用于刺激毛发生长的组合物和方法
1.相关申请的交叉引用本技术要求于2020年2月25日提交的美国临时专利申请号62/981,480的优先权，所述美国临时专利申请在此通过引用以其整体并入。
背景技术：
2.本发明一般涉及用于刺激毛发生长的组合物和方法。
3.脱发经常对遭受其的个体具有负面的社会和心理影响。许多因素被认为促成脱发，包括遗传、激素、环境暴露、用药、心理压力和营养。一种已知的治疗是毛发移植，其需要麻醉，是高成本、耗时和有时痛苦的。其它方法包括按摩和针灸，但这些并未显示为有效的。激素和其它药物已用于治疗脱发，然而，这些治疗频繁导致不期望的副作用，例如在不需要的区域中的毛发生长。相应地，需要用于刺激毛发生长的有效疗法。
技术实现要素：
4.在一个实施方案中，用于刺激毛发生长的组合物包括骨桥蛋白和透明质酸。透明质酸可以具有在约20 kda至1350 kda的范围内的平均分子量。透明质酸可以是交联的，并且在一些实施方案中，可以具有约20%或更大的交联密度。在一些实施方案中，透明质酸以25 mcg/ml或更高、或约25 mcg/ml至约100 mcg/ml的浓度存在。在一些实施方案中，组合物还可以包括丝甘蛋白聚糖、硫酸软骨素、纤维蛋白、igfbp4和gfp10中的一种或多种，并且特别地可以包括丝甘蛋白聚糖、硫酸软骨素和纤维蛋白中的一种或多种。在一些实施方案中，组合物可以包括透明质酸酶抑制剂，例如选自高分子量聚(4-磺酸苯乙烯) (pss)、棉酚、金硫丁二钠、非诺洛芬、甘草酸、脂肪酸、植物衍生的化合物、肝素和o-硫酸化ha (sha)或其组合的透明质酸酶抑制剂。
5.在另一个实施方案中，用于刺激毛发生长的组合物包括透明质酸以及丝甘蛋白聚糖、硫酸软骨素、纤维蛋白、igfbp4和gfp10中的一种或多种。特别地，组合物可以包括丝甘蛋白聚糖、硫酸软骨素和纤维蛋白中的一种或多种。透明质酸可以具有在约20 kda至1350 kda的范围内的平均分子量。透明质酸可以是交联的，并且在一些实施方案中，可以具有约20%或更大的交联密度。在一些实施方案中，透明质酸以25 mcg/ml或更高、或约25 mcg/ml至约100 mcg/ml的浓度存在。在一些实施方案中，组合物还可以包括骨桥蛋白。在一些实施方案中，组合物还可以包括透明质酸酶抑制剂，例如选自高分子量聚(4-磺酸苯乙烯) (pss)、棉酚、金硫丁二钠、非诺洛芬、甘草酸、脂肪酸、植物衍生的化合物、肝素和o-硫酸化ha (sha)或其组合的透明质酸酶抑制剂。
6.在一个实施方案中，刺激有此需要的患者的皮肤中的毛发生长的方法包括将包含透明质酸和cd44结合配体的组合物施用于患者的皮肤。在一些实施方案中，施用包括将组合物施用于皮肤表面，而在其它实施方案中，施用包括将组合物注射到皮肤的真皮层内。可以将组合物注射到皮肤内约400微米至约2 mm的深度。在一些实施方案中，组合物以约400次注射/cm2皮肤至约650次注射/cm2皮肤的量以多次注射进行施用。在一些实施方案中，针
是微针。在一些实施方案中，组合物可以包裹在脂质体例如包含氢化磷脂的脂质体中。
7.在一些实施方案中，刺激毛发生长的方法进一步包括对皮肤应用离子电渗疗法。
8.在一些实施方案中，刺激毛发生长的方法进一步包括对皮肤应用电穿孔。
9.在一些实施方案中，刺激毛发生长的方法进一步包括对皮肤应用激光消融。
10.在一些实施方案中，刺激毛发生长的方法进一步包括对皮肤应用射频热消融。
11.在一些实施方案中，刺激毛发生长的方法进一步包括对皮肤应用微针装置。
12.在一个实施方案中，向需要治疗脱发的患者施用用于毛发生长的组合物的方法包括将组合物注射到患者的皮肤内，其中所述组合物包含透明质酸和cd44结合配体。组合物可以经由针进行注射，例如，其中在注射前将针插入皮肤内400微米至约2 mm。在一些实施方案中，针是微针。在一些实施方案中，组合物可以包裹在脂质体例如包含氢化磷脂的脂质体中。
13.在一个实施方案中，用于刺激毛发生长的组合物包括骨桥蛋白、透明质酸、丝甘蛋白聚糖、硫酸软骨素、纤维蛋白、igfbp4和gfp10中的两种或更多种。
14.在一些实施方案中，用于刺激毛发生长的组合物包含浓度为约1 mcg/ml至约250 mcg/ml的透明质酸。透明质酸可以具有例如在约4,000 da至10,000 da的范围内、在约10,000 da至约100,000 da的范围内、在约15 kda至约50 kda的范围内、在约75 kda至约350 kda的范围内、或在约20 kda至1350 kda的范围内的平均分子量。在一些实施方案中，透明质酸具有大于约950 kda的平均分子量。
15.在组合物的一些实施方案中，透明质酸是交联的。例如，透明质酸可以具有约20%或更大的交联密度。
16.在组合物的一些实施方案中，透明质酸以约25 mcg/ml至约250 mcg/ml、约25 mcg/ml至约100 mcg/ml、约100 mcg/ml至约250 mcg/ml、或者约100 ug/ml或更低的浓度存在。
17.在一些实施方案中，包含浓度为约250 mcg/ml或更低的透明质酸的用于刺激毛发生长的组合物进一步包含骨桥蛋白、透明质酸、丝甘蛋白聚糖、硫酸软骨素、纤维蛋白、igfbp4和gfp10中的一种或多种。
18.在本发明的一些实施方案中，刺激有此需要的患者的皮肤中的毛发生长的方法包括将包含浓度为约1 mcg/ml至约250 mcg/ml的透明质酸的组合物施用于患者的皮肤。在此类方法中，施用可以包括将组合物注射到皮肤的真皮层内，例如皮肤内约400微米至约2 mm的深度。在其它此类方法中，施用可以包括注射以约400次注射/cm2皮肤至约650次注射/cm2皮肤的量的多次注射。在一些实施方案中，方法进一步包括进一步的步骤，例如对皮肤应用离子电渗疗法、对皮肤应用电穿孔、对皮肤应用激光消融、对皮肤应用射频热消融和/或对皮肤应用微针装置。在一些实施方案中，组合物进一步包括cd44结合配体，例如骨桥蛋白。
19.在本发明的一些实施方案中，向需要治疗脱发的患者施用用于毛发生长的组合物的方法包括将组合物注射到患者的皮肤内，其中所述组合物包含浓度为约1 mcg/ml至约250 mcg/ml的透明质酸。在一些实施方案中，组合物经由针进行注射，例如，其中在注射前将针插入皮肤内400微米至约2 mm。在一些实施方案中，针是微针。在一些实施方案中，组合物进一步包含cd44结合配体，例如骨桥蛋白。
附图说明
20.当与附图结合阅读时，用于刺激毛发生长的组合物和方法的实施方案的下述详细描述将得到更好地理解。然而，应当理解，本发明并不限于所示的精确布置。
21.在附图中：图1说明了骨桥蛋白序列和结构域。seq id no: 1代表骨桥蛋白的外显子4的氨基酸；seq id no: 2代表骨桥蛋白的外显子5的氨基酸残基；seq id no: 3代表骨桥蛋白的整联蛋白结合结构域#2 (氨基酸残基162-168)。
22.图2说明了骨桥蛋白结构域和结构；seq id no: 4代表骨桥蛋白的整联蛋白结合位点；seq id no: 5代表骨桥蛋白的整联蛋白结合位点。
23.图3说明了骨桥蛋白结构域和结构。seq id no: 6代表骨桥蛋白的氨基酸残基17-314。
24.图4说明了骨桥蛋白序列和结构域。seq id no: 3代表骨桥蛋白的整联蛋白结合结构域#2 (氨基酸残基162-168)；seq id no: 7代表骨桥蛋白的钙结合结构域(氨基酸残基216-228)；seq id no: 8代表包括信号肽(氨基酸残基1-16)的骨桥蛋白序列。
25.图5显示了在用对照溶液以及低分子量透明质酸的25、50和100 mcg/ml溶液注射后18天的小鼠。
