机能性悬浮造型晶球及其制造方法

1.本发明涉及一种悬浮晶球及其制造方法，且特别涉及一种机能性悬浮造型晶球及其制造方法。


背景技术：

2.化妆品业者通常为了让消费者肉眼观察到活性成分的存在或销售噱头，会将活性成分制作成可视型剂型，如：晶球、油包水型态、或水包油型态。但现有技术的制作方法多采用微流道设备，从而导致制作成本偏高。
3.举例而言，中国台湾实用新型专利公告号m466662提出的“具有促进肌肤紧致、白皙透亮及增加肌肤弹性的胶原蛋白微脂球体结构”，其利用微流道及薄膜加压射出技术制造lipogen胶原蛋白微脂球体。微流道技术为将通过溶有脂质的油性溶剂，利用水将出口附近的油滴向外挤出，于流道出口形成小突起，于恰当时机截断液泡，可一直连续产生大小均一的胶原蛋白微脂球体；薄膜加压射出技术则以适当孔径的滤膜来获得最佳的加压过滤压力及流速以制造大小均一的胶原蛋白微脂球体。
4.又举例而言，中国台湾发明专利公开号201400556提出的“构造色材料及使用其之化妆品”，构造色材料为由带有构造色的树脂粒子构成，树脂粒子为于微小管状流道内，以一定流量注入混有含水溶性自由基聚合起始剂的水介质及自由基聚合性单体的流体，使流体温度瞬间达到预先设定的温度后，于水溶性自由基聚合起始剂的存在下，使自由基聚合性单体一部分反应，借以使均匀的树脂粒子的粒子核于微小管状流道内形成，再利用附有搅拌装置的反应釜使含有所得粒子核的聚合反应液进行聚合反应所得到的树脂粒子，树脂粒子的平均粒径处于150至400nm的范围，仄他电位的绝对值处于30至80mv的范围。
5.再举例而言，中国台湾实用新型专利公告号m421160提出的“制造等粒径颗粒物之装置”，其包含设有空间的基座，基座分别设有连通至空间的第一流道及第二流道，且基座设有汇集第一流道及第二流道的输出流道，输出流道为流通至空间内，输出流道设有输出口；结合于基座上的驱动件，驱动件设有滑移于空间内的推杆，且推杆设有对应第一流道及第二流道的通孔；借由驱动件驱动推杆于空间内横向滑移，使推杆的通孔依序循环对齐第一流道及第二流道，如此原料可借气体间隔后制造出等粒径的颗粒物，并用于保养品。
6.因此，针对现有技术的可视型剂型化妆品所存在的问题提出改善确实为本发明所属技术领域人士积极解决的课题之一


技术实现要素：

7.本发明的一目的在于提出一种悬浮晶球，其可保护活性成分，以避免活性成分与环境接触造成变质。
8.本发明的另一目的在于提出一种悬浮晶球，其可悬浮于二液体层之间的接口，以让消费者肉眼观察到活性成分。
9.本发明的再一目的在于提出一种悬浮晶球，其可与二液体混合后，迅速地随着液
体分层而形成于二液体层之间的接口，以降低与环境接触的时间。
10.本发明的又一目的在于提出一种悬浮晶球，其除了可采用微流道设备制备外，亦可选择以其它非微流道设备的方式制备，从而降低制作成本。
11.于是，本发明提出一种机能性悬浮造型晶球，其包括：主体结构以及活性成分，活性成分为填充于主体结构内或附着于主体结构外。
12.较佳地，机能性悬浮造型晶球的比重为0.95至1。
13.较佳地，主体结构含有玻尿酸钠(sodium hyaluronate)、聚丙烯酸(polyacrylicacid)、海藻酸钠(sodiumalginate)、三仙胶(xanthan gum)、小核菌胶(sclerotium gum)、羟乙基纤维素(hydroxyethyl cellulose)、及瓜尔胶(guar gum)。
