对氧环己酮与L‑苯丙氨酸共聚物及其应用的制作方法

本发明涉及一种l-苯丙氨酸体系共聚物，尤其涉及一种对氧环己酮与l-苯丙氨酸共聚物及其应用。

背景技术：

成纤维细胞是机体损伤的主要修复细胞，而其大量增殖与凋亡抑制又是瘢痕组织形成的生物学基础之一。基于目前对瘢痕组织形成的认知，成纤维细胞由于自身的改变，被激活于某一分化状态，不受生长因子调控而成为癌细胞生长模式是瘢痕形成的主要原因。此外，成纤维细胞大量增殖分泌大量生长因子及胶原蛋白、纤维蛋白等，最终导致胶原沉积从而引发如长期腹膜透析病人腹壁纤维化及术后腹腔粘连等。当腹膜愈合不好时，成纤维细胞发出细胞外基质通过细胞生长因子和细胞活素沉积的信号。粘连成纤维细胞发展为肌成纤维细胞表型；成纤维细胞和肌成纤维细胞分泌大量细胞外基质分子，然后在组织之间建立一个弱纤维的桥梁。最后，血管和胶原沉积在这座桥上，组织发生了粘连。因此，抑制成纤维细胞的增殖是控制瘢痕组织形成及其它由成纤维细胞过度增殖引起的组织纤维化如反复刺激引起的腹壁纤维化及术后腹腔粘连等的重要手段。

目前，瘢痕增生的防治手段主要有压力防治、激素等药物的应用、硅胶薄膜敷贴防治以及手术、放射、激光、冷冻治疗等。这些疗法虽能抑制瘢痕组织增生，但也存在患者活动受限、皮肤溃疡、反复注射导致的组织坏死和血管扩张、疗效有限、二次损伤、癌变风险、易复发、难以控制等缺点。而对腹壁纤维化及术后腹腔粘连的防治多为应用一些抗胶原沉积、抗炎及促胶原降解的药物，此外对于术后腹腔粘连来说，机械隔离法也是常用预防手段，但是这些方法也不能完全解决腹壁纤维化及术后粘连问题。因此，目前临床仍需更能有效抑制成纤维细胞增殖的药物来为成纤维细胞参与的瘢痕增生、腹壁纤维化及术后粘连进行防治。

术后组织粘连是腹部手术的患者一种普遍的并发症。很多这些粘连需要第二次手术来突破，但这会增加患者痛苦和经济负担。虽然有很多的术后粘连的治疗，固体屏障代表临床上最成功的粘附屏障和主要的预防产品。固体障碍一般可以分为可降解和不可降解的。然而，不可生物降解的障碍需要后续操作中被移除，这使得患者存在更多的粘连和手术并发症的风险。因此，可生物降解的障碍成为治疗术后粘连更可行的办法。

抗粘连材料作为一种植入产品，其降解性能十分重要。术后组织粘连通常发生在术后3-7天，所以防粘连材料应该有一个匹配的降解。然而，研究发现，脂肪族聚酯作为防粘连材料的降解周期，远远超过7天。这些聚酯的降解，如聚乳酸(pla)和聚(乳酸-乙醇酸)(plga)，是通过水解完成的。此外，这种单一的降解通常意味着降解的周期很难精确掌控。

聚(对二氧环己酮)(ppdo)，是一种可生物降解的脂肪族聚酯，以其独特的生物可降解性、生物相容性和生物可吸收性，被广泛应用于生物医学领域，如药物输送、血管移植材料、骨科固定材料、医用可吸收手术缝合线的基体材料、软骨组织工程等。然而，由于固有的疏水性和缺乏特定的生物学特性与高结晶度限制了其在生物医学领域中如抗术后粘连的进一步应用。

常用的提高ppdo性能如亲水性、溶解性和体外水解能力的方法，可以通过共聚引进外部组分。这种方法主要是基于两个原则，一个是亲水嵌段组分的引入，如聚乙二醇或聚(乙烯醇)改善其亲水性。另一种是通过随机共聚干扰ppdo的结晶度，从而改善溶解度。虽然ppdo的结晶度和亲水性可以通过与其他脂肪族单体或亲水性大分子共聚来改进，但是这些聚合物如果作为粘连屏障，仍然是简单的物理障碍。但在最近的一篇抗术后粘连综述(cheginin.tgf-betasystem：theprincipalprofibroticmediatorofperitonealadhesionformation.seminreprodmed2008；26：298-312.)中引用到，一个单独的可生物降解的物理屏障对治疗抗术后粘连不可能有明显的作用。

