多药抗体药物偶联物的制作方法

背景技术：

1、抗体-药物偶联物(adc)将单克隆抗体的肿瘤靶向特异性与细胞毒性弹头的有效细胞杀伤活性相结合。部分由于最近adc的临床成功，其中包括本妥昔单抗(adcetristm)在复发性霍奇金淋巴瘤和间变性大细胞淋巴瘤中，和曲妥珠单抗(ado-trastuzumabmertansine)(kadcylatm)在her2阳性转移性乳腺癌中的批准，因此人们对设计新的adc形式产生了浓厚的兴趣。这些新方法中的大多数都集中在解决现有临床分子的一些缺点，例如异质药物负载、有限的药物-接头稳定性，以及具有限制的癌症类型子集的活性的弹头。为了实现改进的adc，在该领域已经取得了显著的进步。这些包括能够实现同质负载的位点特异性药物-接头偶联策略，具有改善的稳定性的药物-接头连接模式，有力的新有效负载以及利用替代释放机制的接头策略。

2、几乎所有有效的癌症化学疗法都使用旨在克服异质肿瘤细胞群体内不同药物敏感性的互补药物组合。该策略最近已应用于adc，目前正在与未偶联的，临床批准的抗癌药物联合进行测试。此外，新兴的adc临床和临床前数据已经证明，通过使用相同的抗体施用单独的adc，可以通过提供替代弹头来克服对特定adc的不敏感性。在这里，我们通过描述用于靶向癌细胞抗原的抗体的可获得的双细胞毒性药物偶联技术，在单个adc内公开了互补药物有效负载，这构成了靶向药物递送领域的重大进步。该技术适用于其他靶向剂，证明了正交硫醇保护基团首次用于制备不依赖于工程化抗体的adc。我们提供了第一个数据，证明与常规adc相比，具有双重偶联药物(md-adc)的多种药物adc表现出增强的体外和体内活性。

3、在md-adc技术的一个示例中，具有互补生理化学性质的两种不同的，高效的他汀(奥瑞他汀)分子与单一抗体偶联，其增强对异质癌细胞群的adc活性。通常使用的他汀药物-接头，也称为他汀链接组装单元，包括mc-mmaf(1)、mc-vc-mmaf(2)和mc-vc-mmae(3)。来自mc-vc-mmae药物接头的释放药物单甲基他汀e(mmae)是细胞可渗透的并且表现出旁观者活性，或杀死相邻的抗原阴性癌细胞。然而，mmae也是多重耐药(mdr)输出物的底物，因此对具有高mdr表达的细胞的活性降低。相反，分别从mc-vc-mmaf和mc-mmaf adc释放的mmaf和cys-mc-mmaf对药物输出不易感并且保留对mdr(+)细胞的活性，但是细胞可渗透性最小。因此，它们没有表现出旁观者活性并且对抗原阴性肿瘤细胞几乎没有活性。结合两种类型药物的特征可以提供癌症的互补活性，产生具有增强的细胞毒性谱的adc。

4、迄今为止，仅报道了md-adc的单个实例，但是该工作是在抗体fab片段上进行的，并且需要遗传引入工程化半胱氨酸(ecys)残基以实现位点特异性区分偶联位点(puthenveetil等.bioconjugate chem.(2016)27(4)：1030-1039)。已经提出了许多其他方法用于将两种单独的试剂与抗体的位点特异性偶联(maruani等，org.biomol.

5、org.(2016)14(26)：6165-6178)，但是这些方法中的大多数需要专门的试剂，包括位点特异性氨基酸突变或定制酶，有时需要两个不同的偶联手柄。所有这些因素都增加了生成和筛选md-adc所需的试剂的复杂性。一种这样的方法利用哒嗪-二酮重新连接还原的天然抗体二硫化物，然后进行双击功能化以构建基本上同质的产物，但该方法仅用于产生荧光团-药物抗体偶联物并且在消耗抗体上两个可偶联的位点，从而减少潜在的总药物负载。

6、所需要的是将双重药物结合到单个链接组装单元中的方法(和adc)，每个单元仅需要一个可偶联位点，并且导致两种药物以特定比例同质地和位点特异性地负载。该方法不应依赖于需要限制性ecys位点或酶介导的偶联的工程化抗体，并且应该适用于可以在一系列抗体上筛选的药物组合，包括商业抗体和杂交瘤抗体库。本公开解决了这些和其他需要。

技术实现思路

1、本文提供了多药抗体药物偶联物(md-adc)，其包含抗体和一至八个共价连接的链接组装单元(la)，其中多达八个共价连接的链接组装单元中的每一个连接至通过还原抗体中的链间二硫键产生的硫醇和/或每个共价连接的la单元与来自工程化半胱氨酸残基的硫醇连接，并且其中每个共价连接的链接组装单元具有与其相连的2-4个药物部分，也称为药物单元，其中两个药物单元是不同的，并且具有任选的分配剂(y)。这些md-adc的具体实施方式提供在式(i)、(ii)、(iii)和(iv)中，以及式(i*)、(ii*)、(iii*)和(iv*)中。

2、本文还提供了可用于制备md-adc的链接组装单元，其由式(ia)、(iia)、(iiia)(iva)和(xiiia)表示。

3、另一方面，本文提供了受保护的链接组装单元(用于制备链接组装单元和md-adc)，其由下述式(ib)、(iib)、(iiib)、(ivb)和(xiiib)体现。

