一种用于治疗骨性关节炎的中药制剂的制作方法

本发明属于中药
技术领域：
，尤其涉及一种用于治疗骨性关节炎的中药制剂，特别是治疗骨性关节炎和增生性关节炎引起的疼痛、肿胀、麻木、关节屈伸不利、关节僵硬、畸形病证的中药制剂。
背景技术：
：骨性关节炎是一种常见疾病，多发于中年以后，属中医痹病—骨痹范畴。痹病由风寒湿等外邪侵袭人体，痹阻经络，气血运行不畅所导致，以关节的疼痛、肿胀、麻木、关节屈伸不利、甚则关节僵硬、畸形为主要临床表现。肝主筋，肾主骨，女子六七、男子六八，虚衰之象渐显，“肝气衰，筋不能动”，“肾脏衰，形体皆极”临床可见筋急而挛，动作牵强，或痿软而无力。是以本病实为本虚标实之证。本虚，病在筋骨，本在肝肾亏虚，筋骨失养；标实，腠理空虚，风寒湿邪闭阻经络，发为痹痛。国家中医药管理局“十一五”骨痹(骨关节炎)诊疗方案临床验证总结报道，320例患者中，寒湿阻络证为53例,湿热阻络证为50例，肝肾亏虚证为196例,气血两虚证为21例，表明本虚标实，肝肾亏虚，是本病的主要病机。临床上中医治疗骨性关节炎分为内治法和外治法，其中内治法以中药内服为主，临床常见内服中药组方较为复杂，药味数量较多，煎煮方法较繁，药品成本较大。因此，进一步研究原料少，针对性强的中药组合物，显得尤为重要。技术实现要素：针对上述问题，本发明提供一种用于治疗骨性关节炎的中药制剂，特别是治疗骨性关节炎和增生性关节炎引起的疼痛、肿胀、麻木、关节屈伸不利、关节僵硬、畸形病证。该中药制剂原料少、疗效较好、针对性强、临床应用效果显著。为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：该中药制剂的原料药按重量份数组成为：鹿角8-13份，牛膝8-12份，青风藤8-12份，穿山龙10-15份，炒白芍8-13份。所述的制剂为丸剂、散剂、合剂、崩解片或分散片等临床可接受的药物制剂。所述中药制剂的制备方法，包括以下步骤：将上述原料按重量份数配比称取后，加水煎煮，按药物总重量的8倍加入水，煎煮2次，每次1.5小时，滤过，合并滤液，浓缩后，加入临床上药物制剂可接受的辅料制成所需剂型即可。各原料的药性分析。鹿角：咸、温，归肾、肝经；具有温肾阳，强筋骨，行血消肿之功效。青风藤：苦、辛、平，归肝、脾经；具有祛风湿，通经络之功效。牛膝：苦、甘、酸、平，归肝、肾经；具有补肝肾，强筋骨，逐瘀通经之功效。穿山龙：甘、苦、温，归肝、肾、肺经；具有祛风除湿，舒筋通络，活血止痛之功效。白芍：酸、苦、微寒，归肝、脾经；具有养血调经，柔肝止痛之功效。本发明的药方配伍明确，药味之间相辅相成；其中，鹿角味咸温归肝肾经，温肾阳，强筋骨，行血消肿的作用，为君药。牛膝味苦酸平归肝经，具有补肝肾、强筋骨、逐瘀通经的作用；青风藤苦辛平，归肝、脾经，具有祛风湿，通经络的作用；二者辅助鹿角治疗骨痹之腰膝酸痛，筋骨无力，关节肿胀，肢体麻痹等症，是为臣药。穿山龙甘苦温，归肝、肾、肺经，具有祛风除湿，舒筋通络，活血止痛的作用；白芍酸苦微寒，归肝、脾经，具有养血调经，柔肝止痛的作用；二者辅助君臣三药，用于治疗骨痹之关节肿胀，疼痛麻木，四肢挛痛等症，是为佐药。牛膝可引血下行，兼为使药。诸药合用，可补肝肾，强筋骨，祛风除湿，活血止痛，共奏宣痹通络，逐瘀通经之效。本发明的有益效果。