入组、对比提取物B雾化吸入组、对比提取物C雾化吸入组的起效时间、持续时间有显著差异(P＜0.05)。与西药异氟醚吸入组比较，本发明提取物雾化吸入组的起效时间、持续时间无显著差异(P>0.05)，说明本发明提取物的麻醉效果与西药异氟醚相当，可以替代西药异氟醚。监测结果见表1-4。
表1-4两组麻醉起效时间、持续时间 min(n＝10)
注：与西药异氟醚吸入组比较，*P<0.05
4讨论与结论
通过初步的监测麻醉大鼠的血压、心率，评估吸入药物麻醉效果，通过实验研究，结果表明，本发明陇南花椒提取物的麻醉效果与西药对照药异氟醚相当，可以替代西药异氟醚，作为麻醉药物使用。本研究为今后本发明陇南花椒提取物雾化吸入麻醉的应用提供了理论与实践依据。
本发明提取物制剂为纯天然传统中药，麻醉效果良好且尚未发现其不良毒副反应。本发明提取物除了有较好的麻醉效果外，在治疗一些合并其他疾病的患者时具有优于异氟醚的作用，比如治疗风湿性关节炎、防治甘露醇所致静脉损伤等。
实验二：本发明花椒提取物治疗风湿性关节炎作用的实验研究
风湿性关节炎属中医痹症范畴该疾患中医治疗以祛风通络，活血止痛为主，内服和外用法均有较好疗效。为进一步评价本发明提取物贴膏的主要药效学，即为临床使用提供依据，开展试验结果报告如下。
1资料与方法
1.1实验药物与试剂
1.1.1本发明提取物贴膏：
处方：花椒20Kg
制备方法：
处方：花椒20Kg
制备方法：
(1)取花椒粗粉(40目)20Kg，置烘箱内45℃烘干4h后，加20倍量60％丙酮水溶液，于65℃水浴回流提取3次，每次75min，合并提取液，回收丙酮，得到花椒总提取物浸膏；
(2)将得到的花椒总提取物浸膏以氯仿:甲醇＝50:5的混合溶液在45℃水浴条件下搅拌溶解，过滤，滤液在45℃水浴中减压浓缩后进行柱层析分离；
(3)选用D101B型大孔吸附树脂进行柱层析分离，树脂柱径高比为1:8，上样体积7BV，水洗5BV除杂，以乙酸乙酯:0.2mol/L磷酸二氢钠溶液＝100:5的洗脱剂8BV洗脱，流速为3BV/h，收集洗脱液，洗脱液浓缩，干燥，得本发明花椒提取物10.3g；
(4)取本发明花椒提取物，加入基质(橡胶16g、松香16g、羊毛脂4g、凡士林1.5g、液体石蜡1g、氧化锌20g、汽油45g)，制成涂料，进行涂膏，切断，盖衬，切成小块，即得。
1.1.2对比提取物A(花椒乙醇提取物贴膏)：
处方：花椒20Kg
制备方法：取花椒粗粉(40目)20Kg，加10倍量70％乙醇于室温下浸渍提取2次，每次2天，合并提取液，过滤，滤液减压回收乙醇，浓缩，干燥，得对比提取物A 21.3g。
(2)花椒乙醇提取物，加入基质(橡胶30g、松香30g、羊毛脂8g、凡士林3g、液体石蜡2g、氧化锌30g、汽油80g)，制成涂料，进行涂膏，切断，盖衬，切成小块，即得。
1.1.3对比提取物B(花椒水提取物贴膏)
处方：花椒20Kg
制备方法：取花椒粗粉(40目)20Kg，加水煎煮三次，(一煎加水6倍量，煎煮90min；二煎加水4倍量，煎煮60min；三煎加水4倍量，煎煮30min)；药液合并浓缩至药材量与药液浓缩液量的比为1:1，加乙醇至含醇量达60％，静置24h，滤过，回收乙醇至无醇味，加水溶解，静置36h，滤过，得花椒水提取物，浓缩，干燥，得对比提取物B 23.5。
(2)花椒水提取物，加入基质(橡胶30g、松香30g、羊毛脂8g、凡士林3g、液体石蜡2g、氧化锌30g、汽油80g)，制成涂料，进行涂膏，切断，盖衬，切成小块，即得。
1.1.4对比提取物C(花椒丙酮提取物贴膏)
处方：花椒20Kg
制备方法：取花椒粗粉(40目)20Kg，加水煎煮三次，(一煎加水6倍量，煎煮90min；二煎加水4倍量，煎煮60min；三煎加水4倍量，煎煮30min)；药液合并浓缩至药材量与药液浓缩液量的比为1:1，加乙醇至含醇量达60％，静置24h，滤过，回收乙醇至无醇味，加水溶解，静置36h，滤过，滤液浓缩，得花椒总浸膏；将上述总浸膏，通过聚酸胺柱进行柱层析分离，树脂柱径高比为1:7，上样体积8BV，水洗4BV除杂，以乙酸乙酯:0.2mol/L磷酸二氢钠溶液＝100:5的洗脱剂9BV洗脱，流速为2BV/h，收集洗脱液，向洗脱液中加入5倍量95％乙醇，拌入硅藻土，烘干，置索氏抽提器中，用丙酮萃取，萃取液在常压蒸馏回收丙酮，得浓缩物，将浓缩物在水浴上挥尽丙酮，对比提取物C 8.5g。
(2)花椒丙酮提取物，加入基质(橡胶16g、松香16g、羊毛脂4g、凡士林1.5g、液体石蜡1g、氧化锌20g、汽油45g)，制成涂料，进行涂膏，切断，盖衬，切成小块，即得。
1.2动物
SD大鼠，雌雄各半，体重160～180g，由甘肃中医药大学实验动物中心提供。
1.3方法
本发明提取物贴膏对大鼠佐剂性多发性关节炎具有抑制作用，选用SD大鼠60只分为模型对照组、可的松组、本发明提取物贴膏组、对比提取物A贴膏组、对比提取物B贴膏组、对比提取物C贴膏组，每组10只。用Freund完全佐剂致炎，从致炎前2天给药，方法为：各组贴膏按4.0g/Kg剂量将各组贴膏按每100克动物体重取0.1ml滴在药棉上包敷致炎足，保持3h，1次/d；以赋形剂为模型对照组，阳性对照选用皮下注射氢化可的松25mg/Kg，1次/2d，致炎后第21天各组动物停药，后续观察3d。
