GHRH类似物的低剂量药物组合物及其用途的制作方法

ghrh类似物的低剂量药物组合物及其用途
1.相关申请的交叉引用
2.本技术要求2020年7月5日提交的美国临时专利申请no.63/048,167的权益，该文献全部内容通过引用并入本文。
3.序列表
4.本技术包含名为"g11718_409_seqlist.txt"的计算机可读形式的序列表，其创建于2021年6月29日，大小为约5kb。该计算机可读形式的全部内容通过引用并入本文。
技术领域
5.概括而言，本公开内容涉及生长激素(gh)促分泌素领域，更特别涉及生长激素释放激素(ghrh)类似物如替莫瑞林(tesamorelin)的制剂及其施用方法。


背景技术：

6.替莫瑞林(反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2,图1)是下丘脑肽ghrh的一种稳定的合成肽类似物，被指示用于减少患有脂肪营养不良的hiv感染患者中过量的腹部脂肪。其通过作用于垂体促生长激素细胞以刺激合成代谢和脂肪分解的内源性gh的合成和脉冲释放来介导其作用。替莫瑞林通过与垂体促生长激素细胞上的ghrhr结合并作为其激动剂来发挥其治疗作用；触发释放的gh又作用于多种靶细胞，包括软骨细胞、成骨细胞、肌细胞、肝细胞和脂肪细胞，产生大量主要由肝脏和外周组织中产生的胰岛素样生长因子1(igf-1)介导的药效动力学效应。
7.用于减少患有脂肪营养不良的hiv感染患者中过量的腹部脂肪的替莫瑞林的批准日剂量为2mg，通过将2ml的1mg/ml替莫瑞林溶液皮下注射到腹部皮肤中来施用。目前其以两个小瓶提供给患者，每个小瓶包含1mg冻干替莫瑞林。患者必须使用具有第一个混合针的注射器将第一个小瓶中的冻干替莫瑞林用2.2ml无菌水重新混悬，从第一个小瓶收集制备的替莫瑞林溶液，更换针，用第二个混合针将制备的替莫瑞林溶液加入到第二个小瓶中，从第二个小瓶中收集制备的替莫瑞林溶液，用注射针更换第二个混合针，皮下注射2ml制备的替莫瑞林溶液。这种用于制备可注射替莫瑞林溶液的相对复杂的方法对于患者不是非常方便，并且增加了替莫瑞林溶液的错误、污染和不当操作的风险。此外，必须皮下注射以给患者提供适宜的血浆替莫瑞林水平的溶液体积相对大(2ml)，这可能伴有注射部位的疼痛(usach等人，adv ther(2019)36:2986-2996)。此外，对于患者更方便的是具有例如含有用于治疗的剂量的单个小瓶，或甚至是含有多个治疗剂量的多剂量小瓶(例如，用于数天的治疗)。
8.因此，需要更简单和方便的替莫瑞林施用方法。
9.本说明书参考了大量文献，这些文献的全部内容通过引用并入本文。
10.公开内容简述
11.概括而言，本公开内容涉及生长激素释放激素(ghrh)类似物如替莫瑞林的制剂及其施用方法。
12.在一个方面，本公开内容提供了包含ghrh分子或其可药用盐(例如反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2或其可药用盐)和至少一种可药用赋形剂的药物组合物。
13.在各个方面和实施方案中，本公开内容还提供了以下项目：
14.2.药物组合物，包含(i)约1.23至约1.32mg的反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2或其可药用盐，浓度为约7.5mg/ml或更高；和(ii)至少一种可药用赋形剂。
15.3.项目1的药物组合物，其包含约1.25至约1.30mg的反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2或其可药用盐。
16.4.项目1或2的药物组合物，其包含约1.27至约1.29mg的反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2或其可药用盐。
17.5.项目1至3任一项的药物组合物，其包含约1.28mg的反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2或其可药用盐。
18.6.项目1至4任一项的药物组合物，其中所述反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2或其可药用盐的浓度为约7.5至约8.5mg/ml。
19.7.项目1至5任一项的药物组合物，其中所述反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2或其可药用盐的浓度为约8mg/ml。
20.8.项目1至6任一项的药物组合物，其中所述至少一种可药用赋形剂包含稀释剂。
21.9.项目1至7任一项的药物组合物，其中所述至少一种可药用赋形剂包含膨胀剂(bulking agent)。
22.10.项目8的药物组合物，其中所述膨胀剂是甘露醇。
23.11.项目1至9任一项的药物组合物，其中所述至少一种可药用赋形剂包含稳定剂。
24.12.项目10的药物组合物，其中所述稳定剂是蔗糖。
25.13.项目1至11任一项的药物组合物，其中所述至少一种可药用赋形剂包含表面活性剂。
26.14.项目12的药物组合物，其中所述表面活性剂是聚山梨酯20。
27.15.项目1至13任一项的药物组合物，其中所述至少一种可药用赋形剂包含缓冲剂。
28.16.项目14的药物组合物，其中所述缓冲剂是组氨酸。
29.17.项目1至15任一项的药物组合物，其中所述至少一种可药用赋形剂包含环糊精。
30.18.项目16的药物组合物，其中所述环糊精是β-环糊精。
31.19.项目1至17任一项的药物组合物，其中所述反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2的可药用盐是乙酸盐。
32.20.给受治疗者施用反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2或其可药用盐以获得与施用2mg的浓度为1mg/ml的反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2生物等效的反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2或其可药用盐血浆水平的方法，所述方法包括给所述受治疗者施用约1.23至约1.32mg的浓度为约7.5mg/ml或更高的反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2或其可药用盐。
33.21.项目19的方法，其包括施用约1.28mg的反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2或其可药用盐。
34.22.项目19或20的方法，其中所述反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2或其可药用盐
ghrh
(1-44)-nh2或其可药用盐；
54.(b)第二容器，其包含可药用稀释剂；
55.(c)说明项目25的方法的说明书；和任选的
56.(d)至少一个注射器。
57.34.包含反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2或其可药用盐的药物组合物，其用于在受治疗者中产生与施用2mg的浓度为1mg/ml的反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2生物等效的反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2或其可药用盐的血浆水平，其中所述药物组合物用于给所述受治疗者施用约1.3至约1.6mg或约1.23至约1.32mg的浓度为约7.5mg/ml或更高的反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2或其可药用盐。
58.35.包含反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2或其可药用盐的药物组合物，其用于施用于人类受治疗者用于产生：
59.(i)在受治疗者中约1500至约4500pg/ml的反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2或其可药用盐的最大血浆浓度(c
max
)；和/或
60.(ii)在受治疗者中约300至约1400pg
·
h/ml的反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2或其可药用盐的外推至无穷大的血浆浓度时间曲线下面积(auc
0-∞
)；