本发明以肝肾亏虚，经络痹阻为病机，以古典经方“鹿角”丸为基础，根据辽宁中医药大学附属医院骨科专家治疗骨性关节炎多年临床经验，不断调整药物剂量，加味而成，总结出的临床经验方；系由纯中药制成的由骨性关节炎和增生性关节炎引起的疼痛、肿胀、麻木、关节屈伸不利、关节僵硬、畸形等病证的有效药物；并且通过动物实验证明具有显著的镇痛、抗炎作用。鹿角丸，出自宋·严用和《济生方》。该书载：“治骨虚极，面肿垢黑，脊痛不能久立，气虚发落齿槁，腰脊痛，甚则喜唾。鹿角二两，川牛膝一两半。上为细末，炼蜜为丸，如梧桐子大，每服七十丸，空心盐汤送下”。本方中鹿角补肝肾、强筋骨入肝肾经为君药；牛膝补肝肾强筋骨、逐瘀通经，与青风藤祛风湿，通经络共为臣药，助鹿角治疗骨痹之腰膝酸痛，筋骨无力，关节肿胀，肢体麻痹等症。《神农本草经》记载牛膝：“味苦、酸，主寒湿痰痹，四肢拘挛，膝痛不可屈伸，逐血气，伤热火烂，堕胎”。《本草汇言》记载：“青风藤，散风寒湿痹之药也，能舒筋活血，正骨利髓，故风病软弱无力，并劲强偏废之证，久服常服，大建奇功”；穿山龙祛风除湿，舒筋通络，活血止痛；白芍养血调经，柔肝止痛；二者辅助君臣三药，用于治疗骨痹之关节肿胀，疼痛麻木，四肢挛痛等症，是为佐药。《东北药植志》记载穿山龙：“舒筋活血，治腰腿疼痛，筋骨麻木”；《神农本草经》谓白芍：“除血痹，破坚积，寒热疝瘕，止痛”。牛膝可引血下行，兼为使药。五味药合用，抓住本病肝肾亏虚的本质，共奏补肝肾强筋骨、通络止痛之功。现代药理学表明，鹿角具有减少软骨基质的破坏，促进软骨细胞增殖的作用；牛膝在抗炎、镇痛等方面发挥重要作用；青风藤可以抑制tnf-α和il-1βmrna表达水平；穿山龙可以清除炎性细胞，以减轻滑膜细胞的炎症反应和组织破坏；白芍可以缓解疼痛症状。从药理学分析，五味中药主要在调节并抑制相关炎性因子生成等方面发挥抗炎、镇痛的作用。附图说明图1本发明的中药制剂对前交叉韧带离断大鼠骨关节炎he染色结果。图2本发明的中药制剂对前交叉韧带离断大鼠骨关节炎masson染色结果。图3本发明的中药制剂对前交叉韧带离断大鼠骨关节炎甲苯胺蓝染色结果。图4本发明的中药制剂对木瓜蛋白酶+半胱氨酸诱导大鼠骨关节炎he染色结果。图5本发明的中药制剂对木瓜蛋白酶+半胱氨酸诱导大鼠骨关节炎masson染色结果。图6本发明的中药制剂对木瓜蛋白酶+半胱氨酸诱导大鼠骨关节炎甲苯胺蓝染色结果。具体实施方式下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。实施例1。该中药合剂的原料药按重量份数组成为：鹿角10份，牛膝12份，青风藤10份，穿山龙15份，炒白芍10份。所述中药合剂的制备方法，包括以下步骤：将上述原料按重量份数配比称取后，加水煎煮，按药物总重量的8倍加入水，煎煮2次，每次1.5小时，滤过，合并滤液，浓缩至原混合物体积的五分之一，即可。一、实验方法。(一)本发明中药制剂对前交叉韧带离断致大鼠骨关节炎的保护作用研究。1、分组与造模。取180g～220g大鼠112只，雌雄各半，每组16只，随机分为7组，分别为：(1)正常对照组：蒸馏水1ml/100g/d；(2)模型组:蒸馏水1ml/100g/d；(3)实施例1的中药制剂低剂量组：5g生药/kg/d；(4)实施例1的中药制剂中剂量组：15g生药/kg/d；(5)实施例1的中药制剂高剂量组：50g生药/kg/d；(6)中药阳性对照组：壮骨关节丸，1.2g/kg/d；(7)西药阳性对照组：双醋瑞因，0.01g/kg/d。