本发明属于药物制剂领域，具体地说，涉及一种黄精多糖口服液及其制备方法。
背景技术：
：黄精(PolygonatiRhizoma)为百合科植物滇(PolygonatumsibiricumRed.kingianumColl.etHemsl.)、(PolygonatumsibiricumRed.sibiricumRed.)或多花(PolygonatumsibiricumRed.cyrtonemaHua)的干燥根茎。按形状不同，习称“大”、“鸡头”、“姜形”。是我国传统中药，属于药食同源性中草药，味甘，性平，具有补气养阴、健脾、润肺、益肾的功效。现代研究表明，含有多糖、皂苷、蒽醌类化合物、生物碱、强心苷、维生素等活性成分。能够延缓衰老、增强免疫功能、降血糖、降血脂、抗炎、抗菌、抗病毒及抗肿瘤等。目前关于黄精多糖口服液在鹌鹑上的饲喂效果报道很少，有关饮水中对鹌鹑免疫性能的影响未见报道。技术实现要素：有鉴于此，本发明针对上述的问题，提供了一种黄精多糖口服液及其制备方法。为了解决上述技术问题，本发明公开了一种黄精多糖口服液，按照质量百分比由以下组份构成：黄精多糖0.5％-4％，防腐剂0.1％-0.3％，稳定剂0.1％-0.25％，该黄精多糖口服液的pH值为5.5～6.5。进一步地，防腐剂为山梨酸钾，所述稳定剂为聚乙烯吡咯烷酮。进一步地，黄精多糖通过以下方法制备得到：1.1)药材预处理：将黄精根茎清洗干净后，放到锅里蒸煮10-30min，冷却至室温后，将黄精切成2～3mm的薄片，取出后置于55-65℃的烘箱干燥；1.2)浸泡与煎煮：取干燥后的黄精，置于圆底烧瓶中，按照料液比为1:20-1:45加入蒸馏水，浸泡时间为20-90min，100℃煎煮90-189min，提取2-4次，过滤并收集提取液；1.3)将提取液进行浓缩，加入95％乙醇，至溶液中含醇量达到80％，静置过夜，抽滤，取沉淀，干燥即得黄精粗多糖。本发明还公开了一种黄精多糖口服液的制备方法，包括以下步骤：1)制备黄精多糖；2)称量：按照质量百分比称量以下组分：黄精多糖0.5％-4％，防腐剂0.1％-0.3％，稳定剂0.1％-0.25％，余量为水；3)混合、过滤与灭菌，制备得到黄精多糖口服液。进一步地，步骤1)中的制备黄精多糖具体为：1.1)药材预处理：将黄精根茎清洗干净后，放到锅里蒸煮10-30min，冷却至室温后，将黄精切成2～3mm的薄片，取出后置于55-65℃的烘箱干燥；1.2)浸泡与煎煮：取干燥后的黄精，置于圆底烧瓶中，按照料液比为1:20-1:45加入蒸馏水，浸泡时间为20-90min，100℃煎煮90-189min，提取2-4次，过滤并收集提取液；1.3)将提取液进行浓缩，加入95％乙醇，至溶液中含醇量达到80％，静置过夜，抽滤，取沉淀，干燥即得黄精粗多糖。进一步地，步骤2)中的防腐剂为山梨酸钾，稳定剂为聚乙烯吡咯烷酮。进一步地，步骤3)中的混合、过滤与灭菌具体为：将称量好的各个组分进行混合，调节pH值为5.5～6.5，将所得制剂进行过滤，口服液灌装于棕色瓶中，封口，115℃灭菌15min；制备得到黄精多糖口服液。与现有技术相比，本发明可以获得包括以下技术效果：1)在室温条件下，保存6个月的黄精多糖口服液的性状及pH均未出现显著性变化，澄明度良好，且未出现浑浊现在，含量也较稳定；微生物限度检查也符合药典标准。综上可知，黄精多糖口服液的稳定性良好。2)饮水中添加黄精多糖对鹌鹑的生长性能和免疫功能有促进作用。当然，实施本发明的任一产品并不一定需要同时达到以上所述的所有技术效果。