嵌合流感疫苗的制作方法

本发明涉及嵌合流感病毒血球凝集素(ha)多肽、含有其的免疫原性/疫苗组合物以及其应用。

背景技术：

1、用于产生流感疫苗的传统方法为在无特定病原(spf)鸡胚蛋中培养病毒，且所述方法常常需要超过六个月来进行大批量生产。然而，一些疫苗病毒株在蛋中生长不良，且对鸡蛋过敏的人可能会产生安全问题。已经开发出基于病毒的细胞培养的新型方法来替代基于蛋的方法；但细胞培养方法仍具有产生潜在地有害病毒的风险。为了克服这些问题，替代性策略的研究已表明，基于重组ha的疫苗可诱导抵抗流感病毒感染的中和抗体。然而，特定流感病毒亚型所诱导的抗体通常可能不会有效地中和其他流感亚型。另外，由于病毒持续不断的突变，因此必须每年更新疫苗。

2、因此，仍需要研发抵抗广谱流感病毒株的通用疫苗。

技术实现思路

1、在一个态样中，本发明提供嵌合流感病毒血球凝集素(ha)多肽，所述多肽包含与一或多个球状头域序列融合的一或多个茎域序列，所述一或多个茎域序列各自与h1亚型ha(h1 ha)及/或h5亚型ha(h5 ha)的茎域共同序列具有至少60％同源性，所述一或多个球状头域序列各自与h1亚型ha(h1 ha)或h5亚型ha(h5 ha)的球状头域共同序列具有至少60％同源性。

2、在一些实施例中，ha为a型流感ha、b型流感ha或c型流感ha。

3、在一些实施例中，同源性为至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％。

4、在一些实施例中，茎域序列为h1 ha的n端茎区段或h1 ha的c端茎区段；h1 ha的n端茎区段或h1+h5 ha序列的c端茎区段；或h5 ha的n端茎区段或h1+h5 ha序列的c端茎区段。

5、在一些实施例中，h1 ha及/或h5 ha的茎域共同序列包含seq id no：1、seq idno：2、seq id no：5、seq id no：6、seq id no：9或seq id no：10的氨基酸序列。

6、在一些实施例中，h1 ha或h5 ha的球状头域共同序列包含seq id no：3、seq idno：7或seq id no：11的氨基酸序列。

7、在一个实施例中，嵌合流感病毒ha多肽包含seq id no：4、seq id no：8或seq idno：12的氨基酸序列。

8、在一些实施例中，ha上的一或多个醣位点经单醣化。在另一实施例中，单醣化ha在各醣位点上仅具有n-乙酰葡萄糖胺(glcnac)。

9、在一实施例中，嵌合流感病毒ha多肽用作免疫原。

10、在另一态样中，本发明提供包含嵌合流感病毒ha多肽及佐剂的免疫原性组合物。在一实施例中，佐剂为醣脂佐剂。

11、在另一态样中，本发明提供包含编码本发明多肽的核酸序列及视情况选用的编码信号肽的核酸序列的重组多核苷酸。在一些实施例中，信号肽包含seq id no：13或seq idno：14的序列。

12、在另一态样中，本发明提供包含本发明的重组多核苷酸的载体。亦提供包含本发明的载体的宿主细胞。

13、在另一态样中，本发明提供使个体对流感病毒免疫的方法，所述方法包含向个体投与有效量的本发明的嵌合流感病毒血球凝集素(ha)多肽或免疫原性组合物。

14、在另一态样中，本发明提供预防个体的流感病毒疾病的方法，所述方法包含向个体投与有效量的本发明的嵌合流感病毒血球凝集素(ha)多肽或免疫原性组合物。

15、在一个实施例中，本文所描述的方法引发cd4+及/或cd8+t细胞免疫反应。

16、在一个实施例中，本文所描述的方法诱导茎特异性抗体，这些茎特异性抗体具有针对h1、h3、h5及h7病毒株及亚型的较高抗体依赖性细胞毒性(adcc)、较佳中和活性及较强交叉保护活性。

