冠脉微循环障碍疾病的在体可视化动物模型的造模方法

本发明涉及动物模型构建，是一种冠脉微循环障碍疾病的在体可视化动物模型的造模方法。

背景技术：

1、冠状动脉微循环功能障碍（coronary microcirculatory dysfunction, cmcd）是由于冠脉微循环结构或功能异常，导致冠状动脉血流量及心肌灌注量减少，继而引发心肌缺血乃至心衰等一系列心血管事件，它的出现与诸多不良的心血管预后密切相关。实现对cmcd的早期精确诊断并有效量化其病理损伤程度对于指导患者的早期干预治疗及预后判断均具有极其重要的意义。冠脉微血管内皮细胞损伤、炎性物质聚集及微血栓形成贯穿了cmcd病理发展的基本过程，深入挖掘涉及这三个关键时期的分子标志物并分析其功能特征具有重大的临床应用价值。故理想的动物模型需具有创伤小、操作简单，能模拟人的冠状动脉微循环功能障碍疾病的病理发展过程。

2、在冠脉微循环障碍疾病的基础研究和临床前期研究中，冠脉微循环障碍的动物模型是实验成功的重要一环。在既往的研究中，因模型造成的复杂的并发症、创伤大、致死率高、操作人员受高辐射等原因对科研工作者造成困扰。

3、根据文献报道，构建冠脉微循环障碍动物模型方法可分为三种：（1）胸部正中开胸分离升主动脉，并使用动脉止血夹阻断升主动脉血流后心腔内注射月桂酸钠；（2）开胸夹闭升主动脉，超声监测心腔内注射月桂酸钠；（3）血管造影系统dsa监测下冠脉内注射月桂酸钠。

4、目前，这三种构建冠脉微循环障碍动物模型方法分别存在一些缺陷，具体介绍如下：

5、（1）通过胸部正中开胸分离升主动脉，动脉止血夹阻断升主动脉血流后心腔内注射月桂酸钠制备大鼠动物模型的造模方法，病理组织染色证实月桂酸钠致冠脉微循环模型建立成功，血管纤维化及微血栓形成等病理改变。但此造模方法的缺点首先是有创伤，易导致胸膜破裂，从而因肺不张造成实验失败；其次是创伤大，易导致胸膜粘连、感染等风险，影响实验炎症因子测定及影像学检查结果；第三，心腔内注射药物，可能注射至乳头肌和腱索等组织，影响药物扩散，并损伤心肌组织，导致心肌结构和功能的非正常改变。

6、（2）胸部正中开胸分离升主动脉，动脉止血夹阻断升主动脉血流后，超声监测下心腔内注射月桂酸钠制备大鼠动物模型的造模方法，大体标本和病理组织学染色证实冠脉微循环障碍模型制备成功。此方法对以上第一种造模方法进行了改良，超声监测下心腔内药物注射，可明确针头位置，可视化药物注射情况。避免注射至乳头肌和腱索等组织。但此方法仍需要开胸阻断升主动脉血流，创伤大。

7、（3）血管造影系统dsa监测下冠脉内注射栓塞微球制备动物模型的造模方法，该方法通过栓塞微球可注射左和（或）右冠脉系统内阻塞冠脉小动脉和前小动脉，造成内皮细胞损伤和炎性反应，建立冠脉微循环障碍模型。但是此方法技术要求高，须有经验冠脉造影的医生，且需要血管造影系统dsa，具有高辐射且价格昂贵，难以推广。

技术实现思路

1、本发明提供了一种冠脉微循环障碍疾病的在体可视化动物模型的造模方法，克服了上述现有技术之不足，该方法创伤小，操作简单，动物成活率高，造模成功率高，易于推广应用。

2、本发明的技术方案是通过以下措施来实现的：一种冠脉微循环障碍疾病的在体可视化动物模型的造模方法，按下述步骤进行：

3、s1，麻醉并保定动物，对颈部及前胸部备皮，并连接心电图；

4、s2，经颈部正中切开皮肤，探查并游离右侧颈总动脉，结扎颈总动脉远心端，用止血夹夹闭颈总动脉近心端，眼科剪向心斜行45°剪一破口；

5、s3，使用球囊导管经动物右侧颈总动脉破口进入血管，使用超声诊断仪探头实时监测球囊导管头端位置，当球囊导管头端到达左、右冠状动脉窦水平时，向球囊导管注水，同时，使用超声诊断仪探头实时监测升主动脉血流信号，当升主动脉血流信号中断时，用棉线结扎固定颈总动脉和球囊导管；

