6-O-烟酰半枝莲碱G在制备治疗肝纤维化的药物方面的应用的制作方法

本发明属于医药领域，涉及6-o-烟酰半枝莲碱g在制备治疗肝纤维化的药物方面的应用。

背景技术：

肝脏是体内主要的代谢器官，具有强大的再生能力。肝损伤发生后肝脏通常可以再生，但若存在长期损伤与慢性炎症刺激，肝脏的再生能力将极大地被削弱，并引起纤维化发生。肝纤维化(hepaticfibrosis，hf)是慢性肝病进展至肝硬化的关键步骤，它是一种机体代偿修复反应。多种病因如酒精性肝病、非酒精性脂肪性肝炎、病毒性肝炎、慢性胆汁淤积及自身免疫性肝炎都可发展为纤维化而进展至肝硬化和肝癌，给患者生命健康带来严重威胁。

肝星状细胞(hsc)是参与hf过程的关键细胞，在损伤修复的过程中，hsc发生活化，并分泌大量的ecm、基质金属蛋白酶和金属蛋白酶组织抑制剂等，同时与肝细胞、肝窦内皮细胞、库普弗细胞等相互作用，引起纤维沉积、肝脏组织结构重塑与紊乱和加速hf进程。

因此，抑制了肝星状细胞的增殖或活力，就可以一定程度治疗缓解hf。目前没有6-o-烟酰半枝莲碱g抑制肝星状细胞增殖的活性报道。

技术实现要素：

本发明是为了克服现有技术的不足，提供一种6-o-烟酰半枝莲碱g在制备治疗肝纤维化的药物方面的应用。

实现本发明目的的技术方案为：

一种6-o-烟酰半枝莲碱g在制备治疗肝纤维化的药物方面的应用。

一种治疗肝纤维化的方法，给予肝纤维化患者有效剂量的6-o-烟酰半枝莲碱g。

有益技术效果：

本发明发现，6-o-烟酰半枝莲碱g一方面可以抑制肝纤维化过程中关键细胞肝星状细胞的增殖，另一方面可以通过抑制肝星状细胞中纤维化关键蛋白的表达进而抑制其活性。因此，6-o-烟酰半枝莲碱g具有抗肝纤维化的作用，可以开发成抗纤维化药物。

附图说明

图1为不同浓度6-o-烟酰半枝莲碱g对hsc-t6细胞的增殖抑制率；

图2为不同浓度6-o-烟酰半枝莲碱g对hsc-t6细胞中纤维化关键蛋白α-sma及tgf-β1表达的抑制作用。

具体实施方式

下面通过具体实施例阐述本发明的实质性内容，但不能以此限定本发明的保护范围。

一、试验材料

大鼠肝星状细胞hsc-t6购自上海生工生物工程有限公司。

胎牛血清(fbs)、dmem培养基购自美国gibco公司。

青链霉素购自上海逍鹏生物科技有限公司。

胰蛋白酶上海士锋生物科技有限公司。

6-o-烟酰半枝莲碱g(cas：1206805-30-2)购自宝鸡市辰光生物科技有限公司，hplc纯度98％。

二、试验方法

1、细胞培养

将大鼠肝星状细胞hsc-t6复苏后用含10％fbs和1％青链霉素的dmem培养基于37℃、5％co2恒温培养箱中培养，待细胞密度达90％左右时，消化、传代。

2、mtt法测定药物对hsc-t6细胞的增殖抑制作用

取对数生长期的大鼠肝星状细胞hsc-t6，消化重悬制成浓度为5×10⁴细胞/ml的细胞悬液，接种于96孔板中，每孔100μl，24h后，药物组更换为含有不同浓度(2、5、10μm，dmso助溶)6-o-烟酰半枝莲碱g的培养基，对照组用正常不含有药物(含等体积溶媒dmso)的培养基，调零孔为不含细胞的培养液，每组设3个复孔，培养48h后，每孔加入mtt溶液(5mg/ml)10μl，孵育4h，弃上清液，每孔加入dmso150μl，振荡5min，酶标仪在570nm处测吸光度值(a)，以调零孔调零，计算不同浓度6-o-烟酰半枝莲碱g对hsc-t6细胞的增殖抑制率。计算公式为：增殖抑制率＝(1－a药物组/a对照组)×100％。

3、westernblot法测定药物对hsc-t6细胞中纤维化关键蛋白表达的抑制作用

取对数生长期的大鼠肝星状细胞hsc-t6，消化重悬制成浓度为1×10⁵细胞/ml的细胞悬液，接种于24孔板中，每孔1ml，24h后，药物组更换为含有不同浓度(2、5、10μm，dmso助溶)6-o-烟酰半枝莲碱g的培养基，对照组用正常不含有药物(含等体积溶媒dmso)的培养基，每组设3个复孔，继续培养48h后，收集细胞，pbs洗涤，裂解细胞，收集细胞蛋白，取50μg蛋白用westernblot法测定比较药物组和对照组hsc-t6细胞中纤维化关键蛋白α-sma及tgf-β1的表达水平，内参为β-actin，拍照、软件分析。

4、数据处理

采用spss17.0进行统计学分析，数据以均值±标准差表示，采用单因素方差分析one-wayanova检验方差齐性，并用student’s-ttest进行分析，p<0.05表示具有显著性差异。

三、试验结果

1、药物对hsc-t6细胞的增殖抑制作用

不同浓度6-o-烟酰半枝莲碱g对hsc-t6细胞的增殖抑制作用如表1和图1所示，2、5、10μm6-o-烟酰半枝莲碱g均可以抑制hsc-t6细胞的增殖，且药物浓度越高，抑制作用越明显。该结果表明，6-o-烟酰半枝莲碱g可以抑制hsc-t6细胞的增殖。

表1不同浓度6-o-烟酰半枝莲碱g对hsc-t6细胞的增殖抑制率

2、药物对hsc-t6细胞中纤维化关键蛋白表达的抑制作用

不同浓度6-o-烟酰半枝莲碱g对hsc-t6细胞中纤维化关键蛋白表达的抑制作用如图2所示，2、5、10μm6-o-烟酰半枝莲碱g均可以抑制hsc-t6细胞中纤维化关键蛋白α-sma及tgf-β1的表达，且药物浓度越高，抑制作用越明显。该结果表明，6-o-烟酰半枝莲碱g可以抑制hsc-t6细胞中纤维化关键蛋白的表达。

技术特征：

1.一种6-o-烟酰半枝莲碱g在制备治疗肝纤维化的药物方面的应用。

2.一种治疗肝纤维化的方法，给予肝纤维化患者有效剂量的6-o-烟酰半枝莲碱g。

技术总结
本发明公开了6‑O‑烟酰半枝莲碱G在制备治疗肝纤维化的药物方面的应用。本发明发现，6‑O‑烟酰半枝莲碱G一方面可以抑制肝纤维化过程中关键细胞肝星状细胞的增殖，另一方面可以通过抑制肝星状细胞中纤维化关键蛋白的表达进而抑制其活性。因此，6‑O‑烟酰半枝莲碱G具有抗肝纤维化的作用，可以开发成抗纤维化药物。

技术研发人员：蔡凤梅;陈亮
受保护的技术使用者：上海容音医疗科技咨询中心
技术研发日：2020.07.01
技术公布日：2020.09.04