一种雷公藤红素纳米凝胶制备方法和应用

本发明属于中药制剂领域，具体的说是将中药雷公藤的三萜类单体成分雷公藤红素制备成纳米凝胶，所述纳米凝胶的制备方法和所述纳米凝胶在制备治疗阿尔茨海默病药物中的应用。

背景技术：

1、雷公藤红素(celastrol，cel)是从雷公藤根中提取的第一种三萜类单体，是最具代表性和价值的药理成分之一(med res rev.2021；41(2):1022-1060)。现代药理研究表明，cel具有抗炎、抗氧化、免疫抑制、抗肿瘤等药理作用，对神经退行性疾病、ii型糖尿病、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、慢性肾炎等炎症和免疫疾病具有治疗作用(pharmacolres.2021；167:105572)。nakamichi等人证明，在双链rna刺激的小胶质细胞mg6细胞中，cel抑制促炎细胞因子和趋化因子的表达，以及激活的小胶质的形态学和转录反应(int jneurosci.2010；120(4):252-257)。paris等人发现，cel在tg ps1/appsw模型中降低了aβ斑块负荷并抑制了小胶质细胞的活化(j neuroinflammation.2010；7:17)。liao等人建立了链脲佐菌素诱导的sd大鼠模型，作为具有阿尔茨海默病样生理变化的短期急性模型。研究结果表明，cel可增加大鼠的认知和igf-1的表达，并抑制gfap的表达(arch med sci.2018；14(2):370-380)。总之，cel可能是通过抑制神经炎症来治疗ad的潜在候选药物。

2、然而，由于cel的水溶性和体内毒性差，限制了其应用，为了解决这一技术问题，现有技术中开发了各种载体，如聚合物纳米颗粒(nat commun.2021；12(1):2174；acsnano.2018；12(8):7812-7825)、脂质体(j control release.2020；320:32-44；molpharm.2021；18(3):1373-1385)纳米胶束(chinese chemical letters.2021；32(3):1046-1050；drug deliv.2022；29(1):454-465)、纳米(eur jpharm biopharm.2015；96:11-21；jcontrol release.2022；347:44-54；int j pharm.2022；619:121709)、纳米笼(jnanobiotechnology.2021；19(1):156)等聚合物水凝胶已广泛用于药物递送，因为它们有助于局部给药，并且可以通过控制温度来调节药物释放(j colloid interface sci.2023；630(pt b):328-340)。泊洛沙姆是一种由疏水链聚环氧丙烷(ppo)和亲水链聚环氧乙烷(peo)组成的两亲三嵌段共聚物，通过亲水和疏水链的相互作用，泊洛沙姆呈现出可逆的溶胶-凝胶转变。泊洛沙姆407是目前用于制备热敏鼻凝胶的最广泛的基质材料，具有低毒性、低刺激性和良好的生物相容性(journal of molecular liquids.2022；362,119717)。与单独使用p407相比，与p188组合制备的凝胶可以调节凝胶化温度和时间，这可以改善封装效率并减少溶解的发生(int j pharm.2020；577:119046)。

3、然而现有技术中雷公藤红素纳米胶束的制备过程中因人或操作方式不同常常会带来一定的误差，此外，在采用鼻腔给药方式将雷公藤红素用于治疗阿尔兹海默时存在药物在鼻腔内停留时间短的问题，从而导致进入有效部位的药量有限，极大地限制了其应用。

技术实现思路

1、本发明的一个目的是提供雷公藤红素纳米凝胶制备方法。

2、本发明采用的技术方案为：提供雷公藤红素纳米凝胶的制备方法，包括如下步骤：一种雷公藤红素纳米凝胶的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

3、步骤一，纳米胶束的制备，将雷公藤红素和两亲性聚合物溶解在无水甲醇中作为有机相；用有机膜和水膜分别过滤1×pbs作为水相，有机相和水相以一定的流速流过微流体仪器以获得纳米悬浮液cel-nps；

4、步骤二，纳米凝胶的制备，制备温敏型水凝胶基质，然后将所述基质滴加到步骤一所得纳米悬浮液cel-nps中，搅拌，储存以完全溶解，形成透明的原位凝胶。

5、优选的，步骤一中所述两亲性聚合物为pcl-peg；所述pcl-peg的分子量为3400。

6、优选的，步骤一中雷公藤红素和pcl-peg的重量份数比为1:1-20。

7、优选的，所述有机相无水甲醇为1-10ml，水相pbs为10-100ml。

8、优选的，所述有机相和水相以1:10-1:100的流速流过微流体仪器；其中所述有机相的流速为1-20ul/min。

9、优选的，步骤二中所述温敏型水凝胶基质为泊洛沙姆407和泊洛沙姆188混合物、壳聚糖和n-异丙基丙烯酰胺共聚物中的任意一种。

10、优选的，所述温敏型水凝胶基质为泊洛沙姆407和泊洛沙姆188混合物，所述泊洛沙姆407和泊洛沙姆188混合物中泊洛沙姆407浓度为10-40％，泊洛沙姆188的浓度为0-10％。

