尼达尼布、其衍生物或药用盐的药物新用途

本发明属于药物应用技术领域，具体涉及尼达尼布、其衍生物或药用盐的药物新用途。

背景技术：

腹膜粘连是腹部及盆腔手术常见的并发症，其发生率可高达90％以上，是长期困扰临床诊疗领域的一个重要问题。腹膜粘连会导致许多严重的并发症，包括肠梗阻、不孕、慢性腹盆部疼痛等，严重影响患者的健康和生活质量。超过20％的腹膜粘连患者会因为肠梗阻等症状需要再次入院进行粘连松解术等治疗，但术后腹膜粘连再发率仍较高，不仅增加了患者医疗费用负担，也加重了相关医疗机构和医疗保险机构的经济及工作负担。目前尚缺乏可有效的预防或治疗腹膜粘连的方法和药物。现临床常与预防和/或治疗腹膜粘连的方法主要包括改进手术技术以减少术中的组织创伤及缩短手术时间、术后采用可吸收膜等物理屏障、口服非甾体抗炎药物干预等，但这些方法的疗效欠佳，因此亟需更有效的预防和治疗腹膜粘连的方法和药物。

尼达尼布(nintedanib,bibf1120)是一种多靶点的酪氨酸激酶及非酪氨酸激酶的小分子抑制剂，其分子式为：c31h33n5o4。尼达尼布通过选择性地抑制pdgfrs、fgfrs，vegfrs、src激酶家族(src,lyn和lck)以及flt-3激酶的活化，发挥显著的抗纤维和良好的抗血管生成及抗肿瘤等作用。目前许多临床研究证据已明确尼达尼布可明显减缓肺纤维化的进展，有效改善特发性肺纤维化、慢性间质性肺纤维化及系统性硬化症性肺纤维化疾病患者的临床症状和疗效预后。同时，相关的临床及临床前研究也发现尼达尼布对非小细胞肺癌、胰腺癌、胆囊癌等恶性肿瘤具有潜在的治疗效果。

目前国内外尚无尼达尼布、其衍生物或药用盐用于预防和/或治疗腹膜粘连的研究报道。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供尼达尼布、其衍生物或药用盐的新用途，即在制药中的新应用。

具体的，本发明涉及尼达尼布、其衍生物或药用盐在制备预防和/或治疗腹膜粘连的药物中的应用。进一步地，所述药物为减少腹膜组织的炎症反应和纤维化反应的药物。

申请人研究了尼达尼布对腹膜粘连大鼠模型的预防和治疗作用，发现与对照组相比，尼达尼布治疗组显著降低了大鼠腹膜粘连的平均发生率、腹膜粘连的质地平均评分、腹膜粘连的韧性平均评分。尼达尼布治疗组较无尼达尼布治疗的对照组腹膜组织内炎症反应更轻、组织内组织纤维含量和成纤维细胞的数量显著降低。同时，高剂量尼达尼布组较低剂量治疗组腹膜组织内炎症反应程度、组织纤维含量和成纤维细胞的数量较少。以上实验结果提示了尼达尼布可有效改善腹膜粘连大鼠模型的临床体征，抑制腹膜组织慢性炎症和异常的纤维组织增生，具有药理作用强的特点，该药安全性好，毒副作用小，因此将其开发成为预防或治疗腹膜粘连的药物，尤其是减少腹膜组织的炎症和纤维化程度的药物具有良好的临床应用前景。

根据本发明具体实施方式的用途，所述腹膜粘连为人或动物的腹膜粘连。所述动物包括但不限于哺乳动物、胎盘哺乳动物、啮齿动物(例如豚鼠、仓鼠、大鼠、小鼠)、兔类动物(例如兔)、犬科动物(例如狗)、猫科动物(例如猫)、马科动物(例如马)、猪类(例如猪)、羊类(例如羊)、牛类(例如奶牛)、灵长类动物、猿猴(例如猴子或者猿)、猴类(例如绒猴、狒狒)、猿类(例如大猩猩、黑猩猩、猩猩、长臂猿)。