61.其中所述药物组合物用于给所述受治疗者施用约1.3至约1.6mg或约1.23至约1.32mg的浓度为约7.5mg/ml或更高的反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2或其可药用盐。
62.36.项目34或35的用于所述用途的药物组合物，其中所述药物组合物用于施用约1.25至约1.30mg的反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2或其可药用盐。
63.37.项目34至36项任一项的用于所述用途的药物组合物，其中所述药物组合物用于施用浓度为约7.5至约8.5mg/ml、优选约8.0mg/ml的反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2或其可药用盐。
64.38.项目34至37任一项的用于所述用途的药物组合物，其中所述反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2的可药用盐是乙酸盐。
65.39.项目34至38任一项的用于所述用途的药物组合物，其中所述受治疗者患有hiv相关性脂肪营养不良。
66.40.项目34至39任一项的用于所述用途的药物组合物，其中所述反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2或其可药用盐用于通过皮下注射施用。
67.41.项目34至40任一项的用于所述用途的药物组合物，其进一步包括将冻干的反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2或其可药用盐重混悬于适宜量的可药用稀释剂中，以获得浓度为约7.5mg/ml或更高的反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2或反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2盐溶液；从而提供用于施用的药物组合物。
68.42.包含反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2或其可药用盐的药物组合物用于在受治疗者中产生与施用2mg的浓度为1mg/ml的反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2生物等效的反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2或其可药用盐的血浆水平的用途，其中所述药物组合物用于给所述受治疗者施用约1.23至约1.32mg的浓度为约7.5mg/ml或更高的反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2或其可药用盐。
69.43.包含反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2或其可药用盐的药物组合物用于施用于人类受治疗者以产生以下的用途：
和“该”和类似指代的使用应解释为涵盖单数和复数，本文另有说明或与上下文明显矛盾除外。
90.术语“包含”、“具有”、“包括”和“含有”应解释为开放式术语(即，意思指“包括但不限于”)，另有说明除外。
91.除非本文另有说明，否则本文中数值范围的描述仅仅意味着充当单独提及落入所述范围的每个单独值的简写方法，并且每个单独值如同其在本文中单独描述那样并入说明书中。所述范围内的值的所有子集也如同其在本文中单独描述那样并入说明书中。
92.类似地，本文中具有各种取代基和针对这些取代基列举的各种基团的通用化学结构意欲充当单独提及通过任何取代基的任何基团的组合获得的每个分子的简写方法。每个单独的分子都如同其在本文中单独描述那样并入说明书中。而且，这些通用化学结构内的分子的所有子集也如同其在本文中单独描述那样并入说明书中。
93.本文所述的所有方法都可以以任意适宜的顺序进行，本文另有说明或上下文明显矛盾除外。
94.本文提供的任何和所有实施例或示例性语言(“例如”、“如”等)的使用仅旨在更好地说明本公开内容，并且不对本公开内容的范围构成限制，另有声明除外。
95.说明书中的任何语言都不应当看作指示任何未要求的元素对于实施本公开内容是必需的。
96.本文中，术语“约”具有其普通含义。术语“约”用于表示数值包括用于确定该值的装置或方法的固有误差变化，或涵盖接近于所述值的值，例如在所述值(或值范围)的10％以内。
97.除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本公开内容所属领域的普通技术人员通常理解相同的含义。
98.在本文所述的研究中，本发明人已经证明，以8mg/ml配制的替莫瑞林比相应的1mg/ml替莫瑞林制剂是更生物可利用的。在人类受治疗者中的药物动力学(pk)研究已经表明，施用1.28mg以8mg/ml配制的替莫瑞林与施用2mg的1mg/ml替莫瑞林制剂(例如egrifta
tm
制剂)(替莫瑞林的批准日剂量)是生物等效的。发现为了获得与egrifta
tm
制剂生物等效，1.2mg和1.36mg(8mg/ml)的剂量分别略微过低或略微过高。因此，发现施用于受治疗者的替莫瑞林的量应当减少约36％(即，1.28mg对比2mg)以在受治疗者中获得生物等效。这有利地减少了施用体积(0.16ml对比2ml)，并使制剂的制备和操作更加用户友好，因为其可以在单个小瓶而不是两个小瓶中提供，从而降低了错误和污染/感染的风险。
99.因此，在第一方面，本公开内容提供了药物组合物，其包含(i)多于1.2mg且少于1.36mg、例如约1.21至约1.35、约1.22至约1.33或1.34、或约1.23至约1.32mg的ghrh分子或其可药用盐，优选反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2或其可药用盐，浓度为约7.5mg/ml或更高；和(ii)至少一种可药用赋形剂。
100.在实施方案中，药物组合物包含约1.21、1.22、1.23、1.24、1.25、1.26或1.27mg至约1.29、1.30、1.31、1.32、1.33、1.34或1.35mg的ghrh分子、优选反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2或其可药用盐。在进一步的实施方案中，药物组合物包含约1.24至约1.31mg的ghrh分子、优选反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2或其可药用盐。在进一步的实施方案中，药物组合物包含约1.25至约1.30mg的ghrh分子、优选反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2或其
可药用盐。在进一步的实施方案中，药物组合物包含约1.26至约1.29mg的ghrh分子、优选反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2或其可药用盐。在进一步的实施方案中，药物组合物包含约1.27至约1.29mg的ghrh分子、优选反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2或其可药用盐。在进一步的实施方案中，药物组合物包含约1.28mg的ghrh分子、优选反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2或其可药用盐。
101.在一个实施方案中，ghrh分子、优选反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2或其可药用盐的浓度为约12、10或8mg/ml或更低。在实施方案中，ghrh分子、优选反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2或其可药用盐的浓度为约7.5至约10、9、8.5或8mg/ml，例如浓度为约7.5至约8.5mg/ml。在进一步的实施方案中，ghrh分子、优选反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2或其可药用盐在药物组合物中的浓度为约7.5、7.6、7.7、7.8或7.9至约8.1、8.2、8.3、8.4或8.5mg/ml。在进一步的实施方案中，ghrh分子、优选反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2或其可药用盐在药物组合物中的浓度为约7.80、7.82、7.84、7.86、7.88、7.9、7.92、7.94、7.95、7.96、7.97、7.98或7.99至约8.01、8.02、8.03、8.04、8.05、8.06、8.08、8.1、8.12、8.14、8.16、8.18或8.2mg/ml。在进一步的实施方案中，ghrh分子、优选反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2或其可药用盐的浓度为约8mg/ml。