6、s4，使用超声诊断仪探头获取标准心尖四腔心切面图像，沿声束方向缓慢进针，经皮肤、肌肉、心肌逐层进入心腔；

7、s5，使用球囊导管注水阻断升主动脉血流，同时，心腔内快速注射月桂酸钠溶液；

8、s6，退出球囊导管，并逐层缝合手术切口，得到冠脉微循环障碍疾病的在体可视化动物模型。

9、下面是对上述发明技术方案的进一步优化或/和改进：

10、上述步骤s3中，球囊导管使用前涂抹石蜡。

11、上述步骤s3中，当球囊导管头端距主动脉瓣0.20cm至0.25cm时，向球囊导管注水。

12、上述步骤s5中，使用球囊导管注水阻断升主动脉血流20s至25s。

13、上述步骤s5中，心腔内快速注射月桂酸钠溶液0.2ml至0.3ml，月桂酸钠溶液的浓度为35mg/ml至50mg/ml，剂量为2.5mg/kg至3.0mg/kg。

14、上述步骤s1中，麻醉为浓度比为1:1舒泰与盐酸塞拉嗪的混合液肌肉注射，剂量为0.10ml/kg至0.15ml/kg。

15、上述球囊导管的型号为6fr、7fr、8fr、9fr和10fr中的一种，直径为2mm，长度为25cm至35cm，球囊容量为2ml至4ml。

16、上述步骤s4中，进针时，穿刺针头型号为28g或30g。

17、上述动物为兔、大鼠、狗和猪中的一种。

18、本发明提供了一种超声引导下非阻塞性的冠脉微循环障碍疾病的在体可视化动物模型的造模方法，该方法以超声引导下球囊导管阻塞升主动脉血流，并在超声引导下经心尖路径注射月桂酸钠药物，在阻塞升主动脉血流的同时注射药物制备冠脉微循环功能障碍疾病的动物模型。该方法具有超声实时、可视化的优势，并结合月桂酸钠致内皮细胞损伤的发病机制制备动物模型，整个方法创伤小，操作简单，动物成活率高，造模成功率高，易于推广应用，可解决目前开胸制备冠脉微循环功能障碍疾病模型的不足，为进一步规范分子影像学诊断、发病机制、治疗等研究奠定坚实的基础。

技术特征：

1.一种冠脉微循环障碍疾病的在体可视化动物模型的造模方法，其特征在于按下述步骤进行：

2.根据权利要求1所述的冠脉微循环障碍疾病的在体可视化动物模型的造模方法，其特征在于步骤s3中，球囊导管使用前涂抹石蜡。

3.根据权利要求1或2所述的冠脉微循环障碍疾病的在体可视化动物模型的造模方法，其特征在于步骤s3中，当球囊导管头端距主动脉瓣0.20cm至0.25cm时，向球囊导管注水。

4.根据权利要求1或2或3所述的冠脉微循环障碍疾病的在体可视化动物模型的造模方法，其特征在于步骤s5中，使用球囊导管注水阻断升主动脉血流20s至25s。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的冠脉微循环障碍疾病的在体可视化动物模型的造模方法，其特征在于步骤s5中，心腔内快速注射月桂酸钠溶液0.2ml至0.3ml，月桂酸钠溶液的浓度为35mg/ml至50mg/ml，剂量为2.5mg/kg至3.0mg/kg。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的冠脉微循环障碍疾病的在体可视化动物模型的造模方法，其特征在于步骤s1中，麻醉为浓度比为1:1舒泰与盐酸塞拉嗪的混合液肌肉注射，剂量为0.10ml/kg至0.15ml/kg。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的冠脉微循环障碍疾病的在体可视化动物模型的造模方法，其特征在于球囊导管的型号为6fr、7fr、8fr、9fr和10fr中的一种，直径为2mm，长度为25cm至35cm，球囊容量为2ml至4ml。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的冠脉微循环障碍疾病的在体可视化动物模型的造模方法，其特征在于步骤s4中，进针时，穿刺针头型号为28g或30g。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的冠脉微循环障碍疾病的在体可视化动物模型的造模方法，其特征在于动物为兔、大鼠、狗和猪中的一种。

技术总结
本发明涉及动物模型构建技术领域，是一种冠脉微循环障碍疾病的在体可视化动物模型的造模方法，该方法以超声引导下球囊导管阻塞升主动脉血流，并在超声引导下经心尖路径注射月桂酸钠药物，在阻塞升主动脉血流的同时注射药物制备冠脉微循环功能障碍疾病的动物模型。本发明具有超声实时、可视化的优势，并结合月桂酸钠致内皮细胞损伤的发病机制制备动物模型，整个方法创伤小，操作简单，动物成活率高，造模成功率高，易于推广应用。

技术研发人员：穆玉明,王国栋,赵嘉欣
受保护的技术使用者：新疆医科大学第一附属医院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12