靶向Trop2蛋白的黑磷纳米片及其制备方法和应用与流程

：本发明涉及医药，特别是涉及一种靶向trop2蛋白的黑磷纳米片及其制备方法和应用。

背景技术

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背景技术：

1、胃癌(gastric cancer，gc)是五种最常见的癌症之一，在全球癌症相关死亡率中排名第三。由于转移和复发率高，进展期胃癌患者的5年生存率低于20％。传统的胃癌治疗方法如手术、放疗、化疗均不能显著改善胃癌患者的预后，因此提高药物靶向性、减少治疗毒副作用已成为当前肿瘤治疗的重点。

2、人滋养细胞表面糖蛋白抗原2(trop2)在多种实体肿瘤中高表达，目前研究表明trop2的高表达与包括胃癌在内的多种肿瘤的发生发展有关。由于肿瘤及其微环境的复杂性，单一的药物或治疗策略可能不足以有效治疗肿瘤，因此联合治疗日益成为长期预后和减少不良反应的主要选择。

3、黑磷(black phosphorus，bp)是一种新型的二维纳米材料，具有高载药量、超高光热转换效率、良好的生物相容性和生物降解性，在纳米医学研究领域显示出巨大的应用潜力。光疗包括光热和光动力疗法(ptt/pdt)是一种新型的无创激光介导的抗肿瘤方法，将激光介导的抗肿瘤方法与抗体靶向药物相结合，开发激光控制给药系统，有助于实现肿瘤的多模式治疗，提高抗肿瘤疗效。bp纳米颗粒是实现ptt/pdt与给药结合的良好集成平台。

4、抗癌的最终目标是开发新的治疗策略，精确地靶向原发肿瘤，抑制肿瘤转移，防止肿瘤复发，且副作用小或无。本发明拟设计一种bp纳米系统载体与以trop2为靶点的抗体药物有效结合，用于实现对gc细胞中高表达trop2的靶向治疗。

技术实现思路

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技术实现要素：

1、本发明的目的在于提供一种靶向trop2蛋白的黑磷纳米片及其制备方法和应用。本发明靶向trop2蛋白的黑磷纳米片的制备方法是全新的制备工艺，流程简便、操作简单、产量相对较高；并且该工艺制备的靶向trop2蛋白的黑磷纳米片不仅对高表达trop2蛋白的胃癌有特异性抑制作用，具有优异的靶向能力，还具有高效的光热转化能力。

2、本发明由如下技术方案实施：靶向trop2蛋白的黑磷纳米片的制备方法，其包括如下步骤：(1)制备黑磷纳米片分散液；(2)制备连接剂混合液；(3)制备连接剂修饰的黑磷纳米片；(4)氧化制备具有醛基的trop2 igg抗体溶液；(5)制备靶向trop2蛋白的黑磷纳米片；其中，

3、(1)制备黑磷纳米片分散液：将黑磷纳米片(bp)分散浸泡在n，n-二甲基甲酰胺(dmf)中，进行超声液相剥离，制备得到黑磷纳米片分散液；黑磷纳米片在dmf中进行超声液相剥离的过程中实现表面初步氧化。

4、(2)制备连接剂混合液：将peg linker(peg为聚乙二醇)和dmap(4-二甲基氨基吡啶)加入去离子水中，制备得到连接剂混合液；

5、(3)制备连接剂修饰的黑磷纳米片：将步骤(2)制备的连接剂混合液加入到步骤(1)制备的黑磷纳米片分散液中搅拌反应，然后透析去除多余的未反应的连接剂后得到黑磷纳米复合物，再向所述黑磷纳米复合物中加入稀盐酸溶液，室温下搅拌30min；离心、洗涤得到连接剂修饰的黑磷纳米片(bpl)；

6、(4)氧化制备具有醛基的trop2 igg抗体溶液：将trop2 igg抗体(trop2antibody)溶液加入至naio4溶液中，室温避光孵育后，加入pbs缓冲液终止反应，制备得到具有醛基的trop2 igg抗体溶液；

7、(5)制备靶向trop2蛋白的黑磷纳米片：将步骤(4)制备的具有醛基的trop2 igg抗体溶液与步骤(3)收集的连接剂修饰的黑磷纳米片(bpl)混合，在室温下孵育后，通过离心去除多余的未反应的具有醛基的trop2 igg抗体，制备得到靶向trop2蛋白的黑磷纳米片(见方案1)。

8、方案1：

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10、本申请中，首先，聚乙二醇的羧基(-cooh)与bp表面初步氧化形成的羟基(p-oh)发生反应。其次，trop2 igg抗体的恒定区域被高碘酸钠氧化，赋予抗体醛基团。最后，trop2igg抗体上的醛基可以通过席夫碱反应与聚乙二醇连接体中的氨基快速反应。