14.较佳地，活性成分为植物萃取物。
15.依本发明，机能性悬浮造型晶球于一般状态下为悬浮于二液体层之间的接口。使用时，可先摇晃使机能性悬浮造型晶球与二液体层混合，再取出机能性悬浮造型晶球；之后，将机能性悬浮造型晶球与二液体静置使液体分层而再形成于二液体层之间的接口，借此降低与环境接触的时间，进而避免主体结构或活性成分变质。此外，透过活性成分填充于主体结构内或附着于主体结构外，得以保护活性成分以避免其与环境接触而变质。
16.另一方面，本发明提出一种机能性悬浮造型晶球的制造方法，其包括：提供模具，模具具有成型穴；将晶球组合液添加至模具的成型穴内；以及透过成型组合液使成型穴内的晶球组合液形成机能性悬浮造型晶球，而机能性悬浮造型晶球包括主体结构以及活性成分，活性成分填充于主体结构内或附着于主体结构外。
17.较佳地，晶球组合液含有溶剂、玻尿酸钠、聚丙烯酸、海藻酸钠、三仙胶、小核菌胶、羟乙基纤维素、瓜尔胶、及活性成分。
18.较佳地，依晶球组合液的总重量计，玻尿酸钠的含量为0.01至5wt％，聚丙烯酸的含量为0.5至5wt％，海藻酸钠的含量为0.5至5wt％，三仙胶的含量为0.5至5wt％，小核菌胶的含量为0.5至2wt％，羟乙基纤维素的含量为0.04至2wt％，瓜尔胶的含量为0.04至2wt％，活性成分的含量为0.05至5wt％，而溶剂的含量为补足至100wt％。
19.较佳地，晶球组合液的ph值为ph4至8。
20.较佳地，成型组合液含有溶剂、碳酸钙(calcium carbonate)、乳酸钙(calcium lactate)、氯化钙(calcium chloride)、氯化钡(barium chloride)、及氯化钾(potassium chloride)。
21.较佳地，依成型组合液的总重量计，碳酸钙的含量为0.5至2wt％，乳酸钙的含量为0.5至2wt％，氯化钙的含量为0.5至2wt％，氯化钡的含量为0.5至2wt％，氯化钾的含量为0.5至2wt％，而溶剂的含量为补足至100wt％。
22.较佳地，成型组合液的ph值为ph4至8。
23.较佳地，于添加晶球组合液至成型穴内之前，更可利用成型组合液润湿模具的成型穴。
24.再一方面，本发明提供一种组合物，其包含：第一液体层、第二液体层、以及如上所述的机能性悬浮造型晶球，第一液体层与第二液体层之间形成有接口，而机能性悬浮造型晶球悬浮于界面。
25.较佳地，第一液体层含有溶剂、甘油(glycerin)、活性成分、及醇类。
26.较佳地，第二液体层含有环戊硅氧烷(cyclopentasiloxane)、聚二甲基硅氧烷(polydimethylsiloxane)、苯丙基二甲基硅烷氧基硅酸酯(phenylpropyldimethylsiloxysilicate)、及鲸蜡硬脂基聚甲基硅氧烷(cetearyl methicone)。
27.较佳地，依第一液体层的总重量计，甘油的含量为5至20wt％，活性成分的含量为0.1至20wt％，醇类的含量为1至10wt％，而溶剂的含量为补足至100wt％。
28.较佳地，依第二液体层的总重量计，环戊硅氧烷的含量为5至40wt％，聚二甲基硅氧烷的含量为1至20wt％，苯丙基二甲基硅烷氧基硅酸酯的含量为1至20wt％，鲸蜡硬脂基聚甲基硅氧烷的含量为1至20wt％。