造模方法：大鼠仰卧位固定于木板上，剪去所要注射的膝关节腔周边1cm区域的腿毛，络合碘消毒；右膝髌旁内侧切口，逐层打开关节腔，将髌骨向外侧推使之脱位，膝关节处于最大屈曲状态，暴露关节腔，剪断前交叉韧带；正常对照组打开关节腔后不剪断前交叉韧带；各治疗组连续给予上述每组所对应给予的药物8周，灌胃给药，2次/日。2、光镜下观察膝关节表面损伤程度评分。给药8周后24h，实验动物全部麻醉处死，分离膝关节，暴露关节面，进行观察，观察关节面的完整度和损坏程度，评分标准如下：0分-关节面光整，色泽如常；1分-关节面粗糙，有小的裂隙且色泽灰暗；2分-软骨缺损深达软骨中层；3分-关节面溃疡形成，软骨缺损深达软骨深层；4分-软骨剥脱，软骨下骨质裸露；结果见表1。表1光镜下膝关节表面损伤程度评分。结果显示，离断模型组的评分高于正常对照组，p<0.01，表明该实验模型组造模成功，实施例1各剂量组与离断模型组比较，均有统计学意义，p<0.01，且实施例1高剂量组与西药阳性对照药双醋瑞因比较有统计学意义，p<0.05；可见，本发明的中药制剂对前交叉韧带离断大鼠膝关节炎具有保护作用。3、病理形态学检测方法。标本切取后立即投入10％甲醛固定48h，后入10％甲酸溶液浸泡，连续脱钙12d，至组织完全脱钙；蒸馏水浸泡，常规脱水、透明、浸蜡、包埋、切片6μm保存备用，进行he，masson，甲苯胺蓝染色，并做相应评分。3.1he染色：切片经过二甲苯梯度脱蜡，苏木精浸染5min，水洗，再入伊红浸染5min，水洗，二甲苯透明，中性树胶封固。结果见图1，其中1-正常对照组、2-离断模型组、3-壮骨关节丸组、4-双醋瑞因组、5-低剂量组、6-中剂量组、7-高剂量组。3.2masson染色：bounin固定液固定48h，经30％甲酸脱钙48h,全部标本按常规石蜡切片程序处理，7um厚度切片，切片移至水洗,入ph6.0的醋酸-醋酸钠缓冲液浸渍30min(37℃)，移入浓度为0.5％的透明质酸酶消化6h，经水洗后,切片入2mol/l氯化钙液浸洗48h，再经水洗后做masson染色，weigert苏木素a和weigert苏木素b等比混合，染色10min，蒸馏水洗1min，masson复合染色液染色15min，蒸馏水稍冲洗，1％磷钼酸液处理5min，苯胺蓝染色液复染5min，1％冰醋酸水处理1min，脱水透明封片。结果见图2，其中1-正常对照组、2-离断模型组、3-壮骨关节丸组、4-双醋瑞因组、5-低剂量组、6-中剂量组、7-高剂量组。3.3甲苯胺蓝染色：甲苯胺蓝染液30min，自来水冲洗，冰醋酸分化至胞核清晰，分化时间不易过长否则容易导致分化过度，再次自来水冲洗，风干后二甲苯透明，中性树胶封固。结果见图3，其中1-正常对照组、2-离断模型组、3-壮骨关节丸组、4-双醋瑞因组、5-低剂量组、6-中剂量组、7-高剂量组。根据以上三种方法的染色，进行软骨结构、数量、基质等方面的评分，评分标准如下，见表2。表2软骨结构、数量、基质等方面的评分标准。评分结果如表3。表3he、masson、甲苯胺蓝染色病理学评分及综合评分结果。与正常组比较*p<0.05,**p<0.01,与离断模型组比较#p<0.05,##p<0.01,与壮骨关节丸组比较δp<0.05,δδp<0.01。离断模型组的三种染色评分及综合评分高于正常对照组，均p<0.01，表明该实验模型组造模成功，实施例1各剂量组的综合评分与离断组比较，均有统计学意义，均p<0.01，且低中剂量组与壮骨关节丸组比较有统计学意义，p<0.01。可见本发明的中药制剂对前交叉韧带离断大鼠膝关节炎具有保护作用。