本发明涉及银翘汤方中药提取物的制备方法及其应用，属于中医药
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：流行性感冒病毒，简称流感病毒，是一种造成人类及动物患流行性感冒的rna病毒，在分类学上，流感病毒属于正黏液病毒科，它会造成急性上呼吸道感染，并借由空气迅速的传播，在世界各地常会有周期性的大流行。流行性感冒病毒在免疫力较弱的老人或小孩及一些免疫失调的病人会引起较严重的症状，如肺炎或是心肺衰竭等。中医药治疗流感具备显著优势，从传统方剂的现代药理广泛筛选中，银翘汤具备显著的抗流感效果。银翘汤来源于《温病条辨》(清代著名温病四大名家”之一的吴鞠通所著)卷二。主要功效用于阳明温病，下后无汗脉浮者，其中银翘汤为透表清热之轻剂。因下之后，积秽去，腑气通，余邪还表，但以气阴俱伤，未得外透，证见无汗脉浮，故仿银翘散意，仍以银花、连翘解毒而轻宣表气；配伍竹叶清上焦之热，生甘草益气清火，增入麦冬、细生地滋阴清热，使还表之邪，得汗而解。主要组分为银花5钱，连翘3钱，竹叶2钱，生甘草1钱，麦冬4钱，细生地4钱；主要功用为滋阴透表。主治阳明温病，下后无汗脉浮者。银翘汤和银翘散是不同的方剂，其中银翘散也为为《温病条辨》中辛凉解表剂，是临床上常用经典方剂。出自于《温病条辨·上焦篇》第4条：“太阴风温、温热、温疫、冬温初起……但热不恶寒而渴者，辛凉平剂银翘散主之”。方由银花、连翘、桔梗、薄荷、竹叶、荆芥穗、豆豉、牛蒡子、芦根、生甘草10味药组成。适用于温邪客表，肺卫失宣之温病初起者。以发热、微恶风寒、口渴、舌边尖红苔薄白、脉浮数为辨证要点。故方中用荆芥穗、豆豉、薄荷解表发汗；牛蒡子、桔梗、甘草轻宣肺气；银花、连翘、竹叶清热宣透；芦根生津止渴。方中清热解毒药与发散表邪药相配伍，共奏疏散风热、清热解毒之功。而银翘汤出自《温病条辨·中焦篇》第13条：“下后无汗脉浮者，银翘汤主之”。方由银花、连翘、竹叶、生甘草、麦冬、生地6味药组成，具有滋阴透表之功，主治温病阳明腑实证经下后，邪气还在表，津液受损者。因其邪微津又伤，无需象银翘散那样用荆、豉解表，桔梗、牛蒡子宣肺，而是用银花、连翘、竹叶、甘草即胜任清热宣透之能。因阴津受损，不能增液作汗，故加入生地、麦冬以养阴增液。总之，2种方剂均来源于《温病条辨》，均为解表清热作用，为常用治疗风热感冒用药，区别在于，银翘散为治疗表证轻症，温病初起，其用药主要为疏散清热中药，有10味中药，而该方剂的中成药及临床研究，历来文献较多，受关注度较高。而银翘汤为治疗温病中后期，除了表证外，且阴液津液已伤，用药除疏散清热药外，且加了养阴滋阴用药。方剂有6味中药。银翘汤，同样为名方古方，药用价值很大，主治的“温病阳明腑实证经下后，邪气还在表，津液受损者”在临床上，实际应用广泛，但对于该方剂的文献现代研究较少。本研究专利基于这个原因，有银翘散的功能，且还有养阴滋阴之功，更应该值得研究和关注。传统上，该方剂的制备工艺及服用方法主要是水煎服：且传统的水提工艺参数没有，可见，传统上其工艺粗糙，且服用、携带不方便，服用量大，也不适宜加工成其他剂型。有关银翘汤的现代制备工艺，提取物研究，文献上尚无报道，其新制剂，新药，新产品开发，也是无，其主要活性成分在复方的体现，研究上也是空白，而复方中连翘主要成分为连翘苷、连翘酯苷等为；金银花中主要含绿原酸、木犀草苷等为主的皂苷类成分；甘草主要含甘草黄酮及甘草皂苷类成分；地黄也主要含梓醇、毛蕊花糖苷类成分，本专利工艺对其主要成分进行系统优化和确认，同时进行了制剂学研究。技术实现要素：本发明的目的是克服传统仅水提液的不足，提供银翘汤方抗病毒中药提取物的制备方法及其应用。本发明包括如下技术方案：技术方案1：提供了银翘汤方中药提取物的水提取制备方法，以金银花、连翘、竹叶、生甘草、麦冬、生地黄(细生地)为原料，各原料相对重量比为金银花：连翘：竹叶：生甘草：麦冬：生地黄(细生地)＝5:3:2:1:4:4；制备方法包括如下步骤：将上述各味药材净选，按比例称取原料，加10～15倍水量浸泡20-30min，加热提取3次，第一次提取1h，第二次提取45min，第三次提取30min，每次的提取时间从沸腾后开始计算，合并提取液，浓缩获得的提取液至所述提取液体积为所述原料重量的3～5倍，获得初步浓缩提取液；进一步干燥至相对密度为1.0～1.2g/cm3的银翘汤方中药提取物。技术方案2：提供了银翘汤方中药提取物的醇提取制备方法，以金银花、连翘、竹叶、生甘草、麦冬、生地黄(细生地)为原料，各原料相对重量比为金银花：连翘：竹叶：生甘草：麦冬：生地黄(细生地)＝5:3:2:1:4:4；制备方法包括如下步骤：将上述各味药材净选，按比例称取原料，加10～15倍65％～85％乙醇浸泡20-30min，加热回流提取2次，每次1h，合并提取液，浓缩获得的提取液至所述提取液的体积为所述原料重量的3～5倍，获得初步浓缩提取液；进一步干燥至相对密度为1.0～1.2g/cm3银翘汤方中药提取物。