具体实施方式以下将配合实施例来详细说明本发明的实施方式，藉此对本发明如何应用技术手段来解决技术问题并达成技术功效的实现过程能充分理解并据以实施。本发明提供一种黄精多糖口服液，按照质量百分比由以下组份构成：黄精多糖0.5％-4％，防腐剂0.1％-0.3％，稳定剂0.1％-0.25％，余量为水；该黄精多糖口服液的pH值为5.5～6.5；其中，防腐剂为山梨酸钾，稳定剂为聚乙烯吡咯烷酮。本发明提供一种黄精多糖口服液的制备方法，包括以下步骤：1)制备黄精多糖：1.1)药材预处理：将黄精根茎清洗干净后，放到锅里蒸煮10-30min，冷却至室温后，将黄精切成2～3mm的薄片，取出后置于55-65℃的烘箱干燥；1.2)浸泡与煎煮：取干燥后的黄精，置于圆底烧瓶中，按照料液比为1:20-1:45加入蒸馏水，浸泡时间为20-90min，100℃煎煮90-189min，提取2-4次，过滤并收集提取液；1.3)将提取液进行浓缩，加入95％乙醇，至溶液中含醇量达到80％，静置过夜，抽滤，取沉淀，干燥即得黄精粗多糖；2)称量：按照质量百分比称量以下组分：黄精多糖0.5％-4％，防腐剂0.1％-0.3％，稳定剂0.1％-0.25％，余量为水；3)将称量好的各个组分进行混合，调节pH值为5.5～6.5，将所得制剂进行过滤，口服液灌装于棕色瓶中，封口，115℃灭菌15min；制备得到黄精多糖口服液。制备得到的黄精多糖口服液呈淡黄色，无异味，防腐效果好，便于长期贮存。实施例1一种黄精多糖口服液的制备方法，包括以下步骤：将黄精根茎清洗干净后，放到锅里蒸煮20min，冷却至室温后，将黄精切成2～3mm的薄片，取出后置于60℃的烘箱干燥；取干燥后的黄精，置于圆底烧瓶中，按照料液比为1:40加入蒸馏水，浸泡时间为30min，100℃煎煮189min，提取3次，过滤并收集提取液；将提取液进行浓缩，加入95％乙醇，至溶液中含醇量达到80％，静置过夜，抽滤，取沉淀，干燥即得黄精粗多糖；按照质量百分比称量以下组分：黄精多糖02％，防腐剂0.2％，稳定剂0.2％，余量为水；其中，防腐剂为山梨酸钾，稳定剂为聚乙烯吡咯烷酮，将称量好的各个组分进行混合，调节pH值为6.0，将所得制剂进行过滤，口服液灌装于棕色瓶中，封口，115℃灭菌15min；制备得到黄精多糖口服液。实施例2一种黄精多糖口服液的制备方法，包括以下步骤：将黄精根茎清洗干净后，放到锅里蒸煮10min，冷却至室温后，将黄精切成2～3mm的薄片，取出后置于65℃的烘箱干燥；取干燥后的黄精，置于圆底烧瓶中，按照料液比为1:20加入蒸馏水，浸泡时间为90min，100℃煎煮90min，提取4次，过滤并收集提取液；将提取液进行浓缩，加入95％乙醇，至溶液中含醇量达到80％，静置过夜，抽滤，取沉淀，干燥即得黄精粗多糖；按照质量百分比称量以下组分：黄精多糖0.5％，防腐剂0.3％，稳定剂0.1％，余量为水；其中，防腐剂为山梨酸钾，稳定剂为聚乙烯吡咯烷酮，将称量好的各个组分进行混合，调节pH值为6.5，将所得制剂进行过滤，口服液灌装于棕色瓶中，封口，115℃灭菌15min；制备得到黄精多糖口服液。实施例3一种黄精多糖口服液的制备方法，包括以下步骤：将黄精根茎清洗干净后，放到锅里蒸煮30min，冷却至室温后，将黄精切成2～3mm的薄片，取出后置于55℃的烘箱干燥；取干燥后的黄精，置于圆底烧瓶中，按照料液比为1:35加入蒸馏水，浸泡时间为20min，100℃煎煮120min，提取2次，过滤并收集提取液；将提取液进行浓缩，加入95％乙醇，至溶液中含醇量达到80％，静置过夜，抽滤，取沉淀，干燥即得黄精粗多糖；按照质量百分比称量以下组分：黄精多糖4％，防腐剂0.1％，稳定剂0.25％，余量为水；其中，防腐剂为山梨酸钾，稳定剂为聚乙烯吡咯烷酮，将称量好的各个组分进行混合，调节pH值为5.5，将所得制剂进行过滤，口服液灌装于棕色瓶中，封口，115℃灭菌15min；制备得到黄精多糖口服液。