抗炎性无岩藻糖基化免疫球蛋白制剂及其产生方法与流程

本发明涉及一种抗炎性无岩藻糖基化免疫球蛋白制剂及其产生方法。

背景技术：

1、ivig是用于自身免疫性疾病诸如川崎病(kawasaki disease)、特发性血小板减少性紫癜和吉兰-巴利综合征(guillain–barrésyndrome)的少数治疗选项之一。ivig是通过从数千名健康受试者的血浆中分离igg并将其纯化和浓缩来产生的。尽管据报道治疗作用是在igg-fc区(非专利文献1、2)，并且igg-fc的asn297结合聚糖是必要的(非专利文献2)，但抗炎作用机制尚不清楚。igg-fc的聚糖在表达igg(诸如fcγ受体)的效应子功能和补体激活方面至关重要，并且去除聚糖会极大地损害抗体依赖性细胞毒性(adcc)、补体依赖性细胞毒性等(非专利文献3)。igg-fc聚糖具有与由七种糖组成的核心结构结合的岩藻糖、半乳糖、唾液酸等，并且表现出高度异质性(图1)。据报道，这些与非还原端结合的单糖与各种生物活性相关(非专利文献4)。

2、岩藻糖去除被证明可增强adcc大约一百倍(非专利文献5、6)，并且无岩藻糖基化单克隆抗体(莫格利珠单抗(mogamulizumab)、奥妥珠单抗(obinutuzumab))已经进入成人t细胞白血病和cd20阳性滤泡性淋巴瘤的临床应用。为了开发替代需求将持续增长的ivig的新型抗体药物，鉴定对自身免疫性疾病表现出抗炎作用的ivig有效成分并阐明其作用机制也是必要的。

3、现有技术文献

4、非专利文献

5、非专利文献1：debre,m.等人,infusion of fc gamma fragments for treatmentof children with acute immune thrombocytopenic purpura.lancet,1993.342(8877):第945–9页。

6、非专利文献2：schwab,i.和f.nimmerjahn,intravenous immunoglobulintherapy:how does igg modulate the immune system？nat rev immunol,2013.13(3):第176–89页。

7、非专利文献3：mimura,y.等人,glycosylation engineering of therapeuticigg antibodies:challenges for the safety,functionality and efficacy.proteincell,2018.9(1):第47-62页。

8、非专利文献4：zhang,p.等人,challenges of glycosylation analysis andcontrol:an integrated approach to producing optimal and consistenttherapeutic drugs.drug discov today,2016.21(5):第740–65页。

9、非专利文献5：shinkawa,t.等人,the absence of fucose but not thepresence of galactose or bisecting n-acetylglucosamine of human igg1complex-type oligosaccharides shows the critical role of enhancing antibody-dependentcellular cytotoxicity.j biol chem,2003.278(5):第3466–73页。

10、非专利文献6：shields,r.l.等人,lack of fucose on human igg1n-linkedoligosaccharide improves binding to human fcgamma riii and antibody-dependentcellular toxicity.j biol chem,2002.277(30):第26733–40页。

技术实现思路

1、发明待解决的问题

2、本发明是鉴于这些问题完成的，并且目的在于提供一种用于抗炎疾病诸如自身免疫性疾病的新治疗药物。

3、解决问题的手段

4、在本发明的抗炎性无岩藻糖基化免疫球蛋白制剂中，所含的igg抗体由人血清igg抗体制成，其中以下所示的聚糖与fc区的天冬酰胺297(asn297)结合。此处，g是半乳糖，n是n-乙酰葡糖胺，并且m是甘露糖。

5、[化学式1]

6、

7、一种产生本发明的抗炎性无岩藻糖基化免疫球蛋白制剂的方法具有：聚糖去除步骤，其在人血清igg抗体上使用内切糖苷酶s(endo s)，以便在壳二糖核心处切割与fc区的天冬酰胺297(asn297)残基结合的聚糖并去除所述聚糖，不包括与所述asn297残基结合的n-乙酰葡糖胺和与所述n-乙酰葡糖胺结合的岩藻糖；岩藻糖去除步骤，其使用α-l-岩藻糖苷酶(alfc)以去除与n-乙酰葡糖胺结合的所述岩藻糖；以及转移步骤，其使用糖苷合成酶(endo sd233q)以将由半乳糖基糖肽(gg-ox)制备的噁唑啉化聚糖转移至与所述人血清igg抗体的fc区的天冬酰胺297(asn297)残基结合的所述n-乙酰葡糖胺上。

8、发明效果

9、本发明可提供一种用于炎性疾病诸如自身免疫性疾病的新治疗药物。

1.一种抗炎性无岩藻糖基化免疫球蛋白制剂，其中所含的igg抗体由人血清igg抗体制成，其中以下所示的聚糖与fc区的天冬酰胺297(asn297)结合(此处，g是半乳糖，n是n-乙酰葡糖胺，并且m是甘露糖)。

2.如权利要求1所述的抗炎性无岩藻糖基化免疫球蛋白制剂，其中所述制剂用于预防和/或治疗自身免疫性疾病。

3.如权利要求2所述的抗炎性无岩藻糖基化免疫球蛋白制剂，其中所述自身免疫性疾病是以下任一者：川崎病、特发性血小板减少性紫癜、吉兰-巴利综合征、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病、自身免疫性中性粒细胞减少症、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性获得性因子viii缺乏症、多发性硬化症、重症肌无力、僵人综合征、多灶性神经病、anca相关性血管炎、慢性类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、天疱疮、大疱性类天疱疮、白塞病、溃疡性结肠炎、克罗恩病、赖特综合征、多发性肌炎、皮肌炎、局限性硬皮病、系统性硬皮病、干燥综合征、抗肾小球基底膜病、原发性硬化性胆管炎、抗磷脂抗体综合征、中毒性表皮坏死松解症、移植物抗宿主病和脓毒症。

4.一种产生抗炎性无岩藻糖基化免疫球蛋白制剂的方法，所述方法包括：聚糖去除步骤，其在人血清igg抗体上使用内切糖苷酶s(endo s)，以便在壳二糖核心处切割与fc区的天冬酰胺297(asn297)残基结合的聚糖并去除所述聚糖，其不包括与所述asn297残基结合的n-乙酰葡糖胺和与所述n-乙酰葡糖胺结合的岩藻糖；

5.如权利要求4所述的产生抗炎性无岩藻糖基化免疫球蛋白制剂的方法，其中在所述岩藻糖去除步骤中，所述α-l-岩藻糖苷酶是1,6-α-l-岩藻糖苷酶。