1.4观察指标容积法测量原发性致炎足及继发性对侧足致炎前后体积，计算肿胀度。
1.5统计学方法采用SPSS19.0统计学软件处理数据。计量资料以均数±标准差示，采用t检验。P<0.05表示差异有统计学意义。
2结果
本发明提取物贴膏组能显著降低致炎后不同时间(3h、7d、14d、21d)致炎足肿胀度，并能显著降低致炎后不同时间(7、12d、18d、21d)致炎足肿胀度，分别与模型对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。见表2-1，表2-2。
表2-1大鼠佐剂性关节炎原发性病变影响比较
注：与模型对照组比较，aP<0.05
表2-2大鼠佐剂性关节炎继发性病变影响比较
注：与模型对照组比较，aP<0.05
3讨论
风湿性关节炎属于变态反应性疾病，是风湿热的主要表现，多以急性发热及关节疼痛为发病症状，临床表现轻或中度发热、游走性关节炎，受累关节为膝、踝、肩、肘等大关节，常见不同关节转移，病变局部有红、肿、热、痛表现。风湿性关节炎是常见慢性免疫性疾病，大多病程较长，且不易治愈，各种临床症状严重影响生活质量，中医中药外治对风湿关节炎方面具有较好优势。
本发明提取物贴膏是中药外用制剂，实验结果显示：本发明提取物贴膏可确定性抑制大鼠佐剂性关节炎导致局部早期炎症反应和使用后不同时间点肿胀，也可抑制对侧足因迟发性超敏反应诱发的局部肿胀，体现了本发明提取物贴膏的祛风除湿、温经止痛和活血通络功效，为临床使用该外用制剂治疗风湿性关节炎提供科学的药效依据。同时，实验结果也说明，本发明花椒提取物作用效果明显优于其他花椒提取物的组分。
实验三：本发明提取物贴膏外敷预防甘露醇所致兔耳浅静脉损伤的实验研究
甘露醇广泛应用于临床医疗救治中，由于其高渗性，当快速、高浓度经外周静脉留置针输入时可导致穿刺局部静脉损伤，局部组织出现发红、肿胀、灼热、疼痛，条索状红线，有时伴有畏寒、发热等全身症状。静脉炎的发生不但增加患者痛苦及医疗费用，而且延误患者的诊断及治疗。为寻找静脉炎的有效防治方法，发明人前期研究试用本发明陇南花椒提取物局部外敷预防高渗药物所致的浅静脉损伤的动物实验研究，从大体表现和组织病理学等微观角度评价了本发明陇南花椒提取物对减少静脉炎的发生具有良好的预防作用。
1材料与方法
1.1实验动物
由甘肃中医药大学动物实验中心提供健康新西兰成年大白兔20只，雌雄各半，体重2.5～3.0Kg，兔耳有畸形者排除，实验前适应性喂养1周。体重由轻到重排序、用随机数字表法将实验兔分为实验组和对照组，每组10只兔(20只耳)。两组兔一般情况比较无统计学差异(P＞0.05)，具有可比性。
1.2实验材料与仪器设备
H-2型石蜡切片机，光学显微镜，显微镜图像分析软件。20％甘露醇、硫化钠，戊巴比妥钠。
本发明提取物贴膏：
处方：花椒20Kg
制备方法：
(1)取花椒粗粉(40目)20Kg，置烘箱内45℃烘干4h后，加20倍量60％丙酮水溶液，于65℃水浴回流提取3次，每次75min，合并提取液，回收丙酮，得到花椒总提取物浸膏；
(2)将得到的花椒总提取物浸膏以氯仿:甲醇＝50:5的混合溶液在45℃水浴条件下搅拌溶解，过滤，滤液在45℃水浴中减压浓缩后进行柱层析分离；
(3)选用D101B型大孔吸附树脂进行柱层析分离，树脂柱径高比为1:8，上样体积7BV，水洗5BV除杂，以乙酸乙酯:0.2mol/L磷酸二氢钠溶液＝100:5的洗脱剂8BV洗脱，流速为3BV/h，收集洗脱液，洗脱液浓缩，干燥，得本发明花椒提取物10.2g；
(4)取本发明花椒提取物，加入基质(橡胶16g、松香16g、羊毛脂4g、凡士林1.5g、液体石蜡1g、氧化锌20g、汽油45g)，制成涂料，进行涂膏，切断，盖衬，切成小块，即得。
1.3方法
实验组在静脉输注甘露醇前30min，在输注甘露醇时将静脉穿刺处用无菌棉球覆盖固定后，以静脉穿刺点为中心，在穿刺点周围和沿静脉走行，用压舌板将本发明提取物贴膏贴于兔耳处，直径超过2～3cm，每天2次，每次1h，每次敷药前用生理盐水棉球擦去外敷药，观察局部组织及血管表现，然后采用同样的药物、方法外敷。
对照组正常静脉输注甘露醇，不外敷任何药物。
每天观察实验兔饮食、活动情况，静脉留置针留置时间5d为界，观察记录两组兔耳有无静脉炎及严重程度。
1.4静脉输注模型的建立
实验中各项操作符合实验动物伦理学原则。采用通用甘露醇输注模式进行造模，按每公斤体重30mg剂量腹腔注射戊巴比妥钠，待麻醉生效兔安静后，分别在两只兔耳缘静脉距耳尖2cm处用甲紫溶液标记，行静脉留置针穿刺术，穿刺一次成功后用康尔惠无菌透明贴固定，建模成功待动物自然清醒后，室温下静脉输注20％甘露醇溶液，按2.5ml/Kg的剂量静脉输注，注射速度8ml/min，注射完毕以50U/ml肝素盐水3～5ml正压封管，每日输2次，两次间隔8h，连续输注5d。静脉输注时密切观察有无药物外渗，发现药物渗漏即废弃模型。