下面结合具体的实验数据来说明本发明的技术效果：1材料与方法1.1试验材料黄精多糖口服液(制备工艺如上，黄精多糖的浓度不得小于15.45mg/mL)；黄芪多糖口服液(由北京生泰尔生物科技有限公司提供，批号20160231，黄芪多糖的浓度不得小于16mg/mL)。鸡新城疫LaSota株弱毒苗、鸡新城疫抗原，购于大华农动物保健公司(20150801)；未经免疫新城疫鹌鹑的红细胞(10％)。1.2黄精多糖质量标准的研究1.2.1性状该制剂为澄明的淡黄色液体，无异味。1.2.2口服液pH值取三组黄精多糖口服液，用pH计测定口服液的pH值，均在规定范围5.5～6.5之间。1.2.3微生物限度取三组黄精多糖口服液，依据中国药典检测微生物限度方法(国家药典委员会.中华人民共和国药典(四部)[M].北京:中国医药科技出版社,2015,通则:140-149.)。1.2.4黄精多糖口服液成品含量的测定随机取6组黄精多糖口服液，测定方法如下：苯酚-硫酸法测定黄精总糖含量：绘制标准曲线：依次精密吸取1.0mg/mL葡萄糖标准液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0毫升、6.0毫升、7.0定容至100mL，各取配制的标准溶液2.0mL，依次精确加入5％的苯酚溶液1.0mL，摇匀后迅速加入浓硫酸5.0mL，摇匀后在50℃恒温水浴锅中分别放置20min，再置冰水浴中冷却10min，然后在490nm处测定吸收值，每个试验重复三次。最后以浓度(x)为横坐标，吸光度值(Y)为纵坐标作图，得到回归方程：Y＝0.0148x+0.0444(R2＝0.9998)，表明葡萄糖浓度在10.09～70.63μg/mL时线性关系良好。按照一定倍数稀释待测样品，准确量取2.0mL待测溶液，按照前述测定方法进行测定。DNS法测定还原糖的含量：精密移取1mg/mL的葡萄糖标准溶液0.3、0.5、0.8、1.0、1.2、1.5、1.8、2.0mL于具塞试管中，分别补蒸馏水至2.0mL。混匀后加入DNS(薛丹,黄豆豆,姚风艳,等.中药木瓜中总糖及还原糖的含量测定[J].中国医药导报,2015,12:121-124+128.)试剂2.0mL，沸水浴加热5min后，冷水冷却至室温，定容至25mL。以蒸馏水为空白对照，于540nm处测定吸光度，每组测定三次，取平均值。以葡萄糖浓度(c)为横坐标，吸光度(A)为纵坐标作图，得到回归方程：A＝1.1442x-0.0212(R2＝0.9994)，表明葡萄糖浓度在0.16～1.05mg/mL时线性关系良好。将样品用蒸馏水溶解稀释至不同浓度，分别取待测样品2.0mL，按照前述测定方法进行测定。1.3黄精多糖口服液稳定性考察1.3.1光照射影响试验将黄精多糖口服液分为3组，每组10支，同时将三组口服液放置光照为200w、100w、避光条件下20d，在0d、10d、20d同一时间随机每组取2支口服液进行检测(秦萌.香菇多糖口服液的制备[D].吉林农业大学,2015.)。