26.图6显示了在用对照溶液以及低分子量透明质酸的25、50和100 mcg/ml溶液注射后18天的小鼠。
27.图7显示了在用对照溶液以及高分子量透明质酸的25、50和100 mcg/ml溶液注射后18天的小鼠。
28.图8显示了在用对照溶液以及高分子量透明质酸的25、50和100 mcg/ml溶液注射后18天的小鼠。
具体实施方式
29.本发明提供了可用于刺激毛发生长的方法和组合物。
30.i. 组合物在一些实施方案中，毛发生长刺激组合物包括关于cd44的天然存在的配体、或者其片段或衍生物。
31.在一些实施方案中，关于cd44的天然存在的配体是骨桥蛋白(opn、spp1)、丝甘蛋白聚糖(srgn)、硫酸软骨素、胶原、纤连蛋白、纤维蛋白或者其cd44结合片段、同种型或衍生物中的一种或多种。
32.关于cd44的天然存在的配体的cd44结合片段、同种型或衍生物包括结合cd44的合成肽，并且基于骨桥蛋白、丝甘蛋白聚糖、硫酸软骨素、胶原、纤连蛋白和/或纤维蛋白的cd44结合结构域生成。
33.在一些实施方案中，毛发生长刺激组合物包括透明质酸。
34.在一些实施方案中，毛发生长刺激组合物包括关于cd44的一种或多种天然存在的配体或者其片段或衍生物、以及透明质酸。
35.在一些实施方案中，毛发生长刺激组合物包括透明质酸、骨桥蛋白、丝甘蛋白聚糖、硫酸软骨素、胶原、纤连蛋白、纤维蛋白及其蛋白水解或合成产生的cd44结合片段、同种
型或衍生物中的两种或更多种的组合。在一些实施方案中，毛发生长组合物包括透明质酸、骨桥蛋白、丝甘蛋白聚糖、硫酸软骨素、胶原、纤连蛋白、纤维蛋白及其结合cd44的蛋白水解或合成产生的片段、同种型或衍生物中的三种或更多种。上文任一种还可以包括透明质酸酶抑制剂和/或一种或多种其它组成成分。
36.各种非限制性实施方案包括下表中描述的组合物，其中“x”指示该组分包括在本发明的实施方案中：
组合物编号骨桥蛋白丝甘蛋白聚糖硫酸软骨素纤维蛋白透明质酸透明质酸酶抑制剂1x
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36 x xx 37 x x x38 x
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43.xxx x 44.xxx
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xx48.x xxx 49.x xx x50.x x xx51.x
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在一些实施方案中，用于刺激毛发生长的组合物可以包括cd44的一种或多种配体。此类配体可以包括骨桥蛋白。在本发明的范围内包括的其它配体包括丝甘蛋白聚糖、硫酸软骨素(例如，4-硫酸软骨素)、胶原、纤连蛋白、纤维蛋白、胰岛素生长因子结合蛋白(igfbp) (例如，igfbp-1、igfbp-2、igfbp-3、igfbp4、igfbp-5和igfbp-6)、绿色荧光蛋白和透明质酸。
37.在一些实施方案中，组合物可以包括cd44配体的片段、同种型或衍生物，其中此类片段、同种型或衍生物与cd44的相应配体具有至少95%的同一性、至少90%的同一性、至少85%的同一性、至少80%的同一性、至少75%的同一性、至少70%的同一性、至少65%的同一性或至少60%的同一性。
38.在一些实施方案中，组合物包含约0.01重量%或更多的cd44结合配体、约0.025重量%或更多的cd44结合配体、约0.050重量%或更多的cd44结合配体、约0.075重量%或更多的cd44结合配体、约0.1重量%或更多的cd44结合配体、约0.25重量%或更多的cd44结合配体、约0.5重量%或更多的cd44结合配体、约0.75重量%或更多的cd44结合配体、约1重量%或更多的cd44结合配体、约2.5重量%或更多的cd44结合配体、约5重量%或更多的cd44结合配体、约7.5重量%或更多的cd44结合配体、或者约10重量%或更多的cd44结合配体。在一些实施方案
中，组合物包含约0.01重量%至约0.025重量%的cd44结合配体、约0.025重量%至约0.05重量%的cd44结合配体、约0.025重量%至约0.075重量%的cd44结合配体、约0.025重量%至约0.1重量%的cd44结合配体、约0.01重量%至约0.1重量%的cd44结合配体、约0.05重量%至约0.075重量%的cd44结合配体、约0.05重量%至约0.1重量%的cd44结合配体、约0.075重量%至约0.1重量%的cd44结合配体、约0.1重量%至约0.2重量%的cd44结合配体、约0.1重量%至约0.5重量%的cd44结合配体、约0.2重量%至约0.4重量%的cd44结合配体、约0.5重量%至约1重量%的cd44结合配体、约0.4重量%至约0.6重量%的cd44结合配体、约0.6至约0.8重量%的cd44结合配体、约0.8重量%至约1重量%的cd44结合配体、约1重量%至约2重量%的cd44结合配体、约1重量%至约5重量%的cd44结合配体、约2重量%至约4重量%的cd44结合配体、约5重量%至约10重量%的cd44结合配体、约4重量%至约6重量%的cd44结合配体、约6至约8重量%的cd44结合配体、或者约8重量%至约10重量%的cd44结合配体。
39.1. 骨桥蛋白骨桥蛋白是一种细胞外信号传导蛋白，其是关于cd44的天然配体。图1-4描述了骨桥蛋白的序列和结构域结构。不受理论的束缚，认为骨桥蛋白可以通过蛋白水解切割cd44，导致cd44细胞内结构域(icd)的细胞内释放而诱导cd44活化。cd44-icd然后自由进入核内并调节基因表达。骨桥蛋白在国际专利公开号wo 2018175630中进行讨论，所述国际专利公开在此通过引用以其整体并入。
40.在一些实施方案中，可用于刺激毛发生长的组合物包括骨桥蛋白或者其cd44结合片段、同种型或衍生物。在一些实施方案中，骨桥蛋白的cd44结合片段、同种型或衍生物包括通过天然存在的(例如，全长)骨桥蛋白的蛋白水解切割产生的肽。在一些实施方案中，骨桥蛋白的cd44结合片段、同种型或衍生物包含骨桥蛋白的残基290-305、骨桥蛋白的残基291-304，包含骨桥蛋白的残基292-303，包含骨桥蛋白的残基293-302，包含骨桥蛋白的残基294-301，或包含骨桥蛋白的残基295-300。在一些实施方案中，骨桥蛋白的cd44结合片段、同种型或衍生物包含seq id no. 2。在一些实施方案中，骨桥蛋白的cd44结合片段、同种型或衍生物包含seq id no. 3。
41.在一些实施方案中，组合物包含约0.01重量%或更多的骨桥蛋白，约0.025重量%或更多的骨桥蛋白或者其cd44结合片段、同种型或衍生物，约0.050重量%或更多的骨桥蛋白或者其cd44结合片段、同种型或衍生物，约0.075重量%或更多的骨桥蛋白或者其cd44结合片段、同种型或衍生物，约0.1重量%或更多的骨桥蛋白或者其cd44结合片段、同种型或衍生物，约0.25重量%或更多的骨桥蛋白或者其cd44结合片段、同种型或衍生物，约0.5重量%或更多的骨桥蛋白或者其cd44结合片段、同种型或衍生物，约0.75重量%或更多的骨桥蛋白或者其cd44结合片段、同种型或衍生物，约1重量%或更多的骨桥蛋白或者其cd44结合片段、同种型或衍生物，约2.5重量%或更多的骨桥蛋白或者其cd44结合片段、同种型或衍生物，约5重量%或更多的骨桥蛋白或者其cd44结合片段、同种型或衍生物，约7.5重量%或更多的骨桥蛋白或者其cd44结合片段、同种型或衍生物，或者约10重量%或更多的骨桥蛋白或者其cd44结合片段、同种型或衍生物。在一些实施方案中，组合物包含约0.01重量%至约0.025重量%的骨桥蛋白或者其cd44结合片段、同种型或其衍生物，约0.025重量%至约0.05重量%的骨桥蛋白或者其cd44结合片段、同种型或其衍生物，约0.025重量%至约0.075重量%的骨桥蛋白或者其cd44结合片段、同种型或其衍生物，约0.025重量%至约0.1重量%的骨桥蛋白或者其