1.5病理标本的制作
在末次静脉输注干预后第5天，分别处理每组的12只兔子，用止血钳夹往耳缘静脉远心端，迅速在以静脉穿刺点前方向心端2cm为中心，切取针体部位耳缘静脉及耳廓组织1cm2标本，放入4％甲醛溶液固定24h后，送甘肃中医药大学药学院药理实验室做常规病理切片。
1.6评价标准
1.6.1静脉炎评价标准
每日肉眼观察局部是否发生静脉炎、静脉炎发生时间及其严重程度，静脉炎标准根据美国护理学会2006年版《输液治疗护理实践标准》进行判断，结合动物实验特点去除疼痛指标，将静脉炎分为5个等级：0级，没有症状；Ⅰ级，局部发红；Ⅱ级，局部红斑或水肿；Ⅲ级，红斑、水肿，条索状静脉形成；Ⅳ级：红斑、水肿显著，条索状静脉形成＞2.5cm，或有脓液流出。
1.6.2病理组织学分析
常规病理切片HE染色，光镜观察及描述。病理组织学从4个方面进行病理损伤程度的判定，血管内皮肿胀、血管周围水肿、炎细胞浸润和血栓形成，每个项目分4个等级，无(－)，轻微(+)，中度(++)，重度(+++)。由专业病理学实验员盲法判断。
1.7统计学处理
采用SPSS17.0统计学软件。两组静脉炎发生率比较采用χ2检验，病理组织损伤程度采用两独立样本等级资料比较的Wilcoxon秩和检验，检验水准α＝0.05。
2结果
2.1两组兔耳静脉炎发生情况比较(表3-1)
表3-1两组兔耳缘静脉炎发生情况比较(只)
2.2两组兔耳组病理损伤程度比较(表3-2)
表3-2两组兔耳静脉及周围组织病理损伤程度比较(只)
3讨论与结论
20％甘露醇是临床用于治疗脑水肿、降低颅内压的首选药物。由于其渗透压高，可引起血浆及组织渗透压的升高，导致血管内皮细胞脱水，促进局部血小板聚集，以及释放各种致炎物质；且甘露醇在使用时需要快速滴注才能达到脱水及利尿的效果，进而加剧对血管及组织的损伤，可使局部静脉出现疼痛、管壁变硬、弹性消失、管腔闭塞等现象，甚至导致无菌性静脉炎。
研究表明，本发明提取物贴膏主要有效成分单叶芸香品碱是一种天然抗氧化剂，具有消炎抗菌、收敛止血、清热解毒、促进组织再生及修复，而且能够加快血液循环速度，降低血液黏稠度、抑制血小板聚集、防止血栓形成以及保护血管内皮细胞等广泛而重要的生物学活性，发明人前期研究也证明了本发明提取物贴膏对甘露醇所致的静脉炎具有良好的预防作用。但如何选择最佳的外敷时机并无实验理论依据，本研究结果发现，本发明提取物贴膏外敷第3天时，实验组静脉炎发生率低于对照组(P＜0.05)，提示输注甘露醇前30min使用本发明提取物贴膏外敷可控制炎症的发生发展，有效降低静脉炎的发生率。表2结果显示，在本发明提取物贴膏外敷5d后实验组血管内皮肿胀、血管周围水肿、炎细胞浸润病理损伤程度低于对照组(P＜0.05)，提示输注甘露醇前30min外敷本发明提取物贴膏更能有效的发挥其抗炎、消肿的作用，减少炎症病理反应的发生。分析原因可能是在输注甘露醇时提前使用本发明提取物贴膏外敷，本发明提取物贴膏的有效活性成分可以充分的渗透到皮下和血管周围组织中，在血管中达到一定浓度，当静脉输注甘露醇时，就可及时有效的发挥其消炎止痛、扩张血管、降低血管壁的脆性以保护静脉血管内皮细胞免受刺激等作用，从而达到预防静脉损伤的目的。故推断输注甘露醇前30min用本发明提取物贴膏外敷可能是预防甘露醇所致静脉炎的最适宜时机。
实验四：本发明花椒提取物高效液相色谱法质量检测方法研究
1仪器与试药
1.1仪器
高效液相色谱仪(Agilent110高效液相色谱仪及工作站，G1311Aquat泵，G1314紫外检测器)。
1.2试药
单叶芸香品碱对照品(中国药品生物制品检定研究院)；本发明花椒提取物：参照本发明说明书具体实施方式中的实施例1制备；陇南花椒药材(陇南花椒有限公司提供)；甲醇(色谱醇，上海生化工助剂厂)；其他试剂为分析纯。
2方法与结果
2.1处方：花椒20Kg
2.2制备方法：
(1)取花椒粗粉(40目)20Kg，置烘箱内45℃烘干4h后，加20倍量60％丙酮水溶液，于65℃水浴回流提取3次，每次75min，合并提取液，回收丙酮，得到花椒总提取物浸膏；
(2)将得到的花椒总提取物浸膏以氯仿:甲醇＝50:5的混合溶液在45℃水浴条件下搅拌溶解，过滤，滤液在45℃水浴中减压浓缩后进行柱层析分离；
(3)选用D101B型大孔吸附树脂进行柱层析分离，树脂柱径高比为1:8，上样体积7BV，水洗5BV除杂，以乙酸乙酯:0.2mol/L磷酸二氢钠溶液＝100:5的洗脱剂8BV洗脱，流速为3BV/h，收集洗脱液，洗脱液浓缩，干燥，得本发明花椒提取物10.4g。
2.3单叶芸香品碱的含量测定
2.3.1HPLC色谱条件
采用HypersilDs(4.0mm×125mm，5μm)色谱柱；流动相：比例为30：70的乙腈-水；检测波长：200nm；柱温：20℃；流速：1.0mL·min-1；进样量：10μL；在该色谱条件下，对照品及样品色谱峰良好，无花椒阴性对照对测定无干扰。