11、优选的，步骤二中将泊洛沙姆407和泊洛沙姆188的混合物缓慢加入到50-90％的cel-nps中。

12、本发明的另一个目的是提供上述方法制备得到的雷公藤红素纳米凝胶。

13、本发明还有一个目的是提供所述雷公藤红素纳米凝胶在制备治疗阿尔茨海默药物中的应用。

14、本发明的有益效果是：

15、本发明首先通过微流体装置合成了pcl-peg 3400负载cel的纳米颗粒，然后以p407和p188为基质材料，获得了负载cel纳米颗粒的原位凝胶。通过tem、zetasizer nanozs和hplc对得到的cel-ng进行了表征。通过建立lps诱导和app/ps1的小鼠模型，研究cel-ng在不同模型下的体内毒性作用和对ad的改善作用。采用morris水迷宫和筑巢试验等行为测试评估学习、记忆和筑巢能力。免疫组化分析小胶质细胞和星形胶质细胞的活化抑制。q-pcr检测炎性细胞因子如il-1β、tnf-α、inos的mrna表达。tunel法检测了ad小鼠海马ca1区的细胞凋亡，相关结果表明：

16、相对于现有雷公藤红素制剂技术，本发明采用微流控技术合成纳米胶束，该技术的使用可以稳定的大批量生产纳米制剂，克服了制剂制备过程中因人或操作方式不同带来的误差。本发明进一步将纳米胶束制备成纳米凝胶，将本发明所制备的雷公藤红素纳米凝胶应用于制备治疗阿尔兹海默药物中，能够增加药物在鼻腔的停留时间，使得更多的药物进入脑部有效部位，减少对其他部位的毒副作用，对脑部疾病的治疗具有重大现实意义。

技术特征：

1.一种雷公藤红素纳米凝胶的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种雷公藤红素纳米凝胶的制备方法，其特征在于步骤一中所述两亲性聚合物为pcl-peg；所述pcl-peg的分子量为3400。

3.根据权利要求2所述的一种雷公藤红素纳米凝胶的制备方法，所述步骤一中雷公藤红素和pcl-peg的重量份数比为1:1-20。

4.根据权利要求1所述的一种雷公藤红素纳米凝胶的制备方法，其特征在于：所述有机相中无水甲醇为1-10ml，水相pbs为10-100ml。

5.根据权利要求1所述的一种雷公藤红素纳米凝胶的制备方法，其特征在于：所述有机相和水相以1:10-1:100的流速流过微流体仪器；其中有机相的流速为1-20ul/min。

6.根据权利要求1所述的一种雷公藤红素纳米凝胶的制备方法，其特征在于步骤二中所述温敏型水凝胶基质为泊洛沙姆407和泊洛沙姆188混合物、壳聚糖和n-异丙基丙烯酰胺共聚物中的任意一种。

7.根据权利要求6所述的一种雷公藤红素纳米凝胶的制备方法，其特征在于：所述温敏型水凝胶基质为泊洛沙姆407和泊洛沙姆188混合物，所述泊洛沙姆407和泊洛沙姆188混合物中泊洛沙姆407浓度为10-40％，泊洛沙姆188的浓度为0-10％。

8.根据权利要求7所述的一种雷公藤红素纳米凝胶的制备方法，其特征在于，步骤二中将泊洛沙姆407和泊洛沙姆188的混合物缓慢加入到50-90％的cel-nps中。

9.一种根据权利要求1-8任意一项权利要求所述方法制备得到的雷公藤红素纳米凝胶。

10.一种权利要求9所述的雷公藤红素纳米凝胶在制备治疗阿尔茨海默药物中的应用。

技术总结
本发明属于中药制剂领域，具体涉及一种雷公藤红素纳米凝胶、制备方法和所述雷公藤红素纳米凝胶在制备治疗阿尔茨海默病药物中的应用。相对于现有雷公藤红素制剂技术，本发明采用微流控技术合成纳米胶束，该技术的使用可以稳定的大批量生产纳米制剂，克服了制剂过程中因操作方式不同带来的误差。此外，本发明进一步将所述纳米胶束制备成纳米凝胶，对于脑部疾病通过鼻腔给药方式，能够增加药物在鼻腔的停留时间，使得更多的药物进入脑部有效部位，减少对其他部位的毒副作用，对脑部疾病的治疗具有重大现实意义。

技术研发人员：李晓芳,张鲁璐,曾华辉,武香香,王新龙,张振强
受保护的技术使用者：河南中医药大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13