已知的α-氨基酸和它们的聚合物具有较好的亲水性和生物特性，特别是细胞黏附和酶的降解。此外，氨基酸序列可以提供与其他共聚物共聚的反应性官能团，可与精氨酸甘氨酸天冬氨酸(rgd)序列或其他基因和蛋白的识别基团反应来改性，从而促进聚合物的细胞和生物反应。在那些氨基酸系列中、l-苯丙氨酸是最重要的一种。它是一种自然发生的必不可少的α-氨基酸，通过聚合物的分解后，可以被生物体吸收；同时，由于存在的苄基，还可以有效地被蛋白酶消化。此外，很少有研究者专门报道l-苯丙氨酸对大鼠心肌成纤维细胞、平滑肌细胞的增殖的抑制。这是一个重要而特殊的l-苯丙氨酸的生物学特性。

本发明人设计合成了一种新的由pdo和氨基酸共聚的共聚物，该共聚物既具有生物学特性，也具有改善的物理性能。具体以l-苯丙氨酸为模板氨基酸进行合成目标共聚物pdpa(p-dioxanone-co-l-phenylalanine)，因为其刚性的苄基基团可以降低聚合物链的灵活性，随着其特异性的抑制细胞增殖可以降低结晶度。相对ppdo，本发明的共聚物pdpa在如生物性能、结晶度、亲水性和体外水解性都有预期的改进。

本发明人意外发现，化合物p-dioxanone-co-l-phenylalanine(pdpa)的共聚物具有细胞-材料相互作用，作为微生物培养面时能有效抑制成纤维细胞增殖。本发明人还通过以小鼠l929成纤维细胞作为微生物培养面进行的抑制纤维细胞增殖实验，从细胞的角度对可能的抑制机理进行了假设性研究，从细胞的角度研究并探索了该共聚物可以被用作粘合屏障材料的可能性。

鉴于发生成纤维细胞粘附起关键作用的成因的分析，发明人认为，如果粘连屏障材料有特定的细胞-材料相互作用，去抑制成纤维细胞的过度增殖，材料将不再只是物理屏障，抗粘连效果效率可明显提高。而且，单一的pdpa由于受限于其分子量，所制成的膜的力学强度很差；因此，该单一膜在实际应用中仍难以操作，因此，如何实现可具体应用的对氧环己酮与l-苯丙氨酸共聚物体系对本领域的技术人员仍是一个难题，尤其是在细胞纤维化引起的病症的药物中的用途，如抗粘连材料等。

技术实现要素：

有鉴于现有技术的上述缺陷，本发明所要解决的技术问题是提供一种对氧环己酮与l-苯丙氨酸共聚物体系在治疗由成纤维细胞及其纤维沉积导致的细胞纤维化引起的病症的药物中的用途。

为实现上述目的，一方面，本发明提供了一种对氧环己酮与l-苯丙氨酸共聚物pdpa(聚(p-dioxanone-co-l-phenylalanine))，其结构如分子式(i)所示。

本发明的对氧环己酮与l-苯丙氨酸共聚物pdpa可通过以下合成路线进行制备。以l-苯丙氨酸(l-phe)为原料，进行合成制备得到聚(对氧环己酮-co-l-苯丙氨酸)，其结构与分析文献已有报道(j.appl.polym.sci.2013，doi：10.1002/app.39455)。

本发明所述共聚物pdpa的分子量为4-30kda，其中，l-苯丙氨酸的摩尔含量为2％-30％。优选地，共聚物pdpa的分子量为4-5kda，l-苯丙氨酸摩尔含量为5％。更优选地，共聚物pdpa的分子量为7-10kda，l-苯丙氨酸摩尔含量为4.76-25.03％。

在本发明的具体实施方式中，还提供了一种(聚对氧环己酮-co-l-苯丙氨酸，pdpa)/(聚乳酸-羟基乙酸共聚物(poly(lactic-co-glycolicacid)，plga)静电纺丝膜。具体地，在加工pdpa过程中又加入了提供力学支撑的plga组分。