2.3.2对照品溶液的制备
精密称取80℃干燥至恒重的单叶芸香品碱对照品适量，加甲醇制成每1mL含0.2mg的溶液。
2.3.3供试品溶液与阴性对照液的制备
精密称取本发明花椒提取物10g，加甲醇40mL，加热回流4h，提取液回流溶剂并浓缩至干，残渣加水10mL溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取5次，每次20mL，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次15mL，正丁醇提取液回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解并转移至10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取滤液即得；另按上述方法和比例制备不含花椒的阴性对照品，同法制成阴性对照液。
2.3.4标准曲线的绘制
精密称取80℃干燥至恒重的单叶芸香品碱对照品适量，用甲醇制成10.4，20.8，41.6，83.2，166.4μgmL-1系列浓度的溶液，分别精密量取上述5种浓度溶液各10μL，注入高效液相色谱仪进行测定。
以峰面积比值与浓度进行线性回归，得回归方程为：A＝21.2764C-0.1394，r＝0.9998。表明单叶芸香品碱在10.1～166.9μgmL-1浓度范围内呈良好的线性关系。
2.3.5稳定性试验
精密吸取供试品溶液10μL，分别于0，1，2，4，8h进样，并计算单叶芸香品碱含量。结果8h内RSD为0.34％(n＝5)。表明样品溶液在8h内稳定。
2.3.6重复性试验
按供试品溶液制备方法平行处理样品5份，依法测定单叶芸香品碱含量并计算。结果测得单叶芸香品碱平均含量为0.11mg·g-1，RSD为1.1％。
2.3.7精密度实验
精密吸取单叶芸香品碱对照品溶液，重复进样5次，依法测定峰面积。结果RSD为0.23％(n＝5)。表明精密度较好。
2.3.8回收率实验
精密称取已知单叶芸香品碱含量的同一批号的样品6份，按高、中、低浓度分别精密加入适量的单叶芸香品碱对照品溶液，按样品测定项下操作，依法测定，计算回收率。结果平均回收率为100.2％，RSD为0.44％(n＝5)。
2.3.9样品含量测定
分别量取对照品溶液和供试品溶液适量，用微孔滤膜滤过，各进样10μL，按上述色谱条件测定3批样品，平行测定5次。按外标法以峰面积计算供试品溶液单叶芸香品碱的含量。本品含单叶芸香品碱应为标示含量的95％～105％，以每1g本品含单叶芸香品碱计，不得少于0.11mg。3批样品含量分别为100.2％(RSD＝1.1％)，101.6％(RSD＝1.2％)，99.8％(RSD＝1.2％)。
实验五：本发明花椒提取物气相色谱法同步测定香桧烯、葎草烯的含量
1仪器与试药
Agilent7890N气相色谱仪：FID检测器，A.01.12.1色谱工作站；SGH－300高纯氢气发生器(北京东方精华科技苑科技有限公司)；色谱柱弹性石英毛细管柱(30m×0.25mm，0.25μm)；梅特勒－托利多十万分之一电子分析天平；香桧烯对照品(含量99.9％，中国食品药品检定研究院)；葎草烯对照品(含量99.9％，中国食品药品检定研究院)；本发明花椒提取物(参照本发明说明书具体实施方式中的实施例1制备)，试剂：环己酮，无水乙醇均为色谱纯。
2色谱条件
色谱柱：ZB-WAX弹性石英毛细管柱(30m×0.25mm，0.25μm)；载气：N2，1.0mL·mL-1；氢气，40mL·mL-1；空气，400mL·min-1；分流比：8：1；进样口温度：250℃，检测器温度300℃；程序升温：初始80℃，每分钟5℃升至120℃，每分钟10℃升至180℃，保持3.5min；内标法。
3试验方法与结果
3.1内标溶液的制备
取环己酮适量，加无水乙醇溶解并稀释制成每1g含12.5mg的溶液，摇匀，作为内标溶液。
3.2供试品溶液的制备
精密量取本品1.0g，置10mL容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，再精密量取1.0mL，置10mL容量瓶中，精密加入内标溶液1.0mL，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀。
3.3对照品储备溶液的制备
精密称取香桧烯对照品、葎草烯对照品适量，加无水乙醇溶解并稀释制成含香桧烯0.301mg·mL-1及葎草烯0.901mg·mL-1的对照品储备溶液，备用；
3.4阴性对照溶液的制备
另按上述“3.2”项下制备方法和比例制备不含花椒的阴性对照品，同法制成阴性对照液。
3.5线性关系的考察
分别精密移取0.2、0.5、1.0、1.5、3.5mL对照品储备液于10mL容量瓶中，加内标溶液1.0mL，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液，分别取1μL进样，记录色谱图，以香桧烯、葎草烯与内标的峰面积比值为纵坐标(Y)，浓度(C)为横坐标(X)，分别绘制标准曲线，得回归方程分别为：