4、另一方面，本文提供了具有1至8个正交保护的链接组装单元的抗体偶联物。

5、在其他方面，本文提供了使用所述md-adc的药物组合物和治疗疾病的方法。

技术特征：

1.一种多药抗体药物偶联物(md-adc)，其包含抗体和八个共价连接的链接组装单元(la)，每个链接组装单元具有两个不同的药物单元d1和d2，其中八个所述共价连接的链接组装单元中的每一个连接至来自所述抗体中还原的链间二硫键的半胱氨酸的硫原子，并且其中每个所述共价连接的链接组装单元具有两至四个与其连接的总药物单元和任选的分配剂(y)，

2.如权利要求1所述的抗体药物偶联物，其特征在于，所述第一抗癌剂和第二抗癌剂选自下组：mmae、mmaf、喜树碱、superdox、尾海兔素10、长春碱和环丙沙星。

3.如权利要求2所述的抗体药物偶联物，其特征在于，d1和d2来自选自下组的药物对：mmae/mmaf，mmae/喜树碱、superdox/喜树碱、

4.如权利要求2所述的抗体药物偶联物，其特征在于，具有旁观者细胞毒活性的所述第一抗癌剂和对mdr+癌细胞具有细胞毒活性的所述第二抗癌剂分别是

5.如权利要求1所述的抗体药物偶联物，其特征在于，所述第一抗癌剂和第二抗癌剂是喜树碱和多柔比星。

6.如权利要求1-5或22任一所述的抗体药物偶联物，其特征在于，所述链接组装单元的所述两至四个总药物单元的连接通过硫醇/马来酰亚胺偶联。

7.如权利要求1所述的抗体药物偶联物，其特征在于，所述链接组装单元还包括分配剂。

8.如权利要求7所述的抗体药物偶联物，其特征在于，所述分配剂是聚乙二醇单元。

9.如权利要求7所述的抗体药物偶联物，其特征在于，所述分配剂是环糊精单元。

10.如权利要求1所述的抗体药物偶联物，其特征在于，其中每个所述共价连接的la单元具有总共三个与其连接的d1和d2，其中d1与d2的摩尔比为2：1。

11.一种多药抗体药物偶联物(md-adc)，其包含抗体和一个或多个共价连接的链接组装单元(la)，每个链接组装单元具有两个不同的药物单元d1和d2，其中所述一个或多个共价连接的链接组装单元在所述抗体的重链或轻链中与工程半胱氨酸或其衍生物的硫原子连接，或与来自所述抗体中还原的链间二硫键的半胱氨酸的硫原子连接，并且其中每个所述共价连接的链接组装单元具有2至4个与其连接的总药物单元和任选的分配剂(y)，

12.如权利要求11所述的抗体药物偶联物，其特征在于，所述第一抗癌剂和第二抗癌剂选自下组：mmae、喜树碱、superdox、尾海兔素10、长春碱和环丙沙星。

13.如权利要求11所述的抗体药物偶联物，其特征在于，d1和d2来自选自下组的药物对：mmae/mmaf、mmae/喜树碱、superdox/喜树碱、superdox/mmae、尾海兔素10/mmae、尾海兔素10/mmaf、长春碱/mmae和长春碱/mmaf。

14.如权利要求11所述的抗体药物偶联物，其特征在于，所述一个或多个共价连接的链接组装单元中的每一个与所述抗体的重链或轻链中的工程化半胱氨酸或其衍生物的所述硫原子连接。

15.如权利要求13所述的抗体药物偶联物，其特征在于，所述具有旁观者细胞毒活性的第一抗癌剂是mmae且对mdr+癌细胞具有细胞毒活性的所述第二抗癌剂是mmaf。

16.如权利要求13所述的抗体药物偶联物，其特征在于，所述第一抗癌剂和第二抗癌剂是喜树碱和多柔比星。

17.如权利要求11-16任一所述的抗体药物偶联物，其特征在于，连接至链接组装单元的所述两至四个总药物单元来自硫醇/马来酰亚胺偶联。

18.如权利要求11所述的抗体药物偶联物，其特征在于，所述链接组装单元还包括分配剂。

19.如权利要求18所述的抗体药物偶联物，其特征在于，所述分配剂是聚乙二醇单元。

20.如权利要求18所述的抗体药物偶联物，其特征在于，所述分配剂是环糊精单元。

21.如权利要求11所述的多药抗体药物偶联物(md-adc)，其包含抗体和一个或多个共价连接的链接组装单元(la)，其中所述一个或多个共价连接的la单元中的每一个连接至所述抗体的重链或轻链中工程化的半胱氨酸或其衍生物的硫原子上，并且其中各个所述共价连接的la单元具有总共三个与其连接的d1和d2，其中d1与d2的摩尔比为2：1。

22.如权利要求1所述的抗体药物偶联物，其特征在于，所述第一抗癌剂和第二抗癌剂独立地选自下组：mmae、mmaf、喜树碱、superdox、尾海兔素10、长春碱和环丙沙星。

技术总结
本公开提供尤其多药物抗体药物偶联物(MD‑ADC)和连接组装(LA)单元，其通过在位点特异性物质中“正交”脱保护和药物负载构建。还提供了受保护的链接组装单元，其允许“正交”脱保护并构建本公开的MD‑ADC和LA单元。

技术研发人员：M·R·列文古德
受保护的技术使用者：思进有限责任公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13