在本发明的优选实施例中，通过静电纺丝方法将式(i)的共聚物pdpa与plga制备成复合静电纺丝膜；其中，plga分子量为200-300kda，plga在复合膜中的分子量分数为20％-30％。单一的pdpa由于受限于其分子量，所制成的膜的力学强度差，因此该单一膜在具体实际应用如手术过程，尤其是腹腔镜手术中难以操作；因此如何实现可应用的抗粘连材料仍是一个难题。而在复合静电纺丝膜中，由于高分子量的plga可为pdpa组分提供一定的力学支撑，使其便于成膜；而且，同时长链plga与pdpa共混纺丝，plga分子链可作为分子链较短的pdpa分子链的物理交联剂，使分子链之间充分缠结，增加其对加工过程中高压电场静电力的抵抗能力。这意味着与单纯pdpa静电纺丝膜相比，构成复合膜的纤维直径更小，纤维堆砌成膜后，膜的孔径也更加小，可有效阻止生物大分子及细胞对膜的渗透，增强防粘连效果。因此，本发明通过静电纺丝方法制备得到的复合静电纺丝膜可用于手术膜，尤其是抗粘结材料的手术膜。

发明人发现本发明分子式(i)共聚物pdpa对由成纤维细胞及其纤维沉积导致的细胞纤维化引起的其他病症具有治疗作用，例如可有效抑制如抗皮肤瘢痕组织增生、反复刺激导致腹壁纤维化、术后腹腔组织粘连发生。并通过sd大鼠和新西兰兔动物实验模型，证明了该共聚物pdpa在抑制细胞增殖领域具有潜在的应用价值，如治疗皮肤瘢痕组织增生、反复刺激导致腹壁纤维化，预防粘连如术后腹腔组织粘连。

另一方面，本发明还提供一种包括分子式(i)的共聚物pdpa在制备治疗细胞纤维化引起的病症的药物中的用途。

具体的，本发明的抗细胞纤维化引起的病症的药物组合物包括分子式(i)的化合物或其可药盐，和可药用辅料或药学上可接受的载体组成。

本发明还提供一种包括分子式(i)的共聚物pdpa在制备治疗由细胞纤维化引起的皮肤瘢痕组织增生的药物中的用途。在治疗皮肤瘢痕组织增生时，本发明化合物能有效抑制大鼠伤口部位参与疤痕组织形成的tgf-β1的分泌及成纤维细胞的增殖，由于可以有效抑制兔耳软骨外至表皮层增厚，从而抑制瘢痕组织的增生，且实验证明其抑制瘢痕组织增生效果优于单独应用l-phe或d-phe。

本发明还提供一种包括分子式(i)的共聚物pdpa在制备治疗由细胞纤维化引起的反复刺激导致腹壁纤维化的药物中的用途。

本发明还提供一种包括分子式(i)的共聚物pdpa在制备治疗由细胞纤维化引起的防粘连材料中的用途，尤其是在制备治疗由细胞纤维化引起的术后腹腔组织粘连发生的药物或材料中的用途。

本发明人还发现分子式(i)化合物的毒性很低。

本发明还提供了一种药物组合物以及该药物组合物在制备治疗细胞纤维化引起的病症的药物中的用途；其中，所述药物组合物含有治疗有效量的上述分子式(i)化合物为活性成分，以及含有一种或多种药学上可接受的载体。

本发明的分子式(i)化合物和所述药物组合物可用于治疗细胞纤维化引起的病症，如用于治疗皮肤瘢痕组织增生、反复刺激导致腹壁纤维化、术后腹腔组织粘连发生的药物。

上述所述药学上可接受的载体是指药学领域常规的药物载体，例如：稀释剂、赋形剂如水等，填充剂如淀粉、蔗糖等；粘合剂如纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮；湿润剂如甘油；吸收促进剂如季铵化合物；表面活性剂如十六烷醇；吸附载体如高岭土；润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙和镁和乙二醇。另外还可以在组合物中加入其它辅剂如甜味剂等。

本发明化合物用于抑制瘢痕增生或抑制反复刺激导致的腹壁纤维化用途时，可以组合物的形式通过局部注射或局部植入的给药方式施用于需要治疗的患者。用于局部注射时可制备成液体制剂如水悬浮剂或其它液体制剂。用于局部植入时可制成常规制剂如片剂、粉剂、粒剂等。用于防止术后组织粘连的用途时以生物膜的形式植入手术部位。