29.较佳地，第一液体层的比重为1至1.5。
30.较佳地，第二液体层的比重为0.6至0.95。
附图说明
31.图1为流程示意图，说明着本发明的一实施方式的制造方法。
32.图2为结构示意图，绘示着本发明的实施方式使用的模具。
33.图3为照片图，呈现本发明的实施方式得到的机能性悬浮造型晶球。
34.图4为照片图，呈现本发明的实施方式得到的机能性悬浮造型晶球悬浮于二液体层之间的接口。
35.图5为流程示意图，说明着本发明的另一实施方式的制造方法；
36.图6为直方图，说明amle对于b16f10细胞活性的影响；
37.图7a为照片图，说明amlw与amle对于dna的保护效果；
38.图7b为直方图，说明amlw与amle对于dna的保护效果；
39.图8为直方图，说明刺葱萃取物对于dna的保护效果；
40.图9为直方图，说明刺葱萃取物对于b16f10细胞活性的影响；
41.图10为直方图，说明刺葱萃取物对于酪胺酸酶活性的抑制效果；
42.图11为照片图，说明经psb作用后，pcna的表现的表现量；
43.图12为照片图，说明经psbl作用后，细胞内lamin a蛋白质的表现的表现量。
具体实施方式
44.为让本发明上述及/或其它目的、功效、特征更明显易懂，下文特举较佳实施方式，作详细说明于下：
45.请参照图1，本发明的一实施方式提出一种机能性悬浮造型晶球的制造方法。如图3所示，所制得的机能性悬浮造型晶球具有主体结构及活性成分，活性成分为填充于主体结构内或附着于主体结构外，借以保护活性成分以避免与环境接触造成变质。又如图4所示，所制得的机能性悬浮造型晶球可与第一液体层与第二液体层组合成一组合物并悬浮于第一液体层与第二液体层之间形成的接口。基于第一液体层的总重量，第一液体层可含有5至20wt％的甘油、0.1至20wt％的活性成分、1至10wt％的醇类(如：丙二醇(propylene glycol)、丁二醇(butylene glycol)、或其混合物)、及补足至100wt％的溶剂(如：水)，但不以此为限；而第一液体层的比重可为1至1.5，但不以此为限。基于第二液体层的总重量，第二液体层可含有5至40wt％的环戊硅氧烷、1至20wt％的聚二甲基硅氧烷、1至20wt％的苯丙
基二甲基硅烷氧基硅酸酯、及1至20wt％的鲸蜡硬脂基聚甲基硅氧烷，但不以此为限；而第二液体层的比重为0.6至0.95，但不以此为限。使用时，可先摇晃组合物使机能性悬浮造型晶球与二液体层混合，再取出机能性悬浮造型晶球；之后，将机能性悬浮造型晶球与二液体静置使二液体分层再形成第一液体层与第二液体层，且机能性悬浮造型晶球形成于此二液体层之间的接口，借此降低机能性悬浮造型晶球与环境接触的时间，进而避免主体结构或活性成分变质。涉及本实施方式的制造方法的详细步骤如下所述。
46.首先，提供模具(1)，模具具有成型穴(11)及二个与成型穴(11)连通的开口(步骤s11)。一般而言，成型穴(11)的外型可决定机能性悬浮造型晶球的外型。如图2所示，成型穴(11)的外型为心形时，机能性悬浮造型晶球的外型当然为心形。可理解的是，成型穴(11)的外型也可为圆形、三角形、或星形，但不以此为限。
