氧化亚铜纳米粒在制备治疗妇科肿瘤的药物中的应用的制作方法

本发明涉及生物医药技术领域，具体地说，涉及氧化亚铜纳米粒的新用途，尤其是在制备治疗妇科肿瘤的药物中的应用。

背景技术：

妇科肿瘤是一种多发病，由于其致病因素较复杂，癌变组织结构多样，受神经内分泌因素影响的不断变化，所在部位又极易受细菌或病毒感染，很早就受到人们重视。妇科生殖器肿瘤又以子宫颈癌，卵巢癌，子宫内膜癌较为常见，这三种肿瘤并称为妇科生殖系统三大恶性肿瘤。宫颈癌(cervicalcancer)在女性肿瘤中的发病率排在第二位，是恶性程度最高的肿瘤之一，全球每年有将近50万的妇女被诊断为宫颈癌，其中将近一半患者死亡。由于宫颈刮片筛查和防癌疫苗的接种，宫颈癌的发生率显著下降。但目前宫颈癌在我国的发病率和死亡率仍占全球四分之一，严重威胁女性健康。手术和放化疗是宫颈癌的主要治疗手段，手术适用于早期病例，放疗虽然适合于各期病例，但可对卵巢和阴道造成功能上的影响，严重影响年轻患者的生活质量，化疗主要应用于宫颈癌局部晚期病例的辅助性治疗和晚期病例的姑息性治疗。目前在晚期宫颈癌中广泛应用的顺铂联合紫杉醇或拓扑替康化疗方案的有效率波动于28.0％～46.3％之间，预计总生存期小于12个月。子宫内膜癌(endometrialcancer，ec)为女性生殖道常见三大恶性肿瘤之一。占女性生殖道恶性肿瘤20％～30％，在许多发达国家，其发病率居妇科恶性肿瘤首位。中国卫生部2004～2005年中国恶性肿瘤死亡抽样回顾调查显示，子宫恶性肿瘤死亡率为4.32/10万，位居女性恶性肿瘤死亡率第七位(2012中国卫生统计年鉴)。鉴于子宫内膜癌的发病率和死亡率逐年递增，在我国ec俨然已经成为一个严重的公共卫生难题。综上所述，寻找新的宫颈癌、子宫内膜癌等妇科肿瘤的治疗药物具有现实意义。

纳米科学的发展给科学进步注入了新鲜动力，给包括医学在内的各个学科带来了深刻的变革。纳米医学及其分支纳米肿瘤学是纳米科学的子学科，它们的发展给肿瘤治疗及抗肿瘤药物研发提供了可行的方法和思路。脂质体靶向给药系统、磁性纳米粒给药体系、量子点、纳米分子成像技术以及无机纳米药物是抗肿瘤纳米药物的前沿研究对象。其中，抗肿瘤无机纳米药物既可以经改造成为载药体系，也可以作为抗肿瘤药物靶向肿瘤组织，表现出许多独特的作用，有许多有趣的科学问题亟待研究。棒状纳米金、星型纳米金、纳米氧化锌、纳米金铁复合材料等多种无机纳米药物表现出显著的抗肿瘤作用，且具有独特的亚细胞结构的靶向作用，可以选择性地靶向肿瘤细胞的细胞核、线粒体等结构，在细胞水平和实验动物水平均表现出良好的肿瘤治疗应用前景。对于无机纳米药物的作用机制研究发现，金纳米粒(aunps)可通过抑制mapk信号通路抑制肿瘤的转移与增殖；纳米tio2可上调bak/bax的比值；mn纳米粒可上调转铁蛋白的表达；超磁性铁纳米粒通过激活β-catenin、cancer/testis抗原、间质金属蛋白酶mmp-2等蛋白的表达参与人间充质干细胞的分化调控，还可与c-erbb-2受体结合靶向乳腺癌细胞；zno纳米粒可抑制akt、erk1/2的磷酸化，激活jnk、p38。其中β-catenin、akt、erk、mmp等蛋白与肿瘤的转移密切相关。

氧化亚铜纳米粒(cuprousoxidenanoparticles，conps)为一种含铜纳米药物。中国专利文献cn201610307984.7，公开日2016.08.10，公开了氧化亚铜纳米粒在制备治疗肾癌药物中的应用，所述肾癌是透明细胞型肾癌、颗粒细胞型肾癌、混合细胞型肾癌、未分化细胞型肾癌。中国专利文献cn201610308780.5，公开日2016.08.10，公开了氧化亚铜纳米粒在制备治疗前列腺癌药物中的应用。目前未知氧化亚铜纳米粒对于妇科肿瘤是否具备治疗效果。

技术实现要素：

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供氧化亚铜纳米粒的新用途。

本发明第一方面提供了氧化亚铜纳米粒在制备治疗妇科肿瘤的药物中的应用。

作为本发明的一个优选例，所述的妇科肿瘤为宫颈癌，子宫内膜癌或卵巢癌。

更优地，所述的妇科肿瘤为宫颈癌或子宫内膜癌。

本发明另一方面提供了氧化亚铜纳米粒在制备体外抑制宫颈癌细胞增殖的试剂中的应用。

作为本发明的一个优选例，所述的宫颈癌细胞为siha，caski，ms751或hela细胞。

本发明再一方面提供了氧化亚铜纳米粒在制备体外抑制子宫内膜癌细胞增殖的试剂中的应用。

作为本发明的一个优选例，所述的子宫内膜癌细胞为ecc1或hec1a细胞。

本文中，所述的“药物”是指能影响机体生理、生化和病理过程，用以临床上预防、诊断、治疗疾病和计划生育的化学物质。所述的“试剂”又可称作生物化学试剂或试药，是专用于实现化学反应、分析化验、研究试验、教学实验、化学配方使用的纯净化学品。本发明的氧化亚铜纳米粒可与药用载体共同制成药物组合物以便于给药，所述药用载体包括生理适合的任何和所有的溶剂、分散介质、包衣剂、等渗和吸收延缓试剂等，给药途径可以是静脉内的、肌肉的、皮下的、肠胃内的、脊柱的或表皮的等。