本发明药物组合物的各种剂型可以按照药学领域的常规生产方法制备。例如使活性成分与一种或多种载体组合，然后将其制成所需的剂型。本发明药物组合物优选含有重量比为0.1％-99.5％的活性成分，最优选含有重量比为0.5-95％的活性成分。

本发明化合物的施用量可根据用药途径、患者的年龄、体重、疾病类型和程度等变化，其日剂量可以是0.01-100mg/kg体重，优选0.1-50mg/kg体重，可一次或多次施用。所属领域的技术人员可根据实际情况容易确定给药剂量，如10mg/kg体重。

技术效果

以下将结合附图对本发明的构思、具体结构及产生的技术效果作进一步说明，以充分地了解本发明的目的、特征和效果。

附图说明

图1是本发明的一个较佳实施例中兔耳圆形切口术后四周a)表观愈合概况；b)组织he染色；c)伤口部位不同组别与正常组织对照的瘢痕组织增厚倍数(1.l-phe/百多邦(100mg/5g)、2.l-phe/百多邦(10mg/5g)、3.d-phe/百多邦(100mg/5g)、4.pdpa-5粉末/百多邦(100mg/5g)、5.百多邦对照组、6.空白对照组，*表示p＜0.05)；

图2是本发明的一个较佳实施例中兔耳圆形切口2术后a)不同组别伤口组织he染色结果；b)不同时间不同组别伤口部位与正常组织对照的瘢痕组织增厚倍数(1.术后一周对照组，2.术后一周植入pdpa-5粉末组，3.术后四周对照组，4.术后四周植入pdpa-5粉末组，p＜0.05)；

图3是本发明的一个较佳实施例中大鼠皮肤切口模型a)tgf-β1免疫组化染色结果(1.术后三天对照组，2.术后五天对照组，3.术后七天对照组，4.术后三天实验组，5.术后五天实验组，6.术后七天实验组)；p＜0.05)；b)术后不同时间不同组别大鼠实验部位皮肤tgf-β1免疫组化染色平均光密度统计(第3、5天数据组间数据有显著性差异，p＜0.05)；

图4是本发明的一个较佳实施例中大鼠腹膜增厚模型a)tgf-β1免疫组化染色结果(1-4术后一周空白对照组、脂多糖对照组、pdpa-5对照组、pdpa-5实验组，5-8术后两周空白对照组、脂多糖对照组、pdpa-5对照组、pdpa-5实验组，9-12术后三周空白对照组、脂多糖对照组、pdpa-5对照组、pdpa-5实验组)；

图5是本发明的一个较佳实施例中大鼠腹膜增厚模型a)各组大鼠腹膜平均厚度(he染色测量值，*表示p＜0.05)；b)tgf-β1免疫组化染色平均光密度统计(*表示p＜0.05)(1-4术后一周空白对照组、脂多糖对照组、pdpa-5对照组、pdpa-5实验组，5-8术后两周空白对照组、脂多糖对照组、pdpa-5对照组、pdpa-5实验组，9-12术后三周空白对照组、脂多糖对照组、pdpa-5对照组、pdpa-5实验组)；

具体实施方式

下面通过实施例的方式进一步说明本发明，本发明的范围并不因此局限于下述实施例，而是由本发明的说明书和权利要求书限定。

实施例中主要试剂及仪器

对氧环己酮(成都艾科试剂，分析纯)，l-苯丙氨酸(成都艾科试剂，分析纯)，三聚光气(成都艾科试剂，分析纯)，辛酸亚锡(成都艾科试剂，分析纯)，聚(l-丙交酯-co-乙交酯)(plga，成都艾科试剂，分析纯)核磁共振仪(德国bruker，400m)。

实施例1

pdpa聚合物的制备及表征

表1.pdpa系列聚合物

^agpc方法测定其重均分子量

pdpa聚合物的表征

pdpa聚合的l-苯丙氨酸含量由核磁共振¹hnmr测定，具体¹hnmr见文献(j.appl.polym.sci.2013，doi：10.1002/app.39455)。

