本发明属于药物技术领域，具体地，涉及一种环草石斛提取物及其在抗糖尿病药品和食品中的应用。
背景技术：
中药治疗糖尿病在我国具有几千年的悠久历史，有较西医毒性较小的优点。石斛在中医临床上常用于治疗热病津伤，口干烦渴，胃阴不足，食少干呕，病后虚热不退，阴虚火旺，骨蒸劳热，目暗不明，筋骨痿软等症。有报道石斛与多味中药共煎煮，对降低II型糖尿病患者的血糖、血脂、减轻胰岛素抵抗有确切的疗效。环草石斛也叫小环钗石斛、美花石斛、粉花石斛，主要分布于贵州、广西、云南和广东等省，自2000年起被中国药典收载，是中医临床上广泛应用的石斛药材的代表。已有文献公开了提取自环草石斛的某些单体具有一定的α -葡萄糖苷酶抑制活性，但是这些单体不是环草石斛的主要成分，获得性不稳定，而且体内抗糖尿病效果也未能得到证实。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种环草石斛提取物，所述提取物的提取方法包括：（a）将粉碎后的环草石斛冷浸于50-80 v/v %丙酮水溶液中1-5天，每天超声辅助1-2次，每次30-40分钟，重复提取3-4次；（b）将步骤（a）所得丙酮-水提取物浓缩，用反相硅胶、大孔吸附树脂或MCI树脂吸附，再以水、70%、80%、90%、100%甲醇或乙醇依次洗脱，每个梯度溶剂用量为2-4个柱体积，收集70%~90%甲醇或乙醇洗脱部分，得环草石斛提取物。
本发明另一方面提供一种抗糖尿病药物组合物，其包含治疗有效量的本发明所述的环草石斛提取物及药学上可接受的载体。
本发明再一方面提供一种抗糖尿病保健食品，其包含有效量的本发明所述的环草石斛提取物及食品添加剂。
本发明再一方面提供一种制备环草石斛提取物的方法，其包括（a）将粉碎后的环草石斛冷浸于50-80%丙酮水溶液中1-5天，每天超声辅助1-2次，每次30-40分钟，重复提取3-4次；（b）将步骤（a）所得丙酮-水提取物浓缩，用反相硅胶、大孔吸附树脂或MCI树脂吸附，再以70%、80%、90%、100%甲醇或乙醇依次洗脱，每个梯度溶剂用量为2-4个柱体积，收集70%~90%甲醇洗脱部分，得环草石斛提取物。
本发明再一方面提供本发明所述的环草石斛提取物在制备治疗糖尿病药物或保健食品中的应用。
本发明的药物组合物或保健食品可制备成适当的剂型，包括但不限于，片剂、胶囊剂、口服液、软胶囊、颗粒剂等固体制剂或液体制剂。本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。使用量可根据患者年龄、体重、所治疗疾病的类型和严重程度等变化进行一次或多次使用。
在一些实施方式中，本发明的环草石斛提取物的步骤（a）中丙酮-水溶液的加入量为环草石斛药材质量的10~15倍（质量比）。在一些实施方式中，本发明的环草石斛提取物的步骤（a）提取后，过滤，取滤液，回收丙酮-水溶液，浓缩得浸膏。
在一些实施方式中，本发明的环草石斛提取物的步骤（b）中用反相硅胶吸附，再以水、70%、80%、90%、100%甲醇依次洗脱。反相硅胶是在正相硅胶（普通硅胶，官能团为OH）的基础上进行化学反应把OH取代为OR（R是碳氢链或称作碳链，CH）的硅胶，如C18反相硅胶，可购自日本富士。
在一些实施方式中，本发明的环草石斛提取物的步骤（b）中用大孔吸附树脂吸附，再以水、70%、80%、90%、100%乙醇依次洗脱。大孔吸附树脂是一类不含交换基团且有大孔结构的高分子吸附树脂，具有良好的大孔网状结构和较大的比表面积，可以有选择地通过物理吸附水溶液中的有机物，可选自D101, D201，D301，HPD100、HPD400、HPD500、HPD600、AB-8和NKA-9。
在一些实施方式中，本发明的环草石斛提取物的步骤（b）中用MCI树脂吸附，再以水、70%、80%、90%、100%甲醇依次洗脱。MCI 树脂选自CHP20/P20、CHP20/P30、CHP20/P50、CHP20/P70、CHP20/P120、CHP50/P30、CHP50/P20、CHP50/P30、CSP50/P10、CHP07/P120、CMG20/P10、CMG20/P30和CMG20/P150。优选地，所述MCI 树脂选自CHP20/P20、CHP20/P30、CHP20/P50、CHP20/P70、CHP20/P120、CHP50/P30、CHP50/P20、CHP50/P30、CSP50/P10和CHP07/P120。更优选地，所述MCI 树脂为CHP20/P20、CHP20/P30、CHP20/P50、CHP20/P70、CHP20/P120中的一种。所述MCI树脂可购自例如三菱化学株式会社（日本，东京）。
在一些实施方式中，本发明的环草石斛为兰科植物环草石斛（Dendrobium loddigesii Rolfe）的茎，分布于广东、广西、云南、贵州、海南，优选云南产Dendrobium loddigesii Rolfe植物。
