白头翁提取物在制备作为免疫佐剂的生物制品中的用途的制作方法

本发明具体涉及白头翁提取物在制备作为免疫佐剂的生物制品中的用途。

背景技术：

1、免疫佐剂，是指能非特异性地增强或改变机体对匹配抗原的特异性免疫应答，增强抗原的免疫原性或者改变免疫的反应类型，但本身并无抗原性的物质。免疫佐剂可增加机体对于疫苗的反应，特别是增加抗体的产生，来增强疫苗接种人群对于特定疾病的抵御能力；改善由于年龄(包括婴儿和老人)、疾病(如hiv患者)或其他原因导致疫苗反应能力降低的问题；便于小剂量抗原的使用；减少疫苗的接种次数；增加初始免疫反应速率；用于研发治疗性的疫苗；减缓抗原的消耗速率等。佐剂作为疫苗研发的重要组成部分，随着新型疫苗研究的深入和市场应用需求的提高，新型佐剂的研发受到广泛重视。

2、目前最常用的佐剂为铝佐剂，主要包括磷酸铝、氢氧化铝和硫酸铝钾三种，其中最常用的为氢氧化铝和磷酸铝。铝佐剂是目前应用最广，且唯一被fda批准可用于人类疫苗的佐剂。通过储存库效应、免疫效应(炎性反应)、促吞噬效应刺激增强免疫效应、促进抗原递呈细胞的活化和成熟等。目前，已上市且含铝佐剂的疫苗有狂犬病疫苗、甲型肝炎疫苗、乙型肝炎疫苗、人乳头瘤病毒疫苗、白喉和破伤风疫苗、流感嗜血杆菌b疫苗和肺炎球菌缀合疫苗等。铝佐剂主要功能仅局限于疫苗蛋白的缓释作用，且对某些疫苗候选抗原缺少佐剂效应或仅有较弱的佐剂效应；不能诱导细胞免疫和细胞毒性t细胞应答，且还会诱导ige介导的超敏反应，引起注射部位发生炎症反应，刺激局部产生红斑、疼痛、肉芽肿和皮下结节等；当铝佐剂剂量选择不当时，可能会对使用者产生较大的毒副作用，因此寻找一种佐剂效应强、刺激性小、毒副作用低的疫苗佐剂有重要意义。

技术实现思路

1、为解决上述问题，本发明提供了白头翁提取物在制备作为免疫佐剂的生物制品中的用途。

2、进一步地，所述生物制品是疫苗用佐剂。

3、进一步地，所述疫苗为灭活疫苗、减毒活疫苗、亚单位疫苗或基因工程疫苗，优选为灭活疫苗或减毒活疫苗。

4、更进一步地，所述减毒活疫苗为联合犬瘟热和狂犬病二联弱毒苗。

5、本发明最后提供了一种预防犬瘟热和犬细小病毒病的联合用组合物，它含有用于同时或者分别给药的白头翁提取物，以及犬瘟热和狂犬病二联弱毒苗。

6、进一步地，所述白头翁提取物中白头翁皂苷b4和白头翁皂苷b5的总含量大于80wt.％，白头翁皂苷b4和白头翁皂苷b5含量的比例为(2.50-4.50)：1。

7、进一步地，所述白头翁提取物中白头翁皂苷b4和白头翁皂苷b5含量的比例为(2.76-4.33)：1。

8、更进一步地，所述白头翁提取物中白头翁皂苷b4的含量为65wt.％-70wt.％，白头翁皂苷b5的含量为15wt.％-25wt.％；，优选的，所述白头翁提取物中白头翁皂苷b4的含量为69wt.％，白头翁皂苷b5的含量为25wt.％。