cd44结合片段、同种型或其衍生物，约0.01重量%至约0.1重量%的骨桥蛋白或者其cd44结合片段、同种型或其衍生物，约0.05重量%至约0.075重量%的骨桥蛋白或者其cd44结合片段、同种型或其衍生物，约0.05重量%至约0.1重量%的骨桥蛋白或者其cd44结合片段、同种型或其衍生物，约0.075重量%至约0.1重量%的骨桥蛋白或者其cd44结合片段、同种型或其衍生物，约0.1重量%至约0.2重量%的骨桥蛋白或者其cd44结合片段、同种型或其衍生物，约0.1重量%至约0.5重量%的骨桥蛋白或者其cd44结合片段、同种型或其衍生物，约0.2重量%至约0.4重量%的骨桥蛋白或者其cd44结合片段、同种型或其衍生物，约0.5重量%至约1重量%的骨桥蛋白或者其cd44结合片段、同种型或其衍生物，约0.4重量%至约0.6重量%的骨桥蛋白或者其cd44结合片段、同种型或其衍生物，约0.6至约0.8重量%的骨桥蛋白或者其cd44结合片段、同种型或其衍生物，约0.8重量%至约1重量%的骨桥蛋白或者其cd44结合片段、同种型或其衍生物，约1重量%至约2重量%的骨桥蛋白或者其cd44结合片段、同种型或其衍生物，约1重量%至约5重量%的骨桥蛋白或者其cd44结合片段、同种型或其衍生物，约2重量%至约4重量%的骨桥蛋白或者其cd44结合片段、同种型或其衍生物，约5重量%至约10重量%的骨桥蛋白或者其cd44结合片段、同种型或其衍生物，约4重量%至约6重量%的骨桥蛋白或者其cd44结合片段、同种型或其衍生物，约6和约8重量%的骨桥蛋白或者其cd44结合片段、同种型或其衍生物，或者约8重量%至约10重量%的骨桥蛋白或者其cd44结合片段、同种型或其衍生物。
42.2. 关于cd44的其它配体在一些实施方案中，可用于刺激毛发生长的组合物包括除了骨桥蛋白之外或加上骨桥蛋白的关于cd44的一种或多种配体。此类配体包括丝甘蛋白聚糖、硫酸软骨素(例如，4-硫酸软骨素)、胶原、纤连蛋白、纤维蛋白、胰岛素生长因子结合蛋白(igfbp) (例如，igfbp-1、igfbp-2、igfbp-3、igfbp4、igfbp-5和igfbp-6)、以及绿色荧光蛋白(例如，gfp10)。关于cd44的另一种配体是下文进一步讨论的透明质酸。在一些实施方案中，组合物包含igfbp4和gfp10。
43.不受理论的束缚，认为这些组分各自可以充当与cd44结合的配体。在一些实施方案中，可用于刺激毛发生长的组合物包括与cd44结合的配体。在一些实施方案中，可用于刺激毛发生长的组合物包括与cd44结合的两种或更多种(例如，三种或四种)配体的组合。
44.a. 丝甘蛋白聚糖在一些实施方案中，组合物包含约0.01重量%或更多的丝甘蛋白聚糖、约0.025重量%或更多的丝甘蛋白聚糖、约0.050重量%或更多的丝甘蛋白聚糖、约0.075重量%或更多的丝甘蛋白聚糖、约0.1重量%或更多的丝甘蛋白聚糖、约0.25重量%或更多的丝甘蛋白聚糖、约0.5重量%或更多的丝甘蛋白聚糖、约0.75重量%或更多的丝甘蛋白聚糖、约1重量%或更多的丝甘蛋白聚糖、约2.5重量%或更多的丝甘蛋白聚糖、约5重量%或更多的丝甘蛋白聚糖、约7.5重量%或更多的丝甘蛋白聚糖、或者约10重量%或更多的丝甘蛋白聚糖。在一些实施方案中，组合物包含约0.01重量%至约0.025重量%的丝甘蛋白聚糖、约0.025重量%至约0.05重量%的丝甘蛋白聚糖、约0.025重量%至约0.075重量%的丝甘蛋白聚糖、约0.025重量%至约0.1重量%的丝甘蛋白聚糖、约0.01重量%至约0.1重量%的丝甘蛋白聚糖、约0.05重量%至约0.075重量%的丝甘蛋白聚糖、约0.05重量%至约0.1重量%的丝甘蛋白聚糖、约0.075重量%至约0.1重量%的丝甘蛋白聚糖、约0.1重量%至约0.2重量%的丝甘蛋白聚糖、约0.1重量%至约
0.5重量%的丝甘蛋白聚糖、约0.2重量%至约0.4重量%的丝甘蛋白聚糖、约0.5重量%至约1重量%的丝甘蛋白聚糖、约0.4重量%至约0.6重量%的丝甘蛋白聚糖、约0.6至约0.8重量%的丝甘蛋白聚糖、约0.8重量%至约1重量%的丝甘蛋白聚糖、约1重量%至约2重量%的丝甘蛋白聚糖、约1重量%至约5重量%的丝甘蛋白聚糖、约2重量%至约4重量%的丝甘蛋白聚糖、约5重量%至约10重量%的丝甘蛋白聚糖、约4重量%至约6重量%的丝甘蛋白聚糖、约6至约8重量%的丝甘蛋白聚糖、或者约8重量%至约10重量%的丝甘蛋白聚糖。
45.b. 软骨素在一些实施方案中，组合物包含软骨素或其盐，例如硫酸软骨素。在一些实施方案中，组合物包含约0.01重量%或更多的软骨素或其盐、约0.025重量%或更多的软骨素或其盐、约0.050重量%或更多的软骨素或其盐、约0.075重量%或更多的软骨素或其盐、约0.1重量%或更多的软骨素或其盐、约0.25重量%或更多的软骨素或其盐、约0.5重量%或更多的软骨素或其盐、约0.75重量%或更多的软骨素或其盐、约1重量%或更多的软骨素或其盐、约2.5重量%或更多的软骨素或其盐、约5重量%或更多的软骨素或其盐、约7.5重量%或更多的软骨素或其盐、或者约10重量%或更多的软骨素或其盐。在一些实施方案中，组合物包含约0.01重量%至约0.025重量%的软骨素或其盐、约0.025重量%至约0.05重量%的软骨素或其盐、约0.025重量%至约0.075重量%的软骨素或其盐、约0.025重量%至约0.1重量%的软骨素或其盐、约0.01重量%至约0.1重量%的软骨素或其盐、约0.05重量%至约0.075重量%的软骨素或其盐、约0.05重量%至约0.1重量%的软骨素或其盐、约0.075重量%至约0.1重量%的软骨素或其盐、约0.1重量%至约0.2重量%的软骨素或其盐、约0.1重量%至约0.5重量%的软骨素或其盐、约0.2重量%至约0.4重量%的软骨素或其盐、约0.5重量%至约1重量%的软骨素或其盐、约0.4重量%至约0.6重量%的软骨素或其盐、约0.6至约0.8重量%的软骨素或其盐、约0.8重量%至约1重量%的软骨素或其盐、约1重量%至约2重量%的软骨素或其盐、约1重量%至约5重量%的软骨素或其盐、约2重量%至约4重量%的软骨素或其盐、约5重量%至约10重量%的软骨素或其盐、约4重量%至约6重量%的软骨素或其盐、约6至约8重量%的软骨素或其盐、或者约8重量%至约10重量%的软骨素或其盐。
46.c．纤维蛋白在一些实施方案中，组合物包含约0.01重量%或更多的纤维蛋白、约0.025重量%或更多的纤维蛋白、约0.050重量%或更多的纤维蛋白、约0.075重量%或更多的纤维蛋白、约0.1重量%或更多的纤维蛋白、约0.25重量%或更多的纤维蛋白、约0.5重量%或更多的纤维蛋白、约0.75重量%或更多的纤维蛋白、约1重量%或更多的纤维蛋白、约2.5重量%或更多的纤维蛋白、约5重量%或更多的纤维蛋白、约7.5重量%或更多的纤维蛋白、或者约10重量%或更多的纤维蛋白。在一些实施方案中，组合物包含约0.01重量%至约0.025重量%的纤维蛋白、约0.025重量%至约0.05重量%的纤维蛋白、约0.025重量%至约0.075重量%的纤维蛋白、约0.025重量%至约0.1重量%的纤维蛋白、约0.01重量%至约0.1重量%的纤维蛋白、约0.05重量%至约0.075重量%的纤维蛋白、约0.05重量%至约0.1重量%的纤维蛋白、约0.075重量%至约0.1重量%的纤维蛋白、约0.1重量%至约0.2重量%的纤维蛋白、约0.1重量%至约0.5重量%的纤维蛋白、约0.2重量%至约0.4重量%的纤维蛋白、约0.5重量%至约1重量%的纤维蛋白、约0.4重量%至约0.6重量%的纤维蛋白、约0.6至约0.8重量%的纤维蛋白、约0.8重量%至约1重量%的纤维蛋白、约1重量%至约2重量%的纤维蛋白、约1重量%至约5重量%的纤维蛋白、约2重
