骨架型紫珠缓释颗粒及其制法与应用

1.本发明涉及缓控释制剂技术领域，具体来说涉及骨架型的缓释颗粒及其制法与应用。


背景技术：

2.马鞭草科紫珠属植物约有190余种，主要分布于亚洲的热带、亚热带地区及大洋洲，我国约有46种，主要分布于长江以南，其中约30种可以药用，茎叶或全株入药，性平，味苦，归肝脾肺经，具有活血，止血，除热，解毒的作用。主要用于治疗吐血、咳血、便血、崩漏、创伤出血、痈疽肿毒、喉痹、风湿性关节炎、月经不调、烧伤等。紫珠属多种植物有着悠久的药用历史，历史上其主要作为止血药应用，民间习称止血草。近年来，紫珠属植物的开发利用取得了进一步的发展，除了作为止血药应用外，根据其抗菌消炎、保肝护肝等作用，临床上用于治疗宫颈炎、宫颈糜烂、各型病毒性肝炎等。此外，紫珠属植物作为主药的中成药制剂也应用于临床上，如紫地合剂、裸花紫珠片、宫复康胶囊等。
3.目前对紫珠化学成分的研究表明，紫珠中含黄酮类、缩合鞣质、萜类、挥发性成分，尚含中性树脂、糖类、羟基化合物及镁、钙、铁盐等。对紫珠药理作用的研究表明：紫珠具有止血、抑菌、抗脂质过氧化、镇痛、抗肿瘤等作用。
4.目前裸花紫珠末被批准为国家三类新兽药，用于畜禽抗炎、抗菌、促生长，但剂型单一，无开发其他剂型。其他紫珠类植物在畜禽上的应用均为空白。


技术实现要素：

5.鉴于上述情况，本发明提供一种骨架型紫珠缓释颗粒及其制法与应用，通过将紫珠提取物与高分子化合物通过一定的工艺，使其成骨架镶嵌状态，形成缓释颗粒，并在骨架逐渐溶蚀的过程中释放出有效成分，解决了植物提取物有效成分在胃酸中降解或在肠道无法释放的技术问题，以实现利用植物提取物防治细菌性疾病的目的。
6.为实现上述目的，本发明采取的技术方案是提供一种骨架型紫珠缓释颗粒，按所述颗粒的总重量百分比计算，所述颗粒包括：紫珠提取物，占5-40wt%；以及载体，占60-95wt%。
7.本发明另提供骨架型紫珠缓释颗粒的制法，按所述骨架型紫珠缓释颗粒的总重量百分比计算，包括5-40wt%的紫珠提取物以及60-95wt%的载体；其中，所述制备方法的步骤包括：紫珠提取物制备步骤s1：将所述植物剪切成约5cm的块段，加入8~24倍的去离子水，连续煎煮2次，每次煎煮1小时，合煎液，2000rpm离心10min，取上清，在85℃减压浓缩至相对密度1.3，获得紫珠提取物；以及，骨架型紫珠缓释颗粒制备步骤s2：将所述载体在40~80℃搅拌溶解，加入步骤s1获得的紫珠提取物，充分搅拌均匀，喷雾制粒，冷却后，过40目筛，制得骨架型紫珠缓释颗粒。
8.本发明骨架型紫珠缓释颗粒及其制法的进一步改进在于，所述紫珠提取物是由选自裸花紫珠、广东紫珠、大叶紫珠、杜虹花、枇杷叶紫珠、尖尾枫、红紫珠中的至少一种植物
经过提取工艺制成。
9.本发明骨架型紫珠缓释颗粒及其制法的进一步改进在于，所述载体选自聚乙二醇12000、聚乙二醇6000、聚乙二醇8000、聚乙二醇10000、聚乙二醇12000、聚乙烯醇、十八醇、硬脂酸、单硬脂酸甘油酯、尿素、糊精、羧甲基纤维素钠、壳聚糖、海藻酸钠中的一种或其组合。
10.本发明骨架型紫珠缓释颗粒的制法的进一步改进在于，所述紫珠提取物制备步骤s1中还包括在进行所述缓释颗粒成形步骤s2之前，对减压浓缩后获得的紫珠提取物进行薄层色谱鉴定。
11.本发明骨架型紫珠缓释颗粒的制法的进一步改进在于，所述紫珠提取物制备步骤s1中还包括在进行所述缓释颗粒成形步骤s2之前，对减压浓缩后获得的紫珠提取物进行有效成分含量测定，所述有效成分包括木犀草苷（c
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）和毛蕊花糖苷（c
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）。
12.本发明另提供骨架型紫珠缓释颗粒用于制备畜禽水产养殖饲料的用途，其中，所述畜禽水产养殖饲料用以防治畜禽水产养殖细菌性疾病。
13.本发明由于采用了以上技术方案，使其具有以下有益效果：（1）本发明的骨架型紫珠缓释颗粒及其制法与应用，是以基于具有溶蚀性的高分子化合物为载体建立的递送系统所制成的缓释颗粒，本发明制得的缓释颗粒可与饲料以任意比例混合，有效活性成分稳定，解决了中药提取物有效成分不稳定的缺点。
14.（2）本发明的骨架型紫珠缓释颗粒，是将中药提取物和高分子化合物载体进行有效配伍，形成镶嵌型的溶蚀性骨架，在生物体内可以实现稳定有效成分，缓慢释放等功能。此工艺操作简单，无溶剂提取方法安全有效，形成的产品能够在与饲料均匀混合或单独饲喂，骨架逐渐溶蚀而释放出有效成分，提高畜禽水产养殖效率。
