肝癌药物的辅助治疗药物及应用和治疗肝癌药物混合物

本发明属于分子生物学和肿瘤防治领域，更具体而言，本发明涉及治疗肝癌耐药性领域。本发明提供了一种新的肿瘤耐药标志物。在肿瘤组织中高表达并导致肿瘤耐药的脂肪酸去饱和酶2(fatty acid desatyrase2，fads2)，将该蛋白作为靶点，可筛选针对该蛋白及其相关分子的治疗肿瘤耐药的药物。

背景技术：

1、作为我国最常见的恶性肿瘤之一的肝癌，具有高发病率、高死亡率的特点。目前，化疗仍是肝癌的主要治疗手段之一。然而，在治疗过程中出现的肝癌对化疗药物的耐药性是影响治疗效果的主要障碍。因此，为了提高肝癌化疗疗效，对肝癌耐药机制进行研究，找到肿瘤耐药关键靶点，设计能够提高肝癌治疗敏感性的新药，是本领域重点研究方向。

2、fads2是一种由444个氨基酸组成的分子量为52.2k da的膜蛋白；它包含一个细胞色素b5样结构域、两个跨膜结构域和三个富含组氨酸的结构域(区域i,ii,iii)。fads2在乳腺癌、肺癌、肝癌、食道癌和黑色素瘤等恶性肿瘤中异常表达。此外，fads2的高表达与肿瘤增殖、细胞迁移和侵袭、血管生成、放疗抗性、临床分期和预后显著相关。fads2还可以通过调节肿瘤微环境中代谢物的产生或改变肿瘤细胞膜的磷脂组成来影响肿瘤细胞的行为。然而fads2在肝癌索拉非尼耐药细胞中的功能和作用机制尚未见报道。为了研究fads2在肝癌耐药中发挥的作用，本发明采用基于质谱的定量蛋白质组学技术筛选和生物学功能研究，运用western blotting、平板克隆形成、等方法检测fads2对肝癌耐药细胞增殖及凋亡的影响。

技术实现思路

1、本发明的目的之一是提供一种通过抑制fads2从而增强肝癌细胞药物敏感性来实现肝癌治疗的方法。通过抑制fads2，恢复肝癌耐药细胞对药物的敏感性，从而达到治疗肝癌的目的。

2、本发明的目的之二是提供一种检测肝癌耐药的分子靶点，为检测肝癌耐药性提供有效工具。

3、为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

4、本发明提供了抑制fads2的方法，是通过抑制剂实现。

5、进一步，所述抑制剂包括了：针对fads2蛋白抑制的抗fads2的抗体、小分子抑制剂、针对fads2编码序列的rna干扰分子或反义寡核苷酸。

6、更进一步，所述抗fads2的抗体，包括：对fads2或其活性片段具有免疫活性，能够特异性识别并结合fads2的氨基酸序列或其空间结构的单克隆抗体、多克隆抗体和具有免疫活性的抗体片段。

7、本发明所述的抗体，其检测方式可通过免疫沉淀，免疫组织化学或免疫荧光。

8、本发明所述的小分子抑制剂可根据需要制备成各种剂型，可以单独给药，也可以各种组合形式给药。

9、本发明所述的针对fads2编码序列的rna干扰分子，选自shrna、sirna、mirna、dsrna。

10、进一步，所述的rna干扰分子sirna的优选序列为sirna1，正义链:5'-acggcaagaacucaaagautt-3'和反义链:5'-aucuuugaguucuugccgugg-3'；

11、sirna2,正义链:5'-accugucugucuacagaaatt-3'和反义链:

12、5'-uuucuguagacagacaggugg-3'；

13、sirna3,正义链:5'-acggcaagaacucaaagautt-3'和反义链:5'-aucuuugaguucuugccgugg-3'。

14、本发明所述的rna干扰分子sirna使用瞬时转染方法。

15、本发明所述的反义寡核苷酸，特异地与fads2基因dna或mrna结合而抑制fads2基因表达，在基因水平调控的分子药物，包括人工合成或体内表达的反义dna和反义rna。

16、本发明提供了fads2的检测方法，包括：基于抗fads2抗体的免疫印迹检测、基于抗fads2抗体的免疫荧光检测、基于抗fads2抗体的的免疫组织化学检测、靶向质谱检测以及非靶向质谱检测。