量%至约4重量%的纤维蛋白、约5重量%至约10重量%的纤维蛋白、约4重量%至约6重量%的纤维蛋白、约6至约8重量%的纤维蛋白、或者约8重量%至约10重量%的纤维蛋白。
47.d. 胶原在一些实施方案中，组合物包含约0.01重量%或更多的胶原、约0.025重量%或更多的胶原、约0.050重量%或更多的胶原、约0.075重量%或更多的胶原、约0.1重量%或更多的胶原、约0.25重量%或更多的胶原、约0.5重量%或更多的胶原、约0.75重量%或更多的胶原、约1重量%或更多的胶原、约2.5重量%或更多的胶原、约5重量%或更多的胶原、约7.5重量%或更多的胶原、或者约10重量%或更多的胶原。在一些实施方案中，组合物包含约0.01重量%至约0.025重量%的胶原、约0.025重量%至约0.05重量%的胶原、约0.025重量%至约0.075重量%的胶原、约0.025重量%至约0.1重量%的胶原、约0.01重量%至约0.1重量%的胶原、约0.05重量%至约0.075重量%的胶原、约0.05重量%至约0.1重量%的胶原、约0.075重量%至约0.1重量%的胶原、约0.1重量%至约0.2重量%的胶原、约0.1重量%至约0.5重量%的胶原、约0.2重量%至约0.4重量%的胶原、约0.5重量%至约1重量%的胶原、约0.4重量%至约0.6重量%的胶原、约0.6至约0.8重量%的胶原、约0.8重量%至约1重量%的胶原、约1重量%至约2重量%的胶原、约1重量%至约5重量%的胶原、约2重量%至约4重量%的胶原、约5重量%至约10重量%的胶原、约4重量%至约6重量%的胶原、约6至约8重量%的胶原、或者约8重量%至约10重量%的胶原。
48.e. 纤连蛋白在一些实施方案中，组合物包含约0.01重量%或更多的纤连蛋白、约0.025重量%或更多的纤连蛋白、约0.050重量%或更多的纤连蛋白、约0.075重量%或更多的纤连蛋白、约0.1重量%或更多的纤连蛋白、约0.25重量%或更多的纤连蛋白、约0.5重量%或更多的纤连蛋白、约0.75重量%或更多的纤连蛋白、约1重量%或更多的纤连蛋白、约2.5重量%或更多的纤连蛋白、约5重量%或更多的纤连蛋白、约7.5重量%或更多的纤连蛋白、或者约10重量%或更多的纤连蛋白。在一些实施方案中，组合物包含约0.01重量%至约0.025重量%的纤连蛋白、约0.025重量%至约0.05重量%的纤连蛋白、约0.025重量%至约0.075重量%的纤连蛋白、约0.025重量%至约0.1重量%的纤连蛋白、约0.01重量%至约0.1重量%的纤连蛋白、约0.05重量%至约0.075重量%的纤连蛋白、约0.05重量%至约0.1重量%的纤连蛋白、约0.075重量%至约0.1重量%的纤连蛋白、约0.1重量%至约0.2重量%的纤连蛋白、约0.1重量%至约0.5重量%的纤连蛋白、约0.2重量%至约0.4重量%的纤连蛋白、约0.5重量%至约1重量%的纤连蛋白、约0.4重量%至约0.6重量%的纤连蛋白、约0.6至约0.8重量%的纤连蛋白、约0.8重量%至约1重量%的纤连蛋白、约1重量%至约2重量%的纤连蛋白、约1重量%至约5重量%的纤连蛋白、约2重量%至约4重量%的纤连蛋白、约5重量%至约10重量%的纤连蛋白、约4重量%至约6重量%的纤连蛋白、约6至约8重量%的纤连蛋白、或者约8重量%至约10重量%的纤连蛋白。
49.f. 胰岛素样生长因子结合蛋白在一些实施方案中，组合物包含约0.01重量%或更多的胰岛素样生长因子结合蛋白、约0.025重量%或更多的胰岛素样生长因子结合蛋白、约0.050重量%或更多的胰岛素样生长因子结合蛋白、约0.075重量%或更多的胰岛素样生长因子结合蛋白、约0.1重量%或更多的胰岛素样生长因子结合蛋白、约0.25重量%或更多的胰岛素样生长因子结合蛋白、约0.5重量%或更多的胰岛素样生长因子结合蛋白、约0.75重量%或更多的胰岛素样生长因子结合蛋白、约1重量%或更多的胰岛素样生长因子结合蛋白、约2.5重量%或更多的胰岛素样
生长因子结合蛋白、约5重量%或更多的胰岛素样生长因子结合蛋白、约7.5重量%或更多的胰岛素样生长因子结合蛋白、或者约10重量%或更多的胰岛素样生长因子结合蛋白。在一些实施方案中，组合物包含约0.01重量%至约0.025重量%的胰岛素样生长因子结合蛋白、约0.025重量%至约0.05重量%的胰岛素样生长因子结合蛋白、约0.025重量%至约0.075重量%的胰岛素样生长因子结合蛋白、约0.025重量%至约0.1重量%的胰岛素样生长因子结合蛋白、约0.01重量%至约0.1重量%的胰岛素样生长因子结合蛋白、约0.05重量%至约0.075重量%的胰岛素样生长因子结合蛋白、约0.05重量%至约0.1重量%的胰岛素样生长因子结合蛋白、约0.075重量%至约0.1重量%的胰岛素样生长因子结合蛋白、约0.1重量%至约0.2重量%的胰岛素样生长因子结合蛋白、约0.1重量%至约0.5重量%的胰岛素样生长因子结合蛋白、约0.2重量%至约0.4重量%的胰岛素样生长因子结合蛋白、约0.5重量%至约1重量%的胰岛素样生长因子结合蛋白、约0.4重量%至约0.6重量%的胰岛素样生长因子结合蛋白、约0.6至约0.8重量%的胰岛素样生长因子结合蛋白、约0.8重量%至约1重量%的胰岛素样生长因子结合蛋白、约1重量%至约2重量%的胰岛素样生长因子结合蛋白、约1重量%至约5重量%的胰岛素样生长因子结合蛋白、约2重量%至约4重量%的胰岛素样生长因子结合蛋白、约5重量%至约10重量%的胰岛素样生长因子结合蛋白、约4重量%至约6重量%的胰岛素样生长因子结合蛋白、约6至约8重量%的胰岛素样生长因子结合蛋白、或者约8重量%至约10重量%的胰岛素样生长因子结合蛋白。
50.g. 绿色荧光蛋白在一些实施方案中，组合物包含约0.01重量%或更多的绿色荧光蛋白、约0.025重量%或更多的绿色荧光蛋白、约0.050重量%或更多的绿色荧光蛋白、约0.075重量%或更多的绿色荧光蛋白、约0.1重量%或更多的绿色荧光蛋白、约0.25重量%或更多的绿色荧光蛋白、约0.5重量%或更多的绿色荧光蛋白、约0.75重量%或更多的绿色荧光蛋白、约1重量%或更多的绿色荧光蛋白、约2.5重量%或更多的绿色荧光蛋白、约5重量%或更多的绿色荧光蛋白、约7.5重量%或更多的绿色荧光蛋白、或者约10重量%或更多的绿色荧光蛋白。在一些实施方案中，组合物包含约0.01重量%至约0.025重量%的绿色荧光蛋白、约0.025重量%至约0.05重量%的绿色荧光蛋白、约0.025重量%至约0.075重量%的绿色荧光蛋白、约0.025重量%至约0.1重量%的绿色荧光蛋白、约0.01重量%至约0.1重量%的绿色荧光蛋白、约0.05重量%至约0.075重量%的绿色荧光蛋白、约0.05重量%至约0.1重量%的绿色荧光蛋白、约0.075重量%至约0.1重量%的绿色荧光蛋白、约0.1重量%至约0.2重量%的绿色荧光蛋白、约0.1重量%至约0.5重量%的绿色荧光蛋白、约0.2重量%至约0.4重量%的绿色荧光蛋白、约0.5重量%至约1重量%的绿色荧光蛋白、约0.4重量%至约0.6重量%的绿色荧光蛋白、约0.6至约0.8重量%的绿色荧光蛋白、约0.8重量%至约1重量%的绿色荧光蛋白、约1重量%至约2重量%的绿色荧光蛋白、约1重量%至约5重量%的绿色荧光蛋白、约2重量%至约4重量%的绿色荧光蛋白、约5重量%至约10重量%的绿色荧光蛋白、约4重量%至约6重量%的绿色荧光蛋白、约6至约8重量%的绿色荧光蛋白、或者约8重量%至约10重量%的绿色荧光蛋白。