根据本发明具体实施方式的用途，所述腹膜粘连为人体腹部及盆部手术或操作引起的腹膜粘连或腹膜透析相关的腹膜粘连。

根据本发明具体实施方式的用途，本发明涉及的尼达尼布、其衍生物或药用盐可以直接给药，也可以与一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋型剂在内的辅助性成分混合后，按照制剂学常规工艺，制备成适合药用的药剂学上可接受的任何药物剂型。所述药物的剂型包括但不限于片剂(包括分散片、肠溶片、咀嚼片、口腔崩解片、泡腾片等)、硬胶囊剂(包括肠溶胶囊)、软胶囊剂、颗粒剂、丸剂、微丸剂、滴丸剂、干混悬剂、口服溶液剂、干糖浆剂、散剂、口服混悬液，注射剂(包括注射用粉针剂(包括注射用无菌灌装粉末、冻干粉针剂)、水溶液注射剂)、软膏剂、凝胶剂、乳液剂、乳胶剂、贴剂、栓剂、凝胶剂等。所述药物可制备成为常释、延释、缓释或控释的药物剂型。所述药物可经口服途径给药、也可以经局部给药、腹腔注射、静脉途径给药等其他临床治疗可接受的给药途径。所述药物的应用剂量为等同于50-100mg/kg大鼠体重的药物剂量，或目前临床推荐的应用剂量。

根据本发明具体实施方式的用途，本发明涉及的尼达尼布、其衍生物或药用盐理论上还可以与治疗腹膜粘连的其它现有药物联合应用。

本发明的有益效果为：

1、本发明提供的尼达尼布、其衍生物或药用盐在制备预防和/或治疗腹膜粘连的药物中的应用，为已知药物尼达尼布、其衍生物或药用盐发掘了新的医疗用途，开拓了一个新的应用领域。

2、本发明提供的尼达尼布、其衍生物或药用盐在制备预防和/或治疗腹膜粘连的药物中的应用，为现有腹膜粘连的治疗提供了新的药物解决方案。经腹膜粘连大鼠模型中的应用显示，其在治疗腹膜粘连方面具有较强的药理作用，该药安全性好，毒副作用低，具有较好的临床应用前景。

3、由于目前腹膜粘连的预防和治疗缺乏有效的药物，因此尼达尼布、其衍生物或药用盐的应用必将对提高腹膜粘连的治疗和预后产生重大意义。

附图说明

图1a：对照组术后8天腹膜粘连形成的大体示意图；

图1b：低剂量尼达尼布治疗组术后8天腹膜粘连形成的大体示意图；

图1c：高剂量尼达尼布治疗组术后8天腹膜粘连形成的大体示意图；

图2：各组间粘连发生率结果比较，其中，a-对照组；b-低剂量尼达尼布治疗组；c-高剂量尼达尼布治疗组；

图3：各组间粘连质地评分结果比较，其中，a-对照组；b-低剂量尼达尼布治疗组；c-高剂量尼达尼布治疗组；

图4：各组间连韧性评分结果比较，其中，a-对照组；b-低剂量尼达尼布治疗组；c-高剂量尼达尼布治疗组；

图5a：对照组腹膜组织的病理组织染色示意图；

图5b：低剂量尼达尼布治疗组腹膜组织的病理组织染色示意图；

图5c：高剂量尼达尼布治疗组腹膜组织的病理组织染色示意图；

图6：各组间腹膜粘连组织的炎症程度评分结果比较，其中，a-对照组；b-低剂量尼达尼布治疗组；c-高剂量尼达尼布治疗组；

图7：各组间腹膜粘连组织的纤维化程度评分结果比较，其中，a-对照组；b-低剂量尼达尼布治疗组；c-高剂量尼达尼布治疗组。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明的技术方案进行详细的描述。显然，所描述的实施例仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所得到的所有其它实施方式，都属于本发明所保护的范围。

实施例一：尼达尼布对腹膜粘连大鼠模型的预防和治疗作用的动物实验

1.实验材料

1.1实验动物：18只sd大鼠(spf级，雌性，220g-260g)，来源及动物合格证：北京华阜康生物技术股份有限公司；scxk(京)2019-0008，no.1103221911015030。

1.2试剂：三氯乙醛，水合物：c804539,shanghaimacklinbiochemical公司；10％水合氯醛：采用材料2)及纯水配制成10％水合氯醛溶液；碘伏消毒液：批号200528w，北京长江脉医药科技有限责任公司；尼达尼布(纯度99.97％)：货号：hy-50904,medchemexpress(mce)公司；医用0.9％氯化钠溶液(生理盐水)：批号：c202005121，华润双鹤药业股份有限公司。

