枸杞水煎液在制备治疗海洛因视网膜组织损伤药物中的用途的制作方法

本发明涉及一种中药水煎液，尤其涉及一种枸杞水煎液在制备治疗海洛因视网膜组织损伤药物中的用途。

背景技术：

海洛因即二乙酰吗啡，是一种严重危害生命的阿片类物质，极易透过血脑屏障与中枢神经系统和周围组织中的阿片受体结合，具有较强的镇痛作用，并对中枢神经有强烈的激动作用，如果长期使用或使用不当，会产生严重的药物依赖，过度兴奋中枢神经系统，干扰机体抗氧化系统的平衡和相关特异蛋白的正常表达，对机体组织结构有病理性损伤。因此，研究中草药对动物或人体的保护作用，研发对机体无毒副作用和抗药物损伤的中药制剂，对于医学事业的发展具有重要意义。

目前，海洛因等兴奋剂滥用、乱用现象较普遍，不良反应事件屡有发生，严重影响人类健康和社会稳定。现国内外普遍使用美沙酮、可乐定等药用来消除兴奋剂成瘾或戒断症状，但这些药物本身存在着一定的成瘾性和耐药性问题，因此选取毒副作用小、依赖性小及耐药性小的中药，对于减少或降低兴奋性药物对机体组织器官造成的损伤具有重要意义。目前还没有特殊疗效的抗海洛因视网膜组织损伤的中药物。

技术实现要素：

本发明提供一种抗海洛因视网膜组织损伤的枸杞水煎液，以达到抗海洛因损伤、保护组织细胞、促进组织细胞修复的目的。

为此，所采用的技术方案为：

枸杞水煎液在制备治疗海洛因视网膜组织损伤药物中的用途。

含生药量为0.2~0.4g/ml的枸杞水煎液在制备治疗海洛因视网膜组织损伤药物中的用途。

本发明的生产制备工艺简单，易于规模化生产；枸杞药食兼用，无污染，投资少，药物价廉，取材方便；毒理学实验未发现有毒副反应；对海洛因视网膜组织损伤有显著的保护作用。

枸杞水煎液可提高组织细胞的sod活力，抑制细胞脂质过氧化和炎症反应，抑制细胞inos活性，减弱组织结构损伤，减小bax、caspase-3、tnf-α、nf-κb蛋白的表达，增加细胞活力，具有抗氧化、抗炎和保护视网膜等作用，能有效减缓或减轻海洛因对视网膜组织的损伤。

附图说明

图1为本发明小鼠视网膜组织结构的变化；

gcl.节细胞层，inl.内核层，onl.外核层；rcl.视锥视杆层；↑.神经节细胞空泡化；*.内核层疏松紊乱；※.外核层疏松紊乱；he染色，标尺=25μm（下同）