51.3. 透明质酸在一些实施方案中，可用于刺激毛发生长的组合物包括透明质酸。透明质酸是关于cd44的天然配体，并且目前已发现它是促炎的并刺激毛发生长。透明质酸是含有β-1,4-d-葡糖醛酸和β-1,3-n-乙酰基-d-葡糖胺的二糖重复单元的天然线性聚合物，如式i中所
示：式i：在一些实施方案中，透明质酸具有低平均分子量，其如本文使用的，指约15,000 da至约40,000 da的范围。在一些实施方案中，透明质酸具有中等平均分子量，其如本文使用的，指约75,000 da至约350,000 da的范围。在一些实施方案中，透明质酸具有高平均分子量，其如本文使用的，指约950,000 da和更大。
52.在一些实施方案中，透明质酸具有范围为约4,000 da或更小至约10,000 da的平均分子量。在一些实施方案中，透明质酸具有范围为约10,000 da至约100,000 da的平均分子量。在一些实施方案中，透明质酸具有范围为约100,000 da至约1,500,000 da或更大的平均分子量。
53.在一些实施方案中，透明质酸具有以下的平均分子量：约1 kda至约10 kda、约10 kda至约50 kda、约50 kda至约100 kda、约100 kda至约150 kda、约200 kda至约250 kda、约300 kda至约350 kda、约400 kda至约450 kda、约500 kda至约550 kda、约600 kda至约650 kda、约700 kda至约750 kda、约800 kda至约850 kda、约900 kda至约1000 kda、约1000 kda至约1100 kda、约1100 kda至约1200 kda、约1200 kda至约1300 kda、约1300 kda至约1400 kda、约1400 kda至约1500 kda、约1 kda至约100 kda、约100 kda至约250 kda、约250 kda至约500 kda、约500 kda至约750 kda、约750 kda至约1000 kda、约1000 kda至约1250 kda、约1250 kda至约1500 kda、约1 kda至约250 kda、约1 kda至约500 kda、约100 kda至约500 kda、约250 kda至约750 kda、约500 kda至约1000 kda、约750 kda至约1250 kda、或者约1000 kda至约1500 kda。
54.在一些实施方案中，透明质酸是交联的。交联可以改善透明质酸的寿命，并且在一些实施方案中，一定程度的交联可以是期望的。在一些实施方案中，透明质酸具有足够的交联以持续约一周。然而，不受作用机制的束缚，认为透明质酸通过与cd44受体相互作用而有效刺激毛发生长。相应地，期望透明质酸不使得交联干扰透明质酸与cd44受体相互作用的能力那么广泛地交联。
55.透明质酸的羟基(-oh)、羧基(-cooh)和/或酰胺(-nhcoch3)官能团可以分别经由醚键(r-o-r)、酯键合(r-coo-r)或碳二亚胺交联。在一些实施方案中，透明质酸与1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺(edc)、戊二醛(gta)、聚(乙二醇)二缩水甘油醚(pegde)、乙二醇二缩水甘油醚(egde)、二乙烯基磺酸酯(dvs)或季戊四醇四丙烯酸酯
mcg/ml组合物、约100 mcg/ml组合物至约150 mcg/ml组合物、约150 mcg/ml组合物至约250 mcg/ml组合物、约200 mcg/ml组合物至约250 mcg/ml组合物、约60 mcg/ml组合物至约80 mcg/ml组合物、约50 mcg/ml组合物至约75 mcg/ml组合物、约25 mcg/ml组合物至约75 mcg/ml组合物、约10 mcg/ml组合物至约50 mcg/ml组合物、或者约10 mcg/ml组合物至约25 mcg/ml组合物。
59.在一些实施方案中，组合物包含约0.001重量%或更多的透明质酸、约0.0025重量%或更多的透明质酸、约0.0050重量%或更多的透明质酸、约0.0075重量%或更多的透明质酸、约0.01重量%或更多的透明质酸、约0.025重量%或更多的透明质酸、约0.05重量%或更多的透明质酸、约0.075重量%或更多的透明质酸、约0.1重量%或更多的透明质酸、约0.25重量%或更多的透明质酸、约0.5重量%或更多的透明质酸、约0.75重量%或更多的透明质酸、或者约1重量%或更多的透明质酸。在一些实施方案中，组合物包含约0.001重量%至约0.0025重量%的透明质酸、约0.0025重量%至约0.005重量%的透明质酸、约0.0025重量%至约0.0075重量%的透明质酸、约0.0025重量%至约0.01重量%的透明质酸、约0.001重量%至约0.01重量%的透明质酸、约0.005重量%至约0.0075重量%的透明质酸、约0.005重量%至约0.01重量%的透明质酸、约0.0075重量%至约0.01重量%的透明质酸、约0.01重量%至约0.02重量%的透明质酸、约0.01重量%至约0.05重量%的透明质酸、约0.02重量%至约0.04重量%的透明质酸、约0.05重量%至约0.1重量%的透明质酸、约0.04重量%至约0.06重量%的透明质酸、约0.06至约0.08重量%的透明质酸、约0.08重量%至约0.1重量%的透明质酸、约0.1重量%至约0.2重量%的透明质酸、约0.1重量%至约0.5重量%的透明质酸、约0.2重量%至约0.4重量%的透明质酸、约0.5重量%至约1重量%的透明质酸、约0.4重量%至约0.6重量%的透明质酸、约0.6至约0.8重量%的透明质酸、或者约0.8重量%至约1重量%的透明质酸。
60.在一些实施方案中，根据本发明的一个实施方案的组合物包含商购可得的透明质酸组合物。例如，合适的商购可得的透明质酸组合物包括但不限于以下述商标销售的透明质酸：juvederm
™
、restylane-l
™
、captique
™
、belotero balance
™
、prevelle silk
™
、elevess
™
、 hylaform
™
、euflexxa
™
、gel-one
™
、hyalgan
™
、orthovisc
™
、monovisc
™
、supartz
™
、synvisc
™
和synvisc-one
™
。
61.c. 透明质酸酶抑制剂在根据本发明的一些实施方案中，组合物包括透明质酸酶抑制剂。透明质酸酶抑制剂的实例包括但不限于高分子量聚(4-磺酸苯乙烯) (pss)、棉酚、金硫丁二钠、非诺洛芬、甘草酸、肝素和o-硫酸化透明质酸(sha)、以及硫酸葡聚糖或其组合。
62.在一些实施方案中，组合物包含约0.01重量%或更多的透明质酸酶抑制剂、约0.025重量%或更多的透明质酸酶抑制剂、约0.050重量%或更多的透明质酸酶抑制剂、约0.075重量%或更多的透明质酸酶抑制剂、约0.1重量%或更多的透明质酸酶抑制剂、约0.25重量%或更多的透明质酸酶抑制剂、约0.5重量%或更多的透明质酸酶抑制剂、约0.75重量%或更多的透明质酸酶抑制剂、约1重量%或更多的透明质酸酶抑制剂、约2.5重量%或更多的透明质酸酶抑制剂、约5重量%或更多的透明质酸酶抑制剂、约7.5重量%或更多的透明质酸酶抑制剂、或者约10重量%或更多的透明质酸酶抑制剂。在一些实施方案中，组合物包含约0.01重量%至约0.025重量%的透明质酸酶抑制剂、约0.025重量%至约0.05重量%的透明质酸酶抑制剂、约0.025重量%至约0.075重量%的透明质酸酶抑制剂、约0.025重量%至约0.1重