102.如本公开内容的上下文中使用的术语“ghrh分子”包括但不限于人天然ghrh
(1-44)
及其片段(例如，ghrh
(1-40)
、ghrh
(1-29)
、1-29之间的片段和1-44序列)和任意其它片段；来自其它物种的ghrh及其片段；含有氨基酸取代、添加和/或缺失的ghrh变体；ghrh的衍生物或类似物，或其片段或变体，具有例如在n-末端、c-末端或侧链上与ghrh氨基酸序列偶联的有机基团或部分；和ghrh(人或来自其它物种)的可药用盐，以及ghrh片段、变体、类似物和衍生物的可药用盐。本公开内容的ghrh分子还涵盖本领域目前已知的ghrh分子，包括但不限于白蛋白缀合的ghrh(美国专利号7,268,113)；聚乙二醇化ghrh肽(美国专利号7,256,258和6,528,485)；猪ghrh
(1-40)
(美国专利号6,551,996)；犬ghrh(美国专利申请号2005/0064554)；1-29至1-44个氨基酸长度的ghrh变体(美国专利号5,846,936、5,696,089、5,756,458和5,416,0733，以及美国专利申请号2006/0128615和2004/0192593)；和pro
0-ghrh肽及其变体(美国专利号5,137,872)。
103.ghrh类似物包括在美国专利号5，681，379和5，939，386中描述的那些，这些文献也描述了它们的合成方法。更特别地，这些ghrh类似物由下式a定义：
104.x-ghrh肽(a)
105.其中所述ghrh肽是下式b的肽(seq id no：2)：
106.a1-a2-asp-ala-ile-phe-thr-a8-ser-tyr-arg-lys-a13-leu-a15-gln-leu-a18-ala-arg-lys-leu-leu-a24-a25-ile-a27-a28-arg-a30-a31-a32-a33-a34-a35-a36-a37-a38-a39-a40-a41-a42-a43-a44-r0(b)
107.其中，
108.a1是tyr或his；
109.a2是val或ala；
110.a8是asn或ser；
111.a13是val或ile；
112.a15是ala或gly；
113.a18是ser或tyr；
114.a24是gln或his；
115.a25是asp或glu；
116.a27是met、ile或nle；
117.a28是ser或asn；
118.a30不存在或者是任意氨基酸，优选gln；
119.a31不存在或者是任意氨基酸，优选gln；
120.a32不存在或者是任意氨基酸，优选gly；
121.a33不存在或者是任意氨基酸，优选glu；
122.a34不存在或者是任意氨基酸，优选ser；
123.a35不存在或者是任意氨基酸，优选asn；
124.a36不存在或者是任意氨基酸，优选gln；
125.a37不存在或者是任意氨基酸，优选glu；
126.a38不存在或者是任意氨基酸，优选arg；
127.a39不存在或者是任意氨基酸，优选gly；
128.a40不存在或者是任意氨基酸，优选ala；
129.a41不存在或者是任意氨基酸，优选arg；
130.a42不存在或者是任意氨基酸，优选ala；
131.a43不存在或者是任意氨基酸，优选arg；
132.a44不存在或者是任意氨基酸，优选leu；和
133.r0是nh2或nh-(ch2)n-conh2，其中n＝1至12。
134.基团x是经由酰胺键锚定到肽的n-末端的疏水性尾部，疏水性尾部定义了5-7个原子的骨架。骨架可以被c
1-6
烷基、c
3-6
环烷基或c
6-12
芳基取代，并且骨架包含至少一个与骨架的至少两个原子连接的刚性部分。刚性部分是双键、三键、饱和或不饱和c
3-9
环烷基、或c
6-12
芳基。
135.在一个实施方案中，基团x是：
136.[0137][0138]
在一个实施方案中，在式b中，a30-a44是：(a)不存在；(b)对应于天然ghrh肽的位置30-44的氨基酸序列(seq id no：3)，或(c)从其c-末端具有1-14个氨基酸缺失的(b)的氨基酸序列。
[0139]
在一个实施方案中，ghrh肽是包含seq id no：4的氨基酸序列的多肽。
[0140]
在一个实施方案中，ghrh分子是(己烯酰基反式-3)hghrh
(1-44)
nh2(seq id no：1)或其可药用盐。[反式-3-己烯酰基]hghrh
(1-44)
酰胺(也称为(己烯酰基反式-3)hghrh
(1-44)
nh2)是合成的人ghrh(hghrh)类似物，其包含hghrh的44-氨基酸序列，其上己烯酰基部分(c6侧链)已经锚定在氨基末端酪氨酸残基上。[反式-3-己烯酰基]hghrh
(1-44)
酰胺的结构如图1所示。
[0141]
术语“可药用盐”指ghrh分子的药理学上可接受的并且对其所施用的受治疗者基本上无毒的盐。更特别地，这些盐保留了ghrh分子的生物有效性和性质，由适宜的无毒的有机或无机酸或碱形成。
[0142]
例如，这些盐包括ghrh分子的酸加成盐，其足够碱性以形成该盐。这类酸加成盐包括乙酸盐、己二酸盐、海藻酸盐、低级链烷磺酸盐如甲磺酸盐、三氟甲磺酸盐或乙磺酸盐、芳基磺酸盐如苯磺酸盐、2-萘磺酸盐或甲苯磺酸盐(也称为甲基苯磺酸盐)、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、肉桂酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸氢盐、2-羟基乙磺酸盐、衣康酸盐、乳酸盐、马来酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过氯酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、磺酸盐、酒石酸盐、硫代氰酸盐、十一烷酸盐等。
[0143]
另外，通常被认为适于由碱性药物化合物形成药学上有用的盐的酸在例如下述文献中进行了讨论：p.stahl等人,camille g.(编著)handbook of pharmaceutical salts.properties,selection and use.(2002)苏黎士:wiley-vch；s.berge等人，journal of pharmaceutical sciences(1977)66(1)1
–
19；p.gould,international j.of pharmaceutics(1986)33 201
–
217；anderson等人，the practice of medicinal chemistry(1996),academic press,纽约；和the orange book(food&drug administration,华盛顿d.c.,在他们的网页上)。
[0144]
本领域技术人员可以使用标准技术非常容易地形成这些盐。确实，将药物化合物(即药物)化学修饰成盐是药物化学家熟知的技术(参见例如h.ansel等人，pharmaceutical dosage forms and drug delivery systems(第6版，1995年)，第196页和第1456-1457页)。ghrh分子的盐可以例如如下形成：在介质如盐在其中沉淀的介质中或在水性介质中使ghrh分子与一定量、例如当量的酸或碱反应，随后冻干。
[0145]
在一个实施方案中，ghrh分子、优选[反式-3-己烯酰基]hghrh
(1-44)
酰胺的可药用盐是乙酸盐。
[0146]