1.3.2温度影响试验先将黄精多糖口服液分为3组，每组10支，同时将三组口服液放置温度为30℃、50℃、70℃的恒温培养箱中，在0d、10d、20d同一时间随机每组取2支口服液进行检测(郭宪清,张丽香,李艳秋.肝康口服液的稳定性研究[J].中国实验方剂学杂志,2009,01:19-20.)。1.3.3长期试验先将黄精多糖口服液分为3组，每组10支，同时将三组口服液放置在室温(国家药典委员会.中华人民共和国药典(四部)[M].北京:中国医药科技出版社,2015,通则:149-150.)。同一时间随机每组取2支口服液进行检测，记录外观形状、澄清度、pH值、微生物限度和黄精多糖的变化情况。1.4试验设计及日粮组成试验采用单因子完全随机设计，设3个处理组，处理组1为对照，采用自来水饮水，处理组2采用黄芪多糖口服液饮水，按照2％浓度(即1升水含黄芪多糖2g)，处理组3采用黄精多糖口服液饮水，按照2％浓度(即1升水含黄精多糖2g)。所有试验日粮参照NRC(1994)推荐的日本鹌鹑(Japanesequail)饲养标准配制，试验基础日粮组成玉米-豆粕型基础日粮，由眉山金字塔饲料公司提供。1.5试验动物饲养及管理选择1日龄健康雌性朝鲜龙城鹌鹑270只，按体重随机分为3个处理组，每组设3个重复，每重复30只。饲养分育雏期(0～21日龄)、育成期(22～42日龄)。育雏期采用育雏笼器饲养，前3d室温39～37℃，随日龄增加而逐渐降低至24℃。22日龄时转育成笼，采用3层阶梯式笼养，24h光照，试验鹌鹑自由采食和饮水，饲喂时遵循少喂勤添的原则。试验鹌鹑3日龄首免新城疫Ⅳ系疫苗(LaSota株)；12日龄新城疫Ⅳ系疫苗二次免疫。1.6测定指标1.6.1生产性能试验前所有鹌鹑以重复为单位称重，并计算初始平均体重。试验期间观察记录各组试验鹌鹑的生理和精神状况。每周末禁食一夜后以重复为单位称重，并计算0～21、22～42日龄各阶段的采食量(FI)、日增重(BWG)和饲料增重比(F/G)。1.6.2免疫器官指数于饲养第21、42天每重复随机选取4只体重相近的雌性鹌鹑，颈静脉放血致死，迅速摘取胸腺、脾脏和法氏囊，称取胸腺、法氏囊和脾脏重量，然后与体重作比较(g/kg)，所得比值即为胸腺指数、法氏囊指数和脾脏指数。1.6.3新城疫抗体效价于饲养第35、42天早饲前，每重复随机选取2只体重相近的雌性鹌鹑颈静脉采血1mL，室温静置30min待析出血清后，3000r/min离心5min后收集血清，用β-微量法检测血清新城疫(NewcastleDisease，ND)抗体效价。1.7数据处理试验数据采用SPSS18.0软件中的One-wayANOVA过程进行单因素方差分析，均值的多重比较采用Duncan’s法进行，以P<0.05作为差异显著性判断标准，结果以平均值±标准误表示。2结果与分析2.1黄精多糖质量标准的确定：2.1.1微生物限度表1微生物限度检查由表1可知，经检查，所制得的黄精多糖口服液制剂微生物限度符合药典通则1107——非无菌药品微生物限度标准(国家药典委员会.中华人民共和国药典(四部)[M].北京:中国医药科技出版社,2015,通则:149-150.)。2.1.2黄精多糖口服液成品含量的测定结果表2黄精多糖含量测定结果由表2可知，通过使用苯酚—硫酸法结合DNS法测定黄精多糖口服液中多糖含量，可知黄精多糖口服液的多糖平均含量为15.45mg/mL，RSD＝0.88％，说明黄精多糖口服液中多糖含量较均匀。将本口服液的多糖含量定为：黄精多糖的浓度不得小于15.45mg/mL。