47.接着，将模具(1)的其中一开口置于成型组合液(3)中，使成型组合液(3)润湿模具(1)的成型穴(11)(步骤s12)。须说明的是，润湿成型穴(11)的目的在于：便于将后续得到的机能性悬浮造型晶球自成型穴(11)脱模取出而不残留于模具(1)中。基于成型组合液(3)的总重量，成型组合液(3)可含有0.5至2wt％的碳酸钙、0.5至2wt％的乳酸钙、0.5至2wt％的氯化钙、0.5至2wt％的氯化钡、0.5至2wt％的氯化钾、及补足至100wt％的溶剂(如：水)，但不以此为限；而成型组合液(3)的ph值可为ph4至8，但不以此为限。
48.最后，将晶球组合液(2)添加至模具(1)的成型穴(11)内，以透过成型穴(11)内的成型组合液(3)使晶球组合液(2)形成机能性悬浮造型晶球(4)(步骤s13、s14)。基于晶球组合液(2)的总重量，晶球组合液(2)可含有0.01至5wt％的玻尿酸钠、0.5至5wt％的聚丙烯酸、0.5至5wt％的海藻酸钠、0.5至5wt％的三仙胶、0.5至2wt％的小核菌胶、0.04至2wt％的羟乙基纤维素、0.04至2wt％的瓜尔胶、0.05至5wt％的活性成分、及补足至100wt％的溶剂(如：水)，但不以此为限；而晶球组合液(2)的ph值可为ph4至8，但不以此为限。此外，活性成分可定义为具有促进皮肤保护修护、抗皱、抗氧化、抗发炎、抗老化、及美白等功效之一的成分，较佳地为植物萃取物。举例而言，植物萃取物可为中国台湾发明专利公告号i697332所述的牛樟芽胚组织萃取物、中国台湾发明专利公开号202021609所述的兰花芽胚组织萃取物、中国台湾发明专利公开号202023527所述的仙茅萃取物、中国发明专利公开号cn109276493a所述的龙眼花萃取物、或中国发明专利公开号cn108852924a所述的红藜萃取物，但不以此为限，该等文献全文并于此以供参考。须说明的是，由于成型组合液(3)可使晶球组合液(2)聚合形成包括主体结构以及活性成分的机能性悬浮造型晶球(4)，故主体结构可含有玻尿酸钠、聚丙烯酸、海藻酸钠、三仙胶、小核菌胶、羟乙基纤维素、及瓜尔胶，但不以此为限。此外，机能性悬浮造型晶球(4)的比重可为0.95至1，但不以此为限。
49.请另参照图5，本发明的另一实施方式提出一种机能性悬浮造型晶球的制造方法。若无特别叙明，本实施方式的用语所表示的意思原则上与上一实施方式的用语所表示的意思相同。涉及本实施方式的制造方法的详细步骤如下所述。
50.首先，提供模具(1)，模具具有成型穴(11)以及一个与成型穴(11)连通的开口(步骤s21)。
51.接着，将晶球组合液(2)经由开口添加至模具(1)的成型穴(11)内(步骤s22)。此外，如前所述，为便于将后续得到的机能性悬浮造型晶球自成型穴(11)脱模取出而不残留于模具(1)中，于晶球组合液(2)添加前，可利用成型组合液润湿模具(1)的成型穴(11)。
52.最后，添加成型组合液(3)至成型穴(11)内的晶球组合液(2)以透过成型穴(11)内的成型组合液(3)使成型穴(11)内的晶球组合液(2)形成机能性悬浮造型晶球(4)(步骤s23、s24)。
53.更佳者，该植物萃取物为山刺番荔枝叶萃取物。于一较佳实施例中，该山刺番荔枝叶萃取物的制备方法包含：首先，将山刺番荔枝叶子洗净，阴干约3至5天，再将山刺番荔枝叶子剪成小碎片约0.5cm2大小以进行萃取。其中，本发明的萃取率公式为：(萃取物重量/样品原总重)
×
