GnRH8-DTT重组去势疫苗及其制备方法和应用

本发明涉及分子疫苗学，具体为gnrh8-dtt重组去势疫苗及其制备方法和应用。

背景技术：

1、传统去势术较为常用的方式为手术阉割法，这种方法对场地、环境、操作等均有较高的要求，与此同时手术会产生副作用，如感染率高导致一定的死亡，且对家畜年出栏量巨大的中国而言带来一定的困难，另外手术成本较高，也不利于动物福利，这种沿袭千年的手术阉割正受到规模化、标准化畜牧生产需求的挑战，研究表明，免疫去势术具有方便高效、可逆、安全等优点，因此，免疫去势技术最有望成为传统去势术的替代者。

2、gnrh由下丘脑分泌，是hpga上的上游激素，调控了fsh和lh的分泌，进而控制精子的发生和性行为的产生。但是由于gnrh抗原相对分子质量较小，是一种不完全抗原，其免疫原性较差，刺激机体产生相应的抗体的能力较差，免疫效果并不理想的原因，不仅如此，采用gnrh单体进行免疫，往往一共需要免疫三四次，在实际应用中很难满足这种条件。而且，gnrh单体，其生产表达量低，制备困难，免疫效果不好，生产成本高，不利于产业化应用。

技术实现思路

1、本发明的目的在于：提供一种gnrh8-dtt重组去势疫苗及其制备方法和应用，以解决以上缺陷。

2、为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

3、一种gnrh8-dtt重组去势疫苗，所述gnrh8-dtt重组去势疫苗的氨基酸序列，含有如序列表seq_1所示的哺乳类gnrh及其变体的序列。

4、优选地，所述gnrh8-dtt重组去势疫苗的氨基酸序列，还含有如序列表seq_2所示的白喉毒素跨膜区域氨基酸序列。

5、优选地，所述gnrh8-dtt重组去势疫苗的氨基酸序列，如序列表seq_3所示。

6、优选地，所述gnrh8-dtt重组去势疫苗，是由含有如序列表seq_4所示的工程菌bl21(de3)-pet28a-gnrh8-dtt表达出的重组蛋白。

7、优选地，一种gnrh8-dtt重组去势疫苗的制备方法，包括如下步骤：

8、s1.根据如序列表seq_1所示的哺乳类gnrh及其7个变体的序列和如序列表seq_2所示的白喉毒素跨膜区域氨基酸序列，设计出包含选定的gnrh8-dtt序列；

9、s2.采用密码子优化系统设计合成带nde i和xho i酶切位点的如序列表seq_4所示dna序列，经nde i和xho i双酶切后dna产物与同样双酶切的载体pet28a连接；

10、s3.随后将连接液转入大肠杆菌dh5α，筛选得到质粒pet28a-gnrh8-dtt，通过将质粒gnrh8-dtt转入大肠杆菌bl21(de3)菌株，得到工程菌bl21(de3)-pet28a-gnrh8-dtt，最终表达出含序列表seq_3所示的氨基酸序列的重组蛋白。

11、优选地，所述gnrh8-dtt重组去势疫苗应用于哺乳动物生育能力控制。

12、本发明的有益效果在于：

13、本发明中，采取gnrh8和dtt蛋白重组的方式，生产的gnrh8-dtt重组去势疫苗，提高了抗原免疫原性，提高了抗原的免疫效果，避免了多肽不稳定的缺陷；同时本发明使用的是重组gnrh8-dtt蛋白，减少了多肽合成制剂成本，使用更加便利。而且本发明采用gnrh8和dtt重组蛋白表达方式，作为制备动物去势疫苗的一种方法，其表达量高，免疫原性好、疫苗制剂简单，能够有效的提高其免疫效果，使去势技术更优化，有利于产业化应用。

技术特征：

1.一种gnrh8-dtt重组去势疫苗，其特征在于，所述gnrh8-dtt重组去势疫苗的氨基酸序列，含有如序列表seq_1所示的哺乳类gnrh及其变体的序列。

2.根据权利要求1所述的gnrh8-dtt重组去势疫苗，其特征在于，所述gnrh8-dtt重组去势疫苗的氨基酸序列，还含有如序列表seq_2所示的白喉毒素跨膜区域氨基酸序列。

3.根据权利要求1所述的gnrh8-dtt重组去势疫苗，其特征在于，所述gnrh8-dtt重组去势疫苗的氨基酸序列，如序列表seq_3所示。

4.根据权利要求3所述的gnrh8-dtt重组去势疫苗，其特征在于，所述gnrh8-dtt重组去势疫苗，是由含有如序列表seq_4所示的工程菌bl21(de3)-pet28a-gnrh8-dtt表达出的重组蛋白。

5.一种如权利要求1-4所述的gnrh8-dtt重组去势疫苗的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

6.一种如权利要求1-4所述的gnrh8-dtt重组去势疫苗的应用，其特征在于，所述gnrh8-dtt重组去势疫苗应用于哺乳动物生育能力控制。

技术总结
本发明属于分子疫苗学技术领域，公开了一种GnRH8‑DTT重组去势疫苗，其含有如序列表Seq_1所示的哺乳类及其7个变体的GnRH序列以及如序列表Seq_2所示的白喉毒素跨膜区域氨基酸序列；其氨基酸序列如序列表Seq_3所示。同时，公开了一种GnRH8‑DTT重组去势疫苗的制备方法和应用。本发明中采取GnRH和DTT蛋白重组的方式，生产的GnRH8‑DTT重组去势疫苗，抗原免疫原性高，免疫效果好，稳定性高；同时减少了多肽合成制剂成本，使用更加便利；采用GnRH和DTT重组蛋白表达方式，表达量高，免疫原性好，疫苗制剂简单，有利于产业化应用。

技术研发人员：潘富强,傅婉臻,刘亚,钱伟,丁建平,邑晴,顾利侠,王帅,李伪娜,蒋佳楠,韩梦迪,张颖,方富贵,张运海,李运生
受保护的技术使用者：安徽农业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/14