17、在一个实施例中，本文所描述的方法提高疫苗功效，产生更多ifn-γ、il-4及cd8+记忆t细胞。

技术特征：

1.一种嵌合流感病毒血球凝集素(ha)多肽，其包含与一或多个球状头域序列融合的一或多个茎域序列，所述一或多个茎域序列各自与h1亚型ha(h1 ha)及/或h5亚型ha(h5 ha)的茎域共同序列具有至少60％同源性，所述一或多个球状头域序列各自与h1亚型ha(h1ha)或h5亚型ha(h5 ha)的球状头域共同序列具有至少60％同源性。

2.如权利要求1的多肽，其中所述ha为a型流感ha、b型流感ha或c型流感ha。

3.如权利要求1的多肽，其中所述同源性为至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％。

4.如权利要求1的多肽，其中所述茎域序列为h1 ha的n端茎区段或h1 ha的c端茎区段；h1 ha的n端茎区段或h1+h5 ha序列的c端茎区段；或h5 ha的n端茎区段或h1+h5 ha序列的c端茎区段。

5.如权利要求1的多肽，其中所述h1 ha的茎域共同序列包含seq id no：1、seq id no：2、seq id no：5、seq id no：6、seq id no：9或seq id no：10的氨基酸序列。

6.如权利要求1的多肽，其中所述h5ha的球状头域共同序列包含seq id no：3、seq idno：7或seq id no：11的氨基酸序列。

7.如权利要求1的多肽，其包含seq id no：4、seq id no：8或seq id no：12的氨基酸序列。

8.如权利要求l的多肽，其中ha上的一或多个醣位点经单醣化，其中单醣化ha在各醣位点上仅具有n-乙酰葡萄糖胺(glcnac)。

9.如权利要求1的多肽，其中所述嵌合流感病毒ha多肽用作免疫原。

10.一种免疫原性组合物，其包含如权利要求1至9中任一项的嵌合流感病毒ha多肽以及佐剂。

11.如权利要求10的免疫原性组合物，其中所述佐剂为醣脂佐剂。

12.一种如权利要求1至9中任一项的嵌合流感病毒血球凝集素(ha)多肽或如权利要求10的免疫原性组合物的用途，其用于制造从而使个体对流感病毒免疫或预防流感病毒疾病的药剂。

13.如权利要求12的用途，其中所述多肽或免疫原性组合物引发cd4+及cd8+t细胞免疫反应。

14.如权利要求12的用途，其中所述多肽或免疫原性组合物诱导茎特异性抗体，这些茎特异性抗体具有针对h1、h3、h5及h7病毒株及亚型的较高抗体依赖性细胞毒性(adcc)、较佳中和活性及较强交叉保护活性。

15.如权利要求12的用途，其中所述多肽或免疫原性组合物提高疫苗功效，产生更多ifn-γ、il-4及cd8+记忆t细胞。

16.一种重组多核苷酸，其包含编码如权利要求1至9中任一项的多肽的核酸序列及视情况选用的编码信号肽的核酸序列。

17.如权利要求16的重组多核苷酸，其中所述信号肽包含seq id no：13或seq id no：14的序列。

18.一种载体，其包含如权利要求17的重组多核苷酸。

19.一种宿主细胞，其包含如权利要求18的载体。

技术总结
本发明涉及一种嵌合流感病毒血球凝集素(HA)多肽，所述多肽包含与一或多个球状头域序列融合的一或多个茎域序列，所述一或多个茎域序列各自与H1亚型HA(H1 HA)及/或H5亚型HA(H5 HA)的茎域共同序列具有至少60％同源性，所述一或多个球状头域序列各自与H1亚型HA(H1 HA)或H5亚型HA(H5 HA)的球状头域共同序列具有至少60％同源性。

技术研发人员：翁启惠,廖心瑜,王世吉,柯怡安,林国仪,马彻,郑婷仁
受保护的技术使用者：刘扶东
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12