如本文使用的术语“可药用赋形剂”具有其在本领域的正常含义，其为本身不是活性成分(药物)的任意成分。赋形剂包括例如粘合剂、润滑剂、稀释剂、填充剂(填料)、增稠剂、崩解剂、增塑剂、包衣、屏障层配制物、润滑剂、稳定剂、释放延迟剂和其它组分。如本文使用的“可药用赋形剂”指不会干扰活性成分的生物活性的有效性并且对受治疗者无毒的任意赋形剂，即，其是赋形剂类别和/或以对受治疗者无毒的量使用。赋形剂是本领域熟知的，本发明的组合物在这些方面不受限制。在一些实施方案中，药物组合物包含一种或多种赋形剂，包括例如但不限于一种或多种粘合剂(粘结剂)、增稠剂、表面活性剂、稀释剂、释放延迟剂、着色剂、矫味剂、填充剂、崩解剂/溶解促进剂、润滑剂、增塑剂、二氧化硅流动调节剂、助流剂、抗结块剂、抗粘着剂、稳定剂、抗静电剂、膨胀剂和其任意组合。如本领域技术人员应当认识到的，单个赋形剂可以同时实现多于两种功能，例如可以同时充当粘合剂和增稠剂。如本领域技术人员应当认识到的，这些术语不是一定相互排斥的。使用本领域已知的标准方法，通过将具有期望纯度的活性成分与一种或多种任选的可药用载体、赋形剂和/或稳定剂混合来制备治疗制剂。赋形剂可以适合于例如静脉内、胃肠外、皮下、肌内、颅内、眶内、眼、心室内、囊内、脊柱内、鞘内、硬膜外、脑池内、腹膜内、鼻内或肺(例如气溶胶)施用(参见remington:the science and practice of pharmacy,loyd v allen,jr,2012，第22版，pharmaceutical press；handbook of pharmaceutical excipients，rowe等人，2012，第7版，pharmaceutical press)。在一个实施方案中，药物组合物是可注射组合物，例如可注射溶液或混悬液。在一个实施方案中，药物组合物包含一种或多种用于皮下施用/注射的赋形剂。
[0147]
在一个实施方案中，药物组合物包含膨胀剂。如本文使用的术语“膨胀剂”指用于给由冻干制剂重构产生的溶液提供适当或期望张力的化合物。优选地，溶液的适当或期望张力等于或接近于与施用溶液的受治疗者的生理流体等渗。例如，一种或多种糖可用作膨胀剂。如本文使用的糖包括但不限于单糖、寡糖和多糖。适宜糖的实例包括但不限于甘露糖、山梨糖、木糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖和葡聚糖。糖还包括糖醇，例如甘露醇、肌醇、卫矛醇、木糖醇和阿糖醇。根据本公开内容也可以使用糖的混合物。在一个实施方案中，膨胀剂是甘
露醇。例如，一种或多种氨基酸如甘氨酸可以用作膨胀剂。膨胀剂在药物组合物中的浓度为约1％至约10％(w/w)或约2％至约8％(w/w)。在一个实施方案中，膨胀剂在药物组合物中的浓度为约3至约5％(w/w)。在进一步的实施方案中，膨胀剂在药物组合物中的浓度为约4％(w/w)。
[0148]
在一个实施方案中，本公开内容的药物组合物还可包含表面活性剂。表面活性剂的典型实例包括山梨坦脂肪酸酯，例如山梨坦单辛酸酯、山梨坦单月桂酸酯、山梨坦单棕榈酸酯；甘油脂肪酸酯，例如甘油单辛酸酯、甘油单肉豆蔻酸酯、甘油单硬脂酸酯；聚甘油脂肪酸酯，例如单硬脂酸十甘油酯、二硬脂酸十甘油酯、单亚油酸十甘油酯；聚氧乙烯山梨坦脂肪酸酯，例如聚氧乙烯山梨坦单月桂酸酯、聚氧乙烯山梨坦单油酸酯、聚氧乙烯山梨坦单硬脂酸酯、聚氧乙烯山梨坦单棕榈酸酯、聚氧乙烯山梨坦三油酸酯、聚氧乙烯山梨坦三硬脂酸酯；聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯，例如聚氧乙烯山梨醇四硬脂酸酯、聚氧乙烯山梨醇四油酸酯；聚氧乙烯甘油脂肪酸酯，例如聚氧乙烯甘油单硬脂酸酯；聚乙二醇脂肪酸酯，例如聚乙二醇二硬脂酸酯；聚氧乙烯烷基醚，例如聚氧乙烯月桂基醚；聚氧乙烯聚氧丙烯烷基醚，例如聚氧乙烯聚氧丙烯二醇醚、聚氧乙烯聚氧丙烯丙基醚、聚氧乙烯聚氧丙烯鲸蜡基醚；聚氧乙烯烷基苯基醚，例如聚氧乙烯壬基苯基醚；聚氧乙烯硬化蓖麻油类，例如聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯硬化蓖麻油(聚氧乙烯氢化蓖麻油)；聚氧乙烯蜂蜡衍生物，例如聚氧乙烯山梨醇蜂蜡；聚氧乙烯羊毛脂衍生物，例如聚氧乙烯羊毛脂；聚氧乙烯脂肪酸酰胺，例如聚氧乙烯硬脂酸酰胺；具有c
10-18
烷基的烷基硫酸盐，例如鲸蜡基硫酸钠、月桂硫酸钠、油基硫酸钠；具有2-4的平均eo摩尔数和c
10-18
烷基的聚氧乙烯烷基醚硫酸盐，例如聚氧乙烯月桂硫酸钠；具有c
8-18
烷基的烷基磺基琥珀酸酯盐，例如月桂基磺基琥珀酸钠；卵磷脂；甘油磷脂；鞘氨醇磷脂类如鞘磷脂；c
12-18
脂肪酸的蔗糖脂肪酸酯。
[0149]
在一个实施方案中，本公开内容的药物组合物的表面活性剂是非离子型表面活性剂。在进一步的实施方案中，本公开内容的药物组合物的表面活性剂是聚氧乙烯山梨坦烷基酯，例如聚山梨酯。在又进一步的实施方案中，本公开内容的药物组合物的表面活性剂是聚山梨酯-20(t20或吐温-20
tm
)。
[0150]
在另一个实施方案中，本公开内容的药物组合物中的表面活性剂的量为约0.0001％至约10％(w/w)。在进一步的实施方案中，本公开内容的药物组合物中的表面活性剂的量为约0.001％至约5％、1％或0.1％(w/w)或约0.005％至约0.05％。在又进一步的实施方案中，本公开内容的药物组合物中的表面活性剂的量为约0.01％(w/w)。
[0151]
在一个实施方案中，本公开内容的药物组合物可进一步包含一种或多种稳定物质或稳定剂。如本文使用的术语“稳定剂”意欲指用于稳定治疗剂以抵抗会降低治疗剂的治疗活性的物理、化学或生物化学过程的化合物。适宜的稳定剂是非还原糖，包括例如但不限于蔗糖和海藻糖；和非还原性多元醇或糖醇，包括例如但不限于山梨醇、甘露醇、麦芽糖醇、木糖醇、甘醇、甘油和乙二醇。在一个实施方案中，本公开内容的药物组合物中的稳定剂的量为约0.05％至约10％(w/w)。在进一步的实施方案中，本公开内容的药物组合物中的稳定剂的量为约1％至约5％、约2％至约4％或约2.5％至约3.5％(w/w)。在又一个实施方案中，本公开内容的药物组合物中的表面活性剂的量为约3％(w/w)。
[0152]
在一个实施方案中，本公开内容的药物组合物包含非还原糖。如本文使用的“非还原糖”指不含半缩醛的糖，例如以具有在糖单元的还原末端之间、而不是在一个糖单元的还
原末端和另一个糖单元的非还原末端之间形成的糖苷键为特征的碳水化合物或糖。在进一步的实施方案中，上述非还原糖是海藻糖或蔗糖。在进一步的实施方案中，上述非还原糖是蔗糖。在一个实施方案中，非还原糖在本公开内容的药物组合物中的浓度为约0.1％至约5％(w/w)。在一个实施方案中，非还原糖的浓度为约1％至约3％(w/w)。在进一步的实施方案中，非还原糖的浓度为约2％(w/w)。
[0153]
在一个实施方案中，本公开内容的药物组合物包含缓冲剂，即，将药物组合物的ph保持在接近所选值的试剂。缓冲剂的实例包括乙酸盐缓冲剂、琥珀酸盐缓冲剂、柠檬酸盐缓冲剂、磷酸盐缓冲剂和组氨酸缓冲剂，在一个实施方案中，缓冲剂是组氨酸缓冲剂。在一个实施方案中，药物组合物中的组氨酸的浓度为约0.01％至约1％，例如约0.05％至约0.5％或约0.1％至约0.3％。在进一步的实施方案中，组氨酸糖的浓度为约0.15％。
[0154]
在一个实施方案中，本公开内容的药物组合物包含寡糖，例如环状寡糖如环糊精。如本文使用的术语“环糊精”指包含通过α-1,4糖苷键连接的吡喃葡糖苷亚基(5个或更多个)的大环的环状寡糖家族。环糊精的实例包括分别包含6、7和8个吡喃葡糖苷亚基的α-环糊精、β-环糊精和γ-环糊精及其类似物(例如改性环糊精)。在一个实施方案中，环糊精是β-环糊精或改性β-环糊精。
[0155]
β
–
环糊精具有以下结构：
[0156][0157]
一个或多个糖单元的一个或多个羟基可以被改性，例如用烷基、链烯基或炔基或者用取代的烷基、链烯基或炔基改性。因此，在实施方案中，β-环糊精可以是未改性的或未取代的，或者可以是改性的或取代的。因此，在进一步的实施方案中，β-环糊精是改性β-环糊精。如本文使用的“改性β-环糊精”指在β-环糊精的一个或多个糖单元的一个或多个羟基上含有修饰(即，与β-环糊精的一个或多个糖单元的一个或多个羟基连接的基团或部分)的β-环糊精。因此，在实施方案中，改性β-环糊精是烷基-、链烯基-、炔基-、取代的烷基-、取代的链烯基-或取代的炔基-β-环糊精(例如，具有羟基取代)。在实施方案中，烷基、链烯基或炔基是(c
1-c6)烷基、(c
1-c6)链烯基或(c
1-c6)炔基。在进一步的实施方案中，改性β-环糊精是(c
1-c6)烷基-β-环糊精，在进一步的实施方案中是甲基-β-环糊精(m-β-cd)。在进一步的
实施方案中，改性β-环糊精是羟基(c
1-c6)烷基-β-环糊精，在进一步的实施方案中是羟丙基-β-环糊精(hp-β-cd)。
[0158]
在一个实施方案中，环糊精在药物组合物中存在的浓度为约2至约15％(w/v)，在进一步的实施方案中为约2至约12.5％(w/v)，例如约2至约10％(w/v)、约2.5至约15％(w/v)、约2.5至约12.5％(w/v)、约2.5至约10％(w/v)、约5至约15％(w/v)、约5至约12.5％(w/v)、约5至约10％(w/v)、约7.5至约12.5％(w/v)、约7.5至约10％(w/v)、约5、7.5、10、12.5或15％(w/v)或约10％(w/v)。
[0159]
在一个实施方案中，本公开内容的药物组合物具有约4.5至约6.5、例如约5.0至约6.0的ph。根据另一个实施方案，药物组合物具有约5.0的ph。根据进一步的实施方案，药物组合物具有约5.5的ph。根据另一个进一步的实施方案，药物组合物具有约5.9-6.0的ph。