15.（3）本发明的骨架型紫珠缓释颗粒，通过其中包含的植物有效成分被释放而具有抗菌抗炎功效，本发明的骨架型紫珠缓释颗粒使用方便、适用于大规模养殖给药的特点，是一种高效、安全、环保的用药方法。
16.（4）本发明的骨架型紫珠缓释颗粒，通过以高分子化合物溶蚀性骨架材料作为载体，使得缓释颗粒在进入动物体内后，具有缓慢释放的作用，能延长其中包含的植物有效成分在肠道内的滞留时间，提高其抗菌抗炎功效。
17.（5）本发明的骨架型紫珠缓释颗粒制备方法简单、稳定性好、易于储存，在畜禽水产养殖方面具有较好的应用推广前景。
18.本发明的这些和其它目的、特点和优势，通过下述的详细说明和权利要求得以充分体现，并可通过所附权利要求中特地指出的手段、装置和它们的组合得以实现。
附图说明
19.图1是紫外光下的薄层色谱图（1：对照品；2：实施例1样品；3：实施例2样品；4：实施例3样品）。
20.图2是紫外光下的薄层色谱图（1：对照品；2：实施例1样品；3：实施例2样品；4：实施例3样品；5：对照品）。
21.图3是本发明制得紫珠缓释颗粒样品中毛蕊花糖苷和木樨草甘含量测定的高效液相色谱图。
具体实施方式
22.为利于对本发明的了解，以下结合实施例进行说明。
23.本发明提供一种骨架型紫珠缓释颗粒，按所述颗粒的总重量百分比计算，5-40wt%的紫珠提取物以及60-95wt%的载体。
24.于本发明实施例中，所述紫珠提取物为裸花紫珠、广东紫珠、大叶紫珠、杜虹花、枇杷叶紫珠、尖尾枫、红紫珠中的至少一种植物经过一定的工艺提取而成的。
25.于本发明实施例中，所述骨架型紫珠缓释颗粒所添加的载体为溶蚀性骨架材料，且所述载体较佳选自聚乙二醇12000、聚乙二醇6000、聚乙二醇8000、聚乙二醇10000、聚乙二醇12000、聚乙烯醇、十八醇、硬脂酸、单硬脂酸甘油酯、尿素、糊精、羧甲基纤维素钠、壳聚糖、海藻酸钠或其组合。
26.本发明骨架型紫珠缓释颗粒主要应用于制备畜禽水产养殖饲料，所述畜禽水产养殖饲料用于防治畜禽水产养殖细菌性疾病。具体地，所述畜禽水产养殖饲料通过添加本发明骨架型紫珠缓释颗粒，使缓释颗粒进入动物胃部后，在骨架（载体）逐渐溶蚀的过程中释放出有效成分，实现利用植物提取物防治细菌性疾病的目的。
27.以上说明本发明骨架型紫珠缓释颗粒的组成配比及其应用方法，以下说明本发明骨架型紫珠缓释颗粒制备方法及其实施例1至实施例4。
28.本发明骨架型紫珠缓释颗粒制备方法的步骤包括：紫珠提取物制备步骤s1：将所述植物剪切成约5cm的块段，加入8~24倍的去离子水，连续煎煮2次，每次煎煮1小时，合煎液，2000rpm离心10min，取上清，在85℃减压浓缩至相对密度1.3，获得紫珠提取物；骨架型紫珠缓释颗粒制备步骤s2：将所述载体在40~80℃搅拌溶解，加入步骤s2获得的紫珠提取物，充分搅拌均匀，喷雾制粒，冷却后，过40目筛，即得骨架型紫珠缓释颗粒。
29.于本发明的制法实施例中，所述紫珠提取物为裸花紫珠、广东紫珠、大叶紫珠、杜虹花、枇杷叶紫珠、尖尾枫、红紫珠中的至少一种植物经过一定的工艺提取而成的。
30.于本发明的制法实施例中，所述载体较佳选自聚乙二醇20000、聚乙二醇6000、聚乙二醇8000、聚乙二醇10000、聚乙二醇12000、聚乙烯醇、十八醇、硬脂酸、单硬脂酸甘油酯、尿素、糊精、羧甲基纤维素钠、壳聚糖、海藻酸钠或其组合；所述载体更佳选自聚乙二醇12000、单硬脂酸甘油酯、聚乙二醇8000中的至少一种。
31.于本发明的制法实施例中，所述制备步骤s1制得的提取物在进行所述缓释颗粒成形步骤s2之前，需将所述提取物进行薄层色谱鉴定和有效成分含量测定。
32.由于毛蕊花糖苷（c
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）具有抗炎、抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化、镇痛、神经保护、改善性功能、免疫调节和改善细胞记忆等多方面的生物活性；木犀草苷（c
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）有較強的呼吸道殺菌作用，且具有降低膽固醇在動脈粥樣硬化中的作用，以及增強毛細血管的舒張作用。是以，本发明在紫珠提取物制备步骤s1进行薄层色谱鉴定，以对产品中裸花紫珠有效成分进行鉴别，并进行有效成分含量测定以通过色谱条件与系统适用性试验，对紫珠提取物测量其中的木犀草苷（c