1.3仪器设备：外科手术器械：组织剪(j22010，上海医疗器械(集团)有限公司手术器械厂)、镊子(j3c030，上海医疗器械(集团)有限公司手术器械厂)、持针器(j32030,上海医疗器械(集团)有限公司手术器械厂)；4-0外科手术缝合丝线(不带针)：爱惜康(ethicon),sa83g；4-0外科手术缝合丝线(带针):爱惜康(ethicon),w586；4-0外科手缝合可吸收线(带针):上海浦东金环医疗用品股份有限公司，r413；注射器：1ml注射器(批20191001，山东威高集团医用高分子制品股份有限公司)；电子天平：型号：fa2204n，上海菁海仪器有限公司；常规大小鼠维持饲料：批号：20113213，北京科澳协力饲料有限公司。

2.实验方法

2.1实验前喂养：实验大鼠购入后，置于本研究所的实验动物房采用普通的大鼠饲料进行饲养7天以适应环境。

2.2实验造模：予实验大鼠腹腔注射1ml10％水合氯醛溶液麻醉；实验大鼠腹部备皮后采用碘伏消毒液进行腹部皮肤消毒；在中下腹部做一个长约3cm的正中纵行切口，充分暴露腹部术野；采用4-0外科手术缝合丝线(不带针)分别在切口两侧结扎壁层腹膜制造4个直径为0.5cm的缺血结节，同侧缺血结节之间的间隔均1cm,且与腹正中切口的间隔均1.5cm，两侧缺血结节数量总计8个；采用4-0外科手缝合可吸收线(带针)缝合腹壁切口，随后采用4-0外科手术缝合丝线(带针)缝合腹部皮肤切口；再次采用碘伏消毒液对手术缝合口进行消毒，将实验大鼠放置复苏箱至大鼠复苏后送回本研究所实验动物房内继续饲养；

2.2给药：术后一天将实验大鼠随机分成3组，每组6只，分别予生理盐水、低剂量或高剂量尼达尼布药物处理。其中，对照组：1ml生理盐水，灌胃给药，每天1次、维持治疗7天；低剂量尼达尼布治疗组：50mg/kg尼达尼布溶于1ml生理盐水,灌胃给药，每天1次，维持治疗7天；高剂量尼达尼布治疗组：100mg/kg尼达尼布溶于1ml生理盐水，灌胃给药，每天1次，维持治疗7天。

2.3评价指标：术后第8天，予实验大鼠吸入高浓度二氧化碳安乐死后，采用目前公认的标准评估对比各组粘连发生率、粘连质地和粘连韧性，见表1。

粘连发生率＝(发生粘连的缺血结节/缺血结节的总数)*100％

表1粘连分级和粘连韧性评分标准

3.数据统计分析

实验数据统计分析采用单因素分析法(one-wayanova)进行3组数据值的差异比较。结果表示为：平均值±标准差，p＜0.05提示差异具有统计学意义。

4.实验结果

(1)尼达尼布显著减少腹膜粘连的发生率(图1a-1c、图2)

粘连的发生率是评估对腹膜粘连进行疾病评估的重要指标之一。对照组、低剂量尼达尼布治疗组、高剂量尼达尼布治疗组的腹膜粘连的平均发生率为：83.4±6.2％、52.6±22.3％以及37.1±9.7％。低剂量及高剂量尼达尼布的腹膜粘连发生率均显著低于对照组(p＜0.01)，但低剂量及高剂量组的腹膜粘连发生率无显著差异(p＝0.186)。

(2)尼达尼布显著改善腹膜粘连质地(图1a-1c、图3)

粘连质地是反映腹膜粘连严重程度的重要指标之一。对照组、低剂量尼达尼布治疗组、高剂量尼达尼布治疗组的腹膜粘连的质地平均评分为：2.4±0.4、1.3±0.7以及0.8±0.3。低剂量及高剂量尼达尼布的腹膜粘连质地平均值显著低于对照组(p＜0.01)，但低剂量及高剂量组的腹膜粘连质地平均值无显著差异(p＝0.197)。

(3)尼达尼布显著减轻腹膜粘连韧性(图1a-1c、图4)

粘连韧性是反映腹膜粘连纤维程度的重要指标之一。对照组、低剂量尼达尼布治疗组、高剂量尼达尼布治疗组的腹膜粘连的韧性平均评分为：1.8±0.2、1.1±0.5以及0.8±0.3。低剂量及高剂量尼达尼布的腹膜粘连质地平均值显著低于对照组(p＜0.01)，但低剂量及高剂量组的腹膜粘连质地平均值无显著差异(p＝0.232)。