本发明优点在于：本发明经体外实验证实conps可显著抑制宫颈癌细胞和子宫内膜癌细胞的增殖，表现出显著的杀伤作用；又经体内实验证实conps与化疗药顺铂抑制肿瘤效果相当，但不会引起裸鼠体重的下降，具备较低的副作用。本发明扩大了conps的用途，应用范围将不仅限于肾癌、前列腺癌等，还可用于与之发病诱因、发病机制均不同的妇科肿瘤如宫颈癌、子宫内膜癌的治疗；另一方面，conps对于上述细胞的体外杀伤作用有助于研究相应肿瘤的发生发展机制，以及不同肿瘤之间的比较，或用作对照品用于评价其他类受试品对癌细胞的增殖抑制作用。

附图说明

图1：conps可显著抑制宫颈癌细胞的增殖。

图2：conps可显著抑制子宫内膜癌癌细胞的增殖。

图3：conps可显著抑制宫颈癌瘤体的生长。

具体实施方式

下面结合附图对本发明提供的具体实施方式作详细说明。

实施例1

一、材料

siha，caski，ms751，hela，ecc1，hec1a：中科院细胞库引进。

dmem、胎牛血清fbs：gibco公司。

裸鼠：上海华东师范大学动物房购买。

conps：自行制备，具体方法参见文献：ywang,xyzi,jsu,etal.cuprousoxidenanoparticlesselectivelyinduceapoptosisoftumorcells.internationaljournalofnanomedicine,2012,7(8):2641-2652。

顺铂(ddp)：sigma公司。

二、方法

1、细胞实验

选择siha，caski，ms751，hela宫颈癌细胞系，ecc1，hec1a子宫内膜癌细胞系为研究对象，使用dmem培养基培养，细胞培养基添加10％fbs和1％青霉素-链霉素，取96孔板，每孔加入200μl的细胞悬液，每孔3000个细胞，孵育过夜，弃培养基，按浓度梯度加入conps，除对照组以外，实验组浓度梯度设定为1.25μg/ml、2.5μg/ml、5μg/ml、10μg/ml每个浓度梯度设置5个复孔，在72h弃去加入药物的培养基，按10:1的比例每孔加入10μl的cck8溶液和100μl培养基配好的混合液，37℃孵箱避光孵育4h，用酶标仪在450nm处测定细胞吸光度，按照抑制率(％)＝(1－实验组平均a值/对照组平均a值)×100％的公式计算出抑制率，通过spss16.0计算出ic50，利用graphpadprism5进行量效柱状图绘制。

2、动物实验

选择ms751宫颈癌细胞系进行裸鼠皮下成瘤实验，每只裸鼠皮下注射2×10⁶细胞，待裸鼠皮下瘤长至5～7mm时分别予以处理。共分为4组，control组：皮下注射50μl5％gs+腹腔注射100μl5％gs；conps：皮下注射50μlconps(4mg/kg)；顺铂组(ddp)：腹腔注射100μl顺铂(2mg/kg)；conps+顺铂组：皮下注射50μlconps(4mg/kg)+腹腔注射100μl顺铂(2mg/kg)。14d后裸鼠处死，测量裸鼠体重及肿瘤重量，利用graphpadprism5进行量效柱状图绘制。三、结果

1、细胞实验结果

不同浓度的conps处理培养于96孔板的宫颈癌细胞72小时之后，采用cck8法检测conps对细胞增殖的影响。检测结果显示，48h时间节点，conps对宫颈癌细胞系siha，caski，ms751，hela细胞的半效抑制浓度ic50依次为5.76μg/ml、3.48μg/ml、5.27μg/ml、3.04μg/ml。72h时间节点，conps对宫颈癌细胞系siha，caski，ms751，hela细胞的半效抑制浓度ic50依次为5.61μg/ml、1.23μg/ml、1.35μg/ml、0.92μg/ml。结果显示，conps可以显著抑制宫颈癌细胞系的增殖(图1)。

不同浓度的conps处理培养于96孔板的子宫内膜癌细胞72小时之后，采用cck8法检测conps对细胞增殖的影响。检测结果显示，48h时间节点，conps对子宫内膜癌细胞系hec1a，ecc1细胞的半效抑制浓度ic50依次为5.328μg/ml、3.767μg/ml。72h时间节点，conps对子宫内膜癌细胞系hec1a，ecc1细胞的半效抑制浓度ic50依次为4.162μg/ml、2.310μg/ml。结果显示，conps可以显著抑制子宫内膜癌细胞系的增殖(图2)。

2、动物实验结果

裸鼠皮下成瘤实验结果表明，conps较对照组可显著抑制肿瘤的增长(p<0.0001)，并且并未引起裸鼠体重的下降。顺铂组较对照组虽可显著抑制肿瘤的增长(p<0.0001)，但可引起裸鼠体重的显著下降(p<0.0001)。conps较顺铂组相比，抑制肿瘤效果无差异(p＝0.8127)，但顺铂组裸鼠体重较conps组有显著下降(p<0.0001)(图3)。这一结果为进一步临床应用打下坚实基础。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。