量%的透明质酸酶抑制剂、约0.01重量%至约0.1重量%的透明质酸酶抑制剂、约0.05重量%至约0.075重量%的透明质酸酶抑制剂、约0.05重量%至约0.1重量%的透明质酸酶抑制剂、约0.075重量%至约0.1重量%的透明质酸酶抑制剂、约0.1重量%至约0.2重量%的透明质酸酶抑制剂、约0.1重量%至约0.5重量%的透明质酸酶抑制剂、约0.2重量%至约0.4重量%的透明质酸酶抑制剂、约0.5重量%至约1重量%的透明质酸酶抑制剂、约0.4重量%至约0.6重量%的透明质酸酶抑制剂、约0.6至约0.8重量%的透明质酸酶抑制剂、约0.8重量%至约1重量%的透明质酸酶抑制剂、约1重量%至约2重量%的透明质酸酶抑制剂、约1重量%至约5重量%的透明质酸酶抑制剂、约2重量%至约4重量%的透明质酸酶抑制剂、约5重量%至约10重量%的透明质酸酶抑制剂、约4重量%至约6重量%的透明质酸酶抑制剂、约6至约8重量%的透明质酸酶抑制剂、或者约8重量%至约10重量%的透明质酸酶抑制剂。
63.d. 载体和其它添加剂在一些实施方案中，组合物包括载体介质。此类载体介质可以是适合于注射到哺乳动物皮肤内的生物相容性流体。在一些实施方案中，载体介质包含盐水溶液。在一些实施方案中，透明质酸充当载体介质以及活性成分。
64.在一些实施方案中，组合物包括一种或多种添加剂。此类添加剂可以包括防腐剂或杀生物剂。
65.在一些实施方案中，组合物包括微乳化剂、纳米乳化剂、固体脂质纳米颗粒、纳米结构脂质载体、脂质体或囊泡。
66.在一些实施方案中，组合物可以包含脂肪酸(例如，油酸)、脂肪酸和醇的酯(例如，肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、油酸乙酯)、中链甘油三酯、三乙酸甘油酯或萜烯(例如，柠檬烯、甲醇、桉树脑(cineole))。在一些实施方案中，组合物可以包含表面活性剂。例如，合适的表面活性剂包括但不限于tween
tm (聚山梨醇酯)、cremophor
tm (聚乙二醇羟基硬脂酸甘油酯、peg-40蓖麻油、聚氧乙烯40氢化蓖麻油的混合物)、transcutol
tm p (二甘醇单乙醚)、plurol oleique
tm (聚甘油-3-油酸酯)、plurol isostearique
tm (聚甘油和高级低聚物的异硬脂酸酯)和labrasol
tm (c8和c10脂肪酸的甘油单酯、甘油二酯和甘油三酯以及peg的单酯和二酯的混合物)和卵磷脂。在一些实施方案中，组合物可以包含助表面活性剂。例如，合适的助表面活性剂包括但不限于短链和中链醇和聚甘油衍生物，包括乙醇、异丙醇、肉豆蔻酸异丙酯和丙二醇。
67.在一些实施方案中，组合物包含大豆油、荷荷巴油、芦荟油、大豆磷脂酰胆碱、水、聚山梨醇酯80、乙醇、苯甲醇、异丙醇、丙三醇、单硬脂酸甘油酯、丙二醇中的一种或多种。
68.ii. 方法生产方法用于生产根据本发明的一个实施方案的治疗组合物的方法包括将有效量的活性剂混合。在一些实施方案中，将有效量的透明质酸与有效量的骨桥蛋白混合。在一些实施方案中，透明质酸具有在约4,000 da至10,000 da的范围内、约10,000 da至约100,000 da的范围内、在约15kda至约50 kda的范围内、在约75kda至约350 kda的范围内、或在约20 kda至1350 kda的范围内的平均分子量。在一些实施方案中，透明质酸具有大于约950 kda的平均分子量。在一些实施方案中，将有效量的透明质酸与有效量的cd44结合配体混合。在一些实施方案中，将有效量的骨桥蛋白与有效量的cd44结合配体混合。在一些实施方案中，分别
将有效量的透明质酸和骨桥蛋白与有效量的cd44结合配体混合。在根据本发明的组合物的一些实施方案中，将有效量的透明质酸酶抑制剂与透明质酸、骨桥蛋白和cd44结合配体中的一种或多种混合。所述方法还可以包括制备生理上可接受的载体介质的步骤，将活性剂加入所述载体介质中。优选地，生理上可接受的载体介质是可注射的。
69.在一些实施方案中，生产方法包括形成微乳剂或纳米乳剂的步骤。微乳剂或纳米乳剂可以包含油、水、表面活性剂和助表面活性剂，以形成液滴尺寸在约10 nm至约100 nm的范围内的胶体分散体。在一些实施方案中，微乳剂或纳米乳剂可以包含脂肪酸(例如，油酸)、脂肪酸和醇的酯(例如，肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、油酸乙酯)、中链甘油三酯、三乙酸甘油酯或萜烯(例如，柠檬烯、甲醇、桉树脑)。在一些实施方案中，微乳剂或纳米乳剂可以包含表面活性剂。例如，合适的表面活性剂包括但不限于tween
tm (聚山梨醇酯)、cremophor
tm (聚乙二醇羟基硬脂酸甘油酯、peg-40蓖麻油、聚氧乙烯40氢化蓖麻油的混合物)、transcutol
tm p (二甘醇单乙醚)、plurol oleique
tm (聚甘油-3-油酸酯)、plurol isostearique
tm (聚甘油和高级低聚物的异硬脂酸酯)和labrasol
tm (c8和c10脂肪酸的甘油单酯、甘油二酯和甘油三酯以及peg的单酯和二酯的混合物)和卵磷脂。在一些实施方案中，微乳剂或纳米乳剂可以包含助表面活性剂。例如，合适的助表面活性剂包括但不限于短链和中链醇和聚甘油衍生物，包括乙醇、异丙醇、肉豆蔻酸异丙酯和丙二醇。在一些实施方案中，微乳剂或纳米乳剂的形成包括使用高压均化器、微流化器和/或超声发生器。
70.在一些实施方案中，生产方法包括将根据本发明的一个实施方案的组合物与固体纳米颗粒混合的步骤。固体纳米颗粒可以包含无机材料例如金属氧化物(例如，氧化锌、二氧化钛)，或在室温下为固体的聚合物。
71.在一些实施方案中，生产方法包括将根据本发明的一个实施方案的组合物与固体脂质纳米颗粒混合的步骤。固体脂质纳米颗粒可以包含在室温下为固体的脂质，其具有表面活性剂的表面覆盖，以当在水中分散时，将它们稳定为具有小于约100 nm的尺寸的液滴。
72.在一些实施方案中，生产方法包括将根据本发明的一个实施方案的组合物与纳米结构脂质载体混合的步骤。纳米结构脂质载体可以包含嵌入固体脂质基质内或定位于固体血小板和表面活性剂层的表面处的流体脂质相。
73.在一些实施方案中，生产方法包括将根据本发明的一个实施方案的组合物与脂质体混合的步骤。脂质体可以包含由自缔合成多层、大单层和小单层囊泡的两亲性磷脂和胆固醇构成的球形囊泡。
74.在一些实施方案中，生产方法包括将根据本发明的一个实施方案的组合物与柔性囊泡混合的步骤。柔性囊泡可以包含将缔合成双层结构的材料以及赋予柔性的组分。在一些实施方案中，柔性囊泡包含醇质体(ethosome) (即，具有高比例乙醇的磷脂)、niosome (即，非离子型表面活性剂)、侵入体(invasome) (即，磷脂、乙醇和萜烯渗透促进剂的混合物)、secosome (即，表面活性剂、乙醇和胆固醇)或pev(即，渗透促进剂囊泡)。在一些实施方案中，pev可以包含油酸、柠檬烯或丙二醇。
75.在一些实施方案中，生产方法包括将根据本发明的一个实施方案的组合物与聚合物胶束或聚合物树枝状聚合物混合的步骤。聚合物胶束可以是具有亲水外壳和疏水内核的胶体载体。聚合物胶束可以是纳米尺寸的。聚合物树枝状聚合物可以包含支化聚合物结构。
76.在一些实施方案中，关于cd44的天然存在的配体的上述cd44结合片段、同种型或
衍生物中的任一种是蛋白水解产生的，而在其它实施方案中，这些是合成产生的。