9、进一步地，所述白头翁提取物的制备方法包括以下步骤：

10、(1)取白头翁，加入醇类溶剂，提取，得提取液；

11、(2)将步骤(1)所得提取液经过极性树脂进行梯度洗脱，洗脱剂依次为水、20～95％乙醇，收集70％乙醇的洗脱液；

12、(3)将步骤(2)收集的液体经过中压制备液相色谱进行洗脱，洗脱剂为水和乙醇的混合溶液，收集洗脱液，浓缩干燥，即得。

13、进一步地，步骤(1)中，所述白头翁为水分≤13.0％的白头翁饮片；所述醇类溶剂为60％～80％乙醇，优选为70％乙醇；所述白头翁与醇类溶剂的质量体积比为1：(8～12)g/ml，优选为1：10g/ml；所述提取方式为回流提取，提取次数为2～3次，提取时间为每次2～3小时；步骤(3)中，所述中压制备液相色谱的填料为odsc-18；所述水和乙醇的混合溶液中水和乙醇的体积比为2:1；所述洗脱液为第3～5个柱体积的液体。

14、本发明所述“免疫佐剂”是指同抗原一起或预先注入机体内能增强机体对抗原的免疫应答能力或改变免疫应答类型的辅助物质。

15、本发明白头翁提取物在制备用于预防接种的生物制品中的用途。经实验证明：由特定比例白头翁皂苷b4和白头翁皂苷b5构成的白头翁提取物作为疫苗佐剂，注射后无明显毒副作用，与疫苗联用可明显提高抗体水平、增强淋巴细胞繁殖及其细胞因子分泌，在持久免疫方面效果优于单独使用疫苗，有协同增效作用；同时白头翁提取物作为免疫佐剂与病原微生物及其代谢产物制成的疫苗在免疫效果上与弗氏佐剂相当，甚至略好，将白头翁皂苷提取物作为疫苗佐剂有良好的应用前景。

16、显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

17、以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

技术特征：

1.白头翁提取物在制备作为免疫佐剂的生物制品中的用途。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述生物制品是疫苗用佐剂。

3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于：所述疫苗为灭活疫苗、减毒活疫苗、亚单位疫苗或基因工程疫苗，优选为灭活疫苗或减毒活疫苗。

4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于：所述减毒活疫苗为联合犬瘟热和狂犬病二联弱毒苗。

5.一种预防犬瘟热和犬细小病毒病的联合用组合物，它含有用于同时或者分别给药的白头翁提取物，以及犬瘟热和狂犬病二联弱毒苗。

6.根据权利要求1～5任一项所述的用途，其特征在于：所述白头翁提取物中白头翁皂苷b4和白头翁皂苷b5的总含量大于80wt.％，白头翁皂苷b4和白头翁皂苷b5含量的比例为(2.50-4.50)：1。

7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于：所述白头翁提取物中白头翁皂苷b4和白头翁皂苷b5含量的比例为(2.76-4.33)：1。

8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于：所述白头翁提取物中白头翁皂苷b4的含量为65wt.％-70wt.％，白头翁皂苷b5的含量为15wt.％-25wt.％；，优选的，所述白头翁提取物中白头翁皂苷b4的含量为69wt.％，白头翁皂苷b5的含量为25wt.％。

9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于：所述白头翁提取物的制备方法包括以下步骤：

10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于：步骤(1)中，所述白头翁为水分≤13.0％的白头翁饮片；所述醇类溶剂为60％～80％乙醇，优选为70％乙醇；所述白头翁与醇类溶剂的质量体积比为1：(8～12)g/ml，优选为1：10g/ml；所述提取方式为回流提取，提取次数为2～3次，提取时间为每次2～3小时；步骤(3)中，所述中压制备液相色谱的填料为odsc-18；所述水和乙醇的混合溶液中水和乙醇的体积比为2:1；所述洗脱液为第3～5个柱体积的液体。

技术总结
本发明公开了白头翁提取物在制备作为免疫佐剂的生物制品中的用途；所述白头翁提取物中白头翁皂苷B4和白头翁皂苷B5的总含量大于80wt.％，白头翁皂苷B4和白头翁皂苷B5含量的比例为(2.50‑4.50)：1。本发明由特定比例白头翁皂苷B4和白头翁皂苷B5构成的白头翁提取物作为疫苗佐剂，注射后无明显毒副作用，与病原微生物组合制成的疫苗可明显提高抗体水平、增强淋巴细胞繁殖及其细胞因子分泌，效果优于单独使用疫苗，有协同增效作用，将白头翁皂苷提取物作为疫苗佐剂有良好的应用前景。

技术研发人员：杨世林
受保护的技术使用者：成都馨海英路生物医药科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/16