含有HDAC抑制剂和IRE1抑制剂的药物组合物及用途的制作方法

本发明属于生物医药领域，具体涉及含有hdac抑制剂和ire1抑制剂的药物组合物及用途。

背景技术：

世界卫生组织调查报告表明，全球癌症状况日益严重，今后20年新患者的人数将由目前的每年1000万增加到1500万，因癌症而死亡的人数也将由每年的600万增加至1000万。随着生活水平的提高，饮食结构的改变，食管癌的发病率呈逐年上升趋势；其中原发性肝癌为发生在肝细胞与肝内胆管上皮细胞的癌变，是人类最常见的恶性肿瘤之一；肺癌为常见的恶性肿瘤，源于各级支气管上皮，分为细胞肺癌和非小细胞肺癌。这些癌症的治疗虽然以手术为主，但由于早期患者一般无明显症状，在首次被确诊的癌症患者中，很多已为中晚期，失去了手术切除的机会，故非手术治疗(如化疗)在肿瘤的综合治疗中有着十分重要的地位。化疗是利用化学药物阻止癌细胞的增殖、浸润、转移，直至最终杀灭癌细胞的一种治疗方式。它是一种全身性治疗手段，和手术、放疗一起，并称为癌症的3大治疗手段。

目前已上市的抗肿瘤药物较多，如烷化剂药物、抗代谢药物、抗肿瘤抗生素、免疫调节剂等，但是大多药物普遍存在选择性低，毒性较大，病人不耐受等缺点。随着对肿瘤的发生发展的分子机制研究越来越清楚，分子靶向治疗多种恶性肿瘤受到了广泛的关注和高度重视。分子靶向药物选择性高、广谱有效，其安全性优于细胞毒性化疗药物，是目前肿瘤治疗领域发展的新方向。

组蛋白去乙酰化酶(histonedeacetylase，hdac)是一类蛋白酶，对染色体的结构修饰和基因表达调控发挥着重要的作用。肿瘤的发生和诸多基因特别是癌基因的异常表达密切相关，而染色体结构是调控基因表达的重要因素。近些年的研究发现hdac作为调控基因转录的关键蛋白酶，其功能异常与肿瘤的发生和发展有直接关系。当hdac过度表达并被转录因子募集时，会抑制某些基因的正常表达。这种因hdac活性过高引起的异常转录抑制在肿瘤中非常普遍，因此hdac成为抗肿瘤药物最具潜力的靶点之一。抑制hdac的活性能引起组蛋白高度乙酰化，重新激活某些抑癌基因的转录并引起多项下游效应，包括促进肿瘤细胞分化、使肿瘤细胞阻滞于g1或g2期以及诱导肿瘤细胞凋亡，从而实现其抗肿瘤作用。

目前已有hdac抑制剂和其他药物联用在体内和体外治疗癌症的例子。如中国专利申请cn101262878a公开了一种治疗癌症的hamlet和hdac抑制剂的治疗组合，该组合包括成分(i)和成分(ii)，成分(i)是hamlet或其生物修饰物，成分(ii)是hdac抑制剂。该组合物在治疗增生性疾病，如产生肿瘤的那些增生疾病中显示出协同作用。但是该组合物对人体的毒害性仍然较大，许多病人服用后出现了不同程度的不良反应，难以满足癌症治疗的临床需要。

因此，有必要提供一种对癌细胞杀伤具有协同作用，同时毒性低的抗肿瘤药物。

技术实现要素：

为了解决现有技术中存在的技术问题，本发明的目的在于提供一种药物组合物及其用于抗肿瘤的用途，以解决以上缺陷。

本发明提供了一种含有hdac抑制剂和ire1抑制剂的药物组合物，包含有效量的hdac抑制剂和有效量的ire1抑制剂。

进一步地，所述的hdac抑制剂具体可以为但不限于帕比司他(lbh589)、恩替诺特(ms-275)和mocetinostat(mgcd0103)中的一种。优选为帕比司他，其cas号为404950-80-7，结构式如下所示：

进一步地，本发明所述ire1抑制剂具体可以为但不限于stf-083010和4μ8c中的一种；优选为stf-083010，其cas号为307543-71-1，结构式如下所示：

stf-083010是一种特异性ire1核酸内切酶抑制剂。在细胞系中，stf-083010具有剂量和时间依赖性的细胞抑制能力和细胞毒性，stf-083010可抑制xbp1剪接，抑制ire1α的核酸内切酶活性，但不影响ire1α的激酶活性。stf-083010可持续抑制细胞的增殖，共培养48小时后stf-083010的细胞抑制率约20％，共培养3天后stf-083010的细胞抑制率约70％；在mec1和mec2细胞中。在人多发性骨髓瘤异种移植瘤模型中，腹腔注射stf-083010(30mg/kg)可显著抑制肿瘤生长。