技术方案3：提供了银翘汤方中药提取物的水提醇沉制备方法，以金银花、连翘、竹叶、生甘草、麦冬、生地黄(细生地)为原料，各原料相对重量比为金银花：连翘：竹叶：生甘草：麦冬：生地黄(细生地)＝5:3:2:1:4:4；制备方法包括如下步骤：1)制备浓缩液：将上述各味药材净选，按比例称取原料，加10～15倍水量浸泡20-30min，加热提取3次，第一次提取1h，第二次提取45min，第三次提取30min，每次的提取时间从沸腾后开始计算，合并提取液，浓缩获得的提取液至所述提取液体积为所述原料重量的3～5倍，获得初步浓缩提取液；2)加乙醇沉淀：加适量乙醇到上述制备的初步浓缩提取液中，使溶剂含醇量为65～75％，静置24小时，滤过，滤液回收乙醇，得到精制液，浓缩，干燥即得银翘汤方中药提取物。技术方案4：提供了银翘汤方中药提取物的大孔树脂纯化制备方法，以金银花、连翘、竹叶、生甘草、麦冬、生地黄(细生地)为原料，各原料相对重量比为金银花：连翘：竹叶：生甘草：麦冬：生地黄(细生地)＝5:3:2:1:4:4；制备方法包括如下步骤：1)制备浓缩液：将上述各味药材净选，按比例称取原料，加10～15倍水量浸泡20-30min，加热提取3次，第一次提取1h，第二次提取45min，第三次提取30min，每次的提取时间从沸腾后开始计算，合并提取液，浓缩获得的提取液至所述提取液体积为所述原料重量的3～5倍，获得初步浓缩提取液；2)大孔树脂纯化：分别加3～5倍体积热水到上步获得的初步浓缩提取液中，取上清液；将上清液过大孔树脂柱吸附，弃流出液；然后用1～5bv的水以0.5～2.5bv/小时的流速洗涤所述吸附柱，弃水洗液；之后采用50～70％的乙醇，洗脱体积3～5bv，以0.5～2.5bv/小时的流速洗脱吸附柱，收集该乙醇洗脱液，浓缩、干燥所述乙醇洗脱液，获得银翘汤方中药提取物。技术方案5：提供了银翘汤方中药提取物的大孔树脂纯化制备方法，以金银花、连翘、竹叶、生甘草、麦冬、生地黄为原料制成，生地黄又名细生地，各原料相对重量比为金银花：连翘：竹叶：生甘草：麦冬：生地黄＝5:3:2:1:4:4；制备方法包括如下步骤：1)制备浓缩液：取上各味中药饮片，按比例称取原料，加10～15倍65％～85％乙醇浸泡20-30min，加热回流提取2次，每次1h，合并提取液，浓缩获得的提取液至所述提取液的体积为所述原料重量的3～5倍，获得初步浓缩提取液；2)大孔树脂纯化：分别加3～5倍体积热水到上步获得的初步浓缩提取液中，取上清液；将上清液过大孔树脂柱吸附，弃流出液；上样后先用5bv的水洗涤所述吸附柱，弃水洗液；然后用1～5bv的水以0.5～2.5bv/小时的流速洗涤所述吸附柱，弃水洗液；之后采用50～70％的乙醇，洗脱体积3～5bv，以0.5～2.5bv/小时的流速洗脱吸附柱，收集该乙醇洗脱液，浓缩、干燥所述乙醇洗脱液，获得银翘汤方中药提取物。技术方案6：本发明的上述方法制备而得的银翘汤方中药提取物中，其含有量以重量计，连翘苷不低于0.035％、连翘酯苷不低于0.042％、绿原酸不低于0.31％、木犀草苷不低于0.09％、甘草苷不低于0.015％、甘草酸不低于0.036％、梓醇不低于0.034％、毛蕊花糖苷不低于0.002％、麦冬总皂苷不低于0.019％。上述成分的含量控制，采用高效液相色谱法(hplc)测定由制备得到的提取物中连翘苷、连翘酯苷、绿原酸、木犀草苷、甘草苷、甘草酸、梓醇、毛蕊花糖苷的含量，以不低于为对照品，测定得到。技术方案7：提供了含有上述方法制备而得的银翘汤方中药提取物的口服固体制剂，其中口服固体制剂包括：片剂、硬胶囊、软胶囊、颗粒剂、口服液；颗粒剂、硬胶囊以及片剂辅料选自淀粉、糖粉、乳糖、糊精、甜菊糖、预胶化淀粉、微晶纤维素、碳酸氢钙、甘露醇、羟丙基甲基纤维素、硬脂酸镁、微粉硅胶、滑石粉、聚乙二醇类等常用辅料；软胶囊剂辅料选自聚乙二醇(聚乙二醇2000-6000)、蜂蜡、液体石蜡、植物油、甘油、明胶等。口服液辅料选用β-环糊精、山梨醇等，其中片剂具体指普通压制片、包衣片、糖衣片、薄膜衣片。技术方案8：提供了上述方法制备而得的银翘汤方中药提取物在制备抗流感病毒、抗炎药物或保健品中的应用。说明：本发明中，生地黄，又名细生地(《温病条辨》记载为细生地)。本发明中，所用的金银花、连翘、竹叶、生甘草、麦冬、生地黄原料均为它们的中药饮片。本发明中，所涉及的乙醇的百分浓度单位％均为体积百分浓度％v/v。本发明具备以下优点：1、本发明的中药提取物以金银花、连翘、竹叶、生甘草、麦冬、生地黄(细生地)为原料制备。其中金银花为忍冬科忍冬属植物忍冬(lonicerajaponica)及同属植物干燥花蕾或带初开的花、连翘为木樨科连翘属植物连翘(forsythiasuspensa)的干燥果实、竹叶为禾本科植物淡竹叶(lophatherumgracilebrongn.)