Y(香桧烯)＝1.1148X－0.0016，R2＝0.9999，香桧烯浓度在0.144～2.552mg·mL-1范围内，线性关系良好；
Y(葎草烯)＝1.1345X+0.0034，R2＝0.9999，葎草烯浓度在0.194～3.465mg·mL-1范围内，线性关系良好。
3.6精密度试验
取香桧烯浓度为0.230mg·mL-1和葎草烯浓度为0.290mg·mL-1的对照品溶液，重复进样6次，记录峰面积，分别计算2种成分与内标的峰面积比值(A/A内标)，香桧烯、葎草烯的RSD分别为0.22％和1.3％(n＝6)。
3.7重复性试验
取同一批样品，按样品测定项下的方法重复测定6次，结果香桧烯、葎草烯的RSD分别为0.34％、1.4％(n＝6)。
3.8稳定性试验
取同一批样品溶液，分别在室温下放置0、2、4、6、8、12h后测定，结果按香桧烯、葎草烯的RSD分别为0.36％、1.8％，说明样品溶液在12h内测定，结果稳定。
3.9加样回收率试验
取已知含量的样品溶液9份，并加入适当的低、中、高对照品溶液，按样品测定法测定香桧烯、葎草烯含量，分别计算回收率，结果见表4-1。
表4-1回收率测定结果(n＝9，％)
结果表明，本方法的回收率较好，香桧烯的回收率分别在99.5％～100.1％，葎草烯的回收率在98.5％～100.6％之间，相对标准偏差分别为0.29％与0.87％，本测定方法能满足本发明花椒提取物中香桧烯与葎草烯的含量测定。
3.10定量限与检测限
采用“信噪比法”来确定本研究的定量限和检测限，取线性标准溶液适量，采用加无水乙醇逐步稀释法进行稀释，当进样浓度为6.27、9.90μg·mL-1时，取1μL进样，连续进样3次，得到香桧烯、内标、葎草烯信噪比平均值分别接近10.0，可以以此浓度为定量限；继续稀释进样，当进样浓度为1.044、1.65μg·mL-1，连续进样3次，得到香桧烯、内标、葎草烯信噪比平均值接近3.0，可以以此浓度为检测限。
3.11耐用性试验
经不同色谱柱考察和溶液稳定性考察，以及柱温，进样口温度和检测器温度考察，表明本方法耐用性良好，适用于本发明花椒提取物中两组分的含量测定。
3.11.1色谱柱的影响
选用3根不同商品规格的色谱柱，测定同一批样品的含量，计算含量值的RSD％分别为1.3、1.7、1.6。结果表明，样品用不同的PEG色谱柱测定含量，香桧烯、葎草烯与内标均可有效分离，说明方法耐用性良好。
3.11.2柱温的影响
柱温对分离的影响主要为影响主峰的出峰时间，温度越高，主峰出峰时间越短，在第一阶段为80℃时，香桧烯主峰香桧烯与杂质峰能保证基线分离，第二阶段120℃时葎草烯主峰与杂质峰能保证基线分离，且各温度下含量的RSD小于2.0％。
3.11.3进样口温度的影响
进样口温度高于柱温时，香桧烯与杂质峰能够保证基线分离，葎草烯与杂质分离良好，且各温度下含量的RSD小于1.8％。
3.11.4检测器温度的影响
检测器温度高于进样口温度时，香桧烯与杂质峰能够保证基线分离，葎草烯与杂质分离良好，且各温度下含量的RSD小于1.9％。
3.12样品含量测定结果
经过方法学验证，本含量测定方法操作简便、准确度高、重现性好，能更有效地控制产品质量。因此应用该方法对10批样品，按照前述方法采用内标法进行含量测定，结果见表4-2。
表4-2样品含量测定结果
4讨论
4.1系统适应性试验
在本试验气相色谱系统下，分别吸取样品测定用混合对照品溶液、供试品溶液与阴性对照溶液各1μL，记录色谱图。2种组分与内标物均能够较好地分离，阴性无干扰。该系统适应性结果见表4-3。
表4-3系统适应性试验
4.2内标物的选择
曾试用过环己酮、萘、联苯、水杨酸甲酯等，因样品挥发性成分多，结果以环己酮的保留时间及分离效果最合适。
4.3柱温的选择
香桧烯、环己酮和葎草烯的沸点相差比较大，柱温低时，葎草烯的保留时间过长，柱温高时，香桧烯与杂质不能有效分离，经采用两段程序升温方式能满足两种成分的同时分析。
4.4本品的含量限度
由10批次产品测定结果，暂定本品的含量限度为：本品每1g含香桧烯不得少于0.200mg，含葎草烯不得少于0.200mg。
本方法对2种成分同时进行分离与检测，方法快速、灵敏，分离度好、专属性好，能有效地控制药品质量。
实验六：不同花椒提取物中单叶芸香品碱、香桧烯、葎草烯的含量测定
1待测样品
1.1.1本发明花椒提取物
处方：花椒20Kg
制备方法：
(1)取花椒粗粉(40目)20Kg，置烘箱内45℃烘干4h后，加20倍量60％丙酮水溶液，于65℃水浴回流提取3次，每次75min，合并提取液，回收丙酮，得到花椒总提取物浸膏；
(2)将得到的花椒总提取物浸膏以氯仿:甲醇＝50:5的混合溶液在45℃水浴条件下搅拌溶解，过滤，滤液在45℃水浴中减压浓缩后进行柱层析分离；