[0160]
在一个实施方案中，本公开内容的药物组合物包含稀释剂，例如水性溶液。在进一步的实施方案中，药物组合物包含(通常是无菌的)水。
[0161]
如果需要，本公开内容的药物组合物可以进一步含有其它稀释剂、增溶剂、赋形剂、ph调节剂、缓和剂、缓冲剂、含硫还原剂、抗氧化剂等。例如，含硫还原剂包括n-乙酰半胱氨酸、n-乙酰高半胱氨酸、硫辛酸、硫双乙醇、硫代乙醇胺、硫代甘油、硫代山梨醇、巯基乙酸及其盐、硫代硫酸钠、谷胱甘肽、甲硫氨酸和含巯基化合物如具有1-7个碳原子的硫代链烷酸。抗氧化剂包括甲硫氨酸、异抗坏血酸、二丁基羟基甲苯、丁基羟基茴香醚、α-生育酚、生育酚乙酸酯、l-抗坏血酸及其盐、l-棕榈酸抗坏血酸酯、l-硬脂酸抗坏血酸酯、亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、没食子酸三戊酯、没食子酸丙酯或螯合剂如乙二胺四乙酸二钠(edta)、焦磷酸钠、偏磷酸钠。也可以含有通常加入的其它组分，例如无机盐如氯化钠、氯化钾、氯化钙、磷酸钠、磷酸钾、碳酸氢钠；和有机盐如柠檬酸钠、柠檬酸钾、乙酸钠。
[0162]
在一个实施方案中，药物组合物在室温下是稳定的。稳定的组合物是其中活性主要成分，即ghrh分子(例如[反式-3-己烯酰基]hghrh
(1-44)
酰胺)在储存时基本上保持其物理和化学稳定性和完整性的组合物。用于测量蛋白质或肽稳定性的各种分析技术是本领域可获得的，在如下文献中进行了综述：peptide and protein drug delivery,247-301,vincent lee编辑,marcel dekker,inc.,纽约,n.y.,pubs.(1991)和jones,a.adv.drug delivery rev.10:29-90(1993)。稳定性可以在选择的温度下测定选择的时间期。对于快速筛选，可以将组合物保持在例如40℃下2周至1个月(和长达6个月)，此时测定稳定性。还可以将组合物保持在例如环境室温条件(约15-30℃，优选约20-25℃)下至少6个月，此时测定稳定性。本公开内容的组合物保持冻干形式的ghrh分子(例如[反式-3-己烯酰基]hghrh
(1-44)
酰胺)在室温(即20-25℃)下稳定储存至少1周、至少2周、至少4周、至少6周、至少8周、至少3个月、至少4个月、至少6个月或至少12个月。例如，“稳定的”组合物可以是储存期的组合物中存在大于约80％、大于约90％、大于约95％、大于约96％、大于约97％、大于约98％或大于约99％的非降解活性剂的组合物。本公开内容的组合物的稳定性可以例如使用反相高压液相色谱法(rp-hplc)测量。
[0163]
在一个实施方案中，药物组合物具有约5.8至约6.2的ph，并且包含：
[0164]
·
约7.8至约8.2mg/ml的ghrh分子(例如[反式3-己烯酰基]hghrh
(1-44)
酰胺)
[0165]
·
约8％至约12％的环糊精，例如β-环糊精，例如羟丙基-β-环糊精(hp-β-cd)
[0166]
·
约2％至约4％的糖醇，例如甘露醇。
[0167]
在一个实施方案中，药物组合物具有约5.9至约6.1的ph，并且包含：
[0168]
·
约7.9至约8.1或约8mg/ml的ghrh分子(例如[反式-3-己烯酰基]hghrh
(1-44)
酰胺)
[0169]
·
约9％至约11％或约10％的环糊精，例如β-环糊精，例如羟丙基-β-环糊精(hp-β-cd)
[0170]
·
约2.5％至约3.5％或约3％的糖醇，例如甘露醇。
[0171]
本公开内容的药物组合物可用于诱导或增加受治疗者中的gh分泌。
[0172]
因此，在另一个方面，本公开内容提供了在需要其的受治疗者中诱导或增加gh分泌的方法，所述方法包括给所述受治疗者施用有效量的上述制剂或组合物。
[0173]
在另一个方面，本公开内容提供了上述制剂或组合物用于诱导或增加受治疗者中的生长激素分泌的用途。
[0174]
在另一个方面，本公开内容提供了上述制剂或组合物在制备用于诱导或增加受治疗者中的gh分泌的药物中的用途。
[0175]
如本文使用的术语“刺激”、“增加”或“诱导”或这些术语的任意变体指生物活性的可测量的增加。在实施方案中，所述增加是相对于对照而言生物活性增加至少10％、20％、40％、60％、80％、90％、95％、100％(2倍)、200％(3倍)。例如，当与未施用ghrh分子的受治疗者相比，在给受治疗者(例如动物、人)施用ghrh分子后测量gh水平增加时，发现grf类似物刺激ghrhr活性。
[0176]
鉴于它们的ghrhr激动剂活性和gh释放性质，本公开内容的组合物可以用作药物，用于其中需要刺激gh分泌的预防和/或治疗性应用，例如用于治疗或预防与ghrh和/或gh功能相关的病症/障碍/疾病(例如，其中降低的gh和/或ghrh功能涉及在疾病/障碍的病因学中)。本领域已经广泛地描述了其中施用gh、ghrh或ghrh类似物/衍生物可以有益的疾病和病症(参见例如wo 2009/009727、wo 2006/042408、wo 2005/037307、wo 2004/105789)。这类病症/障碍/疾病包括例如与脂肪积聚相关的综合征、高胆固醇血症、肥胖、x综合征、脂肪增生、脂肪萎缩、脂肪营养不良(例如hiv相关性脂肪营养不良综合征)、认知功能受损、日间警觉受损、免疫系统功能下降(例如免疫缺陷，例如t细胞缺陷)、肌肉蛋白质分解代谢、与肌肉耗损相关的疾病/病症如少肌症、虚弱、放疗和/或化疗相关的副作用(例如在hiv感染和癌症患者中)、恶病质(例如在癌症患者中)、下丘脑垂体性侏儒症、灼伤、骨质疏松症、肾衰竭、骨不连骨折、急性/慢性虚弱性疾病或感染、伤口愈合、术后问题、泌乳失败、女性不孕症、神经退行性病症、grf受体依赖性肿瘤、年龄相关性病症、睡眠障碍/损伤、有或无纤维化的肝脏疾病或病症如非酒精性脂肪肝病(nafld)或非酒精性脂肪性肝炎(nash)、或肝硬化。因此，在一个实施方案中，施用组合物或制剂的受治疗者患有本文所述的一种或多种疾病或病症。在一个实施方案中，受治疗者患有脂肪营养不良(例如hiv相关性脂肪营养不良综合征)。在一个实施方案中，受治疗者患有nafld或nash。
[0177]
因此，在其它方面，本公开内容提供了用于如下的方法：(1)刺激日间警觉和/或认知功能，例如在年龄相关性病症、轻度认知损害(mci)、阿尔茨海默病前症状(阿尔茨海默病发作前)、痴呆和/或睡眠损害(例如年龄相关性睡眠损害)中，(2)改善/预防/治疗与脂肪积聚和/或高胆固醇血症相关的代谢病症(肥胖、腹部肥胖/脂肪过多、具有代谢障碍的腹部肥胖、具有相对gh缺乏的腹部肥胖、代谢综合征或x综合征、脂肪增生、脂肪萎缩、脂肪营养不
良(例如hiv相关性脂肪营养不良综合征)、血脂异常、高甘油三酯血症)、nafld/nash，(3)改善分解代谢/消瘦病症中的合成代谢，例如在急性或慢性肾衰竭(例如急性或慢性肾衰竭消瘦)、慢性心力衰竭(例如慢性心力衰竭消瘦)、慢性阻塞性肺病(copd)、囊性纤维化(例如成人囊性纤维化消瘦)、虚弱、灼伤、感染(败血症)、肌营养不良、充血性心力衰竭、神经退行性病症(阿尔茨海默病、阿尔茨海默病前综合征、肌萎缩性侧索硬化(als)、获得性免疫缺陷综合征(aids)、长期皮质类固醇治疗后的蛋白质营养不良、在骨不连骨折、髋部骨折、创伤或大手术(术后问题)后、骨质疏松症、长期固定、癌症相关恶病质、少肌症(例如年龄相关性少肌症)、胃肠道(gi)吸收不良(短肠综合征(sbs)、克罗恩病)中观察到的那些，特别是在老年受治疗者中，例如以增加肌肉质量和/或功能，(4)改善免疫缺陷状态(例如t细胞免疫缺陷)的免疫功能或重建，例如与衰老、hiv感染/aids或高剂量化疗和/或放疗后(在hiv感染和癌症患者中)相关的那些，(5)改变脂质参数((a)降低胆固醇；(b)降低非-hdl胆固醇；(c)降低甘油三酯；和/或(d)降低总胆固醇/hdl胆固醇的比例)；(6)改变身体组成参数((a)增加瘦体重；(b)减少躯干脂肪；(c)减少内脏脂肪；(d)减小腹围；(e)减少内脏脂肪组织(vat)；和/或(f)降低vat/皮下脂肪组织(sat)比例)，(7)提高生育力或治疗(女性)不育，治疗泌乳失败，(8)治疗gh缺乏(例如伴有腹部肥胖的gh缺乏)，提供gh替代疗法，例如在成人中，治疗特发性身材矮小症(iss)，(9)治疗ghrh受体相关肿瘤，(10)治疗下丘脑垂体性侏儒症，(11)改善伤口愈合，(12)治疗灼伤，(13)治疗急性/慢性衰弱性疾病或感染，和/或(14)预防/治疗以骨形成不足或减少为特征的病症(例如骨质疏松症)；所述方法包括给需要其的受治疗者施用有效量的上述组合物。
[0178]