作为本发明其中一个优选的实施方案，本发明药物组合物包含帕比司他和stf-083010，两者的摩尔浓度比为0.01～0.2∶10～80，更优选为0.032∶60。

作为本发明另一个优选的实施方案，本发明药物组合物包含帕比司他和4μ8c，两者的摩尔浓度比为0.01～1∶1～50，更优选为0.05∶5。

4μ8c是高效的选择性ire1抑制剂，它可阻断基底(ridd)接近ire1的活性部位，并选择性使xbp1剪接作用和ire1介导的mrna降解失活。

作为本发明另一个优选的实施方案，本发明药物组合物包含恩替诺特和stf-083010，两者的摩尔浓度比为0.2～1∶10～80，更优选为0.5∶60。

作为本发明另一个优选的实施方案，本发明药物组合物包含恩替诺特和4μ8c，两者的摩尔浓度比为0.2～1∶1～50，更优选为0.5∶5。

作为本发明另一个优选的实施方案，本发明药物组合物包含mocetinostat和stf-083010，两者的摩尔浓度比为1～5∶10～80，更优选为3.0∶60。

作为本发明另一个优选的实施方案，本发明药物组合物包含mocetinostat和4μ8c，两者的摩尔浓度比为0.2～1∶1～50，更优选为3.0∶5。

本发明所述药物组合物可以用于制备预防和/或治疗各种肿瘤的药物，所述肿瘤包括但不限于食癌、肺癌、肝癌。

进一步地，可将本发明中所述药物组合物按照本领域常规技术制备成注射制剂或口服制剂，本发明优选将本发明中所述药物组合物制备成口服制剂，所述口服制剂优选为口服胶囊。根据制剂形式，本发明所述药物组合物在制剂中的含量可以以质量计为1～99％，优选为5～90％；制剂使用的辅料可采用本领域常规的辅料，以不和本发明药物组合物发生反应或不影响本发明药物的疗效为前提；制剂的制备方法可以采用本领域常规的制备方法进行制备。

本发明中的药物组合物的给药剂量根据给药对象、给药途径或药物的制剂形式不同可以进行适当的变化，但以保证该药物组合物在哺乳动物体内能够达到有效的血药浓度为前提。

与现有技术相比，本发明药物组合物具有以下优势：

本发明药物组合物在治疗食管癌、肺癌及肝癌方面具有显著的积极效果，尤其是在治疗食管癌方面，取得了协同增效的作用，明显优于它们中的单组份药物，且经试验表明，帕比司他和stf-083010联合作用的效果明显优于stf-083010分别与和顺铂、5-氟尿嘧啶的联合，帕比司他和stf-083010联合用药对肿瘤的治疗效果更好，且毒性更低，减少了副作用的发生，取得了预料不到的技术效果，为临床治疗癌症提供了更多的选择。

附图说明

图1显示了帕比司他和stf-083010联合作用对食管癌细胞克隆形成的影响；

图2显示了帕比司他和stf-083010联合作用对食管癌细胞凋亡的影响；

图3显示了帕比司他和stf-083010联合作用对裸鼠食管癌移植瘤生长的影响；

图4显示了帕比司他、顺铂、5-氟尿嘧啶和stf-083010联合对肿瘤细胞及正常细胞的影响。

具体实施方式：

以下通过具体实施方式的描述对本发明作进一步说明，但这并非是对本发明的限制，本领域技术人员根据本发明的基本思想，可以做出各种修改或改进，但是只要不脱离本发明的基本思想，均在本发明的范围之内。

实施例1、帕比司他和stf-083010联合作用对食管癌细胞克隆形成的影响

将人食管癌细胞kyse510细胞接种到6孔板，待细胞贴壁过夜后，将细胞分为对照组、帕比司他单药组、stf-083010单药组及帕比司他和stf-083010药物联合用药组，分别加入对应的培养基或者药物溶液，孵育7天，检测细胞平板克隆形成情况。结果如图1所示.