(3)选用D101B型大孔吸附树脂进行柱层析分离，树脂柱径高比为1:8，上样体积7BV，水洗5BV除杂，以乙酸乙酯:0.2mol/L磷酸二氢钠溶液＝100:5的洗脱剂8BV洗脱，流速为3BV/h，收集洗脱液，洗脱液浓缩，干燥，得本发明花椒提取物10.6g。
1.2对比提取物A：
处方：花椒20Kg
制备方法：取花椒粗粉(40目)20Kg，加10倍量70％乙醇于室温下浸渍提取2次，每次2天，合并提取液，过滤，滤液减压回收乙醇，浓缩，干燥，得对比提取物A 21.6g。
1.3对比提取物B：
处方：花椒20Kg
制备方法：取花椒粗粉(40目)20Kg，加水煎煮三次，(一煎加水6倍量，煎煮90min；二煎加水4倍量，煎煮60min；三煎加水4倍量，煎煮30min)；药液合并浓缩至药材量与药液浓缩液量的比为1:1，加乙醇至含醇量达60％，静置24h，滤过，回收乙醇至无醇味，加水溶解，静置36h，滤过，得花椒水提取物，浓缩，干燥，得对比提取物B 23.6。
1.4对比提取物C：
处方：花椒20Kg
制备方法：取花椒粗粉(40目)20Kg，加水煎煮三次，(一煎加水6倍量，煎煮90min；二煎加水4倍量，煎煮60min；三煎加水4倍量，煎煮30min)；药液合并浓缩至药材量与药液浓缩液量的比为1:1，加乙醇至含醇量达60％，静置24h，滤过，回收乙醇至无醇味，加水溶解，静置36h，滤过，滤液浓缩，得花椒总浸膏；将上述总浸膏，通过聚酸胺柱进行柱层析分离，树脂柱径高比为1:7，上样体积8BV，水洗4BV除杂，以乙酸乙酯:0.2mol/L磷酸二氢钠溶液＝100:5的洗脱剂9BV洗脱，流速为2BV/h，收集洗脱液，向洗脱液中加入5倍量95％乙醇，拌入硅藻土，烘干，置索氏抽提器中，用丙酮萃取，萃取液在常压蒸馏回收丙酮，得浓缩物，将浓缩物在水浴上挥尽丙酮，对比提取物C 8.3g。
2测定方法
2.1采用本发明实验三提供的高效液相色谱法测定单叶芸香品碱含量的方法进行测定。
2.2采用本发明实验四提供的气相色谱法同步测定香桧烯、葎草烯的含量的方法进行测定。
3测定结果
测定结果见表5-1。
表5-1样品含量测定结果
4讨论与结论
从表5-1中可以看出，本发明本发明花椒提取物中的单叶芸香品碱、香桧烯、葎草烯的含量明显高于其他花椒提取物，这可能也是本发明花椒提取物具有麻醉作用，以及在治疗风湿性关节炎等方面的效果优于其他提取物的原因。
具体实施方式：
实施例1：
处方：花椒20Kg
制备方法：
(1)取花椒粗粉(40目)20Kg，置烘箱内45℃烘干4h后，加20倍量60％丙酮水溶液， 于65℃水浴回流提取3次，每次75min，合并提取液，回收丙酮，得到花椒总提取物浸膏；
(2)将得到的花椒总提取物浸膏以氯仿:甲醇＝50:5的混合溶液在45℃水浴条件下搅拌溶解，过滤，滤液在45℃水浴中减压浓缩后进行柱层析分离；
(3)选用D101B型大孔吸附树脂进行柱层析分离，树脂柱径高比为1:8，上样体积7BV，水洗5BV除杂，以乙酸乙酯:0.2mol/L磷酸二氢钠溶液＝100:5的洗脱剂8BV洗脱，流速为3BV/h，收集洗脱液，洗脱液浓缩，干燥，得本发明花椒提取物10.6g。
含量测定：
采用高效液谱法对单叶芸香品碱进行含量测定：
(1)色谱条件：采用HypersilDs色谱柱；流动相：比例为30：70的乙腈-水；检测波长：200nm；柱温：20℃；流速：1.0mL·min-1；进样量：10μL；
(2)对照品溶液制备：精密称取80℃干燥至恒重的单叶芸香品碱对照品适量，加甲醇溶解制成每1mL含0.2mg的对照品溶液；
(3)供试品溶液的制备：精密称取本发明花椒提取物10mL，加甲醇40mL，加热回流4h，提取液回流溶剂并浓缩至干，残渣加水10mL溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取5次，每次20mL，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次15mL，正丁醇提取液回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解并转移至10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取滤液，即得供试品溶液；
(4)测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，进行检测；
(5)测定结果：以每1g本品含单叶芸香品碱计，为0.15mg。
采用气相色谱法对香桧烯、葎草烯进行含量测定：
(1)色谱条件：色谱柱：ZB-WAX弹性石英毛细管柱；载气：N2，1.0mL·mL-1；氢气，40mL·mL-1；空气，400mL·min-1；分流比：8：1；进样口温度：250℃，检测器温度300℃；程序升温：初始80℃，每分钟5℃升至120℃，每分钟10℃升至180℃，保持3.5min；内标法；
(2)内标溶液的制备：取环己酮适量，加无水乙醇溶解并稀释制成每1mL含12.5mg的溶液，摇匀，作为内标溶液；