77.施用方法施用根据本发明的一个实施方案的组合物的方法包括将根据本发明的一个实施方案的组合物递送至毛囊。在一些实施方案中，递送通过局部施用来实现，即，将组合物应用于皮肤的表面并允许组合物渗透皮肤。在一些实施方案中，施用方法包括在局部施用组合物之前增强渗透的步骤。在一些实施方案中，递送通过注射到皮肤内来实现。
78.在一些实施方案中，局部递送在离子电渗疗法的应用之后或与之结合执行。例如，离子电渗疗法可以包含应用温和的电流(例如，0.1至1.0 ma/cm2)，以增加组合物的皮肤渗透。不受理论的束缚，认为离子电渗疗法可以通过电迁移、电渗和或增强的被动扩散来改善皮肤的渗透。
79.在一些实施方案中，局部递送在电穿孔的应用之后或与之结合执行。例如，电穿孔可以包含应用短持续时间(10微秒至10毫秒)的高强度、高电压(例如，50-1500 v)的电脉冲，以在皮肤的角质层的脂质双层中形成水性孔。
80.在一些实施方案中，局部递送在超声促渗的应用之后或与之结合执行。例如，超声促渗可以包含应用以高频(例如，约500 khz至1250 khz)或低频(例如，约20至约100 khz)或(以高频或低频之一开始并进展到高频或低频中的另一个)的声波。
81.在一些实施方案中，局部递送在激光消融的应用之后或与之结合执行。激光消融可以包含通过激光消融放置在皮肤的表面上的靶材料(例如，聚合物)的光机械波生成。
82.在一些实施方案中，局部递送在磁泳之后或与之结合执行。磁泳可以包含向皮肤应用磁场，例如脉冲电磁场。
83.在一些实施方案中，局部递送在射频热消融的应用之后执行。热消融可以包含在皮肤表面处应用极热(例如，约300℃共数微秒)。不受理论的束缚，认为热消融可以蒸发角质层的部分以产生微米级通道。热消融可以用商购可得的装置来完成，所述装置包括viador
tm (syneron medical ltd，以色列)和passport
tm (nitto-denko，日本)。在一些实施方案中，热消融可以用以2,790 nm发射的铒:钇-镓-石榴石(er:yag)或以2,940 nm发射的钇钪镓石榴石(ysgg)激光来完成。在一些实施方案中，点阵激光消融可以应用于亚mm区域，以生成模拟微针阵列型图案的斑点(例如，40-300
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m，其密度为50-600 cm-2
)。
84.在一些实施方案中，局部递送在微针装置的应用之后执行。
85.用于施用根据本发明的一个实施方案的组合物的方法包括将治疗量的组合物注射到需要治疗的患者的皮肤中。在一些实施方案中，根据本发明的一个实施方案的组合物作为推注进行施用，所述推注如本文使用的，指在少于十分钟的时间内递送的剂量。在一些实施方案中，根据本发明的一个实施方案的组合物作为输注进行施用，所述输注如本文使用的，指在约十分钟或更长时间内递送的剂量。
86.此类注射可以经由单一针、微针或类似装置，或者针、微针或类似装置的阵列来进行。在一些实施方案中，根据本发明的一个实施方案的组合物经由常规注射器进行递送。在一些实施方案中，皮下递送经由中空微针注射器来执行。在一些实施方案中，皮下递送通过微针贴剂来执行，所述微针贴剂已涂布有根据本发明的一个实施方案的组合物，例如已通过3d打印涂布有根据本发明的一个实施方案的组合物。在一些实施方案中，组合物经由喷射注射器进行递送。如本文使用的，术语“针”指用于刺穿皮肤并注射根据本发明的一个实
施方案的组合物的任何此类装置。
87.优选地，在患者的毛囊附近施用组合物。相应地，在一些实施方案中，通过在患者的真皮中注射治疗量的组合物来施用组合物。在一些实施方案中，通过在患者的皮下组织中注射治疗量的组合物来施用组合物。在一些实施方案中，将组合物施用到患者的皮肤内约0.4 mm至约2 mm (即，距皮肤的表面约0.4 mm至约3 mm)。在一些实施方案中，将组合物施用到患者的皮肤内约0.4 mm、约0.5 mm、约0.6 mm、约0.7 mm、约0.8 mm、约0.9 mm、约1 mm、约1.1 mm、约1.2 mm、约1.3 mm、约1.4 mm、约1.5 mm、约1.6 mm、约1.7 mm、约1.8 mm、约1.9 mm、约2 mm、约2.1 mm、约2.2 mm、约2.3 mm、约2.4 mm、约2.5 mm、约2.6 mm、约2.7 mm、约2.8 mm、约2.9 mm或约3 mm。在一些实施方案中，将组合物施用到患者的皮肤内约0.5 mm至约1 mm、约1 mm至约1.5 mm、约1.5 mm至约2 mm、约2 mm至约2.5 mm、约2.5 mm至约3 mm、约1 mm至约3 mm、约1.5 mm至约3 mm、约0.4 mm至约0.6 mm、约0.4 mm至约0.8 mm、约0.4 mm至约1 mm、约0.4 mm至约1.2 mm、约0.4 mm至约1.4 mm、约0.4 mm至约1.6 mm、约0.4 mm至约1.8 mm、约0.4 mm至约2 mm、约0.4 mm至约2.2 mm、约0.4 mm至约2.4 mm、约0.4 mm至约2.6 mm、约0.4 mm至约2.8 mm、约0.4 mm至约3 mm、约0.6 mm至约0.8 mm、约0.6 mm至约1 mm、约0.6 mm至约1.2 mm、约0.6 mm至约1.4 mm、约0.6 mm至约1.6 mm、约0.6 mm至约1.8 mm、约0.6 mm至约2 mm、约0.6 mm至约2.2 mm、约0.6 mm至约2.4 mm、约0.6 mm至约2.6 mm、约0.6 mm至约2.8 mm、约0.6 mm至约3 mm、约0.8 mm至约1 mm、约0.8 mm至约1.2 mm、约0.8 mm至约1.4 mm、约0.8 mm至约1.6 mm、约0.8 mm至约1.8 mm、约0.8 mm至约2 mm、约0.8 mm至约2.2 mm、约0.8 mm至约2.4 mm、约0.8 mm至约2.6 mm、约0.8 mm至约2.8 mm、约0.8 mm至约3 mm、约1 mm至约1.2 mm、约1 mm至约1.4 mm、约1 mm至约1.6 mm、约1 mm至约1.8 mm、约1 mm至约2 mm、约1 mm至约2.2 mm、约1 mm至约2.4 mm、约1 mm至约2.6 mm、约1 mm至约2.8 mm、约1 mm至约3 mm、约1.2 mm至约1.4 mm、约1.2 mm至约1.6 mm、约1.2 mm至约1.8 mm、约1.2 mm至约2 mm、约1.2 mm至约2.2 mm、约1.2 mm至约2.4 mm、约1.2 mm至约2.6 mm、约1.2 mm至约2.8 mm、约1.2 mm至约3 mm、约1.4 mm至约1.6 mm、约1.4 mm至约1.8 mm、约1.4 mm至约2 mm、约1.4 mm至约2.2 mm、约1.4 mm至约2.4 mm、约1.4 mm至约2.6 mm、约1.4 mm至约2.8 mm、约1.4 mm至约3 mm、约1.6 mm至约1.8 mm、约1.6 mm至约2 mm、约1.6 mm至约2.2 mm、约1.6 mm至约2.4 mm、约1.6 mm至约2.6 mm、约1.6 mm至约2.8 mm、约1.6 mm至约3 mm、约1.8 mm至约2 mm 约1.8 mm至约2.2 mm、约1.8 mm至约2.4 mm、约1.8 mm至约2.6 mm、约1.8 mm至约2.8 mm、约1.8 mm至约3 mm、约2.0 mm至约2.2 mm、约2.0 mm至约2.4 mm、约2.0 mm至约2.6 mm、约2.0 mm至约2.8 mm、约2.0 mm至约3 mm、约2.2 mm至约2.4 mm、约2.2 mm至约2.6 mm、约2.2 mm至约2.8 mm、约2.2 mm至约3 mm、约2.4 mm至约2.6 mm、约2.4 mm至约2.8 mm、约2.4 mm至约3 mm、约2.6 mm至约2.8 mm、约2.6 mm至约3 mm、或约2.8 mm至约3 mm。