2.2黄精多糖口服液稳定性考察结果2.2.1光照射影响试验结果表1光照射对黄精多糖口服液稳定性的影响由表3可知，在不同光照条件下口服液的颜色、澄明度及pH值均未出现明显改变，微生物限度仍符合要求，但第一组和第二组多糖含量有所下降，为了保证制剂的稳定性，口服液贮存应用棕色瓶灌装且避光。2.2.2温度影响试验结果表4温度对黄精多糖口服液稳定性的影响由表4可知，在不同温度下，黄精多糖口服液的颜色及澄明度均未出现明显变化，pH值和微生物限度符合要求，多糖含量变化不大，因此温度不是影响黄精多糖口服液稳定性的关键因素，可以不用考虑。2.2.3长期试验结果表5室温条件下保存对黄精多糖口服液稳定性的影响由表5可知，在室温条件下贮存的黄精多糖口服液，在不同时间点检测口服液的外观和澄明度，均未出现明显变化，pH值在规定范围内，微生物限度也符合要求，多糖含量未受到显著影响。2.3饮水中添加黄精多糖口服液对鹌鹑生产性能的影响由表6可以看出，各处理组试验鹌鹑初生重无显著差异(P>0.05)，0～21日龄阶段，加黄芪多糖、黄精多糖口服液后平均日增重、采食量比对照组提高；料重比比对照组降低，但差异都不显著(P>0.05)。42日龄时，黄芪多糖、黄精多糖口服液组体重、日增重显著高于对照组(P<0.05)；而料重比都显著低于对照组(P<0.05)。在前期1～21日龄加黄芪多糖、黄精多糖口服液后鹌鹑的生长性能有一定的改善，效果不显著；在饲养后期(22～42日龄)阶段，黄芪多糖、黄精多糖口服液组体重、日增重显著高于对照组，说明两种药物在饲养后期逐渐显著，对鹌鹑体重、日增重和采食量有所改善，作用效果显著；同时，黄精多糖口服液与黄泉多糖口服液差异不显著(P>0.05)。表6各组对鹌鹑生长性能的影响注：同行比较，不同小字母表示差异显著(P<0.05)，不标或相同小写字母表示差异不显著(P<0.05)，下同。2.4饮水添加黄精多糖口服液对鹌鹑免疫器官指数的影响试验结果见表7，21日龄时黄芪多糖、黄精多糖口服液组鹌鹑的胸腺指数比对照组有所提高差异不显著(P>0.05)，脾脏、法氏囊指数显著高于对照组(P<0.05)。42日龄时黄芪多糖、黄精多糖口服液组鹌鹑的胸腺指数与对照组差异不显著(P>0.05)，脾脏、法氏囊指数显著高于对照组(P<0.05)。但是，黄精多糖口服液与黄泉多糖口服液差异不显著(P>0.05)。表7添加黄精多糖口服液对鹌鹑免疫器官指数的影响日龄项目对照组黄芪多糖组黄精多糖组0-21d胸腺指数2.23±0.122.49±0.322.32±0.25脾脏指数0.81±0.12b1.26±0.24a1.15±0.25ab法氏囊指数1.13±0.03b1.18±0.13ab1.22±0.04a22-42d胸腺指数0.91±0.561.12±0.261.17±0.25脾脏指数0.32±0.06b0.46±0.23a0.43±0.03a法氏囊指数0.85±2.12b1.11±3.25a1.16±2.68a2.5饮水添加黄精多糖口服液中对鹌鹑ND抗体效价的影响由表8可见，对二次免疫后鹌鹑新城疫血凝抑制抗体效价测定结果表明，饮水添加黄芪多糖、黄精多糖口服液在21、35、42d都显著提高抗体效价(P<0.05)，添加黄精多糖口服液后，抗体效价明显改善。黄精多糖口服液与黄泉多糖口服液差异不显著(P>0.05)。表8饮水中添加黄精多糖口服液对ND抗体效价的影响nlog2日龄对照组黄芪多糖组黄精多糖组21d7.83±0.368.83±0.32b7.69±0.32b35d8.23±0.1210.19±0.32a9.32±0.21a42d8.31±0.1210.26±0.24a9.25±0.22a3讨论植物多糖是从天然植物中分离出的高效活性物质,它不仅是植物体的功能和结构物质,而且还参与了生命现象中的各种活动,在提高机体免疫力、抗氧化等方面起到了十分重要的作用。