实施例二：尼达尼布对大鼠腹膜粘连组织局部炎症反应及纤维化反应的病理学评估实验

1.实验材料

1.1病理组织来源：大鼠腹膜粘连实验中实验大鼠腹壁的缺血结节组织及腹膜粘连组织

1.2试剂：10％中性福尔马林固定液：货号：top0372，北京博奥拓达科技有限公司；医用0.9％氯化钠溶液(生理盐水)：批号：c202005121，华润双鹤药业股份有限公司；无水乙醇溶液(分子生物学专用)：货号：e111991，上海阿拉丁生化科技股份有限公司；二甲苯溶液：货号：1330-20-7，国药集团化学试剂有限公司；苏木精-伊红染色试剂盒(h&estaining试剂盒)：货号：ab245880，美国abcam公司。

1.3仪器设备：徕卡手动轮转式病理切片机：型号：rm2235，徕卡显微系统(上海)贸易有限公司；数字化组织病理学图像及辅助分析仪器(aperiopatholgyscanner)：型号：aperiocs2，徕卡显微系统(美国)公司(leicamicrosystems)；

2.实验方法

2.1组织样本石蜡固定及石蜡组织切片制备：

实验大鼠腹壁的缺血结节组织及腹膜粘连组用生理盐水充分清洗，然后浸于10％中性福尔马林固定液在4℃下固定24小时。组织充分固定后在室温下按先后浸于75％乙醇溶液(2小时)、85％乙醇溶液(1小时)、90％乙醇溶液(1小时)、95％乙醇溶液(1小时)及100％乙醇溶液(1.5小时)进行脱水处理，接着将脱水的组织在室温下浸于乙醇二甲苯混合液(30分钟)及二甲苯溶液(50分钟)进行组织透明处理，接着组织样本进行浸蜡处理后制成石蜡包埋组织。使用徕卡手动轮转式病理切片机将石蜡包埋的组织制备成厚度为4mm的石蜡组织切片，组织切片置于室温下的燥环境中保存备用。

2.2苏木精-伊红染色：

首先将石蜡组织切片按先后顺序浸于二甲苯溶液(10分钟)、二甲苯溶液(10分钟)、100％乙醇溶液(10分钟)、95％乙醇溶液(10分钟)及80％乙醇溶液(10分钟)进行充分的组织再水化，接着将组织切片置于苏木精溶液中浸染5分钟，随后用自来水冲洗组织切片去除多余的苏木精溶液。将组织切片置于特殊蓝色染液中浸染15秒后快速取出，并用自来水冲洗组织切片2次去除多余的蓝色染液。接着将组织切片置于伊红染色液中浸染3分钟，随后用自来水冲洗组织切片去除多余的伊红染色液。接着将染色的组织切片按先后顺序置于80％乙醇溶液(2分钟)、95％乙醇溶液(2分钟)、100％乙醇溶液(2分钟)及二甲苯(2分钟)进行脱水及透明处理，最后进行树脂封装固定。以上试验均在室温下进行。

2.3评价标准：各组腹膜组织的炎症和纤维化反应程度采用目前公认的标准对进行评分，评分标准详见表2：

3.数据统计分析

实验数据统计分析采用单因素分析法(one-wayanova)进行3组数据值的差异比较。结果表示为：平均值±标准差，p＜0.05提示差异具有统计学意义。

4.实验结果

尼达尼布显著减少腹膜组织的局部炎症及纤维化反应(图5a-5c、图6、图7)

尼达尼布治疗组较无尼达尼布治疗的对照组腹膜组织内炎症反应更轻、组织内组织纤维含量和成纤维细胞的数量显著降低。同时，高剂量尼达尼布组较低剂量治疗组腹膜组织内炎症反应程度、组织纤维含量和成纤维细胞的数量较少，提示尼达尼布可有效抑制腹膜组织慢性炎症和异常的纤维组织增生，从而有效地抑制腹膜粘连的形成(图5a-5c、图6、图7)。

实施例三：尼达尼布片剂的制备

取100g尼达尼布，与常规辅料混合，按照常规方法制备获得尼达尼布片剂1000片，即得规格为100mg的尼达尼布片剂。

实施例四：尼达尼布胶囊剂的制备

取100g乙磺酸尼达尼布，与常规辅料混合，按照常规方法制备获得乙磺酸尼达尼布胶囊剂1000粒，即得规格为100mg的乙磺酸尼达尼布胶囊剂。

以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。