100％。再来，将剪碎的山刺番荔枝叶进行浸泡步骤，于此步骤中包含两种实施态样，其中，第一实施态样为“超声波低温水萃法”，具体而言，其实施方式为：将山刺番荔枝叶子秤取约100g于4℃的环境下浸泡于900ml的去离子水中，并以超声波振荡萃取设备，于低温下以总能量300～600w的能量连续式萃取。于一较佳实施例中，该连续式萃取以震荡3分钟，休息2分钟的方式一共震荡60分钟。于另一较佳实施例中，于连续式萃取完成后，在4℃温度下以15,000rpm高速离心30分钟，收集上清液，再经抽真空过滤器过滤，获得澄清过滤液，利用减压浓缩机及冷冻干燥机将半成品萃取液进行浓缩，制成山刺番荔枝叶水萃取物。于又一较佳实施例中，山刺番荔枝叶水萃取物的冻干物储存于-80℃；第二实施态样为“超声波低温乙醇萃法”，具体而言，其实施方式为：将山刺番荔枝叶子秤取约100g浸泡于五倍体积的95％乙醇，于4℃的环境中避光三天，取出后于低温下以总能量300～600w的能量连续式萃取。于一较佳实施例中，该连续式萃取以震荡3分钟，休息2分钟的方式一共震荡60分钟。于另一较佳实施例中，于连续式萃取完成后，在4℃温度下以15,000rpm高速离心30分钟，收集上清液，再经抽真空过滤器过滤，获得澄清过滤液，利用减压浓缩机及冷冻干燥机将半成品萃取液进行去除溶剂作业，制成山刺番荔枝叶乙醇萃取物。于又一较佳实施例中，该山刺番荔枝叶乙醇萃取物的冻干物储存于-80℃。以下将山刺番荔枝叶水萃萃取物简称为amlw:将山刺番荔枝叶乙醇萃萃取物简称为amle。
54.如图6所示，为山刺番荔枝叶乙醇萃取物以50～1000μg/ml作用于黑色毒瘤细胞(b16f10细胞)时，b16f10细胞的存活度，其中：amle于50μg/ml时，即对老鼠黑色毒瘤细胞(b16f10)细胞具有显著毒性，其细胞存活度只剩下30％，表示山刺番荔枝叶乙醇萃取物具有毒杀癌细胞的作用，可用于制备治疗皮肤癌的医药品、化妆品、保养品、人体清洁用品、或香氛等产品的原料。
55.如图7a至7b所示，为经过uvb照射的dna puc119试验，当dna受到破坏时，dna会从环形环绕结构(supercoiled-form,s-form)断裂成直线结构(linear-form,l-form)，利用不同分子量的核酸在胶体孔径中移动速度的差异特性，将puc19 dna以h2o2(1mm)诱导及uvb(20mj/cm2)照射，若dna能受到保护作用时，则能呈现至s-form的位置，而当受到破坏时，dna便会呈现在l-form的位置。如图7a至7b所示，可发现控制组未受到伤害可以保持完整的dna型态并呈现环绕结构，未加药物的uvb伤害组别，dna结构受到损伤而呈现直线形结构，而先添加amls或amlw再经uvb照射的状态下，可保持较完整的dna环绕结构，因此可发现山刺番荔枝叶萃取物具有dna保护的作用，并且山刺番荔枝叶的水萃萃取物对于dna的保护效果较乙醇萃萃取物为佳。
56.更佳者，该植物萃取物为刺葱茎萃取物。于一较佳实施例中，该刺葱茎萃取物的制备方法与该山刺番荔枝叶萃取物的制备方法相同，在此不多做赘述，其中以该“超声波低温水萃法”制成一刺葱茎水萃萃取物；以该“超声波低温乙醇萃法”制成刺葱茎乙醇萃萃取物。
于另一较佳实施例中，该植物萃取物为刺葱叶萃取物。于又一较佳实施例中，该刺葱叶萃取物的制备方法与该山刺番荔枝叶萃取物的制备方法相同，在此不多做赘述，其中以该“超声波低温水萃法”制成刺葱叶水萃萃取物；以该“超声波低温乙醇萃法”制成刺葱叶乙醇萃萃取物。以下将刺葱叶水萃萃取物简称为zllw:将刺葱叶乙醇萃萃取物简称为zlle；将刺葱茎水萃萃取物简称为zlsw:将刺葱茎乙醇萃萃取物简称为zlse。