黄芪多糖作为饲料添加剂对肉仔鸡生长性能影响的报道差异较大。有报道认为，在一定的给药剂量范围和给药频率之内,黄芪多糖有利于增重,少于或多于这个给药剂量及频率都可会出现负面作用。也有研究中指出,添加黄芪多糖粗提物对肉仔鸡生长具有明显的促进作用,能显著提高肉仔鸡的体重和日增重。用含糖量96.25％的黄精多糖，分高、中、低3种浓度哺养果蝇,连续给药60d，实验表明，均明显延长雄、雌两性果蝇的平均寿命和最高寿命。实验结果经统计学处理均有显著差异。本试验中黄芪多糖和黄精多糖口服液对鹌鹑生长性能都有促进作用，但两者之间都无显著性差异。动物的脏器指数是其重要的生物学特性指标之一，脏器指数的相对大小，从一定程度上可说明其功能的强弱。肝脏和胰腺是体内重要的代谢器官和消化器官，胸腺、法氏囊和脾脏是重要的免疫器官。一般认为,动物免疫器官的增加是由其自身细胞生长。发育和分裂增殖所致，重量增加表明机体的免疫机能提高，重量减少表明机体免疫状况变差。黄精粗多糖(PSCP)400mg·kg-1·d-1灌胃小鼠，连续给药7d，对照组为等量生理盐水，结果表明：黄精粗多糖能明显促进正常小鼠胸腺和脾脏的重量增加，可明显增强小鼠静脉注胶体碳粒的廓清速率，对小鼠网状内皮系统吞噬功能，有明显的激活和增强作用。黄精多糖可显著提高小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力，说明黄精多糖具有促进小鼠非特异性免疫的作用；还可促进小鼠溶血素的生成，说明其可增强小鼠体液免疫功能。本试验中，添加黄芪多糖和黄精多糖口服液都能显著提高鹌鹑脾脏、法氏囊器官指数，同时能提高ND的滴度，说明黄精多糖能促进鹌鹑免疫器官的发育和提高体液免疫，同时与黄芪多糖效果相当。4结论4.1稳定性试验小结药物制剂的基本要求是安全、有效、稳定。稳定是病人用药安全、疗效可靠的基本保障，可以保证药物制剂的质量恒定，同时保证包装后的药品在其有效期内稳定有效。本试验对三组黄精多糖口服液进行稳定性试验，其中包括影响因素试验和长期试验，以考察口服液的稳定性。其中，影响因素试验中主要考察了光照及温度对黄精多糖口服液的影响，检测指标包括外观、澄明度、pH值及多糖的含量，试验结果表明光照对黄精多糖含量有影响，故应采用棕色瓶制剂瓶灌装，避光保存，以保证制剂的稳定性。而温度对黄精多糖口服液的稳定性几乎没什么影响，故可以不用考虑温度因素。长期试验的研究结果表明，在室温条件下，保存6个月的黄精多糖口服液的性状及pH均未出现显著性变化，澄明度良好，且未出现浑浊现在，含量也较稳定；微生物限度检查也符合药典标准。综上可知，黄精多糖口服液的稳定性良好。4.2饮水中添加黄精多糖对鹌鹑的生长性能和免疫功能有促进作用。上述说明示出并描述了发明的若干优选实施例，但如前所述，应当理解发明并非局限于本文所披露的形式，不应看作是对其他实施例的排除，而可用于各种其他组合、修改和环境，并能够在本文所述发明构想范围内，通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离发明的精神和范围，则都应在发明所附权利要求的保护范围内。当前第1页1 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