11、具体的，所述步骤(1)中，每毫升dmf(n，n-二甲基甲酰胺)中添加黑磷纳米片2.0mg-2.5mg。

12、具体的，所述步骤(2)中，每毫升去离子水中添加25mg peg linker；每毫升去离子水中添加5mg damp。

13、具体的，将步骤(2)制备的连接剂混合液加入到步骤(1)制备的黑磷纳米片分散液中搅拌反应的反应温度为：35℃；反应时间为：8h；连接剂混合液与黑磷纳米片分散液的体积比为1:2。

14、具体的，所述步骤(3)中，每毫克黑磷纳米复合物添加1毫升0.1mol/l的稀盐酸溶液；离心转速为12000rpm；离心时间为4-5min。

15、具体的，所述步骤(4)中，trop2 igg抗体溶液的浓度为1mg/ml；naio4溶液的浓度为100mmol/l；trop2 igg抗体与naio4的质量比为1:1；室温避光孵育时间为30min。

16、具体的，所述步骤(5)中，制备具有醛基的trop2 igg抗体溶液所用的trop2 igg抗体与制备连接剂修饰的黑磷纳米片所用的黑磷纳米片的质量比为1:2.0-1:2.5。

17、利用上述所述的靶向trop2蛋白的黑磷纳米片的制备方法制备得到的靶向trop2蛋白的黑磷纳米片。

18、所述的靶向trop2蛋白的黑磷纳米片在制备治疗胃癌药物中的应用。

19、治疗胃癌药物，有效成分为所述的靶向trop2蛋白的黑磷纳米片。

20、本发明的优点：本发明靶向trop2蛋白的黑磷纳米片的制备方法是全新的制备工艺，流程简便、操作简单、产量相对较高；并且该工艺制备的靶向trop2蛋白的黑磷纳米片不仅对高表达trop2蛋白的胃癌有特异性抑制作用，具有优异的靶向能力，还具有高效的光热转化能力。

技术特征：

1.靶向trop2蛋白的黑磷纳米片的制备方法，其特征在于，其包括如下步骤：(1)制备黑磷纳米片分散液；(2)制备连接剂混合液；(3)制备连接剂修饰的黑磷纳米片；(4)氧化制备具有醛基的trop2igg抗体溶液；(5)制备靶向trop2蛋白的黑磷纳米片；其中，

2.根据权利要求1所述的靶向trop2蛋白的黑磷纳米片的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，每毫升dmf中添加黑磷纳米片2.0mg-2.5mg。

3.根据权利要求1所述的靶向trop2蛋白的黑磷纳米片的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，每毫升去离子水中添加25mg peg linker；每毫升去离子水中添加5mg damp。

4.根据权利要求1所述的靶向trop2蛋白的黑磷纳米片的制备方法，其特征在于，将步骤(2)制备的连接剂混合液加入到步骤(1)制备的黑磷纳米片分散液中搅拌反应的反应温度为：35℃；反应时间为：8h；连接剂混合液与黑磷纳米片分散液的体积比为1:2。

5.根据权利要求1所述的靶向trop2蛋白的黑磷纳米片的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中，每毫克黑磷纳米复合物添加1毫升0.1mol/l的稀盐酸溶液；离心转速为12000rpm；离心时间为4-5min。

6.根据权利要求1所述的靶向trop2蛋白的黑磷纳米片的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中，trop2 igg抗体溶液的浓度为1mg/ml；naio4溶液的浓度为100mmol/l；trop2igg抗体与naio4的质量比为1:1；室温避光孵育时间为30min。

7.根据权利要求1所述的靶向trop2蛋白的黑磷纳米片的制备方法，其特征在于，所述步骤(5)中，制备具有醛基的trop2 igg抗体溶液所用的trop2 igg抗体与制备连接剂修饰的黑磷纳米片所用的黑磷纳米片的质量比为1:2.0-1:2.5。

8.利用权利要求1-7任一所述的靶向trop2蛋白的黑磷纳米片的制备方法制备得到的靶向trop2蛋白的黑磷纳米片。

9.权利要求8所述的靶向trop2蛋白的黑磷纳米片在制备治疗胃癌药物中的应用。

10.治疗胃癌药物，其特征在于，有效成分为权利要求8所述的靶向trop2蛋白的黑磷纳米片。

技术总结
本发明公开了一种靶向Trop2蛋白的黑磷纳米片及其制备方法和应用，其制备方法包括：(1)制备黑磷纳米片分散液；(2)制备连接剂混合液；(3)制备连接剂修饰的黑磷纳米片；(4)氧化制备具有醛基的Trop2IgG抗体溶液；(5)制备靶向Trop2蛋白的黑磷纳米片；以及利用该方法制备得到的靶向Trop2蛋白的黑磷纳米片及其应用。本发明靶向Trop2蛋白的黑磷纳米片的制备方法是全新的制备工艺，流程简便、操作简单、产量相对较高；并且该工艺制备的靶向Trop2蛋白的黑磷纳米片不仅对高表达Trop2蛋白的胃癌有特异性抑制作用，具有优异的靶向能力，还具有高效的光热转化能力。

技术研发人员：贾立周,傅宇昊,赵薇,张宁,刘阳,王腾祺
受保护的技术使用者：巴彦淖尔市医院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/14