本发明环草石斛提取物可以单独直接应用，可以相互组合应用，也可以与其他药物包括植物提取物组成复方的形式使用。经动物药效学实验证实，本发明的环草石斛提取物的具有明确的降血糖药效，其显著促胰岛素分泌，减轻胰岛素抵抗。
具体实施方式
下面用本发明的实施例来进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此来限定本发明，根据本发明的实质性，对本发明进行的简单改进都属于本发明要求保护的范围。
实施例1 –本发明环草石斛提取物的制备
取干燥的环草石斛（Dendrobium loddigesii Rolfe），粉碎，称取1000g置于容器内，用V丙酮：V水=8：1的丙酮-水溶液冷浸3次，第一次浸泡5天，第二次、第三次各浸泡1天，浸泡期间采用超声辅助提取，每次采用10倍的丙酮-水溶液，过滤，取滤液，回收丙酮，并减压浓缩得干燥浸膏55g。将该环草石斛干燥浸膏用适量甲醇溶解，将样品上柱体积为10cm´40cm（i.d.）C-18反相硅胶柱，然后用水，70%，80%，90%，100%甲醇依次洗脱，每个梯度用量为5个柱体积，收集70%、80%甲醇洗脱液，减压旋干得到干燥的环草石斛提取物18 g。
实施例2 –本发明环草石斛提取物的制备
环草石斛干燥浸膏制备同实施例1。将环草石斛干燥浸膏用适量乙醇溶解，将样品上至柱体积为10cm´100cm（i.d.）D101大孔吸附树脂吸附柱，然后用水，70%，80%，90%，100%乙醇依次洗脱，每个梯度溶剂用量为3个柱体积，收集70%~90%乙醇洗脱部分，得环草石斛提取物。
实施例3–本发明环草石斛提取物的制备
环草石斛干燥浸膏制备同实施例1。将环草石斛干燥浸膏用适量甲醇溶解，将样品上至柱体积为10cm´80cm（i.d.）MCI GEL树脂吸附柱，然后用水，70%，80%，90%，100%甲醇依次洗脱，每个梯度溶剂用量为3个柱体积，收集70%~90%甲醇洗脱部分，得环草石斛提取物。
实施例4 –药物组合物的制备（片剂）
取实施例1的方法制得的环草石斛提取物60 mg、乳糖130mg、淀粉55mg、硬脂酸镁5mg，将环草石斛提取物、乳糖、淀粉混合，用水湿润，把湿润后的混合物过筛并干燥，再过筛，加入硬脂酸镁，然后将混合物压片，每片重250mg，环草石斛提取物含量60mg。
实施例5 –保健食品的制备（胶囊剂）
取实施例2的方法制得的环草石斛提取物60 mg、乳糖137mg、硬脂酸镁3mg。将环草石斛提取物与助剂混合，过筛，均匀混合，将得到的混合物装入硬明胶胶囊，每个胶囊重200mg，环草石斛提取物含量为60mg。
实验例1 - 环草石斛提取物的抗糖尿病作用
实验原理： dbdb小鼠是典型的单基因突变导致2 型糖尿病的动物模型（BKS.Cg-Dock7m +/+Leprdb/Nju），该系小鼠由4 号常染色体瘦素受体( LEPR) 的Janus 蛋白酪氨酸激酶( JAK) 基因位点发生突变衍生而来。dbdb小鼠具肥胖，高血糖、高度胰岛素抵抗的自发性II 型糖尿病特性，在C57BLKS背景下，能够观察到很多特征，比如血糖不受控制的增高，产生胰岛素的beta细胞缺失，外源胰岛素无法控制血糖浓度且糖异生作用酶活性升高。在C57BLKS-Leprdb纯合子中可以观察到外周神经病变和心肌病变，伤愈速度减慢，代谢增加等，是常用的研究II 型糖尿病药物及机制的动物模型。
实验方法：db /db 小鼠，5周龄，适应性饲养一周后，随机分为3组：模型对照组、环草石斛提取物组（实施例1-3制备）(100m g /kg) 、二甲双胍组( 130 mg /kg) ，每组8 只，另取C57小鼠作为正常对照组。每天灌胃给药，给药时间9: 00 ～ 10: 00 am，每周给药7天，连续给药7周，每7天检测小鼠体重及血糖值1次。实验期间小鼠自由进食、饮水。
糖耐量测试方法：在给药第6周，各组小鼠空腹12 小时后，灌胃给葡萄糖溶液（2g/kg），分别测试小鼠给糖后0.5、1、1.5、2h血糖值。血糖测试方法：采用试纸法。血糖仪型号：ACCU-CHEK Performa。血糖试纸型号：ACCU-CHEK Performa。
环草石斛提取物降血糖实验结果见表1，实验结果表示为每周检测的小鼠血糖值平均值，其中给药组为环草石斛提取物组，阳性药组为二甲双胍组，模型组及正常对照组。环草石斛提取物对dbdb小鼠糖耐量影响实验结果见表2，实验结果表示为小鼠空腹12小时血糖值平均值及口服葡萄糖液（2g/kg）后0.5、1、1.5、2小时血糖值平均值，其中给药组为环草石斛提取物组，阳性药组为二甲双胍组，模型组及正常对照组。
从表1、表2实验结果可以得出，环草石斛提取物有较好的体内降糖效果，体内降糖药效接近临床降糖药二甲双胍。
表1 - 环草石斛提取物dbdb小鼠体内降血糖实验
表2 - 环草石斛提取物对dbdb小鼠体糖耐量影响实验a
a: 各实验组小鼠口服葡萄糖剂量为2 g/kg。