的干燥茎叶、甘草为豆科植物甘草(glycyrrhizauralensisfisch.)、胀果甘草(glycyrrhizainflatabat.)或光果甘草(glycyrrhizaglabral.)的干燥根和根茎、麦冬为百合科植物麦冬(ophiopogonjaponicus(l.f)ker-gawl.)的干燥块根、地黄为玄参科植物地黄(rehmanniaglutinosalibosch.)的新鲜或干燥块根。获得的中药提取物为所含各种药材活性成分协同起效的混合物，它不同于活性单体，其药效也不同于各种药材活性成分药效的简单加和。2、本发明的“银翘汤”方中药提取物均以金银花、连翘、竹叶、生甘草、麦冬、生地黄(细生地)为原料，经查验相关文献可知“银翘汤”处方来源于清朝吴鞠通编著的《温病条辨》，其具体配方及比例如下:根据邱隆写的“中国历代度量衡单位量值表及说明”一文中可知，在明朝1两等于37.3g，相当于1钱等于3.73g，按此计量换算可得每日处方用量为金银花五钱[18.7g]，连翘三钱[11.2g]，竹叶二钱[7.5g]，生甘草一钱[3.7g]，麦冬四钱[14.9g]，生地黄(细生地)4钱[14.9g]，各原料相对重量比为金银花：连翘：竹叶：生甘草：麦冬：生地黄(细生地)＝5:3:2:1:4:4。3、本发明采用了水提、醇提、水提醇沉、大孔树脂纯化等多种方法，从根本上保证“银翘汤”方中药汤剂的优越性，为制备成高质量的不同剂型产品提供保障。本发明提供的提取物的制备工艺能有效地富集主要活性成分如：连翘苷、连翘酯苷、绿原酸、木犀草苷、甘草苷、甘草酸、梓醇、毛蕊花糖苷等；质量控制采用高效液相分析方法进行含量测定，简单易控。4、本发明提供的大孔树脂纯化制备方法中采用树脂纯化方法，该方法简便、快捷、重现性好；所选用的大孔树脂吸附量大，解吸率大，可反复使用，降低工艺成本；所用的溶剂乙醇，价廉无毒。经大孔树脂纯化的制备方法得到的提取物与原方剂的水煎物相比，体积小、中药内在质量高，产品吸潮性减少、稳定性增加，容易制成外观美观的各种剂型。5、本发明的制备方法所制备的银翘汤方中药提取物具抗炎、抗病毒等功能。而且毒性低，具有很好的用药安全性，这充分提示了本工艺制备的提取物的临床用药的安全性。因此，本发明中所述的“银翘汤”方中药提取物适合工业化生产，具有很强的实用性。具体实施方式通过下面的实施例可以更好的理解本发明的本质，但不以任何方式限制本发明。材料来源：金银花为忍冬科忍冬属植物忍冬(lonicerajaponica)及同属植物干燥花蕾或带初开的花、连翘为木樨科连翘属植物连翘(forsythiasuspensa)的干燥果实、竹叶为禾本科植物淡竹叶(lophatherumgracilebrongn.)的干燥茎叶、甘草为豆科植物甘草(glycyrrhizauralensisfisch.)、胀果甘草(glycyrrhizainflatabat.)或光果甘草(glycyrrhizaglabral.)的干燥根和根茎、麦冬为百合科植物麦冬(ophiopogonjaponicus(l.f)ker-gawl.)的干燥块根、地黄为玄参科植物地黄(rehmanniaglutinosalibosch.)的新鲜或干燥块根。其中材料均通过商业途径购买。实施例1水提取方法制备“银翘汤”方中药提取物方法1：取金银花、连翘、竹叶、生甘草、麦冬、生地黄(细生地)为原料，以水为溶剂提取所述原料，各原料重量比为金银花：连翘：竹叶：生甘草：麦冬：生地黄(细生地)＝5:3:2:1:4:4；将上述各味药材净选，按比例称取金银花50公斤、连翘30公斤、竹叶20公斤、生甘草10公斤、麦冬40公斤、生地黄40公斤，1.9吨水量浸泡20min，加热提取3次(第一次1h，第二次45min，第三次30min，每次的提取时间从沸腾后开始计算)，合并提取液，浓缩获得的提取液至所述提取液体积为所述原料重量的3倍，获得初步浓缩提取液；进一步干燥至相对密度为1.0g/cm3的“银翘汤”方中药提取物(批号为16010106)。方法2：取金银花、连翘、竹叶、生甘草、麦冬、生地黄(细生地)为原料，以水为溶剂提取所述原料，各原料重量比为金银花：连翘：竹叶：生甘草：麦冬：生地黄(细生地)＝5:3:2:1:4:4；将上述各味药材净选，按比例称取金银花50公斤、连翘30公斤、竹叶20公斤、生甘草10公斤、麦冬40公斤、生地黄40公斤，2.85吨水量浸泡30min，加热提取3次(第一次1h，第二次45min，第三次30min，每次的提取时间从沸腾后开始计算)，合并提取液，浓缩获得的提取液至所述提取液体积为所述原料重量的5倍，获得初步浓缩提取液；进一步干燥至相对密度为1.2g/cm3的“银翘汤”方中药提取物(批号为16010208)。