88.在一些实施方案中，根据本发明的一个实施方案的组合物可以以多次注射进行施用。在一些实施方案中，根据本发明的一个实施方案的组合物经由以下进行施用：约1次注射/cm2皮肤至约1000次注射/cm2皮肤、约200次注射/cm2皮肤至约800次注射/cm2皮肤、或者约400次注射/cm2皮肤至约650次注射/cm2皮肤。在一些实施方案中，组合物经由以下进行施用：约200次注射/cm2皮肤、约250次注射/cm2皮肤、约300次注射/cm2皮肤、约350次注射/cm2皮肤、约400次注射/cm2皮肤、约450次注射/cm2皮肤、约500次注射/cm2皮肤、约550次注射/
cm2皮肤、约600次注射/cm2皮肤、或约650次注射/cm2皮肤。
89.治疗方法刺激有此需要的患者中的毛发生长的方法包括将根据本发明的一个实施方案的组合物施用于患者的皮肤表面或皮肤内。在一些实施方案中，通过将组合物应用于患者的皮肤表面来局部施用组合物。在一些实施方案中，例如通过如本文所述的注射，将组合物施用到患者的皮肤的真皮或皮下组织内。
90.在一些实施方案中，将根据本发明的一个实施方案的组合物施用于患者的皮肤，每天一次共一天、每天一次共一周、每天一次共一个月、每天一次共一年、一天两次共一天、一天两次共一周、一天两次共一个月、一天两次共一年、一周一次共一周、一周一次共一个月、一周一次共一年、一周两次共一周、一周两次共一个月、一周两次共一年、一个月一次共一个月、一个月一次共两个月、一个月一次共六个月、一个月一次共一年、一个月两次共一个月、一个月两次共两个月、一个月两次共六个月、一个月两次共一年、每两个月一次共两个月、每两个月一次共四个月、每两个月一次共六个月、每两个月一次共一年、每三个月一次共三个月、每三个月一次共六个月、每三个月一次共九个月、每三个月一次共一年、每四个月一次共四个月、每四个月一次共八个月、每四个月一次共一年、每六个月一次共六个月、每六个月一次共一年、或根据需要。
实施例
91.实施例1. 浓度为100、250和1000 μg/ml的透明质酸(“ha”)的注射三种不同浓度(100、250和1000 μg/ml)的“高”(大于950 kda的分子量分布)、“中”(在75-350 kda之间的分子量分布)、以及“低”分子量(在15-40 kda之间的分子量分布)的透明质酸各自注射到小鼠中。发现高于250
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g/ml的高分子量浓度诱导强炎症应答，其中1000
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g/ml是最差的。对于低分子量浓度，与高分子量ha相比，应答在250
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g/ml下更温和，但在1000
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g/ml下也存在强炎症。对于浓度为250
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g/ml及更高的所有分子量的透明质酸，观察到不良副作用。
92.实施例2. 浓度为25、50和100 μg/ml的ha的注射后续实验包括较低的ha浓度(低于250 μg/ml)。使用细针(胰岛素注射器)做出小切口，以促进注射。将三(3)微升的对照，高(大于950 kda的分子量分布)、中(在75-350 kda之间的分子量分布)、或低分子量(在15-40 kda之间的分子量分布)的透明质酸注射到p53小鼠的背部皮肤中，共连续三(3)天。在图5-8中，当小鼠的头部处于上方的情况下察看小鼠的背部时，对照(1% bsa)注射在左上方，25
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g/ml注射在右上方，100
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g/ml注射在右下方，且50
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g/ml注射在左下方。
93.图5和6显示了两只小鼠的代表性图像，所述小鼠各自接受了低分子量ha的注射。图7和8显示了两只小鼠的代表性图像，所述小鼠各自接受了高分子量ha的注射。图5显示了在25
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g/ml低分子量ha和100
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g/ml低分子量ha斑点中的生长。图6显示了在25
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g/ml低分子量ha和100
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g/ml低分子量ha斑点中的生长。图7显示了在50
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g/ml高分子量ha和100
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g/ml高分子量ha斑点中的生长。图8显示了在25
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g/ml高分子量ha和50
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g/ml高分子量ha斑点中的生长。
94.对于高分子量，监测注射部位共18天用于完全毛发生长初期。在高分子量ha和低
分子量ha两者中，色素沉着在p14处显而易见。两只小鼠对于低分子量ha和高分子量ha两者均具有良好的诱导，但不存在关于中等重量ha的诱导。不受理论的束缚，中等重量ha的注射深度可能已影响了诱导强度。
95.图7和8显示了高分子量ha在50 μg/ml和100 μg/ml下诱导，而无在实施例1中发现的大量炎症应答。在低分子量ha的情况下，仅100 μg/ml诱导毛发生长。如图6中所示，低分子量ha小鼠2具有在25
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g/ml下很好的毛发生长初期斑点(对照注射部位在其下方可见)，但仅在一只小鼠中。
96.本领域技术人员应了解，可以对上文显示且描述的示例性实施方案作出改变，而不背离其宽泛的发明概念。因此，应理解，本发明并不限于显示且描述的示例性实施方案，而是预期覆盖如由权利要求限定的本发明的精神和范围内的修改。例如，示例性实施方案的特定特征可以是或可以不是所要求保护的发明的部分，并且可以组合所公开的实施方案的各种特征。除非在本文中特别阐述，否则术语“一个”、“一种”和“该/所述”并不限于一个/种要素，而是应该理解为意指“至少一个/种”。
97.进一步地，就本发明的方法并不依赖本文阐述的特定步骤次序而言，特定步骤次序不应解释为对权利要求的限制。涉及本发明的方法的任何权利要求不应限于按所写次序执行它们的步骤，并且本领域技术人员可以容易地了解，步骤可以变化并且仍然在本发明的精神和范围内。