(3)供试品溶液的制备：精密量取花椒提取物1.0g，置10mL容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，再精密量取1.0mL，置10mL容量瓶中，精密加入内标溶液1.0mL，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀；
(4)对照品溶液的制备：精密称取香桧烯对照品、葎草烯对照品适量，加无水乙醇溶解并稀释制成含香桧烯0.301mg·mL-1及葎草烯0.901mg·mL-1的对照品储备溶液，备用；
(5)测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10μL，注入气相色谱仪，进行检测；
(6)测定结果：本品每1g含香桧烯为0.210mg，含葎草烯为0.212mg。
实施例2：
处方：花椒20Kg
制备方法：
(1)取花椒粗粉(40目)20Kg，置烘箱内45℃烘干4h后，加20倍量60％丙酮水溶液，于65℃水浴回流提取3次，每次75min，合并提取液，回收丙酮，得到花椒总提取物浸膏；
(2)将得到的花椒总提取物浸膏以氯仿:甲醇＝50:5的混合溶液在45℃水浴条件下搅拌溶解，过滤，滤液在45℃水浴中减压浓缩后进行柱层析分离；
(3)选用D101B型大孔吸附树脂进行柱层析分离，树脂柱径高比为1:8，上样体积7BV，水洗5BV除杂，以乙酸乙酯:0.2mol/L磷酸二氢钠溶液＝100:5的洗脱剂8BV洗脱，流速为3BV/h，收集洗脱液，洗脱液浓缩，干燥，得本发明花椒提取物10.2g。
含量测定：
采用高效液谱法对单叶芸香品碱进行含量测定：
(1)色谱条件：采用HypersilDs色谱柱；流动相：比例为30：70的乙腈-水；检测波长：200nm；柱温：20℃；流速：1.0mL·min-1；进样量：10μL；
(2)对照品溶液制备：精密称取80℃干燥至恒重的单叶芸香品碱对照品适量，加甲醇溶解制成每1mL含0.2mg的对照品溶液；
(3)供试品溶液的制备：精密称取本发明花椒提取物10mL，加甲醇40mL，加热回流4h，提取液回流溶剂并浓缩至干，残渣加水10mL溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取5次，每次20mL，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次15mL，正丁醇提取液回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解并转移至10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取滤液，即得供试品溶液；
(4)测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，进行检测；
(5)测定结果：以每1g本品含单叶芸香品碱计，为0.14mg。
采用气相色谱法对香桧烯、葎草烯进行含量测定：
(1)色谱条件：色谱柱：ZB-WAX弹性石英毛细管柱；载气：N2，1.0mL·mL-1；氢气，40mL·mL-1；空气，400mL·min-1；分流比：8：1；进样口温度：250℃，检测器温度300℃；程序升温：初始80℃，每分钟5℃升至120℃，每分钟10℃升至180℃，保持3.5min；内标法；
(2)内标溶液的制备：取环己酮适量，加无水乙醇溶解并稀释制成每1mL含12.5mg的溶液，摇匀，作为内标溶液；
(3)供试品溶液的制备：精密量取花椒提取物1.0g，置10mL容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，再精密量取1.0mL，置10mL容量瓶中，精密加入内标溶液1.0mL，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀；
(4)对照品溶液的制备：精密称取香桧烯对照品、葎草烯对照品适量，加无水乙醇溶解并稀释制成含香桧烯0.301mg·mL-1及葎草烯0.901mg·mL-1的对照品储备溶液，备用；
(5)测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10μL，注入气相色谱仪，进行检测；
(6)测定结果：本品每1g含香桧烯为0.211mg，含葎草烯为0.213mg。
实施例3：
处方：花椒20Kg
制备方法：
(1)取花椒粗粉(40目)20Kg，置烘箱内45℃烘干4h后，加20倍量60％丙酮水溶液，于65℃水浴回流提取3次，每次75min，合并提取液，回收丙酮，得到花椒总提取物浸膏；
(2)将得到的花椒总提取物浸膏以氯仿:甲醇＝50:5的混合溶液在45℃水浴条件下搅拌溶解，过滤，滤液在45℃水浴中减压浓缩后进行柱层析分离；