方法3：取金银花、连翘、竹叶、生甘草、麦冬、生地黄(细生地)为原料，以水为溶剂提取所述原料，各原料重量比为金银花：连翘：竹叶：生甘草：麦冬：生地黄(细生地)＝5:3:2:1:4:4；将上述各味药材净选，按比例称取金银花50公斤、连翘30公斤、竹叶20公斤、生甘草10公斤、麦冬40公斤、生地黄40公斤，2.47吨水量浸泡25min，加热提取3次(第一次1h，第二次45min，第三次30min，每次的提取时间从沸腾后开始计算)，合并提取液，浓缩获得的提取液至所述提取液体积为所述原料重量的4倍，获得初步浓缩提取液；进一步干燥至相对密度为1.1g/cm3的“银翘汤”方中药提取物(批号为16010309)。实施例2醇提取方法制备“银翘汤”方中药提取物方法1：取金银花、连翘、竹叶、生甘草、麦冬、生地黄(细生地)为原料，以65％乙醇为溶剂提取所述原料，各原料重量比为金银花：连翘：竹叶：生甘草：麦冬：生地黄(细生地)＝5:3:2:1:4:4；将上述各味药材净选，按比例称取金银花50公斤、连翘30公斤、竹叶20公斤、生甘草10公斤、麦冬40公斤、生地黄40公斤，1.9吨65％乙醇浸泡20min，加热回流提取2次，每次1h(每次的回流提取时间从沸腾后开始计算)，提取液合并，静置24小时，过滤取上清液，将上清液浓缩到原药材的3倍，获得初步浓缩提取液；进一步干燥至相对密度为1.0g/cm3的“银翘汤”方中药提取物(批号为16020423)。方法2：取金银花、连翘、竹叶、生甘草、麦冬、生地黄(细生地)为原料，以85％乙醇为溶剂提取所述原料，各原料重量比为金银花：连翘：竹叶：生甘草：麦冬：生地黄(细生地)＝5:3:2:1:4:4；将上述各味药材净选，按比例称取金银花50公斤、连翘30公斤、竹叶20公斤、生甘草10公斤、麦冬40公斤、生地黄40公斤，2.85吨85％乙醇浸泡30min，加热回流提取2次，每次1h(每次的回流提取时间从沸腾后开始计算)，提取液合并，静置24小时，过滤取上清液，将上清液浓缩到原药材的5倍，获得初步浓缩提取液；进一步干燥至相对密度为1.2g/cm3的“银翘汤”中药醇提取物(批号为16020524)。方法3：取金银花、连翘、竹叶、生甘草、麦冬、生地黄(细生地)为原料，以75％乙醇为溶剂提取所述原料，各原料重量比为金银花：连翘：竹叶：生甘草：麦冬：生地黄(细生地)＝5:3:2:1:4:4；将上述各味药材净选，按比例称取金银花50公斤、连翘30公斤、竹叶20公斤、生甘草10公斤、麦冬40公斤、生地黄40公斤，2.47吨75％乙醇浸泡25min，加热回流提取2次，每次1h(每次的回流提取时间从沸腾后开始计算)，提取液合并，静置24小时，过滤取上清液，将上清液浓缩到原药材的4倍，获得初步浓缩提取液；进一步干燥至相对密度为1.1g/cm3的“银翘汤”中药醇提取物(批号为16020625)。实施例3水提醇沉方法制备“银翘汤”方中药提取物方法1：取金银花、连翘、竹叶、生甘草、麦冬、生地黄(细生地)为原料，以水为溶剂提取所述原料，各原料重量比为金银花：连翘：竹叶：生甘草：麦冬：生地黄(细生地)＝5:3:2:1:4:4；将上述各味药材净选，按比例称取金银花50公斤、连翘30公斤、竹叶20公斤、生甘草10公斤、麦冬40公斤、生地黄40公斤，加1.9吨:吨水量浸泡20min，加热提取3次(第一次1h，第二次45min，第三次30min，每次的提取时间从沸腾后开始计算)，合并提取液，浓缩获得的提取液至所述提取液体积为所述原料重量的3倍，获得初步浓缩提取液；边搅拌边缓慢加入适量乙醇，使溶剂含醇量为65％，静置24小时，滤过，滤液回收乙醇，得到精制液，浓缩，干燥获得“银翘汤”方中药提取物(批号为16030518)。方法2：取金银花、连翘、竹叶、生甘草、麦冬、生地黄(细生地)为原料，以水为溶剂提取所述原料，各原料重量比为金银花：连翘：竹叶：生甘草：麦冬：生地黄(细生地)＝5:3:2:1:4:4；将上述各味药材净选，按比例称取金银花50公斤、连翘30公斤、竹叶20公斤、生甘草10公斤、麦冬40公斤、生地黄40公斤，加2.85吨水量浸泡30min，加热提取3次(第一次1h，第二次45min，第三次30min，每次的提取时间从沸腾后开始计算)，合并提取液，浓缩获得的提取液至所述提取液体积为所述原料重量的5倍，获得初步浓缩提取液；边搅拌边缓慢加入适量乙醇，使溶剂含醇量为75％，静置24小时，滤过，滤液回收乙醇，得到精制液，浓缩，干燥获得”银翘汤”方中药提取物(批号为16030620)。方法3：取金银花、连翘、竹叶、生甘草、麦冬、生地黄(细生地)为原料，以水为溶剂提取所述原料，各原料重量比为金银花：连翘：竹叶：生甘草：麦冬：生地黄(细生地)＝5:3:2:1:4:4；将上述各味药材净选，按比例称取金银花50公斤、连翘30公斤、竹叶20公斤、生甘草10公斤、麦冬40公斤、生地黄40公斤，加2.47吨水量浸泡25min，加热提取3次(第一次1h，第二次45min，第三次30min，每次的提取时间从沸腾后开始计算)，合并提取液，浓缩获得的提取液至所述提取液体积为所述原料重量的4倍，获得初步浓缩提取液；边搅拌边缓慢加入适量乙醇，使溶剂含醇量为70％，静置24小时，滤过，滤液回收乙醇，得到精制液，浓缩，干燥获得“银翘汤”方中药提取物(批号为16030722)。