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）及毛蕊花糖苷（c
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）含量。
33.具体地，所述薄层色谱鉴定方法步骤包括：取本品 1g，加水 150ml，煎煮，保持微沸 1h，放冷，滤过。滤液加氯化钠 5g，振摇使溶解，溶液加乙酸乙酯 40ml 振摇提取。取乙酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇 1ml使溶解，作为供试品溶液。另取裸花紫珠对照药材 1g，同法
制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸收上述两种溶液各 10～20μl，分别点于同一用 0.5%氢氧化钠溶液制备的薄层层析硅胶板（规格为硅胶g）上。以乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液（17:2:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 3%三氯化铝乙醇溶液，在 105℃加热 5 分钟，在紫外光（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
34.具体地，有效成分含量测定的步骤包括：以十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂；乙腈-0.1%醋酸水（20:80）为流动相；毛蕊花糖苷检测波长为 330nm，木犀草苷检测波长为 350nm；柱温为 35℃。理论板数不低于 5000。
35.对照品溶液的制备步骤包括：精密称取木犀草苷对照品、毛蕊花糖苷对照品适量，加70%甲醇制成每 1ml各含木犀草苷 20μg，毛蕊花糖苷 40μg 的混合对照品溶液，即得。
36.供试品溶液的制备步骤包括：取本品约 1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 70%甲醇 50ml，称定重量，超声处理（功率 500w，频率 40khz）40 分钟，放冷，再称定重量，用 70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
37.有效成分测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
38.本品按干燥品计算，含木犀草苷（c
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）不得少于 0.050%；含毛蕊花糖苷（c
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）不得少于0.70%。
39.以下说明基于本发明骨架型紫珠缓释颗粒制备方法制备的骨架型紫珠缓释颗粒实施例1至3，以及实施例1至3制成产品的效果对比试验。
40.实施例1实施例1提供的骨架型紫珠缓释颗粒，按所述颗粒的总重量百分比计算，裸花紫珠提取物，占10wt%；聚乙二醇12000，占90wt%。
41.操作步骤：（1）将裸花紫珠药材剪切成约5cm大小块段，加入12倍水，煎煮2次，每次煎煮1h，合并煎液，2000rpm离心10min，在85℃减压浓缩至相对密度1.3，得裸花紫珠提取物浸膏，进行薄层色谱鉴定和木犀草甘和毛蕊花糖苷含量测定，备用。其中，本品按干燥品计算，含木犀草苷（c
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）0.085%；含毛蕊花糖苷（c
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）不得少于1.27%）（2）将聚乙二醇12000在40℃搅拌溶解，加入裸花紫珠提取物浸膏，充分搅拌均匀，喷雾造粒，冷却过40目筛，即得。制备的产品为骨架型裸花紫珠缓释颗粒。
42.实施例2实施例2提供的骨架型紫珠缓释颗粒，按所述颗粒的总重量百分比计算，枇杷叶紫珠提取物，占20wt%；硬脂酸，占80wt%。