57.如图8所示，为刺葱萃取物对于dna保护效果的实验，其中：于仅受h2o2、feso4及uvb伤害的组别，其dna结构受到损伤，呈现大量的直线型的结构，而经刺葱茎水萃萃取物作用的组别，能保持dna的完整型态呈现环形缠绕结构，具有优异的dna保护的作用。
58.如图9所示，为刺葱萃取物以20～1000μg/ml作用于黑色毒瘤细胞(b16f10细胞)时，b16f10细胞的存活度，其中：提供控制组，其b16f10细胞活性为100％，当添加zlle在100μg/ml及以上的浓度作用下，b16f10细胞存活度低于80％；当添加zlse在250μg/ml及以上的浓度作用下，b16f10细胞存活度低于80％，显示其对b16f10细胞具有毒性。表示刺葱叶乙醇萃萃取物或刺葱茎乙醇萃萃取物具有毒杀癌细胞的作用，可用于制备治疗皮肤癌的医药品、化妆品、保养品、人体清洁用品、或香氛等产品的原料。
59.如图10所示，zlse、zlle及zllw明显促进酪胺酸酶能力，导致黑色素生成量增加，且其增加比率有随浓度增高而增强的趋势，故推测zlse、zlle及zllw具备促进黑色素生成的能力，可用于制备促进黑色素生成或强化发根的组合物，并且所制成的组合物可做为仿晒制剂、头皮养护产品、洗发精、口服制剂、食品或生发水等产品的原料。
60.更佳者，该植物萃取物为牡丹花蕊生长点组织萃取物。于一较佳实施例中，该牡丹花蕊生长点组织萃取物包含牡丹花蕊生长点组织水萃萃取物或牡丹花蕊生长点组织乙醇萃萃取物。于另一较佳实施例中，该牡丹花蕊生长点组织水萃萃取物的制备方法包含：采取牡丹花新鲜花蕊，将牡丹花蕊组织以急速-195.79℃(77k)液态氮冷冻固化，并以冷冻研磨器研磨牡丹花蕊组织，将牡丹花蕊组织磨成粉末；提取重量比为9：1的纯水以及牡丹花蕊组织粉末，并将牡丹花蕊组织粉末浸泡于纯水中，于温度条件4℃～50℃的情况下浸泡72～120小时；将浸泡完成的牡丹花蕊组织粉末以及纯水的混合物，于温度条件-4℃～25℃的情况下，以总能量500～800w的超声波能量连续快速振荡萃取，其中，以每震动5分钟休息2分钟的方式连续震荡，直到总震荡时间达60～120分钟；于温度条件-20℃下以15,000g高速离心10分钟以去除底部沉淀物并收集上清液；将该上清液以孔径0.22～0.45μm的多微孔结构滤膜后，利用真空筛检器的程序过滤，以获得澄清过滤液；利用减压浓缩机及真空冷冻干燥机将该澄清过滤液冻干，获得牡丹花蕊生长点组织萃取物(psb)。于又一较佳实施例中，该牡丹花蕊生长点组织乙醇萃萃取物的制备方法包含：采取牡丹花新鲜花蕊，将牡丹花蕊组织以急速-195.79℃(77k)液态氮冷冻固化，并以冷冻研磨器研磨牡丹花蕊组织，将牡丹花蕊组织磨成粉末；提取重量比为9：1的酒精溶液(含50重量％～75重量％乙醇)以及牡丹花蕊组织粉末，并将牡丹花蕊组织粉末浸泡于酒精溶液(含50重量％～75重量％乙醇)中，于温度条件4℃～50℃的情况下浸泡72～120小时；将浸泡完成的牡丹花蕊组织粉末以及酒精溶液(含50重量％～75重量％乙醇)的混合物，于温度条件-4℃～25℃的情况下，以总能量500～800w的超声波能量连续快速振荡萃取，其中，以每震动5分钟休息2分钟的方式连续震荡，直到总震荡时间达60～120分钟；于温度条件-20℃下以15,000g高速离心10分钟以去除底部沉淀物并收集上清液；将该上清液以孔径0.22-0.45μm的多微孔结构滤膜后，利用真空