实施例4大孔树脂方法一制备“银翘汤”方中药提取物方法1：取金银花、连翘、竹叶、生甘草、麦冬、生地黄(细生地)为原料，以水为溶剂提取所述原料，各原料重量比为金银花：连翘：竹叶：生甘草：麦冬：生地黄(细生地)＝5:3:2:1:4:4；将上述各味药材净选，按比例称取金银花50公斤、连翘30公斤、竹叶20公斤、生甘草10公斤、麦冬40公斤、生地黄40公斤，1.9吨水量浸泡20min，加热提取3次(第一次1h，第二次45min，第三次30min，每次的提取时间从沸腾后开始计算)，合并提取液，浓缩获得的提取液至所述提取液体积为所述原料重量的3倍，获得初步浓缩提取液；将初步浓缩提取液加3倍热水稀释，加入适量中药澄清剂壳聚糖，离心，去沉淀，取上清液，上样于d101大孔树脂柱(在上样前分别用酸，碱，水，醇对树脂柱进行前处理)，上样后先用1bv纯水冲洗，水溶液弃除，改用3bv的50％乙醇洗脱，洗脱液流速为0.5bv/h，收集该乙醇洗脱液。继续减压回收溶剂，收集浸膏，干燥获得“银翘汤”方中药提取物(批号为16040817)。方法2：取金银花、连翘、竹叶、生甘草、麦冬、生地黄(细生地)为原料，以水为溶剂提取所述原料，各原料重量比为金银花：连翘：竹叶：生甘草：麦冬：生地黄(细生地)＝5:3:2:1:4:4；将上述各味药材净选，按比例称取金银花50公斤、连翘30公斤、竹叶20公斤、生甘草10公斤、麦冬40公斤、生地黄40公斤，2.85吨水量浸泡30min，加热提取3次(第一次1h，第二次45min，第三次30min，每次的提取时间从沸腾后开始计算)，合并提取液，浓缩获得的提取液至所述提取液体积为所述原料重量的5倍，获得初步浓缩提取液；将初步浓缩提取液加5倍热水稀释，加入适量中药澄清剂壳聚糖，离心，去沉淀，取上清液，上样于d101大孔树脂柱(在上样前分别用酸，碱，水，醇对树脂柱进行前处理)，上样后先用5bv纯水冲洗，水溶液弃除，改用5bv的70％乙醇洗脱，洗脱液流速为2.5bv/h，收集该乙醇洗脱液。继续减压回收溶剂，收集浸膏，干燥获得“银翘汤”方中药提取物(批号为16040927)。方法3：取金银花、连翘、竹叶、生甘草、麦冬、生地黄(细生地)为原料，以水为溶剂提取所述原料，各原料重量比为金银花：连翘：竹叶：生甘草：麦冬：生地黄(细生地)＝5:3:2:1:4:4；将上述各味药材净选，按比例称取金银花50公斤、连翘30公斤、竹叶20公斤、生甘草10公斤、麦冬40公斤、生地黄40公斤，2.47吨水量浸泡25min，加热提取3次(第一次1h，第二次45min，第三次30min，每次的提取时间从沸腾后开始计算)，合并提取液，浓缩获得的提取液至所述提取液体积为所述原料重量的4倍，获得初步浓缩提取液；将初步浓缩提取液加4倍热水稀释，加入适量中药澄清剂壳聚糖，离心，去沉淀，取上清液，上样于d101大孔树脂柱(在上样前分别用酸，碱，水，醇对树脂柱进行前处理)，上样后先用2.5bv纯水冲洗，水溶液弃除，改用4bv的60％乙醇洗脱，洗脱液流速为1.5bv/h，收集该乙醇洗脱液。继续减压回收溶剂，收集浸膏，干燥获得“银翘汤”方中药提取物(批号为16041021)。实施例5大孔树脂方法二制备“银翘汤”方中药提取物方法1：取金银花、连翘、竹叶、生甘草、麦冬、生地黄(细生地)为原料，以65％乙醇为溶剂提取所述原料，各原料重量比为金银花：连翘：竹叶：生甘草：麦冬：生地黄(细生地)＝5:3:2:1:4:4；将上述各味药材净选，按比例称取金银花50公斤、连翘30公斤、竹叶20公斤、生甘草10公斤、麦冬40公斤、生地黄40公斤，1.9吨65％乙醇浸泡20min，加热回流提取2次，每次1h(每次的回流提取时间从沸腾后开始计算)，提取液合并，静置24小时，过滤取上清液，将上清液浓缩到原药材的3倍，获得初步浓缩提取液；将浓缩提取液加3倍热水稀释，加入适量中药澄清剂壳聚糖，离心，去沉淀，取上清液，上样于d101大孔树脂柱(在上样前分别用酸，碱，水，醇对树脂柱进行前处理)，上样后先用5bv水(用1％盐酸调节ph为5)洗涤所述吸附柱，弃水洗液；再用中性1bv水溶液洗脱，水溶液弃除，改用3bv的50％乙醇洗脱，洗脱流速为0.5bv/h，收集该乙醇洗脱液。继续减压回收溶剂，收集浸膏，干燥获得“银翘汤”方中药提取物(批号为16051103)。