结果分析：从图1可看出，与对照组以及单药组相比，联合用药对细胞克隆形成具有明显的协同抑制作用，联合用药组细胞克隆数量和体积最小。

实施例2、帕比司他和stf-083010联合作用对食管癌细胞凋亡的影响

采用流式细胞术检测帕比司他与stf083010单独使用及两药联合后诱导kyse510和kyse450的细胞凋亡情况。将kyse510和kyse450细胞分别以每孔2×10⁵个细胞的密度接种至6孔板。待细胞贴壁后，按实施例2分组给药。共同处理48h后，采用不加edta的胰酶消化收取细胞，加入10μlfitc染色液室温避光反应10min，后再加入5μlpi染色液室温避光反应10min，样品随后用流式细胞仪检测细胞凋亡情况，结果如图2所示。

结果分析：kyse510和kyse450细胞经32nm的帕比司他单独处理后的细胞凋亡率分别为32.3％和35.33％；kyse510和kyse450细胞经stf-083010(60μm)单独处理后的细胞凋亡率分别为3.22％和6.87％；然而，用上述用量的帕比司他和stf-083010联合处理kyse510和kyse450细胞后，细胞凋亡率分别上升至71.1％和47.63％。结果表明，帕比司他和stf-083010的联合使用可显著引起食管癌细胞发生凋亡，两者取得了协同增效的作用。

实施例3、帕比司他和stf-083010联合作用对裸鼠食管癌移植瘤生长的影响

用kyse510细胞通过皮下接种构建裸鼠皮下成瘤模型，接种细胞量为5×10⁶个每只裸鼠，模型构建成功之后，将小鼠分为四组，即对照组，帕比司他单用组，stf-083010单用组，以及帕比司他和stf-083010药物联合用药组，给药方式均为腹腔注射。共给药14天，观察并记录小鼠肿瘤的生长情况，给药结束后，处死小鼠，取小鼠皮下瘤组织进行称重及免疫组化染色，结果如图3所示。

结果分析：与对照组及单药组相比，联合用药对肿瘤生长具有明显的抑制作用，联合用药组肿瘤生长速度最慢，最终剥取的肿瘤重量最轻，说明联合用药能够在食管癌移植瘤的生长抑制产生协同作用。

实施例4、帕比司他和stf-083010联合作用对肿瘤细胞及正常细胞的影响

将kyse450食管癌细胞株、kyse510食管癌细胞株、a549肺癌细胞株、hepg2肝癌细胞株和huvec正常血管内皮细胞以每孔3000-6000个细胞的数量接种到96孔板，待细胞贴壁后，加入空白对照组、32nm的帕比司他和60μmstf-083010及联合用药组药物(32nm帕比司他和60μmstf-083010)；此外，在kyse450细胞株中，做顺铂、5-氟尿嘧啶分别与stf-083010联合用药，分组如下：对照组、1μg/ml顺铂、60μmstf-083010、顺铂+stf-083010、4μg/ml5-氟尿嘧啶、5-氟尿嘧啶+stf-083010，培养48h后，每孔加入10μl浓度为5mg/ml的mtt溶液，继续培养4h，然后弃去培养液每孔加入100μl的dmso，于恒速摇床上避光摇晃。待结晶物充分溶解后，在酶标仪上读取od值(波长570nm，参考波长630nm)，读取每孔的吸光值，计算两药合用后的细胞存活及抑制率。

采用金氏修正式评价两种药物联合用药时对肿瘤细胞的联用效果，具体步骤为，按照生长抑制率(％)＝(1-od实验组/od对照组)×100％的公式，计算出a药在某种条件下对肿瘤细胞的抑制率为ea，计算出b药在某种条件下对肿瘤细胞的抑制率为eb，再计算出两者联合给药的抑制率为ec，通过以下公式计算联合用药指数q值，q＝ec/(eb+ea-eb*ea)，当q值>1.15为协同效应，0.85<q<1.15为相加效应，q<0.85为拮抗效应。通过上述联合用药指数的计算进一步判断两种药物联合用药的最终药效。结果详见图4。

结果分析：经过计算，32nm帕比司他和60μmstf-083010联合用药在kyse450、kyse510、a549和hepg2肿瘤细胞中的q值分别为1.16，1.17，1.15，1.14；顺铂和stf-083010联合用药在kyse450细胞中的q值为0.90；5-氟尿嘧啶和stf-083010联合用药在kyse450细胞中的q值为0.77。这表明，32nm帕比司他和60μmstf-083010联合用药对食管癌、肺癌和肝癌均具有显著的积极效果，尤其是在将两者用于食管癌细胞株，取得了协同的作用，且帕比司他和stf-083010联合用药的抗食管癌效果优于顺铂、5-氟尿嘧啶和stf-083010联合使用。