聚合物分子量由gpc方法测定(dmf流动相)，结果见表1。

实施例2

各植入材料的制备方法

1)防治瘢痕增生及腹壁纤维化药物的制备方法

合成pdpa-5聚合物后将其溶于氯仿中，搅拌过滤除去不溶物，得到滤液搅拌下慢慢滴入乙醚，沉出聚合物粉末，真空干燥24小时除去残留有机溶剂。所得干燥聚合物粉末即为所用植入药物。

2)防治术后腹腔粘连复合膜的制备方法

将pdpa及plga按照相应质量比溶于六氟异丙醇中，制备成浓度为10％w/v的浓溶液，进行静电纺丝加工制备成多孔纤维膜，制备参数如下：注射速率1ml/h，电压8kv，环境温度30℃，环境相对湿度40％，接收距离10cm。

表2.pdpa/plga系列多孔纤维膜聚合物比例表

实施例3

防治表皮伤口瘢痕增生效果实验

试验的前提条件是，用自然未感染的新西兰兔或sd大鼠进行相关实验测试，将动物随机分组，每组5只，实验组分别连续测试。

1)兔耳内侧皮肤圆形切口1

用圆形钻刀在新西兰兔耳廓内侧皮肤做圆形切口至软骨层，取下所切圆形皮肤，术后一周内每日一次于创面涂抹照实施例2中的方法制备的实施例1中的聚合物pdpa-5粉末/百多邦软膏(将pdpa粉末均匀搅拌至百多邦软膏中，以下各组制法相同)，对照各组为：百多邦软膏、l-苯丙氨酸/百多邦软膏、d-苯丙氨酸/百多邦软膏，不做处理空白对照组。术后四周取兔耳伤口及伤口旁正常组织，福尔马林固定后，石蜡包埋、切片he染色后显微镜下拍照测量伤口及正常组织厚度。测量与伤口周围正常皮肤相比，伤口部位软骨外至表皮层增厚倍数。

结果如图1所示，从兔耳照片及组织he染色结果来看，涂抹聚合物pdpa-5粉末/百多邦软膏后的皮肤并没有影响伤口愈合；术后四周实验组与对照组伤口均被鳞状上皮覆盖，各组软骨至表皮组织出现不同程度增厚。由图1a可知，与空白对照组及百多邦对照组相比，pdpa-5粉末的应用并未影响伤口愈合；由图1c可知，pdpa-5粉末的应用可有效抑制兔耳软骨外至表皮层增厚，抑制瘢痕组织增生，且效果优于单独应用l-phe及d-phe。因此，pdpa聚合物粉末的应用可有效抑制瘢痕组织增生。

2)兔耳内侧皮肤圆形切口2

用圆形钻刀在新西兰兔耳廓内侧皮肤做圆形切口至软骨层，术后于创面应用一次性植入pdpa-5粉末15mg，对照组术后不做处理，术后一、四周分别取兔耳伤口及伤口旁正常组织，福尔马林固定后，石蜡包埋、切片he染色后显微镜下拍照测量伤口及正常组织厚度。测量与伤口周围正常皮肤相比，伤口部位软骨外至表皮层增厚倍数。

在图2中，a1.术后一周对照组，a2.术后一周植入pdpa-5粉末组，a3.术后四周对照组，a4.术后四周植入pdpa-5粉末组。由图2a)可知，实验组与对照组伤口部位在术后一周即被鳞状上皮组织覆盖，pdpa-5粉末的植入并未影响伤口愈合。与对照组相比，实验组伤口部位由软骨至表皮组织出现不同程度增厚，但是实验组的增厚程度显著小于对照。第四周，急性水肿期过后，组织增厚程度有所减弱，但实验组增厚仍小于对照组。因此，pdpa-5粉末的植入可以有效抑制兔耳伤口处软骨外至表皮层增厚及疤痕增生。由图2b可知，pdpa聚合物粉末的应用可有效抑制瘢痕组织增生。

3)大鼠背部皮肤切口

sd大鼠背部做长1cm切口，深至筋膜层，实验组于创面应用pdpa-5粉末，对照组术后不做处理，术后第3、5、7天处死大鼠，取伤口部位固定后石蜡包埋，切片，选择成纤维细胞标记物c抗体对标本切片进行免疫组化染色、拍摄高倍照片，应用imagejproplus对各组图片进行光密度测量并统计。