(3)选用D101B型大孔吸附树脂进行柱层析分离，树脂柱径高比为1:8，上样体积7BV，水洗5BV除杂，以乙酸乙酯:0.2mol/L磷酸二氢钠溶液＝100:5的洗脱剂8BV洗脱，流速为3BV/h，收集洗脱液，洗脱液浓缩，干燥，得本发明花椒提取物9.8g。
含量测定：
采用高效液谱法对单叶芸香品碱进行含量测定：
(1)色谱条件：采用HypersilDs色谱柱；流动相：比例为30：70的乙腈-水；检测波长：200nm；柱温：20℃；流速：1.0mL·min-1；进样量：10μL；
(2)对照品溶液制备：精密称取80℃干燥至恒重的单叶芸香品碱对照品适量，加甲醇溶解制成每1mL含0.2mg的对照品溶液；
(3)供试品溶液的制备：精密称取本发明花椒提取物10mL，加甲醇40mL，加热回流4h，提取液回流溶剂并浓缩至干，残渣加水10mL溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取5次， 每次20mL，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次15mL，正丁醇提取液回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解并转移至10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取滤液，即得供试品溶液；
(4)测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，进行检测；
(5)测定结果：以每1g本品含单叶芸香品碱计，为0.14mg。
采用气相色谱法对香桧烯、葎草烯进行含量测定：
(1)色谱条件：色谱柱：ZB-WAX弹性石英毛细管柱；载气：N2，1.0mL·mL-1；氢气，40mL·mL-1；空气，400mL·min-1；分流比：8：1；进样口温度：250℃，检测器温度300℃；程序升温：初始80℃，每分钟5℃升至120℃，每分钟10℃升至180℃，保持3.5min；内标法；
(2)内标溶液的制备：取环己酮适量，加无水乙醇溶解并稀释制成每1mL含12.5mg的溶液，摇匀，作为内标溶液；
(3)供试品溶液的制备：精密量取花椒提取物1.0g，置10mL容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，再精密量取1.0mL，置10mL容量瓶中，精密加入内标溶液1.0mL，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀；
(4)对照品溶液的制备：精密称取香桧烯对照品、葎草烯对照品适量，加无水乙醇溶解并稀释制成含香桧烯0.301mg·mL-1及葎草烯0.901mg·mL-1的对照品储备溶液，备用；
(5)测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10μL，注入气相色谱仪，进行检测；
(6)测定结果：本品每1g含香桧烯为0.223mg，含葎草烯为0.218mg。
实施例4：贴膏剂
处方：花椒20Kg
制备方法：
(1)取花椒粗粉(40目)20Kg，置烘箱内45℃烘干4h后，加20倍量60％丙酮水溶液，于65℃水浴回流提取3次，每次75min，合并提取液，回收丙酮，得到花椒总提取物浸膏；
(2)将得到的花椒总提取物浸膏以氯仿:甲醇＝50:5的混合溶液在45℃水浴条件下搅拌溶解，过滤，滤液在45℃水浴中减压浓缩后进行柱层析分离；
(3)选用D101B型大孔吸附树脂进行柱层析分离，树脂柱径高比为1:8，上样体积7BV，水洗5BV除杂，以乙酸乙酯:0.2mol/L磷酸二氢钠溶液＝100:5的洗脱剂8BV洗脱，流速为3BV/h，收集洗脱液，洗脱液浓缩，干燥，得本发明花椒提取物10.1g；
(4)取本发明花椒提取物，加入基质(橡胶16g、松香16g、羊毛脂4g、凡士林1.5g、液体石蜡1g、氧化锌20g、汽油45g)，制成涂料，进行涂膏，切断，盖衬，切成小块，即得。
实施例5：气雾剂
处方：花椒20Kg
制备方法：
(1)取花椒粗粉(40目)20Kg，置烘箱内45℃烘干4h后，加20倍量60％丙酮水溶液，于65℃水浴回流提取3次，每次75min，合并提取液，回收丙酮，得到花椒总提取物浸膏；
(2)将得到的花椒总提取物浸膏以氯仿:甲醇＝50:5的混合溶液在45℃水浴条件下搅拌溶解，过滤，滤液在45℃水浴中减压浓缩后进行柱层析分离；
(3)选用D101B型大孔吸附树脂进行柱层析分离，树脂柱径高比为1:8，上样体积7BV，水洗5BV除杂，以乙酸乙酯:0.2mol/L磷酸二氢钠溶液＝100:5的洗脱剂8BV洗脱，流速为3BV/h，收集洗脱液，洗脱液浓缩，干燥，得本发明花椒提取物10.1g；
(4)取本发明花椒提取物，加入水900mL，加入丙二醇100mL、香精适量，混匀，滤过，得药液；将上述药液在无菌室内定量分装于气雾剂容器中，将阀件固定于容器上，然后 在780Pa压力下，向瓶内压入经微孔滤膜滤过的抛射剂F12 2g，即得溶液型气雾剂。共制成100瓶。