在其它方面，本公开内容提供了上述组合物用于实现上述(1)至(14)的一种或多种生物/治疗作用的用途，例如用于改善、预防和/或治疗上述病症、疾病或障碍，或用于制备/制造用于改善、预防和/或治疗上述病症、疾病或障碍的药物。在其它方面，本公开内容提供了用于改善、预防和/或治疗上述病症、疾病或障碍或用于制备/制造用于改善、预防和/或治疗上述病症、疾病或障碍的药物的上述组合物。
[0179]
如本文使用的术语“治疗”定义为将治疗剂应用或施用于受治疗者，或将治疗剂应用或施用于来自受治疗者的分离的组织或细胞系，所述受治疗者患有障碍、疾病、障碍或疾病的症状或对障碍或疾病有易感性，目的是治愈、愈合、减轻、延迟、缓解、改变、补救、减缓、改善或影响障碍/疾病、障碍/疾病的症状或对障碍/疾病的易感性。
[0180]
在另一方面，本公开内容提供了给受治疗者施用ghrh分子，优选给患者施用反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2的方法，以获得与施用2mg的浓度为1mg/ml的ghrh分子(例如包含5％甘露醇的egrifta
tm
制剂)生物等效的ghrh分子血浆水平，所述方法包括给受治疗者施用大于1.2mg且小于1.36mg、例如约1.21至约1.35、约1.22至约1.33或1.34、或约1.23至约1.32mg的浓度为约7.5mg/ml或更高的ghrh分子。在一个实施方案中，ghrh分子、优选反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2配制在本文所述的药物组合物中。在一个实施方案中，受治疗者患有一种或多种上述病症、疾病或障碍。在进一步的实施方案中，受治疗者患有hiv相关性脂肪营养不良。在另一个实施方案中，受治疗者患有nafld或nash。
[0181]
如本文使用的术语“生物等效”指在给受治疗者施用ghrh分子后的一个或多个药物动力学(pk)参数在两种治疗方案之间没有显著性差异，如使用适宜的统计学标准所确定。在一个实施方案中，至少两个pk参数在两种治疗方案之间没有显著性差异。在一个实施
方案中，至少三个pk参数在两种治疗方案之间没有显著性差异。在一个实施方案中，所述一个或多个pk参数包括最大血浆浓度(c
max
)。在一个实施方案中，所述一个或多个pk参数包括外推至无穷大的血浆浓度时间曲线下面积(auc
0-∞
)。在一个实施方案中，所述一个或多个pk参数包括使用线性梯形方法从0至t
lqc
(最后观察到可定量血浆浓度的时间)计算的血浆浓度时间曲线下累积面积(auc
0-t
)。在一个实施方案中，生物等效指在禁食状态下相对平均c
max
、auc
(0-t)
和auc
(0-∞)
的90％ci在参比的80％至125％内。
[0182]
在一个实施方案中，使用所述一个或多个pk参数的自然对数(ln)转换进行统计分析。在一个实施方案中，所使用的统计标准是两种治疗方案之间的指数差的几何lsmeans的比率，具有对应的90％置信区间(ci)，其中ln-转换的pk参数的最小二乘均值(lsmeans)在80.00％至125.00％范围内，如以下实施例中所述。
[0183]
在一个实施方案中，所述方法允许在人类受治疗者中达到约1500至约4500pg/ml的ghrh分子的最大血浆浓度(c
max
)。在另一个实施方案中，所述方法允许在人类受治疗者群体中达到约2500至约3500pg/ml的ghrh分子的平均c
max
。在进一步的实施方案中，所述方法允许在人类受治疗者群体中达到约2600或2700至约3000、3100或3200pg/ml的ghrh分子的平均最大血浆浓度c
max
。
[0184]
在一个实施方案中，所述方法允许在受治疗者中实现约300至约1400pg
·
h/ml的ghrh分子的外推至无穷大的血浆浓度时间曲线下面积(auc
0-∞
)。在一个实施方案中，所述方法允许在人类受治疗者群体中实现约500至约1000pg
·
h/ml的ghrh分子的平均auc
0-∞
。在进一步的实施方案中，所述方法允许在人类受治疗者群体中实现约600、650或700至约750、800、850或900pg/ml的ghrh分子的平均auc
0-∞
。
[0185]
在一个实施方案中，所述方法包括：(a)将冻干的ghrh分子、优选反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2或其可药用盐重混悬于适宜体积的可药用稀释剂中，以获得约7.5mg/ml或更高的ghrh分子溶液；和(b)施用适宜体积的ghrh溶液，以便给受治疗者施用大于1.2mg且小于1.36mg、例如约1.21至约1.35、约1.22至约1.33或1.34、或约1.23至约1.32mg的ghrh分子、优选反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2或其可药用盐。
[0186]
在一个实施方案中，所述方法包括：(a)将冻干的ghrh分子、优选反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2或其可药用盐重混悬于适宜体积的可药用稀释剂中，以获得约7.5至约8.5mg/ml的ghrh分子溶液；和(b)给受治疗者施用约0.144至约0.176ml的(a)的ghrh分子溶液，从而施用约1.23至约1.32mg的ghrh分子。
[0187]
在一个实施方案中，所述方法包括：(a)将冻干的ghrh分子、优选反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2或其可药用盐重混悬于适宜体积的可药用稀释剂中，以获得约7.8至约8.2mg/ml的ghrh分子溶液；和(b)给受治疗者施用约0.150至约0.170ml的(a)的ghrh分子溶液，从而施用约1.23至约1.32mg的ghrh分子。
[0188]
在进一步的实施方案中，所述方法包括：(a)将冻干的ghrh分子、优选反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2或其可药用盐重混悬于适宜体积的可药用稀释剂中，以获得约8mg/ml的ghrh分子溶液；和(b)给受治疗者施用约0.16ml的(a)的ghrh分子溶液，从而施用约1.28mg的ghrh分子。
[0189]
在进一步的实施方案中，所述方法包括：(a)将约12.5mg的冻干的ghrh分子、优选反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2或其可药用盐重混悬于约1.4ml的可药用稀释剂中，以获
得约8mg/ml的ghrh分子溶液；和(b)给受治疗者施用约0.16ml的(a)的ghrh分子溶液，从而施用约1.28mg的ghrh分子。
[0190]
在一个实施方案中，冻干的ghrh分子、优选反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2或其可药用盐在容器中，优选密封容器中，例如小瓶中。在一个实施方案中，使用注射器将冻干的ghrh分子重混悬。在一个实施方案中，ghrh分子溶液通过注射、例如皮下注射进行施用。
[0191]
如本文使用的术语“受治疗者”或“患者”指温血动物，例如哺乳动物，例如猫、狗、小鼠、豚鼠、马、牛、绵羊或人。在一个实施方案中，受治疗者是哺乳动物。在进一步的实施方案中，上述受治疗者是人。
[0192]
在另一方面，本公开内容还提供了套盒，其包含：(a)第一容器，其包含至少约1.21mg、例如至少约1.23至约1.32mg的冻干ghrh分子、优选反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2或其可药用盐；(b)包含可药用稀释剂的第二容器；和(c)用于将冻干ghrh分子、优选反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2或其可药用盐重混悬于可药用稀释剂中以获得约7.5mg/ml或更高的ghrh分子溶液的说明书。
[0193]
在一个实施方案中，套盒包括：(a)第一容器，其包含至少约1.21mg、例如至少约1.23至约1.32mg的冻干ghrh分子、优选反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2或其可药用盐；(b)第二容器，其包含至少0.16ml的可药用稀释剂；和(c)用于将冻干ghrh分子、优选反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2或其可药用盐重混悬于可药用稀释剂中以获得约7.8至约8.2mg/ml的ghrh分子溶液的说明书。
[0194]
在一个实施方案中，第一容器包含约12.5mg的冻干的反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2或其可药用盐。在一个实施方案中，第二容器包含约1.4ml的可药用稀释剂。