a.空白对照组15d小鼠视网膜组织结构，视网膜组织结构完整，各层细胞清晰可见；

b.实验对照组15d小鼠视网膜组织结构，gcl层神经节细胞减少并出现空泡样变性，inl和onl结构紊乱、疏松成网状；

c-d.枸杞1，2组15d小鼠视网膜组织结构，视网膜组织损伤明显改善，视网膜gcl层空泡化减轻，inl和onl层排列较为整齐、紧密。

图2为本发明小鼠视网膜组织bax蛋白表达的变化；

a.空白对照组15d小鼠视网膜组织bax蛋白的表达；

b.实验对照组15d小鼠视网膜组织bax蛋白的表达；

c-d.枸杞1，2组15d小鼠视网膜组织bax蛋白的表达．

图3为本发明小鼠视网膜组织caspase-3蛋白表达的变化

a.空白对照组15d小鼠视网膜组织caspase-3蛋白的表达；

b.实验对照组15d小鼠视网膜组织caspase-3蛋白的表达；

c-d.枸杞1，2组15d小鼠视网膜组织caspase-3蛋白的表达．

图4为本发明小鼠视网膜组织tnf-α蛋白表达的变化

a.空白对照组15d小鼠视网膜组织tnf-α蛋白的表达；

b.实验对照组15d小鼠视网膜组织tnf-α蛋白的表达；

c-d.枸杞1，2组15d小鼠视网膜组织tnf-α蛋白的表达．

图5为本发明小鼠视网膜组织nf-κb蛋白表达的变化；

a.空白对照组15d小鼠视网膜组织nf-κb蛋白的表达；

b.实验对照组15d小鼠视网膜组织nf-κb蛋白的表达；

c-d.枸杞1，2组15d小鼠视网膜组织nf-κb蛋白的表达．

具体实施方式

下面结合实施例进一步说明本发明。

本发明药液的制备方法

按照传统中药煎剂制备方法，取宁夏枸杞100g，加水1l浸泡1h后煮沸30min，滤过药汁，药渣再加水煎煮30min滤过药汁，合并两次药液，再用旋转蒸发仪将该煎剂浓缩制成0.2~0.4g/ml的生药水煎液用于以下试验。

枸杞水煎液对海洛因视网膜损伤的保护作用

选出生10d的昆明小鼠120只，随机分为空白对照组、实验对照（海洛因）组和枸杞水煎液（海洛因+枸杞）1、2组。实验对照组和枸杞水煎液1、2组采用递增剂量（2.0g/l、3.0g/l、4.0g/l）海洛因溶液连续（1~5d，6~10d，11~15d）腹腔注射15d，每次注射0.2ml(每天两次)，注射海洛因1h后，枸杞水煎液1、2组再分别灌胃0.2g/ml、0.4g/ml的枸杞水提液，实验对照组灌胃等量的生理盐水，空白对照组腹腔注射和灌胃等量的生理盐水。在实验5d、10d和15d时，处死各组小鼠，用比色法检测小鼠视网膜组织超氧化物歧化酶（sod）、诱导型一氧化氮合酶（inos）活性和丙二醛（mda）含量及血浆血浆谷胱甘肽（gsh）含量和乳酸脱氢酶（ldh）活性，用石蜡包埋法和he染色法观察小鼠视网膜组织结构的病理变化，用免疫组织化学法检测小鼠视网膜组织bax、caspase-3、tnf-α、nf-κb蛋白表达量的变化，用image-proplus6.0图像分析软件检测bax、caspase-3、tnf-α、nf-κb蛋白在小鼠视网膜组织中阳性反应产物的平均光密度，实验数据用spss13.0进行统计分析，结果以平均值±标准差(mean±sd)表示，研究枸杞水煎液对海洛因致视网膜组织损伤的影响。实验发现实验对照组小鼠视网膜组织sod活性极显著降低(p<0.01)，inos活性和mda含量极显著升高(p<0.01)；血浆gsh含量极显著降低(p<0.01)，ldh活性显著升高(p<0.01或p<0.05)；视网膜组织病理性损伤明显，节细胞层（gcl）细胞减少并出现空泡样变性，内核层（inl）和外核层（onl）结构紊乱、疏松成网状，染色不均匀；视网膜组织bax、caspase-3、tnf-α、nf-κb蛋白阳性表达的平均光密度值明显增大，染色加深(p<0.01或p<0.05)。枸杞（海洛因+枸杞）1、2组小鼠视网膜组织sod活性又升高，inos活性和mda含量降低，10d、15d时差异显著或极显著(p<0.01或p<0.05)；视网膜组织损伤有明显改善，视网膜gcl层空泡化减轻，inl和onl层排列较为整齐、紧密，染色较均匀；血浆gsh含量又升高，ldh活性降低，10d、15d时差异显著(p<0.05或p<0.01)；视网膜组织bax、caspase-3、tnf-α、nf-κb蛋白阳性表达的平均光密度值明显减小，染色减弱(p<0.01或p<0.05)。结果见图1~5，表1~3。

综上所述，枸杞水煎液能有效提高组织细胞的抗氧化活性，减少自由基对视网膜组织细胞的损伤，增加细胞膜稳定性，促进视网膜组织细胞代谢，抑制或中和炎性因子的活性，能明显降低海洛因致损伤小鼠血浆ldh活性和视网膜组织丙二醛（mda）含量（表1，2），明显减轻视网膜组织细胞变性（图1），抑制或减少bax、caspase-3、tnf-α、nf-κb蛋白在视网膜组织细胞中的表达（图2，3，4，5，表3），增加细胞活力，从而减轻海洛因所致的组织损伤和细胞凋亡。同时，枸杞水煎液还具有安全、无依赖、无毒的作用。