筛检器的程序过滤，以获得澄清过滤液；利用减压浓缩机及真空冷冻干燥机将该澄清过滤液冻干，获得牡丹花蕊生长点组织萃取物(psb)。以下将牡丹花蕊生长点组织萃取物简称为psb。
61.pcna(proliferating cell nuclear antigen)是一种增殖细胞核抗原，可作为dna钳，帮助dna聚合酶活性(dna pol)然后募集fen1(flap内切核酸酶1)以去除悬垂的5'端，是dna修复的最后一步涉及dna连接酶，该酶将最终的dna链以磷酸二酯键结合在一起。有许多机制可以修复受损的双链。如图11所示，未经过uvb伤害的控制组，pcna表现定量(1.0)，而经过uvb照射后，其表现明显降低(0.2)。而经牡丹花蕊生长点组织萃取物(psb)作用的细胞则可明显提升pcna的表现(0.8)。显示牡丹花蕊生长点组织萃取物可有效调控修护皮肤细胞免于uv的伤害。
62.更佳者，该活性成分为牡丹花蕊复合微晶囊体组合物。于一较佳实施例中，该牡丹花蕊复合微晶囊体组合物的制备方法包含：将牡丹花蕊生长点组织萃取物(psb)与载体原料混合，使载体原料分散形成胶体复合物。具体而言，将载体原料溶解于溶剂中，利用旋转减压浓缩仪去除溶剂以形成脂质薄膜，之后加入牡丹花蕊生长点组织萃取物(psb)至脂质薄膜使脂质分散成胶体复合物，所获得的胶体复合物即为牡丹花蕊复合微晶囊体组合物。以下将牡丹花蕊复合微晶囊体组合物简称为psbl。
63.核纤层蛋白lamin a基因变异可损坏dna修复功能，而令基因组变得不稳定，导致早老症。抗衰老启动机制发现lamin a蛋白质能刺激长寿基因sirt1，使细胞自我保护、自我更新及推迟衰老。评估包覆型牡丹花蕊微囊(psbl)调控抗老化蛋白lamin a的表现，进而推迟细胞衰老。人类皮肤角质株化细胞(hacat细胞)(1.5
×
105cell/ml)培养于直径10cm的培养皿(dish)，在37℃及5％co2培养箱中培养至少24小时，加入包覆型牡丹花蕊微囊(psbl)，置入培养箱作用24小时。当达反应时间，利用ripa buffer进行蛋白质萃取，之后进行sds-page电泳直到目标蛋白分离。加入0.5％脱脂牛奶2分钟后，再加入1级抗体反应10分钟，以0.1％磷酸盐缓冲生理盐水(pbst)冲洗3次，再加入2级抗体反应10分钟，再以0.1％pbst冲洗3次。最后加入ecl冷光感应试剂，置入冷光照相系统拍照并使用image j定量分析蛋白质表现。如图12所示，人类皮肤角质株化细胞(hacat细胞)经包覆型牡丹花蕊微囊(psbl)作用后，分析细胞内lamin a蛋白质表现量。细胞骨架蛋白β-actin作为定量控制组。结果显示，与控制组(lamin a表现为1.0)相比，细胞经包覆型牡丹花蕊微囊(psbl)作用后lamin a表现增加至3.8，显示包覆型牡丹花蕊微囊(psbl)可活化lamin a蛋白质，推测其具抗老化效果。
64.惟以上所述者，仅为本发明的较佳实施例，但不能以此限定本发明的专利保护范围；故，凡依本发明的专利保护范围及发明说明书内容所作的简单的等效改变与修饰，皆仍落入本发明的专利保护范围内。