方法2：取金银花、连翘、竹叶、生甘草、麦冬、生地黄(细生地)为原料，以85％乙醇为溶剂提取所述原料，各原料重量比为金银花：连翘：竹叶：生甘草：麦冬：生地黄(细生地)＝5:3:2:1:4:4；将上述各味药材净选，按比例称取金银花50公斤、连翘30公斤、竹叶20公斤、生甘草10公斤、麦冬40公斤、生地黄40公斤，2.85吨85％乙醇浸泡30min，加热回流提取2次，每次1h(每次的回流提取时间从沸腾后开始计算)，提取液合并，静置24小时，过滤取上清液，将上清液浓缩到原药材的5倍，获得初步浓缩提取液；将浓缩提取液加5倍热水稀释，加入适量中药澄清剂壳聚糖，离心，去沉淀，取上清液，上样于d101大孔树脂柱(在上样前分别用酸，碱，水，醇对树脂柱进行前处理)，上样后先用5bv水(用1％盐酸调节ph为6)洗涤所述吸附柱，弃水洗液；再用中性5bv水溶液洗脱，水溶液弃除，改用洗5bv的70％乙醇洗脱，洗脱流速为2.5bv/h，收集该乙醇洗脱液。继续减压回收溶剂，收集浸膏，干燥获得“银翘汤”方中药提取物(批号为16051205)。方法3：取金银花、连翘、竹叶、生甘草、麦冬、生地黄(细生地)为原料，以75％乙醇为溶剂提取所述原料，各原料重量比为金银花：连翘：竹叶：生甘草：麦冬：生地黄(细生地)＝5:3:2:1:4:4；将上述各味药材净选，按比例称取金银花50公斤、连翘30公斤、竹叶20公斤、生甘草10公斤、麦冬40公斤、生地黄40公斤，2.47吨75％乙醇浸泡25min，加热回流提取2次，每次1h(每次的回流提取时间从沸腾后开始计算)，提取液合并，静置24小时，过滤取上清液，将上清液浓缩到原药材的4倍，获得初步浓缩提取液；将浓缩提取液加5倍热水稀释，加入适量中药澄清剂壳聚糖，离心，去沉淀，取上清液，上样于d101大孔树脂柱(在上样前分别用酸，碱，水，醇对树脂柱进行前处理)，上样后先用5bv水(用1％盐酸调节ph为5.5)洗涤所述吸附柱，弃水洗液；再用中性3bv水溶液洗脱，水溶液弃除，改用洗4bv的60％乙醇洗脱，洗脱流速为1.5bv/h，收集该乙醇洗脱液。继续减压回收溶剂，收集浸膏，干燥获得“银翘汤”方中药提取物(批号为16051228)。实施例6“银翘汤”方中药提取物的口服制剂制备方法1)“银翘汤”方中药提取物颗粒剂的制备处方：(银翘汤提取物分别取自于实施例1、实施例2、实施例3、实施例4、实施例5的“银翘汤”方中药提取物)银翘汤提取物：500.0g淀粉：200.0g磷酸氢钙：150.0g糊精：100.0g乳糖：50.0g称取处方量银翘汤提取物，加入处方量的辅料，加60％乙醇制软材，过20目制粒，50～60℃鼓风干燥(水份控制在5％～8％)，过16目筛整粒，即得银翘汤颗粒。2)“银翘汤”方中药提取物包衣片的制备处方：(银翘汤提取物分别取自于实施例1、实施例2、实施例3、实施例4、实施例5的“银翘汤”方中药提取物)银翘汤提取物：500.0g预胶化淀粉：200.0g微晶纤维素：230.0g甜菊糖：25.0g蔗糖：25.0g硬脂酸镁：10.0g微粉硅胶：10.0g包衣剂：诺彩tm胃溶包衣剂(适量)称取处方量的银翘汤提取物，加入处方量的辅料(硬脂酸镁、微粉硅胶外加)，加60％乙醇制软材，过20目制粒，50～60℃鼓风干燥(水份控制在5％～8％)，过16目筛整粒，与外加辅料硬脂酸镁、微粉硅胶混合均匀，压片，包衣，即得银翘汤包衣片。3)“银翘汤”方中药提取物胶囊剂的制备处方：(银翘汤提取物分别取自于实施例1、实施例2、实施例3、实施例4、实施例5的“银翘汤”方中药提取物)银翘汤提取物：500.0g羟丙甲纤维素：40.0g(一半外加一半內加)预胶化淀粉：190.0g微晶纤维素：200.0g乳糖：25.0g糖粉：25.0g硬脂酸镁：10.0g滑石粉：10.0g称取处方量银翘汤提取物，加入处方量的辅料(硬脂酸镁、滑石粉外加)，加60％乙醇制软材，过20目制粒，50～60℃鼓风干燥(水份控制在5％～8％)，过16目筛整粒，与外加辅料硬脂酸镁、微粉硅胶混合均匀，用充填机进行填充，即得银翘汤胶囊。4)“银翘汤”方中药提取物软胶囊剂的制备处方：(银翘汤提取物分别取自于实施例1、实施例2、实施例3、实施例4、实施例5的“银翘汤”方中药提取物)银翘汤提取物：500.0g植物油：140.0g山梨醇：100.0g甘油：50.0g液体石蜡：60.0g明胶：150.0g称取处方量银翘汤提取物与处方量的植物油、山梨醇混合均匀，将明胶与甘油分别盛装于贮液槽中，两液通过同心管状的双层喷头以不同速度喷出，使一定量的胶液将一定量的药液包裹后，滴入另一种不相互溶的冷却液(液体石蜡)中，胶液接触冷却液后因表面张力作用变为球形，并逐渐凝固而成软胶囊。5)“银翘汤”方中药提取物口服液的制备处方：(银翘汤提取物分别取自于实施例1、实施例2、实施例3、实施例4、实施例5的“银翘汤”方中药提取物)银翘汤提取物：500.0gβ-环糊精：140.0g蔗糖：100.0g蒸馏水260.0g称取处方量银翘汤提取物，加入处方量的辅料，加蒸馏水溶解，搅拌均匀，即得银翘汤提取物口服液。实施例7“银翘汤”方提取物的活性成分测定1.