结果如图3所示：在成纤维细胞大量增殖的术后第3、5天，与对照组相比实验组tgf-β1抗体免疫组化着色明显变浅，对免疫组化图像进行平均光密度统计后，也得出和上述结果一致的结论，即在术后第3、5天实验组免疫组化图像平均光密度显著低于对照组。说明pdpa-5粉末的应用可有效抑制伤口部位参与疤痕组织形成的tgf-β1的分泌及成纤维细胞的增殖，从而抑制瘢痕组织的增生。由图3b可知，pdpa聚合物粉末的应用可有效减少伤口部位成纤维细胞的增殖，从而抑制瘢痕组织的增生。

实施例4

预防腹膜刺激引起的腹膜增厚(纤维化)

沿180-220gsd大鼠腹中线切开约4cm暴露腹腔，pdpa-5粉末实验组及pdpa-5粉末对照组于术中在腹腔内分别放置pdpa-5粉末15mg，空白对照组及pdpa-5粉末对照组分别注射生理盐水2ml，缝合腹壁及皮肤，脂多糖对照组及pdpa-5粉末实验组，于手术后的第1、3、5、7天向大鼠腹腔注射细菌内毒素(脂多糖)，空白对照组及pdpa-5粉末对照组注射生理盐水，术后第1、2、3周后取大鼠腹壁及肠壁组织固定、石蜡包埋、切片后进行he染色及对术后一周腹壁组织进行tgf-β1抗体免疫组化染色(如图4所示)，并统计各组大鼠腹膜组织厚度及免疫组化单位面积光密度，结果如图5所示。

由图4可以看出，术后第1周与空白对照组相比脂多糖对照组大鼠腹膜组织明显增厚，而pdpa-5对照组及pdpa-5实验组大鼠腹膜组织也有不同程度增厚。术后第2、3周，随着pdpa-5降解，l-苯丙氨酸被释出，与脂多糖对照组大鼠相比，pdpa-5对照组与实验组大鼠腹壁组织厚度显著下降，说明在术后第2周，pdpa-5开始发挥其抗纤维化作用。

由图5可知，对各组大鼠腹膜组织he图像进行厚度统计后，可知pdpa-5粉末的应用从术后第2周开始有效地抑制了反复腹膜刺激引起的腹膜纤维化及增厚。对各组大鼠腹膜组织进行tgf-β1免疫组化染色后对图像进行平均光密度测定并统计。pdpa-5实验组大鼠腹膜组织tgf-β1着色平均光密度显著低于各对照组，脂多糖对照组着色平均光密度最大，表明，反复脂多糖刺激导致了腹膜纤维化。pdpa-5实验组大鼠腹膜组织厚度小于pdpa-5对照组是实验组大鼠注射脂多糖带来的炎症反应加速了pdpa-5的降解，从而使pdpa-5实验组组织局部有效成分浓度大于对照组所致。综上可知，pdpa-5粉末的应用有效地限制了成纤维细胞的增殖及tgf-β1的分泌，即pdpa-5粉末的应用有效地抑制了反复刺激腹膜引起的腹膜纤维化及增厚。

实施例5

pdpa复合静电纺丝纤维膜预防术后腹腔粘连

sd大鼠麻醉后开腹，用手术刀刮去盲肠浆膜层(1cm×1cm)，将盲肠旁系膜用可吸收线固定于腹壁相应位置，在盲肠损伤对应腹壁位置用手术刀刮去腹壁浆膜层(1cm×1cm)，于盲肠创面及腹壁创面上各放置一张(直径1.5cm)pdpa复合静电纺丝纤维膜，关腹。一周后开腹查看腹腔情况，可以明显观察到，未使用pdpa复合静电纺丝纤维膜的对照组大鼠盲肠组织与相应腹壁组织发生严重粘连，而应用pdpa复合静电纺丝纤维膜的实验各组大鼠在纤维膜的阻隔及生物学作用下，盲肠组织与相应腹壁组织仍是相互游离状态，未发生粘连。由此可见，pdpa/plga静电纺丝膜可有效防止腹腔粘连。

以上详细描述了本发明的较佳具体实施例。应当理解，本领域的普通技术无需创造性劳动就可以根据本发明的构思作出诸多修改和变化。因此，凡本技术领域中技术人员依本发明的构思在现有技术的基础上通过逻辑分析、推理或者有限的实验可以得到的技术方案，皆应在由权利要求书所确定的保护范围内。