43.操作步骤：（1）将枇杷叶紫珠药材剪切成约5cm大小块段，加入20倍水，煎煮2次，每次煎煮1h，合并煎液，2000rpm离心10min，在85℃减压浓缩至相对密度1.3，得枇杷叶紫珠提取物浸膏，进行薄层色谱鉴定和木犀草甘和毛蕊花糖苷含量测定，备用。其中，本品按干燥品计算，含木犀草苷（c
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）0.083%；含毛蕊花糖苷（c
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）不得少于1.14%（2）将硬脂酸在40℃搅拌溶解，加入枇杷叶紫珠提取物浸膏，充分搅拌均匀，喷雾造粒，冷却过40目筛，即得。制备的产品为骨架型枇杷叶紫珠缓释颗粒。
44.实施例3实施例3提供的骨架型紫珠缓释颗粒，按所述颗粒的总重量百分比计算，广东紫珠提取物，占20wt%；单硬脂酸甘油酯，占80wt%。
45.操作步骤：（1）将广东紫珠药材剪切成约5cm大小块段，加入24倍水，煎煮2次，每次煎煮1h，合并煎液，2000rpm离心10min，在85℃减压浓缩至相对密度1.3，得广东紫珠提取物浸膏，进行薄层色谱鉴定和木犀草甘和毛蕊花糖苷含量测定，备用。其中，本品按干燥品计算，含木犀草苷（c
21h20o11
）0.092%；含毛蕊花糖苷（c
29h36o15
）不得少于1.32%。
46.（2）将单硬脂酸甘油酯在80℃搅拌溶解，加入广东紫珠提取物浸膏，充分搅拌均匀，喷雾造粒，冷却过40目筛，即得。制备的产品为骨架型广东紫珠缓释颗粒。
47.实施例4：产品效果对比试验1、供试动物：南美白对虾 1000 尾，体重 1.92 g
±
0.80 g，体长 5.14 cm
ꢀ±
0.29 cm，购自水产市场。临床表现健康，采食正常，虾线正常，在封闭恒温动物饲养实验室内容积为20kg透明玻璃缸内进行饲养，水温 28 ℃
±
1 ℃，ph=8，24 h充氧，养殖用水为海水配制，盐度为 25.0
ꢀ‰
，每天换水一次，换水量 1/4。
48.2、供试菌株：虾源大肠杆菌，本实验室分离鉴定、保存。
49.3、试验分组：随机分成5组，每组200尾，连续给药7天，观察至28天。
50.第1组：空白对照组，饲料和饮水中不添加任何药物。
51.第2组：阳性对照组，在养殖水体中加入大肠杆菌106cfu/m3，饲料和饮水中不添加任何药物。
52.第3组：试验组，在养殖水体中加入大肠杆菌106cfu/m3，在饮水中添加实施例1样品，按照0.5g/l水添加，饲料中不添加任何药物，连用7天。
53.第4组：试验组，在养殖水体中加入大肠杆菌106cfu/m3，在饮水中添加实施例2样品，按照0.5g/l水添加，饲料中不添加任何药物，连用7天。
54.第5组：试验组，在养殖水体中加入大肠杆菌106cfu/m3，在饮水中添加实施例3样品，按照0.5g/l水添加，饲料中不添加任何药物，连用7天。
55.4、评价指标：临床症状、生长分析、成活率、脏器指数。
56.5、结果如表1可见，在试验期间，试验组（第3、4、5组）和空白对照组（第1组）虾只未见与产品相关的不良反应，未见死亡，采食正常，生长正常。阳性对照组（第2组），虾只陆续出现死亡，采食量下降，生长速度下降。
57.实验可知，添加本发明骨架型紫珠缓释颗粒的试验组（第3、4、5组）的虾只体长和体重均优于空白对照组（第1组）和阳性对照组（第2组），表现出较好的增重效果；且试验组（第3、4、5组）的水体总菌落数显著低于阳性对照组（第2组）和空白对照组（第1组）。
58.表1：第14、28天南美白对虾体指数变化（n=15）
图1显示了本发明裸花紫珠颗粒在紫外光下的薄层色谱图，其中，1表示对照品；2表示实施例1样品；3表示实施例2样品；4表示实施例3样品。
59.图2显示了本发明裸花紫珠颗粒在紫外光下的薄层色谱图，其中，1表示对照品；2表示实施例1样品；3表示实施例2样品；4表示实施例3样品；5表示对照品。
60.图3是本发明制得紫珠缓释颗粒样品中毛蕊花糖苷和木樨草甘含量测定的高效液相色谱图。其中，rt9.836峰为毛蕊花糖苷，rt11.781峰为木樨草苷。
61.借此，本发明通过将紫珠提取物与骨架型颗粒载体结合成骨架镶嵌状态，形成缓释颗粒，从而使制得的缓释颗粒在一定温度下骨架逐渐溶蚀的过程中释放出植物提取物有效活性成分，达到提供植物有效活性成分良好的保护并在适当环境时间下释放，实现利用植物提取物防治细菌性疾病的目的。
62.以上内容是结合具体地优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。