4、实施例1对离断前交叉韧带大鼠血清il-1β、tnf-α、pge2含量的影响。给药8周后24h，实验动物全部麻醉，股动脉取血，3000转/min，10min，取上清进行实验，按il-1β、tnf-α、pge2试剂盒说明操作，实验结果如表4。表4大鼠血清il-1β、tnf-α、pge2含量检测结果。组别剂量(g/kg)只数il-1β(ng/l)tnf-α(ng/l)pge2(ng/l)正常组---1015.18±2.3067.83±13.27605.25±52.53离断组---1019.72±3.68**92.45±19.23**668.90±71.71*低剂量组51014.27±3.17##81.49±17.67595.02±59.18#中剂量组151016.36±3.52##80.50±14.84653.98±104.08高剂量组501015.78±2.48##91.31±16.02648.78±80.22壮骨关节丸组1.21015.94±2.45##89.59±16.05643.61±75.71双醋瑞因组0.011015.07±2.77##92.28±24.02574.63±67.47#结果显示，模型组il-1β、tnf-α、pge2含量与正常组比较均升高，表明该实验模型组造模成功，实施例1对血清il-1β具有减少作用，p<0.01，对血清tnf-α、pge2含量不显著，只有低剂量组减少了血清pge2含量，有统计学差异，p<0.05。与正常组比较*p<0.05，**p<0.01，与模型组比较δp<0.05，δδp<0.01。(二)本发明的中药制剂对木瓜蛋白酶+半胱氨酸诱导大鼠骨关节炎的保护作用研究。1分组与造模。取180～220g大鼠112只，雌雄各半，每组16只，随机分为7组，分别为：(1)正常对照组：蒸馏水1ml/100g/d；(2)模型组:蒸馏水1ml/100g/d；(3)实施例1中药制剂的低剂量组：5g生药/kg/d；(4)实施例1中药制剂的中剂量组：15g生药/kg/d；(5)实施例1中药制剂的高剂量组：50g生药/kg/d；(6)中药阳性对照组：壮骨关节丸，1.2g/kg/d；(7)西药阳性对照组：双醋瑞因，0.01g/kg/d。造模方法：配制4％木瓜蛋白酶和0.3m半胱氨酸的造模液，仰卧位固定于木板上，剪去所要注射的膝关节腔周边1cm区域的腿毛，络合碘消毒。将大鼠膝关节屈曲45°以髌骨下极白色髌腱外缘的膝眼为进针点，向髁间窝方向穿刺进针，抵达股骨髁后回撤2mm，关节腔内缓慢注射0.1ml。正常对照组注射等体积的生理盐水。各药物治疗组连续给予上述药物6周，灌胃给药，2次/日。2、光镜下观察膝关节表面损伤程度评分。给药6周后24h，实验动物全部麻醉处死，分离膝关节，暴露关节面，进行观察，观察关节面的完整度和损坏程度，评分标准如下：0分-关节面光整，色泽如常；1分-关节面粗糙，有小的裂隙且色泽灰暗；2分-软骨缺损深达软骨中层；3分-关节面溃疡形成，软骨缺损深达软骨深层；4分-软骨剥脱，软骨下骨质裸露。结果见表5。表5光镜下膝关节表面损伤程度评分。结果显示，木瓜蛋白酶+半胱氨酸组的评分高于正常对照组，p<0.01，表明该实验模型组造模成功，实施例1各剂量组与木瓜蛋白酶+半胱氨酸组比较，均有统计学意义，p<0.01，中药阳性对照药壮骨关节丸组与西药阳性对照药双醋瑞因与木瓜蛋白酶+半胱氨酸组比较有统计学意义，p<0.05。