色谱条件agilent1260高效液相色谱仪，紫外检测器(dad)，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，c18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)；连翘苷(中国食品药品检定研究院，批号：110773-20101)的检测波长：277nm，流动相：乙腈-水(25：75)；连翘酯苷(中国食品药品检定研究院，批号：110663-20201)的检测波长：330nm，流动相：乙腈-0.4％冰醋酸溶液(15：85)；绿原酸(中国食品药品检定研究院，批号：110763-20201)的检测波长：327nm，流动相：乙腈-0.4％冰醋酸溶液(13：87)；木犀草苷(中国药品生物制品检定所，批号：110709-201206)的检测波长350nm，流动相：乙腈-0.5％冰醋酸溶液(梯度洗脱：10：90(0min)～20：80(15min)-20：80(30min)～30：70(40min))；甘草苷(中国药品生物制品检定所，批号：111670-200503)、甘草酸(中国食品药品检定研究院，批号：111530-200706)的检测波长237nm，流动相：乙腈-0.05％磷酸溶液(梯度洗脱：19：81(0min)-19：81(8min)～50：50(35min)～100：0(36min)～19：81(40min))；梓醇(中国药品生物制品检定所，批号：111857-201l02)的检查波长为：210nm，流动相：乙腈-0.1％磷酸溶液(1：99)；毛蕊花糖苷(中国食品药品检定研究院，批号：111846-201102)的检查波长：334nm，流动相：乙腈-0.1％醋酸溶液(16:84)；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；进样量：10μl。麦冬总皂苷的测定条件：紫外-可见分光光度法，在397nm波长处测定吸光度2.“银翘汤”方中药提取物样品的制备1)本发明提取物按本发明实例1、2、3、4、5所述的方法分别制得上述中药提取物各1个批号。3.标准品溶液的配制取连翘苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含0.2mg的溶液，即得；取连翘酯苷a对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含0.1mg的溶液，即得(临用配制)；取绿原酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加50％甲醇制成每lml含40μg的溶液，即得(10℃以下保存)；取木犀草苷对照品适量，精密称定，加70％乙醇制成每lml含40μg的溶液，即得；取甘草苷对照品、甘草酸铵对照品适量，精密称定，加70％乙酵分别制成每lml含甘草苷20μg、甘草酸铵0.2mg的溶液，即得(甘草酸重量＝＝甘草酸铵重量/1.0207)；取梓醇对照品适量，精密称定，加流动相制成每lml含10μg的溶液，即得；取毛蕊花糖苷对照品适量，精密称定，加流动相制成每lml含10μg的溶液，即得。取鲁斯可皂苷元对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含50μg的溶液，即得。4.测定方法分别取各批号的上述中药提取物样品适量，精密称定约10-25mg，转移至50ml容量瓶中，加甲醇40ml，常温下超声30min，取出冷却到室温，加甲醇至刻度，摇匀，吸取适量，定容至50ml，摇匀，即可测定。根据外标一点法计算各成分含量。结果见表1：麦冬总皂苷的测定：标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0.5ml、lml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml，分别置具塞试管中，于水浴中挥干溶剂，精密加人高氯酸10ml，摇匀，置热水中保温15分钟，取出，冰水冷却，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法，在397nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。分别取各批号的上述中药提取物样品适量，精密称定约10-25mg，转移至50ml容量瓶中，加甲醇40ml，常温下超声30min，取出冷却到室温，加甲醇至刻度，摇匀，吸取适量，定容至50ml，摇匀。精密量取供试品溶液2-5ml，置10ml具塞试管中，照标准曲线的制备项下的方法，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中鲁斯可皂苷元的重量，计算，即得。