[0195]
在一个实施方案中，可药用稀释剂是水性溶液，例如无菌水。
[0196]
在一个实施方案中，冻干的ghrh分子、优选反式-3-己烯酰基-ghrh
(1-44)-nh2或其可药用盐在密封容器如小瓶中。在一个实施方案中，套盒还包括至少一个注射器。
[0197]
在一个实施方案中，套盒还包含给受治疗者施用多于1.2mg且少于1.36mg、例如约1.21至约1.35、约1.22至约1.33或1.34、或约1.23至约1.32mg的ghrh分子的说明书，例如通过皮下注射。
实施例
[0198]
通过以下非限制性实施例进一步详细说明了本公开内容。
[0199]
实施例1：用1.2mg、1.36mg和1.6mg的8mg/ml替莫瑞林制剂在人中进行的生物等效性研究
[0200]
该研究是在16名健康男性和女性受治疗者中的单中心、随机、单剂量、致盲、4-治疗、4-周期、4-顺序、交叉设计。在禁食条件下施用以下研究产品(ip)：
[0201]
测试产品：用于sc注射的替莫瑞林12.5mg/小瓶无菌冻干粉末，以8mg/ml重混悬于包含10％羟丙基-β-环糊精(hp-β-cd)和3％甘露醇的溶液(ph 5.9-6)中。
[0202]
参比产品：用于sc注射的(替莫瑞林)1mg/小瓶无菌冻干粉末，以1mg/ml重混悬于包含5％甘露醇的溶液中。
[0203]
根据随机方案，在每个研究期间施用以下4种治疗之一的单次sc剂量：
[0204]
治疗-a：单次1.2mg(0.15ml)sc剂量的测试产品
[0205]
治疗-b：单次1.36mg(0.17ml)sc剂量的测试产品
[0206]
治疗-c：单次1.6mg(0.20ml)sc剂量的测试产品
[0207]
治疗-d：单次2mg(2.00ml)sc剂量的参比产品
[0208]
根据表1施用了治疗：
[0209]
表1：研究顺序
[0210][0211]
纳入标准
[0212]
1.提供签署且注明日期的icf
[0213]
2.声明在研究期间遵守所有研究程序和可获得性的意愿
[0214]
3.健康成年男性或女性
[0215]
4.如果是女性，则符合以下标准之一：
[0216]
a)具有生育可能性，并且同意从第一次研究药物施用前至少28天直到最后一次研究药物剂量后至少30天使用接受的避孕方案之一。可接受的避孕方法包括以下之一：
[0217]
·
禁止异性性交
[0218]
·
系统性避孕药(复方避孕药、可注射/植入/可插入激素避孕产品、透皮贴剂)
[0219]
·
宫内装置(含或不含激素)
[0220]
·
具有杀精子剂的男性避孕套或具有阴道杀精子剂的男性避孕套(凝胶、泡沫或栓剂)
[0221]
·
在第一次研究药物施用前至少6个月男性伴侣进行输精管结扎
[0222]
或者
[0223]
b)男性伴侣在给药前少于6个月进行输精管结扎，并且同意从第一次研究药物施用直至最后一次研究药物剂量后至少30天使用另外的可接受的避孕方法
[0224]
或者
[0225]
c)不具有生育可能性，定义为手术不孕(即，已经经历完全子宫切除术、双侧卵巢切除术或输卵管结扎)或处于绝经后状态(即，在第一次研究药物施用前至少1年没有月经且没有替代的医学病症)
[0226]
5.年龄至少18岁，但不超过55岁
[0227]
6.体重指数在18.5kg/m2至30.0kg/m2内，包括端点
[0228]
7.轻度吸烟者、非吸烟者或以前吸烟者(轻度吸烟者定义为在第一次研究药物施
用前至少90天每天使用10.0个尼古丁单位或更少的人。以前吸烟者定义为在第一次研究药物施用前至少180天完全停止使用尼古丁产品的人)
[0229]
8.临床实验室值在实验室规定的正常范围内；如果不在该范围内，则它们必须没有临床意义，如研究者所确定。
[0230]
9.在身体检查(包括生命体征)、血糖测量和/或ecg中没有在医疗史或临床意义(cs)发现的证据中捕获的临床意义(cs)疾病，如研究者所确定。
[0231]
排除标准
[0232]
1.在筛选时哺乳的女性
[0233]
2.在筛选时或在第一次研究药物施用之前根据妊娠测试怀孕的女性
[0234]
3.对替莫瑞林、甘露醇、倍他环糊精(betadex)或任意相关产品(包括制剂的赋形剂)有显著超敏反应史以及对任意药物的严重超敏反应(如血管性水肿)
[0235]
4.存在显著的胃肠道、肝脏或肾脏疾病或者已知干扰药物吸收、分布、代谢或排泄或已知增强或易患不期望的作用的任意其它病症，或该病史。
[0236]
5.显著的心血管、肺、血液学、神经学、精神、内分泌、免疫或皮肤疾病史
[0237]
6.在筛选就诊时存在cs ecg异常，如通过医学判断所定义。
[0238]
7.在注射部位(腹部)存在疤痕、瘀伤、发红、感染或刺激
[0239]
8.在注射部位(腹部)存在可能影响视觉皮肤评估的任意纹身、皮肤变色或异常皮肤质构
[0240]
9.具有任意药物的维持疗法或显著的药物依赖性或酒精滥用史(》3个酒精单位/天，摄入过量酒精，急性或慢性)
[0241]
10.在第一次研究药物施用前28天内的任意cs疾病
[0242]
11.在第一次研究药物施用前28天内使用任意处方药(激素避孕药或激素替代疗法除外)，研究者认为其将质疑参与者的状态是健康的。
[0243]
12.任意结核病史
[0244]
13.在筛选时或第一次研究药物施用前酒精和/或药物滥用的阳性测试结果
[0245]
14.hiv ag/ab combo、乙型肝炎表面抗原或丙型肝炎病毒测试的阳性筛选结果
[0246]
15.纳入本临床研究的以前组中
[0247]
16.替莫瑞林摄入史
[0248]
17.在第一次研究药物施用前28天内摄入ip
[0249]
18.在第一次研究药物施用前28天内献血50ml或更多
[0250]
19.在第一次研究药物施用前56天内献血500ml或更多(canadian blood services，hema-quebec，临床研究等)
[0251]
本研究共包括16名受治疗者，在随机分组后，所有16名受治疗者接受治疗-a、治疗-b、治疗-c和治疗-d。所有受治疗者都完成了本研究。
[0252]
在施用药物之前和施用药物之后直到4.00小时，在k2edta真空采血管中收集血样。在已经证明不引起分析物显著降解的条件下处理和储存样品。简言之，将样品于4℃以约1000g离心10分钟。将所得血浆转移到聚丙烯转移管中。此后，将1800μl产生的血浆转移到含有200μl稳定溶液(最终体积的10％)的聚丙烯管中。将稳定化的血浆样品立即置于干冰上，于-80℃冷冻储存直至测定。
[0253]
使用经验证的elisa测定评估了替莫瑞林血浆水平。定量下限(loq)和定量上限分别为150pg/ml和6000pg/ml。
[0254]
本研究感兴趣的主要pk参数是：
[0255]
·cmax
(最大观察血浆浓度)，
[0256]
·
auc
0-t
(使用线性梯形方法从0到最后观察到的可定量血浆浓度的时间(t
lqc
)计算的血浆浓度时间曲线下累积面积)；和
[0257]
·
auc
0-inf
(外推至无穷大的血浆浓度时间曲线下面积，计算为auc
0-t
+c
lqc
/λz，其中c
lqc
是在时间t
lqc
时测量的浓度，和λz是表观消除速率常数，通过对数浓度对时间曲线的末端线性部分的线性回归估计)
[0258]
还测定了其它参数，例如t
max
(最大观察血浆浓度的时间；如果它出现在一个以上的时间点处，则t
max
定义为具有该值的第一个时间点)，auc
0-t/inf
(auc
0-t
相对于auc
0-inf
的相对百分比)，λz和t
half
(终末消除半衰期，计算为ln(2)/λz)。
[0259]
使用具有对数线性末期假设的非房室方法评估了主要吸收和处置参数。使用梯形法则来评估auc(线性梯形线性内插)，通过使由对数线性回归模型估计的测定系数最大化来估计末期。但是，不评估个体浓度-时间曲线的处置参数，其中终末对数-线性期可以使用以下标准可靠地表征：
[0260]
·
最佳拟合范围选择：至少80％的r2[0261]
·
相应的终末半衰期值低于或等于评估λz的时间间隔的2倍(即，t
half
≤t
lqc
和t
lin
之间的时间间隔差的两倍)。
[0262]
对每个单独时间点的血浆浓度和所有pk参数计算了描述性统计。个体血浆浓度/时间曲线使用实际取样时间给出，而平均血浆浓度/时间曲线使用理论取样时间给出。
[0263]
使用c
max
、auc
0-t
和auc
0-inf
的自然对数转换进行所有统计学推断。使用非参数方法分析了参数t
max
。基于wilcoxon’s秩和检验(mann-whitney u-检验)进行固定周期、顺序和治疗效果的检验。使用方差分析(anova)模型对所有其它pk参数进行统计学分析。
[0264]
