本发明涉及一种猫爪草抗肿瘤成分的制备方法。
背景技术：
猫爪草ranunculiternatiradix为毛茛科植物小毛茛ranunculusternatusthunb.的干燥块根。本品呈纺锤形，多5～6个簇生，形似猫爪，长3～10mm，直径2～3mm，顶端有黄褐色残茎或茎痕。表面黄褐色或灰黄色，久存色泽变深，微有纵皱纹，并有点状须根痕和残留须根。质坚实，断面类白色或黄白色，空心或实心，粉性。气微，味微甘。猫爪草别名三散草（浙江）、猫爪儿草（河南）、猫爪子（河南）、鸭脚板（安徽）、金花草（广西）。猫爪草性温，味甘、辛，入肝、肺经，具有清热解毒、消肿散结、止咳祛痰等功效，临床用于治疗肺结核、淋巴结结核、咽喉炎、疟疾等症。民间用猫爪草治疗淋巴结核，不论结核大小或是否化脓均有较好的疗效。近年来因其有较好的抗肿瘤效果而成为研究热点。
近年来针对猫爪草化学成分的研究较少，其主要含有黄酮类及苷类、生物碱、挥发油、有机酸等化合物。
据报道，猫爪草煎剂治疗淋巴结核180例，其有效率达100%，临床治愈率73.9%；其注射液对小鼠s180、s37癌株有抑制作用其煎剂对痢疾杆菌、金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、四联球菌等均有显著抑制作用。另有报道猫爪草能诱生肿瘤坏死因子（tnf）。肿瘤坏死因子是一组具有抗肿瘤、抗病毒、参与多种免疫调节过程的球蛋白，由于它能特异性地杀死肿瘤细胞，而对正常组织细胞无不良影响，从而起到肿瘤免疫和肿瘤治疗的作用。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种猫爪草抗肿瘤成分的制备方法。
本发明通过下面技术方案实现：
一种猫爪草抗肿瘤成分的制备方法，包括如下步骤：将猫爪草干燥块根用75-85%乙醇溶液回流提取1-3次，每次提取1.5-2.5h，合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液；将所得乙醇提取浓缩液用水稀释，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，减压浓缩，收集乙酸乙酯萃取物；将乙酸乙酯萃取物用大孔树脂富集活性成分，先用10%乙醇冲洗9个柱体积除去大极性成分，再用80%乙醇洗脱12个柱体积，收集80%洗脱液，再经硅胶柱色谱分离，依次用体积比65:1、42:1、21:1、13:1的氯仿-甲醇洗脱，收集21:1洗脱部分，浓缩即得。
优选地，所述的制备方法中，将猫爪草干燥块根用80%乙醇溶液回流提取。
优选地，所述的制备方法中，回流提取2次。
优选地，所述的制备方法中，每次提取2h。
优选地，所述的制备方法中，1kg猫爪草干燥块根用4-6l溶剂进行提取。
优选地，所述的制备方法中，大孔树脂为ab-8型大孔吸附树脂。
本发明技术效果：
该制备方法可以有效的得到猫爪草中有效成分，具有显著的抗肿瘤活性，且制备方法简单可行，易操作，可大规模生产。
具体实施方式
下面结合实施例具体介绍本发明的实质性内容。
实施例1
一种猫爪草抗肿瘤成分的制备方法，包括如下步骤：将猫爪草干燥块根用80%乙醇溶液回流提取2次，每次提取2h，合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液；将所得乙醇提取浓缩液用水稀释，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，减压浓缩，收集乙酸乙酯萃取物；将乙酸乙酯萃取物用ab-8型大孔树脂富集活性成分，先用10%乙醇冲洗9个柱体积除去大极性成分，再用80%乙醇洗脱12个柱体积，收集80%洗脱液，再经硅胶柱色谱分离，依次用体积比65:1、42:1、21:1、13:1的氯仿-甲醇洗脱，收集21:1洗脱部分，浓缩即得。
其中，1kg猫爪草干燥块根用5l溶剂进行提取。
实施例2
一种猫爪草抗肿瘤成分的制备方法，包括如下步骤：将猫爪草干燥块根用75%乙醇溶液回流提取1次，每次提取1.5h，合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液；将所得乙醇提取浓缩液用水稀释，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，减压浓缩，收集乙酸乙酯萃取物；将乙酸乙酯萃取物用ab-8型大孔树脂富集活性成分，先用10%乙醇冲洗9个柱体积除去大极性成分，再用80%乙醇洗脱12个柱体积，收集80%洗脱液，再经硅胶柱色谱分离，依次用体积比65:1、42:1、21:1、13:1的氯仿-甲醇洗脱，收集21:1洗脱部分，浓缩即得。
其中，1kg猫爪草干燥块根用4l溶剂进行提取。
实施例3
一种猫爪草抗肿瘤成分的制备方法，包括如下步骤：将猫爪草干燥块根用85%乙醇溶液回流提取3次，每次提取2.5h，合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液；将所得乙醇提取浓缩液用水稀释，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，减压浓缩，收集乙酸乙酯萃取物；将乙酸乙酯萃取物用ab-8型大孔树脂富集活性成分，先用10%乙醇冲洗9个柱体积除去大极性成分，再用80%乙醇洗脱12个柱体积，收集80%洗脱液，再经硅胶柱色谱分离，依次用体积比65:1、42:1、21:1、13:1的氯仿-甲醇洗脱，收集21:1洗脱部分，浓缩即得。
其中，1kg猫爪草干燥块根用6l溶剂进行提取。
该制备方法可以有效的得到猫爪草中有效成分，具有显著的抗肿瘤活性，且制备方法简单可行，易操作，可大规模生产。