可见本发明对木瓜蛋白酶+半胱氨酸诱导的大鼠膝关节炎具有保护作用。与正常组比较*p<0.05,**p<0.01,与木瓜蛋白酶+半胱氨酸组比较#p<0.05,##p<0.01。3、病理形态学检测方法。标本切取后立即投入10％甲醛固定48h，后入10％甲酸溶液浸泡，连续脱钙12d，至组织完全脱钙。蒸馏水浸泡，常规脱水、透明、浸蜡、包埋、切片6μm保存备用，进行he，masson，甲苯胺蓝染色，并做相应评分。3.1he染色：切片经过二甲苯梯度脱蜡，苏木精浸染5min，水洗，再入伊红浸染5min，水洗，二甲苯透明，中性树胶封固。结果如图4，其中1-正常对照组；2-木瓜蛋白酶+半胱氨酸组；3-壮骨关节丸组；4-双醋瑞因组；5-低剂量组；6-中剂量组；7-高剂量组。3.2masson染色：bounin固定液固定48h,经30％甲酸脱钙48h,全部标本按常规石蜡切片程序处理,7um厚度切片,切片移至水洗,入ph6.0的醋酸-醋酸钠缓冲液浸渍30min(37℃),移入浓度为0.5％的透明质酸酶消化6h,经水洗后,切片入2mol/l氯化钙液浸洗48h,再经水洗后做masson染色,weigert苏木素a和weigert苏木素b等比混合，染色10min，蒸馏水洗1min，masson复合染色液染色15min，蒸馏水稍冲洗，1％磷钼酸液处理5min，苯胺蓝染色液复染5min，1％冰醋酸水处理1min，脱水透明封片。结果如图5，其中1-正常对照组；2-木瓜蛋白酶+半胱氨酸组；3-壮骨关节丸组；4-双醋瑞因组；5-低剂量组；6-中剂量组；7-高剂量组。3.3甲苯胺蓝染色：甲苯胺蓝染液30min，自来水冲洗，冰醋酸分化至胞核清晰，分化时间不易过长否则容易导致分化过度，再次自来水冲洗，风干后二甲苯透明，中性树胶封固。结果如图6，其中1-正常对照组；2-木瓜蛋白酶+半胱氨酸组；3-壮骨关节丸组；4-双醋瑞因组；5-低剂量组；6-中剂量组；7-高剂量组。根据以上三种方法的染色，进行软骨结构、数量、基质等方面的评分，评分标准如表6。表6软骨结构、数量、基质等方面的评分标准。评分结果见表7。表7he、masson、甲苯胺蓝染色病理学评分及综合评分结果。与正常组比较*p<0.05,**p<0.01,与模型组比较#p<0.05,##p<0.01。木瓜蛋白酶+半胱氨酸组的三种染色评分及综合评分高于正常对照组，均p<0.01，表明该实验模型组造模成功，实施例1各剂量组的甲苯胺蓝和综合评分与木瓜蛋白酶+半胱氨酸组比较，均有统计学意义，均p<0.01，中高剂量组与木瓜蛋白酶+半胱氨酸组的he染色评分比较有统计学意义，p<0.01。中西阳性药在各个染色评分与木瓜蛋白酶+半胱氨酸组比较均有统计学意义，p<0.05，p<0.01，可见本发明的中药制剂对木瓜蛋白酶+半胱氨酸组大鼠膝关节炎具有保护作用。4.实施例1对木瓜蛋白酶+半胱氨酸诱导膝关节炎大鼠血清il-1β、tnf-α、pge2含量的影响。给药6周后24h，实验动物全部麻醉，股动脉取血，3000转/min，10min，取上清进行实验，按il-1β、tnf-α、pge2试剂盒说明操作，实验结果如表8。表8大鼠血清il-1β、tnf-α、pge2含量检测结果。