结果见表1：表1银翘汤提取物各组分含量测定结果故“银翘汤”方中药提取物，其含有以重量计，连翘苷不低于0.035％、连翘酯苷不低于0.042％、绿原酸不低于0.31％、木犀草苷不低于0.09％、甘草苷不低于0.015％、甘草酸不低于0.036％、梓醇不低于0.034％、毛蕊花糖苷不低于0.002％、麦冬总皂苷不低于0.019％。实施例8“银翘汤”方中药提取物的抗炎实验研究注昆明小鼠170只，分模型组、消炎通、样品1-1(批号：16010106)、样品1-2(批号：16010208)、样品1-3(批号：16010309)、样品2-1(批号：16020423)、样品2-2(批号：16020524)、样品2-3(批号：16020625)、样品3-1(批号：16030518)、样品3-2(批号：16030620)、样品3-3(批号：16030722)、样品4-1(批号：16040817)、样品4-2(批号：16040927)、样品4-3(批号：16041021)、样品5-1(批号：16051103)、样品5-2(批号：16051205)、样品5-3(批号：16051228)共十七组。每组动物各10只，各组小鼠连续灌胃给药10天，末次给药后于小鼠右耳涂布二甲苯0.02ml/只致炎。间隔3h后颈椎脱臼法处死小鼠，沿耳廓基线剪下双耳，用直径8mm打孔器在两耳同一部位打下耳片并称重。结果见表2。与模型组相比，阳性对照组、样品1-1，1-2，1-3，2-1，2-2，2-3，3-1，3-2，3-3，4-1，4-2，4-3，5-1，5-2，5-3对小鼠耳肿胀度与阴性对照组有极显著差异(p<0.05)；说明各样品显著的抗炎作用，同时，样品4-1，4-2，4-3和5-1，5-2，5-3抗炎效果均强于样品1-1，1-2，1-3，2-1，2-2，2-3，3-1，3-2，3-3。表2对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响(n＝10)组别剂量(g/kg)肿胀度(mg)模型组——7.05±2.12消炎通2.0003.25±1.45***样品1-11.4006.49±1.12*样品1-21.4006.46±1.26*样品1-31.4006.42±1.33*样品2-11.1006.62±1.12*样品2-21.1006.58±1.06*样品2-31.1006.66±1.21*样品3-10.9005.01±1.17*样品3-20.9005.08±1.04*样品3-30.9005.09±1.34*样品4-10.5304.39±1.23**样品4-20.5304.32±1.19**样品4-30.5304.35±1.08**样品5-10.4504.12±1.37**样品5-20.4504.17±1.46**样品5-30.4504.19±1.24**与模型组相比，*p<0.05；**p<0.01；***p<0.001。实施例9提取物的抗流感病毒实验研究采用a3型流感病毒液(广东省微生物研究所提供)感染小鼠为模型，观察样品1-1(批号：16010106)、样品1-2(批号：16010208)、样品1-3(批号：16010309)、样品2-1(批号：16020423)、样品2-2(批号：16020524)、样品2-3(批号：16020625)、样品3-1(批号：16030518)、样品3-2(批号：16030620)、样品3-3(批号：16030722)、样品4-1(批号：16040817)、样品4-2(批号：16040927)、样品4-3(批号：16041021)、样品5-1(批号：16051103)、样品5-2(批号：16051205)、样品5-3(批号：16051228)及阳性对照药(病毒唑)对感染小鼠肺指数、肺病变程度的影响，结果见表3，表明：十五个样品均有显著抑制肺病变程度，显示该方剂的十五个样品均有较好的抗流感病毒效果。同时，样品4-1，4-2，4-3和5-1，5-2，5-3抗流感病毒效果均强于样品1-1，1-2，1-3，2-1，2-2，2-3，3-1，3-2，3-3表3对流感病毒的作用(n＝10)组别剂量(mg/kg)肿胀度(mg)模型组——1.96±0.12病毒唑组801.08±1.60***样品1-1601.79±1.56*样品1-2601.76±1.70*样品1-3601.73±1.32*样品2-1601.72±1.03*样品2-2601.74±1.12*样品2-3601.70±1.18*样品3-1601.68±1.04*样品3-2601.70±1.22*样品3-3601.65±1.34*样品4-1601.38±1.41**样品4-2601.42±1.13**样品4-3601.36±1.27**样品5-1601.25±1.31**样品5-2601.21±1.27**样品5-3601.27±1.12**与模型组相比，*p<0.05；**p<0.01；***p<0.001。当前第1页12