17、本发明所述的肝癌包括：原发性肝癌，继发性肝癌，以及原发性肝癌或继发性肝癌的离体培养细胞。

18、进一步，原发性肝癌包括：肝细胞肝癌、肝内胆管癌，肝细胞癌混合肝内胆管癌；继发性肝癌包括：肠癌、胰腺癌转移胆囊癌、胆管癌。

19、本发明所述的药物，包括：顺铂、吉非替尼、阿霉素、紫杉醇、5-氟尿嘧啶、索拉非尼、西地尼布、帕唑帕尼、阿西替尼、瓦他拉尼、司马沙尼、舒尼替尼、雷莫芦单抗及阿柏西普。

20、本发明提供了一种通过抑制fads2从而增强肝癌细胞药物敏感性的肝癌治疗新方法。本发明发现肝癌耐药细胞中fads2表达量上调，生存分析显示fads2的高表达与肝癌不良预后有关，抑制fads2可以显著增强肝癌细胞药物敏感性，从而达到治疗肝癌的目的。本发明的研究成果不仅为肝癌临床治疗提供理论基础，并能够为肝癌药物的开发提供新的药物靶点

技术特征：

1.一种肝癌药物的辅助治疗药物，其以肝癌细胞的fads2蛋白抑制剂为活性成份。

2.如权利要求1所述的辅助治疗药物，其特征在于，所述fads2抑制剂选自下述中的一种或两种以上：针对fads2蛋白抑制的抗fads2的抗体、针对fads2编码序列的rna干扰分子或反义寡核苷酸中的一种或两种以上、针对fads2的小分子抑制剂。

3.如权利要求2所述的辅助治疗药物，其特征在于：抗fads2的抗体包括：对fads2或其活性片段具有免疫活性，能够特异性识别并结合fads2的氨基酸序列或其空间结构的单克隆抗体、多克隆抗体和具有免疫活性的抗体片段中的一种或两种以上；所述的针对fads2编码序列的rna干扰分子选自：shrna、sirna、mirna、dsrna中的至少一种或两种以上；所述的反义寡核苷酸为：特异地与fads2基因dna或mrna结合而抑制fads2基因表达，在基因水平调控的分子药物，包括人工合成或体内表达的反义dna和反义rna中的一种或两种以上。

4.如权利要求2所述的辅助治疗药物，其特征在于：rna干扰分子sirna的序列为下述中的一种或两种以上，

5.如权利要求1-4任一所述辅助治疗药物，其特征在于，所述辅助治疗药物用于辅助肝癌治疗所采用的肝癌药物为顺铂、吉非替尼、阿霉素、紫杉醇、5-氟尿嘧啶、索拉非尼、西地尼布、帕唑帕尼、阿西替尼、瓦他拉尼、司马沙尼、舒尼替尼、雷莫芦单抗及阿柏西普中的一种或两种以上，其可恢复肝癌耐药细胞对药物的敏感性，可提高其药效。

6.如权利要求1或5所述的辅助治疗药物，其特征在于：所述的肝癌包括原发性肝癌和继发性肝癌中的一种或者两种组合；或原发性肝癌或继发性肝癌的离体培养细胞中的一种或者两种；其中原发性肝癌包括：肝细胞肝癌、肝内胆管癌，肝细胞癌混合肝内胆管癌中的一种或者两种；继发性肝癌包括：肠癌、胰腺癌转移胆囊癌、胆管癌中的一种或者两种。

7.一种fads2蛋白抑制剂在制备恢复肝癌耐药细胞对药物的敏感性的辅助治疗药物中的应用。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于：所述fads2蛋白抑制剂为权利要求2-4中任一权利要求中所述的fads2蛋白抑制剂中的一种或二种以上。

9.一种治疗肝癌药物混合物，包含fads2蛋白抑制剂，以及肝癌药物或肝癌药物活性成份中的一种或二种以上。

10.如权利要求9所述的治疗肝癌药物混合物，所述fads2蛋白抑制剂为权利要求2-4中任一权利要求中所述的fads2蛋白抑制剂中的一种或二种以上；

技术总结
目前大部分肿瘤的治疗方案都是手术切除辅助化疗，化疗耐药性现已成为影响肿瘤患者预后的重要因素。本发明提供了一种通过抑制FADS2从而增强肝癌细胞药物敏感性的肝癌治疗新方法。本发明发现肝癌耐药细胞中FADS2表达量上调，生存分析显示FADS2的高表达与肝癌不良预后有关，抑制FADS2可以显著增强肝癌细胞药物敏感性，从而达到治疗肝癌的目的。本发明的研究成果不仅为肝癌临床治疗提供理论基础，并能够为肝癌药物的开发提供新的药物靶点。

技术研发人员：张丽华,张堃,王子璇,褚宏伟,马宝福,潘慧,赵宝锋,梁振,杨开广,张玉奎
受保护的技术使用者：中国科学院大连化学物理研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12