生物等效性证明是基于几何最小二乘均值(ls均值)的8mg/ml比1mg/ml比例，其中c
max
、auc
0-t
和auc
0-inf
的相应90％ ci在80％至125％可接受范围内。对于ln转换参数(几何ls均值的治疗-a、-b或-c比治疗-d的比例)，计算了测试和参比产品之间ls均值差的指数的90％置信区间(ci)。
[0265]
评估受治疗者内cv的公式是：其中mse是从ln转换参数的anova模型获得的均方误差。
[0266]
由合格的研究人员通过评价以下各项来评价了安全性：报告的不良事件(aes)、临床实验室测试结果、生命体征测量、ecg发现、身体检查发现、目测皮肤评价和血糖。
[0267]
结果
[0268]
替莫瑞林的c
max
和auc的统计学分析的总结在表2(治疗-a对比治疗-d)、表3(治疗-b对比治疗-d)和表4(治疗-c对比治疗-d)中给出。
[0269]
表2：替莫瑞林的统计学分析的总结(治疗-a对比治疗-d)
[0270][0271]ac
max
的单位为pg/ml，auc
0-t
和auc
0-∞
的单位为pg
·
h/ml
[0272]bauc
0-∞
的n＝15
[0273]
在1.2mg sc剂量的测试产品(治疗-a)之后，替莫瑞林被快速吸收，中值t
max
为0.15小时(范围＝0.10-0.20小时)，并且大体上与对2mg sc剂量的参比产品(治疗-d，中值[范围]＝0.20[0.15-0.25]小时)观察到的t
max
类似。对1.2mg测试产品观察到的c
max
、auc
0-t
和auc
0-∞
值分别为2889.6pg/ml、807.6pg
·
h/ml和879.2pg
·
h/ml；与之相比，2mg参比产品分别为3097.7pg/ml、949.3pg
·
h/ml和1057.2pg
·
h/ml。对于c
max
、auc
0-t
和auc
0-∞
，几何最小二乘平均比例点估计值分别为92.68％、84.44％和83.93％。auc几何ls平均值的治疗-a比治疗-d的比例的90％置信区间的下限低于80.00％生物等效性标准。因此，施用1.2mg的8mg/ml制剂与施用2mg的不是生物等效的。
[0274]
表3：替莫瑞林的统计学分析的总结(治疗-b对比治疗-d)
[0275][0276]
a c
max
的单位为pg/ml，auc
0-t
和auc
0-∞
的单位为pg
·
h/ml
[0277]bauc
0-t
和auc
0-∞
的n＝14
[0278]cauc
0-∞
的n＝15
[0279]
在1.36mg sc剂量的测试产品(治疗-b)之后，替莫瑞林被快速吸收，中值t
max
为0.15小时(范围＝0.10-0.25小时)，并且大体上与对2mg sc剂量的参比产品(治疗-d，中值[范围]＝0.20[0.15-0.25]小时)观察到的t
max
类似。对1.36mg测试产品观察到的c
max
、auc
0-t
和auc
0-∞
值分别为3462.6pg/ml、957.1pg
·
h/ml和1029.8pg
·
h/ml；与之相比，2mg参比产品分别为3097.7pg/ml、949.3pg
·
h/ml和1057.2pg
·
h/ml。对于c
max
、auc
0-t
和auc
0-∞
，几何最小二乘平均比例点估计值分别为112.77％、110.32％和108.31％。c
max
和auc
0-t
的几何ls平均值的治疗-b比治疗-d的比例的90％置信区间的上限正好高于125.00％生物等效性标准。因此，施用1.36mg的8mg/ml制剂与施用2mg的不是生物等效的。
[0280]
表4：替莫瑞林的统计学分析的总结(治疗-c对比治疗-d)
[0281][0282]
a c
max
的单位为pg/ml，auc
0-t
和auc
0-∞
的单位为pg
·
h/ml
[0283]
b auc
0-∞
的n＝15
[0284]
在1.6mg sc剂量的测试产品(治疗-c)之后，替莫瑞林被快速吸收，中值t
max
为0.15小时(范围＝0.10-0.25小时)，并且大体上与对2mg sc剂量的参比产品(治疗-d，中值[范围]＝0.20[0.15-0.25]小时)观察到的t
max
类似。对1.6mg测试产品观察到的c
max
、auc
0-t
和auc
0-∞
值分别为3918.1pg/ml、1126.6pg
·
h/ml和1260.1pg
·
h/ml；与之相比，2mg参比产品分别为3097.7pg/ml、949.3pg
·
h/ml和1057.2pg
·
h/ml。对于c
max
、auc
0-t
和auc
0-∞
，几何最小二乘平均比例点估计值分别为131.65％、125.05％和122.04％。c
max
和auc的几何ls平均值的治疗-c比治疗-d的比例的90％置信区间的上限高于125.00％生物等效性标准。因此，施用1.36mg的8mg/ml制剂与施用2mg的不是生物等效的。
[0285]
测试产品a、b和c的c
max
和auc
0-t
显示随剂量成比例地增加，对于剂量从1.2mg至1.6mg增加1.33倍，c
max
增加1.36倍，auc
0-t
增加1.39倍。
[0286]
总之，这些结果表明，施用高于1.2mg和低于1.36mg剂量的8mg/ml制剂将适于获得与施用2mg的生物等效。
[0287]
实施例2：用1.28mg的8mg/ml替莫瑞林制剂在人中进行的生物等效性研究
[0288]
本研究的主要目的是在健康受治疗者中施用单次皮下(sc)剂量后评价2种替莫瑞林制剂(1mg/小瓶和12.5mg/小瓶)的药物动力学(pk)。
[0289]
研究中的研究产品如下：
[0290]
·
测试：注射用替莫瑞林，无菌冻干粉末，12.5mg/小瓶(重混悬于包含10％羟丙基-β-环糊精(hp-β-cd)和3％甘露醇的溶液(ph 5.9-6)中后为8mg/ml)。
[0291]
·
参比：注射用替莫瑞林，无菌冻干粉末，1mg/小瓶(重混悬于包含5％甘露醇的溶液中后为1mg/ml溶液)。
[0292]
在单剂量、交叉和开放标签研究中，受治疗者通过腹部注射皮下接受1.28mg测试制剂和2mg参比制剂。因此，施用了以下产品：
[0293]
表5：研究制剂的描述
[0294][0295]
根据食品药品监督管理局(fda)和治疗产品理事会(tpd)的规定，使用不同的标准评估了相对生物利用度：
[0296]
fda：
[0297]
·
对于1n-转换的参数c
max
、auc
0-t
和auc
0-inf
，由测试产品和参比产品之间的指数差计算的具有相应90％置信区间的几何ls平均值的比例均落入80.00％至125.00％生物等效性范围内。
[0298]
tpd：
[0299]
·
对于ln-转换的参数c
max
，由测试产品和参比产品之间的指数差计算的几何ls平均值的比例落入80.0至125.0％生物等效性范围内。
[0300]
·
对于ln-转换的参数auc
0-t
，由测试产品和参比产品之间的指数差计算的具有相应90％置信区间的几何ls平均值的比例落入80.0至125.0％生物等效性范围内。
[0301]
在药物动力学和统计学分析中包括36名给药受治疗者中的33名。本文给出的药物动力学和统计学分析是基于qc’ed未经审核的浓度数据。使用实际时间进行药物动力学分析。
[0302]
纳入/排除标准、研究方案和数据分析与实施例1中报道的研究中相似。
[0303]
结果
[0304]
表6给出了替莫瑞林的c
max
和auc的统计学分析总结。
[0305]
表6：统计学结果
[0306][0307]
a c
max
的单位为pg/ml，auc
0-t
和auc
0-inf
的单位为pg
·
h/ml
[0308]
b auc
0-inf
的n＝32
[0309]c根据规定要求，小数位是不同的。(fda是2位小数，tpd是1位小数)
[0310]
统计学结果证实了1.28mg剂量(测试)和2mg剂量(参比)之间具有相似的吸收速率
和程度，因为所有的pk终点(c
max
、auc
0-t
和auc
0-inf
)都在80-125％的预定可接受范围内。
[0311]
tpd附加要求：没有发现异常值。而且，参比产品和测试产品批次的测定药物含量彼此相差不超过5％(标签声明的百分比)，因此对于比例和置信区间未使用效力校正的含量。
[0312]
8mg/ml制剂的1.28mg(0.16ml)替莫瑞林剂量被判断为与1mg/ml制剂的2mg(2ml)剂量是生物等效的，并且发现在受治疗者中是安全的和良好耐受的。
[0313]
尽管上文已经通过其具体实施方案描述了本公开内容，但是可以对其进行改变而不背离如所附权利要求书中限定的本公开内容的宗旨和性质。在权利要求书中，词语“包括”用作开放式术语，基本上等同于短语“包括但不限于”。除非上下文另有明确指示，否则单数形式“一个”、“一种”和“该”包括相应的复数指代。