结果显示，木瓜蛋白酶+半胱氨酸组il-1β、tnf-α含量与正常组比较均升高，表明该实验模型组造模成功，中剂量组对血清il-1β具有减少作用，p<0.01，对血清tnf-α、pge2含量不显著，中剂量组与木瓜蛋白酶+半胱氨酸组比较，血清il-1β含量降低，p<0.05，中剂量组与木瓜蛋白酶+半胱氨酸组比较，血清il-1β含量降低，p<0.05，高剂量组与木瓜蛋白酶+半胱氨酸组比较，血清tnf-α含量降低，p<0.01，且与壮骨关节丸组比较，血清tnf-α含量降低，p<0.05。与正常组比较*p<0.05,**p<0.01,与模型组比较#p<0.05,##p<0.01,与壮骨关节丸组比较δp<0.05,δδp<0.01。实施例2。该中药制剂的原料药按重量份数组成为：鹿角8份，牛膝8份，青风藤12份，穿山龙13份，炒白芍8份。实施例3。该中药制剂的原料药按重量份数组成为：鹿角13份，牛膝10份，青风藤8份，穿山龙10份，炒白芍13份。二、典型病例。病例1：余某，男，56岁；主诉：左膝关节疼痛1年，加重半个月。现症见：左膝关节疼痛，疼痛呈刺痛，痛有定处，舌质暗，苔白，脉弦；无既往史；无过敏史；专科检查：左膝肿胀(-)，内外侧关节间隙压痛(+)，活动受限(+)，浮髌试验(-)，麦氏征(-)，前后抽屉试验及侧向应力试验(-)；影像学检查：左膝关节正侧位片示内侧关节间隙狭窄，组成骨不同程度骨质增生；中医诊断：痹症(血瘀气滞证)，西医诊断：左膝骨性关节炎；治法方药：实施例1的制剂14剂，每日两次口服，服药后左膝疼痛症状明显好转。病例2：张某，女，63岁；主诉：右膝关节肿胀疼痛3个月，加重伴关节僵硬4天；现症见：右膝关节肿胀疼痛，腰膝酸软，舌质红，苔白，脉沉细；既往史：糖尿病病史5年，自服二甲双胍缓释片，血糖控制稳定；无过敏史；专科检查：右膝肿胀(+)，外侧关节间隙压痛(+)，活动受限(++)，浮髌试验(-)，麦氏征(-)，前后抽屉试验及侧向应力试验(-)，右足五趾功能活动及皮肤感觉正常；中医诊断：痹症消渴(肝肾亏虚证)西医诊断：右膝骨性关节炎2型糖尿病；治法方药：实施例2的制剂14剂，日两次口服，服药后右膝疼痛症状减轻，又服14剂，症状较前明显好转。病例3：刘某，男，59岁；主诉：双膝关节疼痛6个月，加重2天；现症见：双膝关节疼痛，疼痛呈刺痛，痛有定处，日轻夜重，舌质暗苔白，脉弦；无既往史；无过敏史；专科检查：双膝肿胀(-)，左膝外侧关节间隙压痛(+)，右膝内侧关节间隙压痛(+)，活动受限(+)，浮髌试验(-)，麦氏征(-)，前后抽屉试验及侧向应力试验(-)，双足五趾功能活动及皮肤感觉正常，末梢血循良。影像学检查：双膝关节正侧位片示左膝内侧髁间嵴变尖，髌上韧带骨化；右膝关节外侧间隙变窄，组成骨不同程度骨质增生；中医诊断：痹症(血瘀气滞证)，西医诊断：双膝骨性关节炎治法方药：实施例3的制剂20剂，日两次口服。服药后左膝疼痛症状减轻，右膝改善不明显，又服15剂，右膝疼痛症状较前明显好转。病例4：严某，女，53岁，主诉：腰部疼痛，活动受限3年，加重10天。现症见：腰部疼痛，痠软，腿膝无力，遇劳加重，反复发作，舌淡，脉沉细。无既往史；无过敏史；专科检查：腰部生理曲度变直，腰4-骶1棘突及旁开1.5cm处压痛(+)，左直腿抬高试验50°(+)，右直腿抬高试验70°(-)，加强试验(-)，坐骨神经牵拉试验(-)，“4”字试验(-)，巴氏征(-)，双下肢肌力、皮肤感觉正常及五趾功能活动正常。影像学检查：腰部ct示腰4-5、腰5-骶1椎间盘突出。中医诊断：腰痛病(肝肾亏虚证)，西医诊断：腰椎间盘突出症。治法方药：实施例1的制剂14剂，日两次口服。服药后症状减轻，又服14剂，症状明显好转。当前第1页12